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STITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE

LAMO TEMAPACHE
TUXPAN-VER

NOMBRE:
Angel Ricardo Blanco Blanco
MATERIA:
Microbiologia
MAESTRA:
IIA. Nancy Deyanira Hernandez
TRABAJO:
Antologa Unidad 1-7.

UNIDAD NO. 1
INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA
1.1.

Concepto y contenido de la Microbiologa

1.1.1.Concepto de Microbiologa y sus implicaciones

El vocablo Microbiologa deriva de las palabras griegas: mikros (pequeo), bios (vida) y logos
(ciencia), por lo que se puede definir, sobre la base de su etimologa, como la ciencia que trata de los
seres vivos muy pequeos, concretamente de aquellos cuyo tamao se encuentra por debajo del
poder resolutivo del ojo humano. Esto hace que el objeto de esta disciplina venga determinado por la
metodologa apropiada para poner en evidencia, y poder estudiar, a los microorganismos.
Precisamente, el origen tardo de la Microbiologa con relacin a otras ciencias biolgicas, y el
reconocimiento de las mltiples actividades desplegadas por los microorganismos, hay que atribuirlos
a la carencia, durante mucho tiempo, de los instrumentos y tcnicas pertinentes. Con la invencin del
microscopio en el siglo XVII comienza el lento despegue de una nueva rama del conocimiento,
inexistente hasta entonces. Durante los siguientes 150 aos su progreso se limit casi a una mera
descripcin de tipos morfolgicos microbianos, y a los primeros intentos taxonmicos, que buscaron
su encuadramiento en el marco de los sistemas naturales de los Reinos Animal y Vegetal.
El asentamiento de la Microbiologa como ciencia est estrechamente ligado a una serie de
controversias seculares (con sus numerosas filtraciones de la filosofa e incluso de la religin de la
poca), que se prolongaron hasta finales del siglo XIX. La resolucin de estas polmicas dependi del
desarrollo de una serie de estrategias experimentales fiables (esterilizacin, cultivos puros,
perfeccionamiento de las tcnicas microscpicas, entre otras), que a su vez dieron nacimiento a un
cuerpo coherente de conocimientos que constituy el ncleo aglutinador de la ciencia microbiolgica.
El reconocimiento del origen microbiano de las fermentaciones, el definitivo abandono de la idea de la
generacin espontnea, y el triunfo de la teora germinal de la enfermedad (cualquier enfermedad
infecciosa est causad por grmenes) propuesta por Pasteur y Koch, representan la edad de oro de la
Bacteriologa y las conquistas definitivas que proporcionan la naturaleza de la Microbiologa en los
albores del siglo XX.
Tras la Edad de Oro de la Bacteriologa, inaugurada por las grandes figuras de Pasteur y Koch, la
Microbiologa qued durante cierto tiempo como una disciplina descriptiva y aplicada, estrechamente
imbricada con la Medicina, y con un desarrollo paralelo al de la Qumica, que le aportara varios
avances metodolgicos fundamentales. Sin embargo, una corriente, en principio minoritaria, dedicada
a los estudios bsicos centrados con ciertas bacterias del suelo poseedoras de capacidades
metablicas especiales, incluyendo el descubrimiento de las que afectan a la nutricin de las plantas,
logr hacer ver la ubicuidad ecolgica y la extrema diversidad fisiolgica de los microorganismos. De
esta forma, se estableca una cabeza de puente entre la Microbiologa y otras ciencias biolgicas, que
lleg a su momento decisivo cuando se comprob la unidad qumica de todo el mundo vivo, y se
demostr, con material y tcnicas microbiolgicas que la molcula de la herencia era el ADN. Con ello
se asiste a un ntimo y frtil intercambio entre la Microbiologa, la Gentica y la Bioqumica, que se
plasma en el nacimiento de la Biologa Molecular, base del espectacular auge de la Biologa desde
mediados del siglo XX. Por otro lado, el programa inicial de la Microbiologa (bsqueda de agentes
infectivos, desentraamiento y aprovechamiento de los mecanismos de defensa del hospedador)
condujeron a la creacin de ciencias subsidiarias (Virologa, Inmunologa) que finalmente adquirieron
su mayora de edad y una acentuada autonoma.

Por ltimo, la vertiente aplicada que estuvo en la base de la creacin de la Microbiologa, mantuvo su
vigencia, enriquecida por continuos aportes de la investigacin bsica, y hoy muestra una no menos
prometedora perspectiva de expansin a mltiples campos de la actividad humana, desde el control
de enfermedades infecciosas (higiene, vacunacin, quimioterapia, antibioterapia) hasta el
aprovechamiento econmico racional de los mltiples procesos en los que se hallan implicados los
microorganismos (biotecnologas).

1.1.2. Objeto de estudio de la Microbiologa

1.1.2.1. Los microorganismos como objeto material de la Microbiologa
La Microbiologa se define como la ciencia que estudia los microorganismos, esto es, aquellos
organismos demasiado pequeos cuya visualizacin requiere el empleo del microscopio. Tal definicin
implica que el objeto material de la Microbiologa viene delimitado por el tamao de los seres vivos
que investiga, lo que supone que abarca una enorme heterogeneidad de tipos estructurales,
funcionales y taxonmicos: desde partculas no celulares como los virus, viroides y priones, hasta
organismos celulares tan diferentes como las bacterias, los protozoos y parte de las algas y de los
hongos.
Los microorganismos son seres vivos de tamao microscpico dotados de individualidad, con una
organizacin biolgica sencilla, acelular o celular, y en este ltimo, pudiendo presentarse como
unicelulares, cenocticos, coloniales o pluricelulares, pero sin diferenciacin en tejidos u rganos, y
que necesitan para su estudio una metodologa propia y adecuada a sus pequeas dimensiones. Bajo
esta denominacin se engloban tanto microorganismos celulares como las entidades subcelulares.
Los microorganismos celulares comprenden todos los procariotas incluidos en el Dominio Archea y
Dominio Bacteria, as como los microorganismos eucariticos incluidos en el Dominio Eukarya, dentro
de diferentes reinos: hongos filamentosos o verdaderos; levaduras, algas y protozoos. Los virus y
partculas subvirsicas son otro tipo de objetos de estudio de la Microbiologa, aunque son entidades
no celulares que no poseen ciertos rasgos atribuibles a lo que se entiende por vida, cuentan con
individualidad y entidad biolgica, y caen de lleno en el dominio de esta ciencia.
Los virus son entidades no celulares de muy pequeo tamao (normalmente inferior al del ms
pequeo procariota), por lo que debe de recurrirse al microscopio electrnico para su visualizacin.
Son agentes infectivos de naturaleza obligadamente parasitaria intracelular, que necesitan su
incorporacin al protoplasma vivo para que su material gentico sea replicado por medio de su
asociacin ms o menos completa con las actividades celulares normales, y que pueden transmitirse
de una clula a otra.
Cada tipo de virus consta de una sola clase de cido nucleico (DNA o RNA, nunca ambos), con
capacidad para codificar varias protenas, algunas de las cuales pueden tener funciones enzimticas,
mientras que otras son estructurales, disponindose stas en cada partcula virsica (virin) alrededor
del material gentico formando una estructura regular (cpsida); en algunos virus existe, adems, una
envuelta externa de tipo membranoso, derivada en parte de la clula en la que se desarroll el virin
(bicapa lipdica procedente de membranas celulares) y en parte de origen virsico (protenas)
En su estado extracelular o durmiente, son totalmente inertes, al carecer de la maquinaria de
biosntesis de protenas, de replicacin de su cido nucleico y de obtencin de energa. Esto les obliga
a un modo de vida (sic) parasitario intracelular estricto o fase vegetativa, durante la que el virin pierde
su integridad, y normalmente queda reducido a su material gentico, que al superponer su informacin
a la de la clula hospedadora, logra ser expresado y replicado, producindose eventualmente la
formacin de nuevos viriones que pueden reiniciar el ciclo.
Los viroides son un grupo de nuevas entidades infectivas, subvirsicas, descubiertas en 1967 por
T.O. Diener en plantas. Estn constituidos exclusivamente por una pequea molcula circular de ARN
de una sola hebra, que adopta una peculiar estructura secundaria alargada debido a un extenso, pero
no total, emparejamiento intracatenario de bases por zonas de homologa interna. Carecen de
capacidad codificadora y muestran cierta semejanza con los intrones autocatalticos de clase I, por lo
que podran representar secuencias intercaladas que escaparon de sus genes en el transcurso
evolutivo. Se desconocen detalles de su modo de multiplicacin, aunque algunos se localizan en el

nucleoplasma, existiendo pruebas de la implicacin de la RNA polimerasa II en su replicacin, por un

modelo de crculo rodante que genera concatmeros lineares. Esta replicacin parece requerir
secuencias conservadas hacia la porcin central del viroide.
Los viroides aislados de plantas originan una gran variedad de malformaciones patolgicas. El
mecanismo de patogenia no est aclarado, pero se sabe que muchos de ellos se asocian con el
nucleolo, donde quiz podran interferir; sin embargo, no existen indicios de que alteren la expresin

gnica (una de las hiptesis sugeridas); cada molcula de viroide contiene uno o dos dominios
conservados que modulan la virulencia.
Los RNAs satlites son pequeas molculas de tamao similar al de los viroides de plantas (330-400
bases), que son empaquetados en cpsidas de determinadas cepas de virus (con cuyos genomios no
muestran homologas). Se replican slo en presencia del virus colaborador especfico, modificando
(aumentando o disminuyendo) los efectos patgenos de ste.
Los virusoides constituyen un grupo de RNA satlites no infectivos, presentes en el interior de la
cpsida de ciertos virus, con semejanzas estructurales con los viroides, replicndose exclusivamente
junto a su virus colaborador.
Los priones son entidades infectivas de un tipo totalmente nuevo y original, descubiertas por Stanley
Prusiner en 1981, responsables de ciertas enfermedades degenerativas del sistema nervioso central
de mamferos (por ejemplo, el "scrapie" o prurito de ovejas y cabras, la encefalitis espongiforme
bovina), incluyendo los humanos (kuru, sndrome de Gerstmann-Strassler, enfermedad de
Creutzfeldt-Jakob). Se definen como pequeas partculas proteicas infectivas que resisten la
inactivacin por agentes que modifican cidos nucleicos, y que contienen como componente
mayoritario (si no nico) una isoforma anmala de una proteina celular. Tanto la versin celular normal
C
Sc
(PrP ) como la patgena (PrP en el caso del "scrapie") son glicoprotenas codificadas por el mismo
gen cromosmico, teniendo la misma secuencia primaria. Se desconoce si las caractersticas
distintivas de ambas isoformas estriban en diferencias entre los respectivos oligosacridos que
adquieren por procesamiento post-traduccional.
A diferencia de los virus, los priones no contienen cido nucleico y estn codificados por un gen
celular. Aunque se multiplican, los priones de nueva sntesis poseen molculas de PrP que reflejan el
gen del hospedador y no necesariamente la secuencia de la molcula del PrP que caus la infeccin
previa. Se desconoce su mecanismo de multiplicacin, y para discernir entre las diversas hiptesis
propuestas quiz haya que dilucidar la funcin del producto normal y su posible conversin a la
isoforma patgena infectiva.
Recientemente se ha comprobado que, al menos algunas de la enfermedades por priones son
simultneamente infectivas y genticas, una situacin inslita en la Patologa humana, habindose
demostrado una relacin entre un alelo dominante del PrP y la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob. El
gen del prin (Prn-p) est ligado genticamente a un gen autosmico (Prn-i) que condiciona en parte
los largos tiempos de incubacin hasta el desarrollo del sndrome.
1.1.2.2. Los enfoques de estudio como objeto formal de la Microbiologa
El objeto formal de la Microbiologa viene determinado por todos aquellos aspectos (caractersticas
estructurales, fisiolgicas, bioqumicas, genticas, taxonmicas, ecolgicas, entre otras) y enfoques
desde los que se puede estudiar a los microorganismos y que conforman el cuerpo bsico de
conocimientos de esta ciencia.
Por otro lado, la Microbiologa tambin se ocupa de las distintas actividades microbianas en relacin
con los intereses humanos, tanto las que pueden acarrear consecuencias perjudiciales (y en este caso
estudia los nichos ecolgicos de los correspondientes agentes, sus modos de transmisin, los
diversos aspectos de la microbiota patgena en sus interacciones con el hospedador, los mecanismos
de defensa de ste, as como los mtodos desarrollados para combatirlos y controlarlos), como de las
que reportan beneficios (ocupndose del estudio de los procesos microbianos que suponen la
obtencin de materias primas o elaboradas, y de su modificacin y mejora racional con vistas a su
imbricacin en los flujos productivos de las sociedades).

Finalmente, la Microbiologa ha de ocuparse de todas las tcnicas y metodologas destinadas al

estudio experimental, manejo y control de los microorganismos, es decir, de todos los aspectos
relacionados con el modo de trabajo de una ciencia emprica.

1.1.3. Ubicacin de los microorganismos en los sistemas de clasificacin

En la dcada de los 80, surgi una nueva visin sobre la clasificacin de los seres vivos y sus
posibles relaciones evolutivas, provocando una verdadera revolucin en la Biologa moderna. Para
entender esta revolucin debemos primero conocer cul era el conocimiento que haba entrado en
crisis. El llamado paradigma clsico consideraba que la clasificacin natural de los seres vivos
comprenda slo dos grandes clases de organismos (Figura 1): Procariontes (clulas sin ncleo) y
Eucariontes (clulas con ncleo); estas dos grandes clases se diferenciaban profundamente a nivel de
su estructura y organizacin subcelular, por lo que se les consider siempre como grupos excluyentes.
Adems, estas clases de organismos eran agrupadas en 5 reinos (Whittaker, 1969), conformando los
procariontes por si solos, el llamado reino Monera o Prokaryota (considerado primitivo o ancestral).
Los 4 reinos eucariontes restantes Protozoa, Hongo, Plantae y Animalia seran reinos derivados del
reino Monera (ms evolucionados)

Figura 1. Esquema de los 5 reinos clsicos de Wittaker y sus relaciones evolutivas: reino Metazoa (Animalia),
reino Metafita (Plantae), reino Fungi (Hongo), reino Protista (Protozoo) y reino Procariota (Monera)

En el ao 1978 se descubre que las arquibacterias, hasta ese momento incluidas dentro del Reino
Mnera, eran un nuevo tipo de seres vivos, tan distantes evolutivamente de las bacterias como de los
eucariontes. En el ao 1990 Woese incorpora estos descubrimientos a un nuevo esquema sobre la
evolucin y clasificacin de los seres vivos, planteando que la evolucin habra ocurrido en tres lneas
o linajes filogenticos principales, y no en dos (procariontes y eucariontes), como postulaba el
paradigma clsico.
Esta nueva visin se caracteriza por considerar a las arquibacterias, actualmente denominadas
archeas, como una tercera forma de vida, muy diferentes a los eucariontes y procariontes clsicos, el
cambio propuesto por Woese resalta las diferencias, hasta ahora ocultas, entre organismos
procariotas.
Todos estos cambios y nuevas propuestas han sido posibles gracias al estudio y comparacin de
secuencias de macromolculas conservadas en todos los seres vivos (denominadas relojes
moleculares), tales como el RNA ribosomal (especialmente el RNAr 16S) y algunas protenas
conservadas (como los factores traduccionales EF-G y EF-Tu). Tras una gran labor experimental,
Woese se centr en un conjunto de informacin gentica en particular descubierto en el llamado 'RNA
mitocondrial 16s'. Esta secuencia de cdigo gentico aparece en el genoma de todos los seres
vivos. Es una secuencia perfectamente conservada, lo cual significa que ha evolucionado muy
lentamente, por lo que puede ser utilizada para rastrear los cambios evolutivos sucedidos a lo largo de
perodos de tiempo muy largos.

El giro paradigmtico ocurrido en las dos ltimas dcadas, se ve plasmado en el nuevo rbol
filogentico propuesto por Woese para la evolucin de los seres vivos. Esta nueva clasificacin se
basa en una visin tricotmica (tres linajes principales) e incorpora un nuevo nivel o rango taxonmico
denominado Dominio (superior a Reino). Estos tres nuevos linajes evolutivos reciben las siguientes
denominaciones: dominio Bacteria, dominio Archaea y dominio Eukaya (Figura 2).

En el rbol filogentico de la vida, la distancia entre dos especies cualesquiera, trazada a lo largo de
las lneas que las conectan, es proporcional a las diferencias entre su RNA mitocondrial. Las especies
con secuencias prcticamente idnticas estn presumiblemente relacionadas y son representadas en
el rbol, unas cerca de las otras; aquellas que estn ampliamente separadas, son parientes ms
lejanos, y cuando se combina cierta cantidad de datos es posible inferir linajes. Cuando se emplea
este mtodo con nuestras familiares plantas y animales, estos trazos en el rbol de la vida son muy
similares a los de los rboles evolutivos deducidos de la anatoma estructural, pero la gran sorpresa
lleg cuando se aplic esta tcnica al mundo microbiolgico.
Dentro del Dominio Bacteria existen varios linajes bacterianos diferentes, cada uno de ellos
estrictamente debera corresponder a un reino diferente, sin embargo por razones de ndole histrica,
se les denomina Divisiones o Phyla. Hoy en da se describen 80 Divisiones o Phyla en el Dominio
Bacteria, siendo la gran mayora de estas bacterias fotolitotrficas, quimiolitotrficas, ambientales y no
patgenas para el hombre, muchas de ellas son fundamentales en varios ciclos geoqumicos del
planeta (carbono, nitrgeno, fsforo, entre otros). El Dominio Archaea contiene al menos dos reinos
(divisiones o Phyla) nuevos: Crenarchaeota y Euryarchaeota. El Dominio Eukarya histricamente
comprendera los Reinos (Dominios o phyla) Fungi, Animalia, Plantae y Protozoa (llamados a veces
Protista); pero actualmente, se conserva a los 3 primeros, mientras que el antiguo Reino Protozoa, se
fragmenta en mltiples Reinos (Divisiones o Phyla) tales como: Microsporidios, Diplomonadas,
Apicomplexa, Alveolados, Stramenopiles, Excavados, entre otros.
As, los microorganismos se encuentran ubicados en los tres dominios: Archea, Bacteria y Eukarya,
este ltimo comprende a todos los linajes microbianos constituidos por clulas eucariticas.

Figura 2. rbol filogentico de la vida, Este rbol filogentico se basa en la comparacin de secuencias del RNA
ribosomal 16 S. La raz se localiz mediante el estudio de los factores traduccionales EF-Tu y EF-G (Woese, et
al., 1990).

Los virus no se incorporan a esta clasificacin por el hecho de no estar conformados por clulas y
constituirse en seres vivos slo en unin a una clula viva preexistente. Sus orgenes no estn claros,

algunos investigadores opinan que derivaran de entidades celulares y por lo tanto no seran
primitivos. Otros investigadores piensan que corresponderan a remanentes de una etapa de la
evolucin pre-celular de la vida, por lo que en este caso se consideraran entes primitivos.

Recientemente se descubri una nueva familia de virus denominada Mimivirus, que se caracteriza por
infectar amebas y poseer un genoma de DNA mayor que el de algunas bacterias (dos veces mayor
que el genoma de la bacteria Micoplasma genitalium). Algunos investigadores piensan, en base al
estudio de las secuencias de algunas enzimas de estos virus, que esta familia podra corresponder a
virus arcaicos, anteriores incluso al origen de las clulas eucariontes. En todo caso, hoy en da no
existe consenso entre los investigadores respecto al origen de los virus y no parece posible, al menos
al corto plazo, dilucidar experimentalmente tal cuestin.

1.2. Desarrollo histrico de la Microbiologa

Aunque los microorganismos se originaron hace aproximadamente 4.000 millones de aos, la
Microbiologa es relativamente una ciencia joven. Los primeros microorganismos se observaron hace
300 aos y sin embargo pasaron unos 200 aos hasta que se reconoci su importancia. La
Microbiologa aparece a finales del siglo XIX como consecuencia de la confluencia de una serie de
progresos metodolgicos que se haban iniciado en los siglos anteriores, y que obligaron a una
revisin de ideas y prejuicios seculares sobre la dinmica del mundo vivo. De acuerdo al esquema
propuesto por Collard (l976), se distinguen cuatro periodos en el desarrollo de la Microbiologa:
Primer periodo. Periodo de especulacin que se extiende desde la antigedad hasta el arribo de los
primeros microscopistas.
Segundo periodo. Acumulacin de observaciones desde l675 con el descubrimiento de los
microorganismos por Leeuwenhoek, hasta mediados del siglo XIX.
Tercer periodo. Inicia con el cultivo de microorganismos, que llega hasta finales del siglo XIX, donde
las investigaciones de Pasteur y Koch encabezan el establecimiento de la Microbiologa como ciencia
experimental.
Cuarto periodo. A partir de los albores del siglo XX con los descubrimientos de Winogradsky,
Beijerinck, Kluver y van Niel, hasta nuestros das, en el que los microorganismos se estudian desde
los aspectos morfolgicos, fisiolgicos, bioqumicos, genticos, ecolgicos, entre otros, lo que conlleva
a la Microbiologa a un extraordinario crecimiento, as como tambin, al surgimiento de disciplinas
microbiolgicas especializadas como la Virologa y la Inmunologa entre otras, y a la estrecha
imbricacin de las ciencias microbiolgicas en el marco general de las Ciencias Biolgicas.

1.2.1. Periodo previo al descubrimiento del microscopio (periodo de especulacin)

Durante el periodo de especulacin, la humanidad tuvo conocimiento sobre las actividades de los
microorganismos, aunque stos no pudieron ser observados. El ser humano produca bebidas
alcohlicas, productos lcteos y pan, sin embargo, especulaban sobre la forma en que se efectuaban
dichos procesos fermentativos. Por otro lado, tambin se generaron especulaciones sobre el origen de
las enfermedades infecciosas. Diversas fuentes escritas de la antigedad griega y romana hablan de
grmenes invisibles que transmiten enfermedades contagiosas. Lucrecio (96-55 a.C.), en su De
rerum natura hace varias alusiones a semillas de enfermedad.
En el Renacimiento europeo, Girolamo Frascatorius, en su libro De contagione et contagionis (1546)
dice que las enfermedades contagiosas se deben a grmenes vivos que pasan de diversas maneras
de un individuo a otro. Estos inicios de explicacin que renunciaban a invocar causas sobrenaturales
fueron probablemente catalizados por la introduccin en Europa de la sfilis, una enfermedad en la que
estaba clara la necesidad de contacto para su contagio. Pero la cosa que se transmite en la
enfermedad sigui siendo objeto de conjeturas durante mucho tiempo, sin embargo, la existencia de
los microorganismos no se conoci hasta finales del siglo XVII.

1.2.2. Primeros microscopistas y el descubrimiento de los microorganismos

Ya en el siglo XIV, con la invencin de las primeras lentes para corregir la visin, surgi una cierta
curiosidad sobre su capacidad de aumentar el tamao aparente de los objetos. En el siglo XVI
surgieron algunas ideas sobre aspectos de la fsica ptica de las lentes de aumento, pero no
encontraron una aplicacin inmediata. Se dice que Galileo hizo algunas observaciones

microscpicas invirtiendo su telescopio a partir de lentes montadas en un tubo, pero en cualquier

caso est claro que no tuvieron ninguna repercusin.
El descubrimiento de los microscopios fue obra del holands Antony van Leeuwenhoek, quien fue la
primera persona en describir los microorganismos en detalle. En 1675 descubri que en una gota de
agua de estanque pululaba una asombrosa variedad de pequeas criaturas a las que a los cuales
denomin animculos. En 1683 descubre las bacterias, por lo que se considera el "padre de la
Microbiologa". Sus dotes de observador le llevaron asimismo a describir protozoos (como Giardia,

que encontr en sus propias heces), la estructura estriada del msculo, la circulacin capilar, a
descubrir los espermatozoides y los glbulos rojos (por lo que tambin se le considera el fundador de
la Histologa animal), as como a detallar diversos aspectos estructurales de las semillas y embriones
de plantas. Simultneamente el ingls Robert Hooke, usando microscopios compuestos, describi los
hongos filamentosos en 1667, y descubri la estructura celular de las plantas en 1665, acuando el
trmino clula. Sin embargo, estas observaciones no condujeron a ninguna investigacin acerca de
las posibles actividades de los microorganismos, ni como agentes de fermentaciones ni de
enfermedades infecciosas ya que el desarrollo de la qumica y de la medicina era demasiado primitivo.
Una vez descubiertos los microorganismos por Leeuwenhoek se empez a especular sobre el origen
de estos animculos, por lo que se formaron dos escuelas: la abiognesis (generacin espontnea)
apoyada por los preformacionistas y la biognesis (los animculos se originaban a partir de
animculos padres). La doctrina de la generacin espontnea fue puesta en entredicho por los
experimentos de Redi quien acu la expresin "Omne vivum ex ovo" (1668), tras comprobar que los
gusanos encontrados en la carne provenan de los huevos que previamente haban depositado en la
carne las moscas.
Los descubrimientos de Redi tuvieron el efecto de desacreditar la teora de la generacin espontnea
para los animales y plantas, pero la reavivaron respecto de los recin descubiertos animlculos, una
cosa eran los huevos de moscas y otra los microorganismos. En 1745 Needham hirvi trozos de carne
para destruir los organismos preexistentes y los coloc en un recipiente abierto, posteriormente,
observ colonias de microorganismos sobre la superficie y concluy que se generaban
espontneamente a partir de la carne.
En 1769, Spallanzani repiti el experimento pero tapando los recipientes, no apareciendo las colonias,
lo que contradeca la teora de la generacin espontnea. Pero Needham argument que el aire era
esencial para la vida incluida la generacin espontnea de microorganismos y este aire haba sido
excluido en los experimentos de Spallanzani. En 1836 Franz Schulze pas el aire a travs de unas
soluciones cidas fuertes hacia el interior de un recipiente con carne hervida. Al ao siguiente Theodor
Schwann pas el aire a travs de tubos calientes. Los microorganismos no aparecan en ningn caso
ya que los microorganismos presentes en el aire haban sido aniquilados. Sin embargo, los que
apoyaban la generacin espontnea comentaban que el cido y el calor alteraban el aire de tal
manera que impeda la generacin espontnea de los microorganismos. En 1864 Pasteur pone fin a la
controversia sobre el origen de los microorganismos al utilizar matraces con cuello de cisne, el aire
pasaba libremente a travs del cuello, pero los microorganismos no aparecan en la solucin ya que
las partculas de polvo y microorganismos sedimentaban en el recodo del cuello. Estos experimentos
de Pasteur promovieron el reconocimiento de la biognesis, de esta forma quedaba definitivamente
aclarado el origen de los microorganismos, y se abra la Edad de Oro del estudio cientfico de las
formas de vida no observables a simple vista. Los ltimos escpticos quedaron silenciados cuando en
1877 John Tyndall aplic su sistema de esterilizacin por calentamiento discontinuo (hoy conocida
precisamente como tindalizacin), que evidenci la existencia de formas microbianas de reposo muy
resistentes al calor, lo cual fue confirmado poco ms tarde por Ferdinand Cohn al descubrir las
esporas bacterianas.
Sin duda desde la Prehistoria los hombres utilizan con provecho las fermentaciones. Las teoras
cientficas de esa poca reconocan la presencia de levaduras en la fermentacin alcohlica, pero
estas levaduras eran consideradas como compuestos qumicos complejos, sin vida. Esta era la teora
mecanstica liderada por los qumicos alemanes von Liebig y Whler. Luis Pasteur, qumico francs,
propuso la teora vitalstica y demostr que las clulas viables de levaduras causan fermentacin en
condiciones anaerbicas; durante dicha fermentacin el azcar presente en el mosto es convertido
principalmente en etanol y CO 2. En 1866, Pasteur public la obra titulada "Estudios sobre el vino, sus
enfermedades, causas que las provocan. Nuevos procedimientos para la conservacin y

envejecimiento". Entre las mejoras aconsejadas haba un mtodo para aumentar la calidad de la
conservacin de los vinos consistente en calentarlos a una temperatura de 68 C durante 10 minutos y
despus enfriarlos rpidamente. Esta tcnica ha venido a ser conocida como pasteurizacin y es
ahora ampliamente utilizada en el tratamiento de la leche.

En 1546, Girolano Fracastoro sugiri que las enfermedades podan deberse a organismos tan
pequeos que no podan verse y que eran transmitidos de una persona a otra. Sin embargo, el
descubrimiento de que las bacterias pueden actuar como agentes especficos de las enfermedades
infecciosas en los animales fue realizado a travs del estudio del carbunco, infeccin grave de los
animales domsticos que es transmisible al hombre. La demostracin concluyente de la causa
bacteriana o etiologa del carbunco la proporcion en 1876 Robert Koch, mdico alemn, seis aos
despus Koch anunci al mundo que haba encontrado la bacteria del carbunco (Bacillus anthracis).
Posteriormente l y sus colaboradores descubrieron las bacterias que causan la tuberculosis y el
clera. El descubrimiento posterior de los virus (Dimitri Ivanovski en 1892; el virus del mosaico del
tabaco pasaba los filtros que retenan a las bacterias), agentes que no crecen en medios artificiales en
el laboratorio como lo hacen las bacterias, han permitido realizar algunas modificaciones en los
postulados de Koch. Este trabajo sobre el carbunco condujo rpidamente a la edad de oro de la
bacteriologa. En 25 aos la mayora de los agentes bacterianos de las principales enfermedades
humanas haban sido descubiertos y descritos.
Actualmente es difcil comprender la magnitud de la miseria y devastacin causada por los
microorganismos antes de 1950. En Europa, durante el perodo de 1347-1350 ocurri una epidemia
de peste bubnica, conocida como la "muerte negra" y causada por la bacteria Yersinia pestis, se
estim que murieron 25 millones de personas. Con el conocimiento de que los microorganismos
causaban enfermedades, los cientficos se dedicaron a investigar la prevencin y el tratamiento. Los
hospitales adoptaron la antisepsia (Joseph Lister. 1860) la cual previene la diseminacin de las
enfermedades infecciosas mediante la inhibicin o destruccin de los agentes causantes. Tambin se
descubri la inmunizacin (Pasteur, 1880), proceso que estimula las defensas del cuerpo frente a la
infeccin. Se empez a aplicar la quimioterapia (Paul Ehrlich, Gerhard Domagk, y Alexander
Fleming), tratamiento de las enfermedades con una sustancia qumica. Tambin influy la sanidad
pblica, sobre todo la higiene relacionada con los alimentos y aguas.
Antes de 1940 el conocimiento del fenmeno gentico provena de las investigaciones sobre plantas y
animales, pero no se saba si estos resultados se podan aplicar a los microorganismos. En 1944
Oswald Avery, Colin MacLeod y MacLyn McCarty descubrieron el papel del DNA en la gentica
bacteriana. Encontraron que el material de DNA de un tipo de neumococos puede transferir una
caracterstica hereditaria a otro tipo de neumococos. Posteriormente, en 1953 Watson, Crick y Wilkins
descubrieron la estructura molecular del DNA. Estos descubrimientos, junto con otros, establecieron
que la informacin gentica de todos los organismos est codificada en el DNA. Esto hizo de los
microorganismos un modelo muy atractivo para la investigacin gentica. Actualmente y utilizando la
tecnologa del DNA recombinante o ingeniera gentica se pueden transferir fragmentos de DNA de un
organismo a otro.

1.2.3. El cultivo de los microorganismos

La doctrina del pleomorfismo, vigente durante buena parte del siglo XIX, mantena que los
microorganismos adoptaban formas y funciones cambiantes dependiendo de las condiciones
ambientales. A estas ideas se oponan frontalmente investigadores como Koch, Pasteur y Cohn, que
estaban convencidos de la especificidad y constancia morfolgica y fisiolgica de cada tipo de
microorganismo (monomorfismo). El pleomorfismo haba surgido como una explicacin a la gran
variedad de formas y actividades que aparecan en un simple frasco de infusin, pero ya Pasteur, en
sus estudios sobre la fermentacin, se haba percatado de que los cultivos que aparecan podan
considerarse como una sucesin de distintas poblaciones de microorganismos predominantes, que, a
resultas de sus actividades, condicionaban la ulterior composicin de la comunidad microbiana. La

solucin definitiva a esta cuestin dependa, de nuevo, de un desarrollo tcnico, que a su vez iba a
suministrar una de las herramientas caractersticas de la nueva ciencia: los mtodos de cultivo puro.
Los primeros cultivos puros fueron obtenidos por el miclogo Brefeld, quien logr aislar esporas de
hongos y cultivarlas sobre medios slidos a base de gelatina. Por su menor tamao, este mtodo se
haca inviable para las bacterias, por lo que se recurri a un mtodo basado en diluciones: Lister, en
1878 realiz diluciones secuenciales de cultivos mixtos, hasta lograr muestras en las que exista una
sola clula. Pero la tcnica era larga y tediosa y, adems, normalmente slo se lograban aislar clulas

del tipo bacteriano ms abundante en el cultivo original; sin embargo, el experimento sirvi para
confirmar la naturaleza particulada de los agentes de las fermentaciones.
Por aquella poca Koch buscaba con ahnco mtodos ms sencillos de cultivo puro, indispensables
para proseguir sus investigaciones sobre bacterias patgenas. Primero emple rodajas de patata
como sustrato slido nutritivo sobre el que se podan desarrollar colonias macroscpicas de bacterias
que presentaban morfologa caracterstica, que Koch interpret como resultantes del crecimiento a
partir de clulas individuales. Pero enseguida recurri a compactar el tpico caldo de cultivo a base de
carne (diseado por Loeffler) aadindole gelatina (1881). El medio slido as logrado era
transparente, lo que permita visualizar fcilmente los rasgos coloniales, y contena los nutrientes
adecuados para el crecimiento de una amplia gama de bacterias. stas eran inoculadas en la
superficie del medio con un hilo de platino pasado previamente por la llama, por la tcnica de siembra
en estra. Sin embargo, la gelatina presentaba los inconvenientes de ser atacada por determinados
microorganismos, y de tener un bajo punto de fusin; ambos problemas se solventaron cuando en
1882 el mdico alemn Walter Hesse, introdujo el agar (polisacrido extrado de algas rojas) como
nuevo agente solidificante. El trabajo de Koch ya citado tuvo la trascendental consecuencia de derribar
las ideas pleomorfistas, y supuso la primera propuesta del concepto de especie dentro del mundo
bacteriano. En 1887 Petri, un ayudante de Koch, sustituy las engorrosas bandejas de vidrio cubiertas
con campanas, usadas hasta entonces para los cultivos slidos, por un sistema manejable de placas
de cristal planas, que se conoce como cajas de Petri.
El desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento fue una consecuencia de las
investigaciones llevadas a cabo por Beijerinck y Winogradsky entre 1888 y los primeros aos del siglo
XX, sobre bacterias implicadas en procesos biogeoqumicos y poseedoras de caractersticas
fisiolgicas distintivas (quimioauttrofas, fijadoras de nitrgeno, entre otras). Estos medios, donde se
aplica a pequea escala el principio de seleccin natural, se disean de forma que su composicin
qumica definida favorezca slo el crecimiento de ciertos tipos fisiolgicos de microorganismos, nicos
capaces de usar ciertos nutrientes del medio. Otra importante aportacin a este perodo de cultivo
dentro del desarrollo de la Microbiologa surgi del uso de medios diferenciales, en los que se
manifiesta algn rasgo bioqumico o metablico, lo que contribuye a la identificacin microbiana. Fue
Wrtz quien, en 1892, introdujo el uso de indicadores de pH, incorporados en los medios, lo cual
permita revelar la produccin de acidificaciones por fermentacin en ciertas bacterias.
Grandes naturalistas como Haeckel, Strassburger y Abb interaccionando con una poderosa industria
ptica y qumica. Estas influencias recprocas se plasmaron en numerosos proyectos que reflejaban la
efervescencia de las ciencias naturales tras la estela de Darwin (cfr. Jahn et al., 1985).
Concretamente, la industria ptica de Abb y Zeiss, pudo satisfacer la necesidad de Koch de
perfeccionar el microscopio compuesto, introduciendo lentes acromticas y una iluminacin inferior
provista de condensador. El mismo Abb desarroll en 1878 el objetivo de inmersin en aceite. Por
otro lado, la industria qumica BASF, que por aquella poca se encontraba en pleno auge de patentes
de nuevos colorantes, suministr al laboratorio de Koch una serie de derivados de anilina que tean
las bacterias permitiendo su fcil visualizacin al microscopio en frotis de tejidos infectados. En 1875
Carl Weigert ti bacterias con pirocarmn, un colorante que ya vena siendo usado desde haca unos
aos en estudios zoolgicos. En aos sucesivos se fueron introduciendo el azul de metileno (Koch,
1877), la fuchsina, y el violeta cristal. En 1882-1883 Ziehl y Neelsen desarrollan su mtodo de cidoalcohol resistencia para teir Mycobacterium tuberculosis. En 1884 el patlogo dans Christian Gram
establece una tincin de contraste que permite distinguir dos tipos bacterianos en funcin de sus
reaccin diferencial de tincin y que, como se vera mucho ms tarde, reflejaba la existencia de dos
grupos de bacterias con rasgos estructurales distintivos. En 1890 Loeffler logra visualizar flagelos
bacterianos por medio de su tcnica de impregnacin argntica. Como veremos ms adelante, la

misma industria de colorantes alemana previa a la primera guerra mundial fue decisiva tambin para
los comienzos de la quimioterapia.
Estas innovaciones tcnicas (mtodos de cultivo, microscopa y tinciones) fueron fundamentales (junto
con los sistemas de esterilizacin abordados en el anterior apartado) para la consolidacin de la
Microbiologa como ciencia, permitiendo eliminar las grandes dosis de especulacin que hasta
entonces haban predominado.

1.2.4. Auge de la Microbiologa (Winogradsky, Beijerinck, Kluyver y van Niel)

Gran parte de los avances en Microbiologa descritos hasta ahora se debieron a la necesidad de
resolver problemas prcticos. Pero hacia finales del siglo XIX una serie de investigadores,
desarrollaron importantes estudios bsicos que fueron revelando una enorme variedad de
microorganismos y sus actividades metablicas, as como su papel crucial en ciclos biogeoqumicos,
sus relaciones con procesos de nutricin vegetal, entre otros.
El descubrimiento de la quimioautotrofa, obra del gran microbilogo ruso Sergei Winogradsky (18561953), oblig a revisar los conceptos previos, procedentes de la Fisiologa Vegetal, de que el
crecimiento autotrfico dependa de la presencia de clorofila. Winogradsky haba comenzado
investigando las bacterias del hierro descubiertas por Cohn en 1875, observando que podan crecer
en medios minerales, por lo que supuso que obtenan su energa de la oxidacin de sales ferrosas a
frricas (1888).
En 1889, combinando tcnicas de observacin secuencial de cultivos microscpicos con ensayos
microqumicos sobre bacterias del azufre (Beggiatoa, Thiothrix), infiri que estos microorganismos
oxidaban sulfuro de hidrgeno hasta azufre elemental (acumulando ste como grnulos), y luego
hasta cido sulfrico, obteniendo de este modo su energa. Estas observaciones pueden haber sido el
arranque del concepto de litotrofa. Pero el descubrimiento de la quimioautotrofa lleg cuando al ao
siguiente Winogradsky y Omeliansky pasaron a estudiar las bacterias nitrificantes, demostrando de
manera clara que la energa obtenida de la oxidacin del amonio o del nitrito era usada para fijar CO2
(1889-1890). Ms tarde el mismo Winogradsky extendi la demostracin a cultivos puros en los que el
agente solidificante de los medios era el gel de slice. La explicacin del proceso de oxidacin de los
compuestos de azufre no lleg hasta los estudios de Dangeard (1911) y Kiel (1912). Nuevas
capacidades metablicas fueron reveladas al estudiar los procesos respiratorios de las bacterias que
oxidan hidrgeno o metano (Shngen, 1906).
El qumico Berthelot haba sealado (1885) que los microorganismos del suelo podan incorporar
nitrgeno molecular directamente del aire. Fue igualmente Winogradsky el primero en aislar una
bacteria capaz de fijar nitrgeno atmosfrico (Clostridium pasteurianum) y en explicar el ciclo del
nitrgeno en la naturaleza (1890), siendo el holands Martinus Beijerinck (1851-1931) el descubridor
de Azotobacter como bacteria aerobia fijadora de vida libre (1901). Ms tarde Beijerinck demostr por
mtodos qumicos que, en efecto, Azotobacter incorpora nitrgeno de la atmsfera mientras crece
(1908). La importancia de la fijacin de nitrgeno para la nutricin vegetal lleg con los estudios sobre
bacterias formadoras de ndulos en las races de las leguminosas. Ya los experimentos cuantitativos
sobre plantas creciendo en recipientes, realizados por Boussingault a mediados del siglo XIX, haban
indicado que las leguminosas asimilaban nitrgeno de la atmsfera. En 1866 Voronin descubri las
bacterias de los ndulos radicales de esta familia de plantas. Frank, en 1879, demostr que los
ndulos parecan inducirse por las mismas bacterias albergadas en ellos, y Ward (1887) us bacterias
procedentes de ndulos machacados para inocular semillas, logrando la produccin de ndulos en
suelo estril, y describiendo en un bello trabajo el proceso de infeccin, con su produccin de hifas
(cordn de infeccin). Tras la introduccin del concepto de simbiosis por De Bary, en 1878, fue
Schindler (1884) el primero en describir los ndulos radicales como resultado de una simbiosis entre
planta y bacterias.
Los trabajos de Hermann Hellriegel (1831-1895) y de su colaborador Hermann Willfahrt (1853-1904),
que trabajaban en la Estacin Experimental de Bernburg, comunicados en primer lugar en un
congreso en Berln, en 1886, y publicados en un artculo ejemplar en 1888, asociaron la fertilidad
nitrogenada natural de las leguminosas con la presencia de sus ndulos radicales, sealando que
estos ndulos se inducan por microorganismos especficos; de este modo lograron una brillante
sntesis de las observaciones microbiolgicas y qumicas. El mismo ao de 1888 Beijerinck logr el
cultivo puro in vitro de las bacterias nodulares (a las que bautiz como Bacillus radicicola), observando

que no reducan nitrgeno en vida libre; ms tarde (1890) aport la prueba definitiva de que las
bacterias aisladas eran capaces de nodular especficamente ciertas especies de leguminosas,
adquirindose de esta forma la facultad de fijar nitrgeno en su asociacin con la raz de la planta.
Irnicamente el nombre definitivo para las bacterias de los ndulos de leguminosas (Rhizobium) fue
propuesto por Frank, quien durante mucho tiempo se haba negado a reconocer los resultados de

Hellriegel y Willfahrt, y que haba oscilado en sus opiniones, desde suponer que la fijacin de
nitrgeno era un rasgo general de las plantas, hasta creer que las estructuras intranodulares
observadas a microcopio (bacteroides) eran grnulos de reserva (incluidas las que l mismo observ
en plantas no leguminosas de los gneros Alnus y Eleagnus, originadas por una bacteria bautizada en
su honor -Frankia); incluso cuando se convenci de que los simbiontes eran bacterias (y no hongos o
mixomicetes), pensaba que stas slo estimulaban a que las plantas fijaran nitrgeno en sus hojas; su
conversin (y an as incompleta y con reticencias) no lleg hasta 1892. El aislamiento de los
bacteroides intranodulares (Prazmowski, 1890), y la relacin entre su formacin y la fijacin de
nitrgeno (Nobbe y Hiltner, 1893) complet esta primera oleada de investigacin sobre este tema que
tanta trascendencia presentaba para la Agronoma. Estos estudios estn en la base de todos los
ulteriores trabajos de Microbiologa Agrcola, de modo que esta especiliadad fue incorporada
tempranamente a los laboratorios cientficos y estaciones experimentales.
Las obras trascendentales de Winogradsky y Beijerinck abrieron un nuevo horizonte para el estudio de
la diversidad microbiana. La escuela de Beijerinck, en la Universidad Tcnica de Delft, fue continuada
por A.J. Kluyver y C.B. van Niel, siendo este ltimo el padre de la escuela norteamericana desde su
establecimiento en California, ya que form a figuras tan importantes como R.Y. Stanier, R.E. Hungate
o M. Doudoroff. La escuela holandesa fundada por Beijerinck tuvo asimismo otra fructfera colonia en
la ciudad alemana de Konstanz, donde N. Pfennig continu el trabajo emprendido junto a van Niel en
Delft. Todos estos autores, y sus colaboradores, fueron realizando contribuciones esenciales sobre
una amplia diversidad de bacterias, descubriendo la variedad de las bacterias fotosintticas, los tipos
de organismos litotrficos, y profundizando en multitud de aspectos estructurales y fisiolgicos de las
bacterias recin descubiertas. Como dice T.D. Brock en una recensin de Kluyver (1961) los hombres
de la escuela de Delft de Microbiologa General fueron pioneros en una poca en la que la mayora de
los investigadores estaban demasiado fascinados por problemas aplicados en medicina, agricultura o
industria, como para preocuparse por microorganismos quimiosintticos o fotosintticos, o por
aquellos que muestran fermentaciones inusuales.... Pero, como en tantas otras ocasiones, este
enfoque de ciencia bsica ha sido extraordinariamente frtil, y aparte de la profundizacin en la unidad
y diversidad de la vida ha dado origen a penetrantes percepciones en multitud de problemas
planteados, tarde o temprano, a las ciencias biolgicas.

1.3.Relaciones de la Microbiologa con otras ciencias

El auge de la microbiologa desde finales del siglo XIX se plasm, entre otras cosas, en el aislamiento
de gran variedad de cepas silvestres de microorganismos, lo que suministr un enorme volumen de
nuevo material biolgico sobre el que trabajar, aplicndose una serie de enfoques que eran ya
habituales en las ciencias naturales ms antiguas; as, haba que crear un marco taxonmico (con sus
normas de nomenclatura) para encuadrar a los organismos recin descubiertos, era factible
desarrollar trabajos sobre morfologa y fisiologa comparadas, sobre variabilidad y herencia, evolucin,
ecologa, etc. De este modo la joven Microbiologa fue objeto, en pocos aos, de la utilizacin, a un
ritmo acelerado, de los mtodos taxonmicos y experimentales que haban ido surgiendo y
madurando desde el siglo XVIII en los mbitos de la Historia Natural clsica.
Los esfuerzos tempranos para lograr un clasificacin bacteriana por parte de Cohn (1875) y Migula
(1894), que sustentaban su concepto de especie predominantemente sobre caracteres morfolgicos,
pero hacia 1900 era evidente la arbitrariedad e insuficiencia de este tipo de clasificaciones, de modo
que los intentos posteriores hicieron uso de caracteres bioqumicos (Orma Jensen, 1909), o de una
mezcla de rasgos morfolgicos, bioqumicos, patognicos y de tincin (Buchanan, 1915). El sistema
de taxonoma bacteriana adquiri un nuevo impulso a partir de la 1 edicin del Bergey's Manual of
Determinative Bacteriology (1923), y de las propuestas de Kluyver y van Niel (Prospects for a natural
system of classification of bacteria, 1936). En cuanto a la nomenclatura, no fue hasta 1958 en que se
gener un Cdigo Internacional de Nomenclatura Bacteriolgica, aunque ya se vena aplicando desde
haca tiempo el procedimiento tipolgico para los microorganismos, con criterios similares a los de la
Zoologa y la Botnica.
El establecimiento de relaciones taxonmicas precis el recurso a mtodos cada vez ms amplios y
afinados de anlisis gentico, estructural o fisiolgico. En un apartado anterior ya vimos las
conexiones tempranas entre la Bioqumica y la Microbiologa a propsito del descubrimiento de la
base enzimtica de las fermentaciones, lo cual abri el camino para dilucidar el metabolismo
energtico microbiano, y para demostrar su similitud qumica con rutas metablicas de organismos
superiores. Otro paso importante en la percepcin de la unidad bioqumica del mundo vivo deriva del
descubrimiento de las vitaminas (trmino acuado por Funk en 1911), al establecerse que
determinados factores de crecimiento requeridos por algunos microorganismos eran qumicamente
similares a las vitaminas necesarias en la dieta de los animales, y que este tipo de compuestos
representa precursores biosintticos de coenzimas del metabolismo celular. As pues, este tipo de
investigaciones sent claramente la idea de la unidad qumica de los seres vivos, independientemente
de su encuadre taxonmico, y encauz una buena parte de los trabajos bioqumicos hacia los
microorganismos, dadas sus cualidades de facilidad de manejo y cultivo en laboratorio.
En cuanto a las conexiones de la Microbiologa con la Gentica, ya Beijerink, en 1900, tras analizar la
teora de la mutacin de De Vries, haba predicho que los microoganismos podran convertirse en
objetos de investigacin ms adecuados que los sistemas animales o vegetales. Pero las primeras
conexiones entre ambas ciencias arrancan de la necesidad que hubo, a principios del siglo XX, de
determinar la sexualidad de los hongos con fines taxonmicos. En 1905 Maire demostr la existencia
de meiosis en la formacin de ascosporas, y Claussen (1907) evidenci fusin de ncleos en
Ascomicetos, mientras que Kniepp, hacia finales de los aos 30 haba recogido un gran volumen de
informacin sobre procesos sexuales en Basidiomicetos. El sueco Lindegren (1936) realiza las
primeras cartografas genticas en cromosomas de Neurospora, durante su estancia en el laboratorio
californiano de Morgan; este ltimo, propugnador de la teora de los genes (1926), confiaba desde
haca aos en ampliar sus xitos, logrados en Drosophila, hacia el estudio de la gentica microbiana.
En 1941, otros dos discpulos de Morgan, Beadle y Tatum, aislan mutantes auxotrficos de

Neurospora, con lo que se inicia el estudio de la base bioqumica de la herencia, y convierten a este
hongo en una valiosa herramienta de trabajo en esta lnea de investigacin.
Las estrategias diseadas por Beadle y Tatum fueron aplicadas por Luria y Delbrck (1943) a cultivos
bacterianos, investigando la aparicin de mutaciones espontneas resitentes a fagos o estreptomicina.
La conexin de estos experimentos con las observaciones previas de Griffith (1928) sobre la
transformacin del neumococo, llev a Avery y colaboradores (1944) a demostrar que el principio
transformante portador de la informacin gentica es el ADN. En 1949 Erwin Chargaff demuestra

bioqumicamente la transmisin gentica mediante ADN en Escherichia coli , y en 1952 Alfred

Hershey y Martha Chase, en experimentos con componentes marcados de fagos, ponen un elegante
colofn a la confirmacin de la funcin del ADN, con lo que se derribaba el antiguo y asentado
paradigma de las protenas que hasta mediados de siglo intentaba explicar la base de la herencia.
De esta forma, la Microbiologa experimental se sita en pleno centro del nacimiento de la Gentica
molecular, de la mano de los avances paralelos en Bioqumica (anlisis por rayos X de la estructura
del ADN debido a Maurice Wilkins y Rosalind Franklin, modelo de Watson y Crick de la doble hlice
del ADN, etc.), dando origen esta confluencia a lo que se ha llamado la Edad de Oro de la Biologa
Molecular.

1.4. Importancia de la Microbiologa

La Microbiologa es una de las Ciencias que tiene ms que ofrecer a los pases en desarrollo, por su
trascendencia en la salud pblica, medicina, agricultura e industria, siendo las colecciones de
microorganismos el epicentro que la sostiene, debido a que las exigencias de la investigacin son
cada vez ms firmes en el empleo de cultivos de procedencia conocida y garantizados en pureza y
conservacin. Sin cultivos microbianos sus constituyentes celulares o enzimticos no puede existir la
Microbiologa aplicada y por consiguiente, la Biotecnologa que se encarga de transformar los
resultados obtenidos de la ciencia bsica (Microbiologa, Biologa Molecular. Bioqumica, entre otras)
en productos y procesos de valor comercial.
La Microbiologa muestra una prometedora perspectiva de expansin a mltiples campos de la
actividad humana, desde el control de enfermedades infecciosas (higiene, vacunacin, quimioterapia,
antibioterapia) hasta el aprovechamiento econmico y racional de los mltiples procesos en los que se
hallan implicados los microorganismos (biotecnologas). La industria alimentaria utiliza
microorganismos en la produccin de vinagre, bebidas alcohlicas, aceitunas, mantequilla, queso,
yogurt, pan, entre otros. Adems, las bacterias y otros microorganismos ahora pueden ser
manipulados para producir sustancias que ellos normalmente no sintetizan; el impacto de las nuevas
tecnologas est determinando notables cambios en la Microbiologa. Entre los avances de mayor
trascendencia en los ltimos aos, se encuentran: la secuenciacin completa de genomas
bacterianos; la identificacin de microorganismos por tcnicas genotpicas; el desarrollo de la
microbiologa clnica; el reconocimiento y las posibilidades de la aplicacin de la biodiversidad
microbiana.
Existen cazadores de microbios modernos que en ambientes exticos, aslan bacterias nuevas, no
descritas, si se considera que se desconoce ms del 95% de las bacterias, el describir bacterias
nuevas parecera una actividad sin fin. En este sentido, resulta interesante investigar si existen
microorganismos en extincin y cules seran las causas. Se desconoce los efectos que la actividad
humana tiene sobre los microorganismos; la devastacin de selvas y bosques probablemente tienen
efectos drsticos sobre los microorganismos; los fertilizantes qumicos alteran las poblaciones de
bacterias fijadoras de nitrgeno, y el uso de antibiticos ha favorecido la proliferacin de las
resistentes. Por otra parte, se estn realizando investigaciones sobre la obtencin de genes del
ambiente, donde no importa el microorganismo del que provenga el gen, ya que la meta es expresarlo
en alguna bacteria conocida y obtener un producto novedoso que pueda probarse como frmaco,
insecticida o promotor del crecimiento.
La secuenciacin de genomas completos ha mostrado la existencia de enormes cantidades de genes
potenciales, cuya funcin se desconoce; una manera de descifrar su funcin es eliminarla de las
clulas por mutacin. Se puede prever que el futuro de la investigacin en microbiologa, requerir de
la generacin de un enorme nmero de mutantes en muchos genes potenciales de diferentes
especies. Esta tarea parece titnica, sin embargo, es factible.
Otro enfoque ingenioso con perspectivas a futuro es de la "evolucin in vitro", aqu se mezclan genes
de diferentes vas inclusive de vas metablicas no relacionadas y tambin se pueden incluir genes
mutados al azar o por recombinacin. El objetivo es obtener sntesis de enzimas, protenas,
compuestos novedosos; esta estrategia ha sido utilizada con xito en la sntesis de nuevos
carotenoides. Mediante manipulaciones genticas ms tradicionales de ingeniera gentica se han
logrado microorganismos productores de diferentes compuestos, existen bacterias que producen
cantidades prodigiosas de riboflavina (vitamina B2), o se ha cambiado la especificidad de una enzima
en otra, la enzima lactato deshidrogenasa se convirti en la enzima malato deshidrogenasa.

En Microbiologa se han seleccionado modelos de estudio y algunos de stos se han analizado con
gran profundidad, ello se ve reflejado en el nmero de publicaciones por microorganismo; por
ejemplo, E. coli es la bacteria en la que ms investigacin se hace y entre los hongos ms estudiados
se encuentra Saccharomyces. Sin embargo, una vez que se detecta un microorganismo de inters se
puede avanzar muy rpido en su conocimiento basado en lo que se sabe en otros microorganismos,
este ha sido el caso del virus del SIDA y en Helicobacter pylori, de este ltimo, por su importancia
mdica, se secuenciaron dos cepas, se han secuenciado las islas de patogenicidad de muchas cepas
y se han implementado experimentos de citoxicidad en diferentes lneas celulares de humano.

La identificacin de los organismos causantes de brotes infecciosos es posible gracias al uso de

tcnicas moleculares que permiten rastrear, a manera de detectives, la fuente de la contaminacin, as
por ejemplo, muy recientemente las diarreas de unas pocas personas en ciudades alejadas en
Estados Unidos, se atribuyeron a que el perejil que fue adquirido por algunos restaurantes llevaba
Shigella sonnei por haber sido regado con agua contaminada; la rapidez en la deteccin evit que
otras personas enfermasen, se estima que si se hubiera podido realizar este tipo de rastreo en aos
anteriores, como en 1993, se hubieran podido prevenir algunos de los decesos causados por las E.
coli enteropatgenas de las hamburguesas.

UNIDAD NO. 1
MTODOS Y TCNICAS MICROBIOLGICAS BSICAS.

2.1 Aislamiento y Seleccin de Microorganismo

2.1.1 RESERVORIO DE MICROORGANISMOS
2.1.1.1 Agua, Suelo y Aire
Diversidad en Ambientes
Raramente podemos encontrar a los microorganismos como cultivos puros.
Cada especie de cada microorganismo se encuentra en diferentes ambientes
donde existen las condiciones necesarias para su crecimiento: agua, suelo y
aire, por lo que tambin las tcnicas de aislamiento ser diferente para cada
ambiente y para cada especie de microorganismo.
Agua
El agua es un amiente donde existen diferentes microorganismos y cada uno
de ellos realizan diferentes actividades en el ambiente. Tambin, los
microorganismos forman parte esencial en la cadena alimenticia, as mismo,
tambin son instrumentos en el proceso de reciclaje de elementos presentes
en el agua. Llamaremos por agua a los ambientes acuticos a todas las
extensiones de agua presentes en el globo terrqueo: mares, ros, arroyos,
aguas domsticas, aguas residuales, etc.
Distribucin de los Microorganismos
Plancton
Es una forma de vida flotante y a la deriva en extensiones de agua. Son
mviles debido a las caractersticas de flotacin que presentas, algunas de
ellas estn cubiertas por gotas de aceite o simplemente por la estructura que
presenta. Existen dos grupos principales: fitoplancton, que son todas las algas;
y el zooplancton, lo constituyen los protozoos y los animales vivos diminutos.
Microorganismos Bentnicos
Esta clase de microorganismos habitan en el fondo de una masa grande de
agua y sta a su vez es la regin ms rica en microorganismos de un estuario
marino puesto que contiene millones de microorganismos por gramo de agua.
El Papel de los Microorganismos
Algas:

Son productores primarios

Predominan en el fitoplancton

Por fotosntesis cambian energa radiante en compuestos

qumicos.
Protozoos:

Se alimenta del fitoplancton

Evita la luz y hace migraciones diurnas
Presentes en la regin del zooplancton

Plancton:
Fuente de alimento de peces, ballenas, calamares.

Capacidad de producir materia orgnicafertilidad delos ocanos.

Crecimiento dependiente de energa radiante, CO2, N2 orgnico y de

compuestos de fsforo.

Producen color caracterstico de algunos mares.

Suelo
El suelo es otro de los ambientes donde abundan los microorganismos. Debido
a que en este medio se depositan diversos residuos, ocurren cambios en la
naturaleza y ambiente, todos estos cambios, sin embargo, son modulados y
controlados por diferentes clases de microorganismos.
Bacterias, hongos, algas, protozoos y virus son abundantes y se presentan en
cantidades de miles de millones de organismos por gramo de suelo. Debido a
la gran diversidad de microorganismos, al realizar un cultivo muestra slo se
puede recuperar un pequeo sector de todos los miles de microorganismos
presentes. Es por ello que se requiere de muchos estudios para conocer y
clasificar a los microorganismos. Esta es una labor extenuante porque, como ya
mencionamos, existe un gran nmero de microorganismos por cada gramo de
suelo.

Los microorganismos principalmente realizan los cambios de materia mediante

un proceso bioqumico: cambios qumicos de compuestos orgnicos e
inorgnicos y los procesos cclicos del ciclo del nitrgeno y la fijacin del
nitrgeno.

Fijacin de Nitrgeno
Transformacin del N2 atmosfrico en nitrgeno de un compuesto.

Microorganismos no simbiticos:
Viven libres en independientes en el suelo
Microorganismos simbiticos:

Viven en races de algunas plantas

Bacterias del gnero Rhizobium

Se establecen en las clulas de hospedador (raz)

Fijacin Simbitica del Nitrgeno

Clulas aumentan tamao formando ndulos

Leguminosas, bacterias y ndulos= sistema de fijacin.

Bacterias hacen el nitrgeno aprovechable por la planta

Bacterias utilizan nutrientes de los tejidos de la planta.

Aire
Este ambiente es distinto de los anteriores. Ac los microorganismos no
cuentan con las condiciones necesarias para su crecimiento ni reproduccin
sino slo servir como vehculo o medio de transporte que las esparcir por los
diferentes ambientes, ya sea en forma de gotitas o acompaadas de polvo.
La cantidad de microorganismos presentes en el aire est en funcin de las
fuentes de contaminacin y la sobrevivencia de los microorganismos est
definida por las condiciones atmosfricas, humedad, luz solar y temperatura.
Contenido microbiolgico del Aire
Dentro de los edificios

Est influido por las corrientes de ventilacin, generalmente los

microorganismos son depositados en el aire en pequeas gotitas que fluyen de
la nariz y la boca, estas partculas micromtricas quedan en el aire que
posteriormente se desplazarn por la presencia de corrientes de aire y las
partculas ms grandes quedarn fijadas en el. Tambin depender del nmero
de personas dentro del edificio, poco nmero de personas indica que tambin
habr poco nmero de microorganismos, a mayor nmero de personar la
cantidad de microorganismos tambin aumentar.
Atmsfera
El contenido microbiano estar definido por partcula de polvo proveniente del
suelo, gotas de agua provenientes de masas de agua, agentes contaminantes
generados por actividades industriales, agrcolas y domsticas. Las esporas de
hongos son las ms abundantes en este ambiente.
2.1.2 Animales y Plantas
Animales
En los animales tambin podemos encontrar diferentes microorganismos,
algunos son dainos para la salud produciendo enfermedades, alguna curables
y otras no, pero tambin encontramos a los que estn relacionados o qu la
sobrevivencia depende de la relacin microorganismo-animal.
Debido a la alimentacin de cada animal, se dice que estos no pueden
sobrevivir con preses pequeas en relacin a su tamao: microorganismos. Los

microorganismos que habitan en los animales generalmente son hospedadores

de los tractos intestinales donde estos microorganismos contribuyen a la
digestin y algunos a la produccin de vitaminas y los desechos de los
animales forman parte del ciclo del nitrgeno donde nuevamente los
microorganismos desempean un papel importante.

No todos los microorganismos son benficos para los animales, algunos tienen
interacciones negativas. Existen las depredaciones por hongos y nematodos; las
que alteran el habitad: Eutroficacin: agota el oxgeno disuelto y puede provocar
la muerte de los peces, alteraciones en los alimentos (bioacumulacin), la
produccin de toxinas y las que causan infecciones.
Plantas
Las plantas son un habitad microbiano que varia dependiendo de la temperatura
de las plantas a lo largo del da como del ao. Los microorganismos no se
transfieren fcilmente de planta a planta y stos se hospedan principalmente en
las races de la misma donde realizan las funciones simbiticas. Los
microorganismos satisfacen sus requerimientos bsicos para su crecimiento y
reproduccin; as como los microorganismos se benefician con las plantas, las
plantas tambin tienen influencia de los microorganismos: el reciclado y la
solubilizacin de los nutrientes minerales; sntesis de vitaminas, aminocidos,
auxinas, citoquinas y giberelinas; sntesis de sustancias alelopticas
(antagnicas) inhiben crecimiento de otras plantas.

2.1.2 MTODOS Y TCNICAS DE AISLAMIENTO Y SELECCIN

Una vez conocidos los habitad de los microorganismos, podemos extraer algunos
de ellos para su estudio, al aislamiento de un microorganismos en un medio de
cultivo se le conoce como cultivo puro. Los cultivos puros se pueden lograr por
diferentes tcnicas de muestreo y aislamiento. Tambin es menester mencionar
que se debe tener cuidado en contar con las condiciones adecuadas para el

crecimiento de las bacterias: pH, nutrientes requeridos, temperatura para el

crecimiento y reproduccin, etc.
2.1.2.1 Estra en Placa.
El inculo se siembra sobre la superficie de un medio del tipo del agar nutritivo,
en una caja Petri, haciendo estras con una aguja enmangada o con una asa
bacteriolgica. El mtodo ms utilizado es por cuadrantes (ya sea por dilucin o
conservacin).

2.1.2.2 Vertido en Placa

El inculo se deposita en mezclas de agar fundido, posteriormente son vaciadas
en cajas petri. Algunas de las colonias crecern en la superficie del medio
despus del periodo de incubacin.

2.1.2.3 Extensin en Placa con Varilla de Vidrio

Se coloca una gota de inculo en el centro de una caja petri con un medio del tipo
agar nutritivo y utilizando un tubo de vidrio doblado o con un asa Diralsky se
extiende el inculo sobre la superficie del medio. Puede utilizarse la misma varilla
de vidrio para inocular una segunda placa para asegurar una adecuada
dispersin de las clulas. En algunas cajas aparecern colonias aisladas.

2.1.2.4 Enriquecimiento Poblacional

Para mejorar la probabilidad de aislar un organismo que posee una caracterstica
fisiolgica o bioqumica nica, se puede sembrar por estra, por extensin en
placa o en masa, pasando el inculo a travs de una serie de transferencias, a un
medio de una composicin (y condiciones de incubacin) que favorezcan el
desarrollo del microorganismo deseado. El procedimiento de enriquecimiento
aumenta en efecto la proporcin del organismo deseado en relacin con la que
estaba presente en el inculo inicial.
2.1.2.5 Diluciones en Serie
Est mtodo permite reducir la concentracin de los microorganismos cuando
ste crezca demasiado. Este es uno de los mtodos ms sencillo y barato y se
pueden obtener un nmero definido de colonias.

2.1.2.6 Micromanipulacin
Mediante un micromanipulador se puede usar una micropipeta para obtener un
solo microorganismo de una suspensin de clulas en un lquido, mientras se
examina la preparacin con el microscopio. La clula aislada es luego transferida
a un medio estril.

Micromanipulador

2.1.3 SELECCIN DE MICROORGANISMOS DE INTER INDUSTRIAL:

SCREENING
Deteccin y aislamiento de microorganismos de inters industrial de entre una poblacin compleja de
organismos utilizando procedimientos selectivos.
Screening Primario: Deteccin y aislamiento de microorganismos potencialmente tiles.

Screening Secundario: Estudio de los microorganismos aislados en el screening primario para

separar los que tienen inters potencial de los que tienen inters real y mejorar estas cepas
seleccionadas.

Para llevar a cabo un screening primario generalmente se parte de una poblacin mixta (suelo,
fermentaciones naturales, etc.) donde existe tanto una gran cantidad como variedad de
microorganismos potencialmente tiles que debemos seleccionar. Para ello lo primero que hacemos
es utilizar medios selectivos donde crezca el tipo de microorganismo que nos interesa aislar.
A este medio se le pueden aadir inhibidores para eliminar los que no nos interesan. Por ejemplo, si
queremos obtener un microorganismo aerobio lo creceramos en presencia de O 2 con lo que los
anaerobios no creceran; o bien si queremos seleccionar hongos, aadiramos cloranfenicol,
antibitico que acta frente a bacterias pero que no afecta a los hongos.
Los parmetros generales que tenemos que tener en cuenta son la fuente de carbono, fuente de
nitrgeno, aireacin, temperatura, pH e inhibidores. Posteriormente se reaslan en cultivo puro
aquellos microorganismos que hemos aislado para su posterior estudio.

2.2 Cultivo de microorganismos.

2.2.1 Clasificacin de los microorganismos con base a sus
requerimientos nutricionales
La nutricin es el proceso por el cual los seres vivos toman del medio donde habitan, los
compuestos qumicos que necesitan para llevar a cabo sus procesos energticos y biosintticos
que les permiten crecer y reproducirse. Los requerimientos nutricionales de cada grupo microbiano
estn dados por la composicin qumica de las clulas que los constituyen y por sus
caractersticas genticas las que determinan sus propiedades fisiolgicas y su capacidad para
utilizar y transformar los compuestos que se encuentran en el ambiente en que se desarrollan. En
general los requerimientos nutricionales de los microorganismos reflejan el ambiente natural en
que viven; este conocimiento y el uso de medios de cultivo de composicin qumica definida, son
de primordial importancia en el estudio de la nutricin microbiana cuyas caractersticas varan
ampliamente entre los microorganismos. Algunos tienen requerimientos nutricionales muy simples,
obtienen su energa de compuestos inorgnicos y utilizan CO2 o carbonatos como fuente de
carbono, en tanto que otros requieren de compuestos orgnicos con diferentes grados de
complejidad. La fuente de nitrgeno, la obtienen a partir de aminocidos o nitrgeno inorgnico en
diferentes estados de oxidacin incluyendo el nitrgeno molecular. Respecto a los requerimientos
de oxgeno, los microorganismos pueden vivir con diferentes concentraciones de este elemento.
En el siguiente experimento se pondrn de manifiesto el tipo de nutricin y necesidades de
oxgeno de diferentes microorganismos, para ello, estos se inocularn en dos medios de cultivo,
en el primero se variarn las fuentes de carbono y de nitrgeno y en el segundo la tensin de
oxgeno y se relacionarn sus caractersticas nutricionales con el desarrollo y las transformaciones
qumicas microbianas obtenidas en los diferentes medios de cultivo,

De acuerdo con estos criterios, los microorganismos se ubican en cuatro clases nutricionales las
que se describen en el cuadro 1. No obstante, la versatilidad fisiolgica de los microorganismos
determina que la clasificacin expuesta no sea de ninguna manera estricta, como lo demuestran
los siguientes ejemplos: algunos microorganismos fotoauttrofos crecen tambin en la oscuridad
comportndose como quimiohetertrofos. Esta versatilidad se conoce con el trmino de facultativo.
Asimismo, algunas bacterias y algas fotoautotrficas son incapaces de sintetizar alguno de sus
constituyentes celulares a partir de CO2, por lo que generalmente viven asociadas con otros
microorganismos que le proporcionan este componente y cuando se les cultiva en medios
artificiales es necesario suministrar ese compuesto orgnico. Es importante recalcar que aun
cuando el grupo bacteriano es, desde el punto de vista estructural, el ms simple de los
microorganismos (procariotes); fisiolgicamente es el ms complejo y el nico en el que se
encuentran todos los tipos nutricionales descritos.

2.2.2 Tipos de nutrientes.

2.2.2.1 Macronutrientes.
2.2.2.2 Micronutrientes.
La nutricin microbiana consiste en suministrar a las clulas los ingredientes qumicos que necesitan
para hacer monmeros, ya que recordemos las clulas estn compuestas fundamentalmente por
agua y macromolculas, y estas estn estructuradas o formadas precisamente por los monmeros

antes mencionados. Y los nutrientes como vimos anteriormente son esos famosos compuestos
qumicos que la clula necesita para vivir.
Las distintas especies bacterianas tienen diferentes requerimientos nutricionales (a veces especficos)
y condiciones fisicoqumicas que les permiten permanecer viables.
Los nutrientes requeridos en grandes cantidades son denominados macronutrientes mientras que los
micronutrientes son necesarios en cantidades trazas.
Entre los primeros se encuentran C, H, O, N (los ms abundantes), P, S, K, Ca, Fe y Na, y entre los
segundos podemos citar Cr, Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V, Zn. Algunos organismos, adems de los
minerales, necesitan muy pequeas cantidades de nutrientes de naturaleza orgnica llamados
factores de crecimiento. stos son vitaminas, aminocidos, purinas y pirimidinas. Los organismos que
tienen tales requerimientos se denominan auxtrofos para diferenciarse de los prottrofos que son
independientes de tales factores.

MACRONUTRIENTES
Vamos a comenzar hablando de los macronutrientes, como dijimos anteriormente estos son los que la
clula requiere o consume en mayor cantidad, precisamente por ser suministro de la mayor parte de
energa metablica, o de funcionamiento en la clula, a continuacin mostraremos una tabla en la que
se detalla los principales macronutrientes, su fuente natural en el ambiente, y su forma suministrada
en los medios de cultivo:

Ahora analizaremos cada uno de ellos, con sus respectivas funciones en el medio de cultivo y por lo
tanto en el requerimiento nutricional de los microorganismos.

Carbono: Muchas procariotas necesitan algn tipo de compuesto orgnico como fuente de
carbono. Los estudios nutricionales han demostrado que las bacterias pueden asimilar varios
compuestos orgnicos carbonados y usarlos para hacer nuevo material celular. Los aminocidos, los
cidos grasos, los cidos orgnicos, los azucares, las bases nitrogenadas, los compuestos aromticos
y sin fin de compuestos orgnicos de otro tipo pueden ser por una u otra bacteria. Algunos procariotas
son auttrofos, capaces de construir todas sus estructuras orgnicas a partir del dixido de carbono
con la energa obtenida de la luz o de compuestos inorgnicos. En peso seco, una clula tpica
contiene un 50% de carbono; el carbono es el principal elemento de todas las clases de
macromolculas. La ms utilizada es la glucosa (una pentosa).

Nitrgeno: Despus del carbono, el siguiente elemento ms abundante en la clula es el

nitrgeno. En una bacteria tpica alrededor del 12 % de su peso es nitrgeno, este elemento es
importante en las protenas, en los cidos nucleicos y en otros constituyentes celulares. En la
naturaleza el nitrgeno se encuentra en forma inorgnica y orgnica. Sin embargo la mayor parte del

nitrgeno natural disponible esta en forma inorgnica, como el amoniaco (NH3), nitratos (NO3) o N2.
La mayora de las bacterias son capaces de utilizar amoniaco como nica fuente de nitrgeno, y
muchas pueden utilizar nitratos. El nitrgeno gaseoso puede ser usado como fuente de nitrgeno en
algunas bacterias, las bacterias fijadoras de nitrgeno.

Fsforo: El fsforo se presenta en la naturaleza en forma de fosfatos orgnicos e inorgnicos,

y la clula lo necesita fundamentalmente para la sntesis de cidos nucleicos y fosfolpidos.
Recordemos que el ADN se encuentra formado por nucletidos, los cuales se constituyen por una
base nitrogenada, una pentosa (azcar), y por supuesto un grupo fosfato que sirve como unin o
enlace entre los nucletidos, es por esto que la presencia de fosforo es muy importante.

Azufre: El azufre se lo necesita o se lo requiere porque es un componente estructural de los

aminocidos cistena y metionina, y aparte de eso porque se presenta en ciertas vitaminas, como la
tiamina, la biotina, y el acido lipoco, as como en la coenzima A. Es muy importante sealar tambin
que en las protenas se depende de los enlaces de azufre para que esta se mantenga compacta y no
se desnaturalice, razn por la cual este elemento es indispensable en muchos de los
microorganismos. El azufre sufre una serie de transformaciones qumicas en la naturaleza, muchas de
las cuales son llevadas a cabos exclusivamente por microorganismos, y es utilizado por ellos en
varias formas qumicas. La mayora del azufre celular procede de fuentes inorgnicas, ya sean
sulfatos (SO4) 2-, sulfuros (HS)-.

Potasio: El potasio es necesario en todos los organismos. Una gran diversidad de enzimas lo
requiere especficamente, como por ejemplo algunas implicadas en la sntesis de protenas.

Magnesio: El magnesio funciona como estabilizador de los ribosomas, las membranas

celulares, y los cidos nucleicos, y tambin se necesita para la actividad de varias enzimas.

Calcio: El calcio, que no es un nutriente esencial para el crecimiento de muchos

microorganismos, ayuda a estabilizar la pared celular bacteriana y tiene una funcin importante en la
termorresistencia en las endoesporas.

Sodio: El sodio es requerido, por algunos microorganismos, aunque no todos, y su necesidad

suele ser un reflejo del hbitat del microorganismo. Por ejemplo el agua de mar tiene un elevado
contenido de sodio y los microorganismos marinos normalmente lo requieren para su crecimiento; en
cambio, otras especies muy relacionadas, pero de agua dulce, crecen bien en ausencia de este
elemento.

Hierro: El hierro es fundamental en la respiracin celular y es tambin un elemento clave para

los citocromos y para las protenas que contienen hierro y azufre implicados en el transporte de
electrones. En condiciones anaerbicas, el hierro se encuentra por lo general en estado de oxidacin
+2 y por lo tanto es soluble. Sin embargo, bajo condiciones aerbicas suele estar en el estado de
oxidacin +3 y formar varios minerales no solubles. Para obtener el hierro de tales minerales, las
clulas producen agentes quelantes de hierro llamados siderforos, que solubilizan el hierro y lo
transportan dentro de la clula. Un grupo importante de siderforos derivan del cido hidroxmico y
quelan el hierro frrico +3 fuertemente. Una vez que el complejo hierro hidroxamato pasa a la clula,
el hierro se libera y el hidroxamato puede salir y ser reutilizado de nuevo para el transporte de hierro.
Las bacterias como el Escherichia coli y Salmonella Typhimutium producen siderforos fenlicos,
estructuralmente complejos, llamados entereobactinas. Estos siderforos derivan del compuesto
aromtico catecol y tienen una elevada afinidad de unin de hierro. Sin tales agentes quelantes de
hierro muchas bacterias patgenas seran incapaces de iniciar la infeccin debido a la limitacin de
hierro.
En las aguas marinas, el hierro prcticamente es indetectable (las aguas ocenicas superficiales
tpicamente solo unos cuantos picogramos de hierro por milmetro y se han encontrado bacterias
marinas que producen siderforos estructuralmente complejos capaces de secuestrar el hierro
presente en concentraciones tan bajas. Estos siderforos poseen una regin peptdica que compleja
el fe +3 y una regin lipdica que se asocia con la membrana celular. Compuestos como la
aquachelina, unen el hierro, se agregan en micelas, y luego transportan el hierro a la clula

Algunos procariotas pueden crecer en ausencia total de hierro. Por ejemplo las bacterias Lactobacillus
plantarum y Borrelia burgdorferii no contienen hierro. El Mn 2+ sustituye en estas bacterias al hierro
como componente metlico de las enzimas que normalmente contienen Fe+2.

MICRONUTRIENTES
Los micronutrientes como dijimos anteriormente son los que la clula consume en menos cantidades,
pero eso no quiere decir que son menos importantes que los macronutrientes, para nada, en realidad
son igual de importantes que los que se consumen en grandes cantidades. Los micronutrientes son
metales, muchos de los cuales tienen una funcin estructural en varias enzimas. La tabla presentada
a continuacin resume los principales micronutrientes en los sistemas vivos y enzimas que los
contienen.
Debido a que la necesidad de estos elementos trazas es muy pequea en cuanto a su concentracin,
con frecuencia no es necesario aadirlos a los medios de cultivo para cultivar microorganismos en el
laboratorio. No obstante, si un medio de cultivo contiene compuestos muy puros, disueltos en agua
destilada de elevada pureza, puede darse una deficiencia en algn elemento traza. En tales casos, se
aade al medio una pequea cantidad de una solucin de metales traza a fin de suministrar los
metales necesarios.
Es importante recalcar que el hierro como vemos se encuentra dentro de los micronutrientes pero
generalmente se lo considera como uno macro, ya que en realidad dentro de todos los metales
sealados, es el que ms es utilizado por ciertas clulas, se la lleg a considerar micro por su
naturaleza metlica, pero por su importancia y requerimiento elevado en las clulas se lo considera
como un macronutriente.

2.2.2.3 Factores de crecimiento.

Requerimientos de Nitrgeno
El nitrgeno en los compuestos orgnicos de las clulas se presenta en estado reducido como grupo
amino. La gran mayora de los organismos fotosintticos asimilan el nitrgeno en estado inorgnico
como nitratos, que posteriormente son reducidos. Muchos organismos no fotosintticos como
bacterias y hongos tambin pueden asimilar el nitrgeno como nitrato, otros microorganismos son
incapaces de llevar a cabo esta reduccin y utilizan como fuente de nitrgeno formas reducidas de
este. Las necesidades de nitrgeno se cubren frecuentemente con materiales orgnicos que
contienen nitrgeno en estado reducido.
Requerimientos de Azufre
El azufre en los compuestos orgnicos de las clulas se presenta en estado reducido como grupo
sulfhidrilo. La mayora de los organismos fotosintticos asimilan el azufre en estado inorgnico como
sulfatos que posteriormente son reducidos. Bacterias y hongos tambin pueden asimilar el azufre
como sulfato. Las necesidades de azufre, se cubren frecuentemente con materiales orgnicos que
contienen azufre en estado reducido.
Requerimientos de Oxgeno
En los organismos superiores, el oxgeno es un componente universal de las clulas y gran parte de
este elemento lo proporciona el agua. No obstante, los organismos superiores y muchos
microorganismos necesitan adems oxgeno molecular, ya que dependen de la respiracin aerobia
como mecanismo generador de energa, donde el oxgeno acta como oxidante terminal. A estos
organismos que requieren oxgeno molecular se les denomina aerobios obligados. Dentro de esta

categora, hay algunos grupos que crecen mejor a presiones parciales de oxgeno ms bajas (0,2
atmsferas) que las del aire y se les denomina microaerfilos.

Otros microorganismos, obtienen energa por la va fermentativa o por respiracin anaerobia, que no
implica la necesidad de oxgeno como oxidante terminal. En muchos casos el oxgeno puede actuar
como una sustancia txica o bien inhibir el crecimiento. A estos microorganismos se les denomina
anaerobios obligados.
Otros microorganismos pueden crecer tanto en ausencia como en presencia de oxgeno molecular,
alternando la respiracin con la fermentacin, a estos se les denomina anaerobios facultativos. Un
caso particular son las bacterias del cido lctico, que no son sensibles al oxgeno molecular y en
presencia de ste, continan la fermentacin.

2.2.5 Esterilizacin y asepsia

Esterilizacin por calor:
El calor es el mtodo de eleccin para esterilizar el material de laboratorio resistente a las altas
temperaturas. La temperatura y el tiempo requeridos para esterilizar un material dependende que se
est utilizando calor seco o calor hmedo.

Esterilizacin con calor seco: La accin bactericida del calor seco se debe a la oxidacin fsica de
un procedimiento lento o coagulacin de la protena bacteriana por quemadura. En ausencia de
humedad se necesita una temperatura ms alta,ya que en esta forma los microbios son destruidos al
absorber el calor. Pueden ser dos tipos:
Directa: flameado o incineracin ms utilizada enlaboratorios y en algunos hospitales
pequeos.
Indirecto: aire caliente u horno de Pasteur con temperatura de 160C a 180C por 1 a 2 horas
siendoel ms eficaz y seguro el elctrico.
Esterilizacin con calor hmedo:El calor hmedo es la forma de vapor saturado a presin es eficaz
para la destruccin de todas las formas microbianas, incluso espora. La muerte de las bacterias es
causada por la desnaturalizacin y coagulacin de su protena o su sistema intercelular enzimaprotena. Estas reacciones son catolizadas por medio del agua. Estas pueden de dos tipos:

Calor hmedo discontinuo: algunos medios de cultivo que contiene carbohidratos como
lagelatina, leche, etc. no soportan temperaturas elevadas.

Vapor a presin: conocido como autoclave, que posee todos los requisitos indispensables
comogrados de temperatura y tiempo de exposicin, que junto con el tamao del autoclave y el flujo
delvapor, la densidad y el tamao de la carga en la cmara aumentan la tasa se muerte de
losmicroorganismos, en una temperatura de 121C 132C durante 15 minutos o ms.
Esterilizacin
por
radiacin:
La ionizacin por radiacin genera iones al liberar electrones de lostomos, estos se desprenden
violentamente con tomos adyacentes y se une a ellos, o bien se desprenden del segundo tomo. La
energa liberada se transforma en energa trmica o qumica la cual causa la muerte de los
microorganismos al romper la molcula del ADN e impide la divisin molecular y la propagacin de la
vida. Las principales fuentes de radiacin ionizante son las partculas Beta y rayos gamma.
Esterilizacin por gas xido de etileno:
Este es un gas incoloro, soluble en agua y en solventes comunes, se emplea para esterilizar objetos
sensibles al calor, este proceso es relativamente lento. El poder bactericida depende de la
concentracin del mismo gas, temperatura, humedad y tiempo de exposicin. La actividad esporicida
se produce por aniquilacin de los grupos terminales hidroxilo,carboxilo, amino y sulfridrilo.

Esterilizacin por glutaraldehido:

La solucin acuosa de glutaraldehido activado y amortiguado al 2%,destruye a los microorganismos
por desnaturalizacin de la protena. Es preferida para esterilizar instrumentos que no pueden
esterilizarse al vapor o no se cuenta con otro mtodo de esterilizacin.
Filtracin:
Las clulas microbianas pueden retirarse de los lquidos o gases por filtracin. La filtracin es lenta y
cara (debe usarse un filtro nuevo cada vez); por esta razn, se utiliza slo para los lquidos
termolbiles, que no se pueden esterilizar en el autoclave. Los slidos termolbiles tambin se pueden
esterilizar por filtracin, si previamente se disuelven en un lquido. Tcnicamente, la filtracin no
esteriliza porque los virus pueden pasar a travs de los filtros, pero el proceso es suficiente para la
mayora de los estudios de rutina que se llevan a cabo en el laboratorio.

2.3 Criterios utilizados en la identificacin de microorganismos

1. Mtodos basados en criterios morfolgicos
Los rasgos morfolgicos (estructurales) han ayudado a los taxonomistas por muchos aos a
clasificar organismos. Los organismos superiores tienen rasgos anatmicos tan diferentes
que pueden ser fcilmente utilizados en su clasificacin, pero con respecto a los
microorganismos, stos lucen bajo el microcoscopio tan similares que se dificulta su clasificacin. Es decir, que estos microorganismos que se
ven tan parecidos bajo un microscopio, pueden diferir en propiedades bioqumicas, fisiolgicas y/o
serolgicas. Sin embargo, aun cuando la morfologa celular dice poco sobre las relaciones filogenticas, sigue siendo til para la identificacin bacteriana. Por ejemplo: la presencia de endosporas y
su localizacin resulta de mucha utilidad en la
identificacin de bacilos esporulados.

2. Mtodos basados en tincin diferencial

Es posible sacar conclusiones en relacin con la
morfologa de una bacteria, examinando una lmina
que fue sometida a un proceso de tincin diferencial. Estos criterios morfolgicos encabezan las
primeras etapas del proceso de identificacin bacteriana. La mayor parte de las bacterias, teidas con
Gram, las podemos clasificar como gram positivas o
gram negativas, otras tinciones diferenciales, como la
cido resistente, se aplican a otro tipo de bacte- rias,
como por ejemplo micobacterias. Un examen
microscpico de una lmina teida por medio de gram o de una tincin diferencial es til
para obtener una informacin rpida sobre la calidad de un ambiente clnico. Por otro la- do,
un mdico tambin puede obtener suficiente informacin de un reporte tcnico de laboratorio para comenzar el tratamiento apropiado de un paciente.

3.
4. Mtodos basados en pruebas bioqumicas
Las pruebas bioqumicas han sido ampliamente
utilizadas para diferenciar bacterias. Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar azcares, la
presencia de enzimas, la degradacin de compuestos, la produccin de compuestos coloreados, etc. Aun bacterias fuertemente relacionadas
pueden separarse en dos especies diferentes con
base a pruebas bioqumicas. Por ejemplo,
las bacterias entricas gram negativas, forman un grupo muy grande y heterogneo cuyo
hbitat natural es el tracto gastrointestinal de humanos y otros animales. Esta familia, Enterobacteriaceae, incluye a varios patgenos que causan sndromes diarreicos. Un gran
nmero de ensayos han sido desarrollados de manera de identificar rpidamente al patgeno, para que posteriormente el mdico, con base al reporte, indique el tratamiento adecuado,
o para que los epidemilogos puedan localizar la fuente de la infeccin.
Existen flujogramas, como el que se describe a continuacin
riana, mediante pruebas bioqumicas de microorganismos. Por
coco bacilo gram negativo, facultativo, fermentador de glucosa,
la presencia de una enterobacteria, para determinar su gnero
esquema.

para la identificacin bacteejemplo, la presencia de un

oxidasa negativo, nos indica
podemos seguir el siguiente

Fermenta
No

Si

Pueden utilizar
No

Shigella:
produce lisina
Decarboxilasa

Si

Pueden utilizar
No

Si

Salmonella: Generalmente produce H2S

Produce
acetona?

Escherichia
No

Si
Enterobacter

Los gneros clnicamente ms importantes de la familia Enterobacteriaceae son: Escherichia, Salmonella, Shigella, Citrobacter y Enterobacter. El gnero Escherichia, Enterobacter y Citrobacter fermentan la lactosa con produccin de cido y gas, a diferencia de
los gneros Salmonella y Shigella que no fermentan la lactosa.
Por otra parte, los medicamentos no estriles y/o productos cosmticos deben estar exentos de microorganismos patgenos tales como: Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli,
Salmonella spp. Staphylococcus aureus. Estos productos deben ser controlados pa- ra
verificar la ausencia de estos microorganismos. En la USP se describen los procedimientos a seguir para la identificacin de estas bacterias, que se resumen en procedimientos de enriquecimiento, aislamiento y pruebas bioqumicas para su identificacin fi- nal.
El tiempo necesario para la identificacin de bacterias puede reducirse considerablemen- te
con el uso de sistemas miniaturizados basados en pruebas bioqumicas. Estas herramientas
que permiten reducir el tiempo del reporte, en primer lugar fueron elabora- dos para
bacterias de importancia mdica, tales como las enterobacterias. Estos siste- mas han
sido diseados para realizar varias pruebas bioqumicas simultneamente y permitir la
identificacin en un tiempo ms corto. Cada uno de los ensayos, consta de tu- bos
miniaturizados que contienen el medio de cultivo que se hidratan al inocularlos con la
suspensin bacteriana pura. Las pruebas se clasifican en grupos; a cada uno de resulta- dos
positivos de los ensayos de se le asigna un determinado valor numrico, obtenindo- se un
cdigo que corresponder a un determinado gnero o especie en un texto de la base de
datos.

Con fines de control microbiolgico, la USP indica cuales son las pruebas bioqumicas
mnimas que se requieren para la identificacin de los microorganismos objetables, pero no
descarta que se utilicen sistemas miniaturizados donde se realizan un nmero mayor de
pruebas bioqumicas.
Existen muchas casas comerciales que producen sistemas miniaturizados para diferen- tes
tipos de microorganismos adems de las enterobacterias. Cada casa fabricante tiene su
propia presentacin, clculos, manuales, etc.
Una limitacin de este tipo de mtodo de identificacin es la aparicin de cepas mutantes y la
adquisicin de plasmidios que pueden dar origen a cepas con caractersticas diferen- tes.
Este tipo de mtodo de identificacin tambin ha sido desarrollado para la identifica- cin de
levaduras y de otros hongos.

4. Mtodos basados en tipificacin con fagos

La interaccin entre un virus bacteriano (fago) y su clu- la
bacteriana sensible es sumamente especfica, ya que el
proceso de adsorcin se encuentra mediado por receptores especficos tanto en el virus como en la clula
bacteriana. A una placa con medio de cultivo slido inoculado con un cultivo puro de una determinada bacteria, se
le aade una alcuota de un fago especfico; ste puede
ocasionar la lisis de las bacterias, hecho que se evidencia
en el cultivo como zonas claras definidas, de- nominadas
placas, que indican que hubo infeccin y lisis celular. El
uso de fagos especficos permite identificar y subclasificar
bacterias dentro de una misma especie.

5. Mtodos basados en ensayos serolgicos

Los mtodos serolgicos, implican la utilizacin de preparaciones de inmunoglobulinas
especficas provenientes del suero o de un reactivo, y que pueden ser de gran utilidad en la
identificacin microbiana en muestras puras o en muestras biolgicas. Cada uno de los
mtodos tiene su fundamento particular, pero en lneas generales, todos se basan en la
reaccin de un antgeno presente en el agente microbiano con su anticuerpo correspondiente. La solucin que contiene los anticuerpos se denomina antisuero.
Estos mtodos son muy tiles en diversas situaciones:

Si a travs de un sistema miniaturizado basado en pruebas bioqumicas se determin que

la bacteria causante de la infeccin es un
miembro del gnero Salmonella, utilizando
una batera de antisueros contra el antgeno O
presente en el lipopolisacarido de las bacterias
gram negativas, es posible identificar a la
Sal- monella aislada hasta el nivel de serotipo
(poli O, A, B, C, D, etc.).

La inmunofluorescencia ha resultado ser

sumamente til en casos de infecciones de diferente origen. Puede utilizarse para la identificacin del microorganismo aislado o presente
en una muestra biolgica. En el mtodo directo
se fija la muestra problema a una lmina y se
pone en contacto con el antisuero especfico
marcado con una sustancia fluorescente (rodamina o fluorescena). Una vez transcurrido el tiempo para que tenga lugar la reaccin antgeno anticuerpo, se expone la lmina a la radiacin ultravioleta para visuali- zar
la reaccin. Tambin existe la tcnica indirecta, donde en primer lugar se utiliza el
anticuerpo especfico no marcado y posteriormente se utiliza un anti anticuerpo marcado.

En caso de una infeccin viral,

los virus no pueden ser identificados mediante pruebas bioqumicas, pero si pueden ser
identificados en diferentes fluidos biolgicos utilizando inmunoensayos, tales como el ELISA (Enzyme-linked immunoabsorbent assay), el cual, a manera general, utiliza anticuerpos
monoclonales especficos para
el antgeno a identificar, marcados con una enzima.
En un ensayo de ELISA tipo
sandwich, los anticuerpos especficos para el antgeno, se colocan sobre los pozos de una
microplaca, posteriormente se
aade la muestra donde se quiere
determinar la presencia del
agente (bacteria, virus,
protozoario). Si el agente est presente ocurre la reaccin antgeno-anticuerpo; luego del lavado
se aade el anticuerpo especfico marcado con la enzima. Una
vez transcurrido el tiempo de incubacin y realizado el lavado
correspondiente, se aade el
sustrato. Si se desarrolla un color se trata de un resultado positivo. Estos ensayos, al igual que otros, involucran el uso
de controles positivos y negativos.

Inmunoensayos tipo ELISA han sido desarrollados para la deteccin e identificacin

de varios tipos de agentes microbianos. Ejemplos: VIH, virus de la Hepatitis A,B,C,
Chlamydea trachomatis, Legionella pneumophili, Mycoplasma pneumoniae, Escherichia coli, Entamoeba hystoliticum, Haemophilus influenzae, Neisseria.
6. Mtodos basados en biologa molecular
Modernamente adquiere ms importancia el uso de mtodos basados en biologa
molecular donde, a travs de procedimientos y reactivos, se pueden detectar determinadas secuencias de ADN que son propias de un determinado agente microbiano.
El mtodo que se est utilizando ampliamente en los laboratorios de diagnstico es el
PCR (Polymerase Chain Reaction), que se aplica generalmente para la identificacin demicroorganismos que no pueden ser cultivados por los mtodos convencionales. A
travs de este mtodo, puede aumentarse la cantidad de ADN hasta niveles detec- tables
mediante electroforesis o mediante sondas de ADN.

El proceso de PCR, puede resumirse en 4 etapas, que se repiten un n nmero de veces:

1. Separacin de las cadenas de ADN, ello se realiza aumentando la temperatura, la

cual rompe los enlaces de hidrgeno que mantiene unidos a las cadenas de ADN.
2. Adicin de cadenas cortas de polinucletidos, denominados cebadores, que se
unen por complementariedad de bases a cada una de las cadenas del fragmento
de ADN que se desee amplificar. Uno se une a la cadena 5 ---3 y otro a la cadena 35.
3. Disminucin de la temperatura para permitir que los cebadores hibridicen con las
cadenas de ADN de la muestra problema, por complementariedad de bases.
4. Adicin de la ADN polimerasa, los cuatro nucletidos (ATP, GTP, TTP, CTP) y
dems cofactores, para que tenga lugar la sntesis de la cadena complementaria.
5. Repeticin de las etapas 1 a 4.
Este proceso se caracteriza por ser exponencial. En cada ciclo se duplica la regin de
ADN ubicada entre los cebadores.

Este procedimiento se realiza en un equipo denominado termociclador, que permite

regular las diferentes temperaturas que se requieren para cada uno de los pasos.
A continuacin se enumeran ejemplos de agentes microbianos subclasificados
bacterias, virus y protozoario, que han sido identificados mediante PCR.

en

Bacterias:
Borrelia burghdoferi, Vibrio cholerae, Helicobacter pylori, Stahylococcus aureus,
Chlamydea trachomatis, Shigella dysenteriae, Treponema pallidum, Escherichia coli
enterotoxinognica, Mycobacterium tuberculosis y Legionella pneumonophilia, Campylobacter jejuni.
Virus: Parvovirus, Herpes-simplex virus, Rotavirus, Papillomavirus, Virus del dengue,
Virus Varicella-Zoster, Virus de la Rubola, Adenovirus, Rhinovirus.

Protozoarios: Plasmodium falciparium, Toxoplasma gondii, Entamoeba histolyticum,

Pneumocystis carinii, Trypnanosoma cruzi.

Otro mtodo que tambin ha sido ampliamente utilizado y que se fundamenta en

complementariedad de bases de cidos nucleicos, son aquellos que utilizan sondas de
ADN, que se definen como secuencias de oligonucleotidos de ADN marcados, con un
32 125
35
elemento radioactivo ( P, I, S) o con una protena unida a una enzima co- mo la
fosfatasa alcalina. Estas sondas se utilizan para la deteccin de una secuencia
complementaria de ADN o ARN, presente en el agente que se desea identificar.
La muestra, que se supone que contiene un agente microbiano con una secuencia
complementaria que se desea identificar, se coloca en un filtro, se trata de manera tal de
liberar al cido nucleico, se calienta para que las cadena s complementarias

se separen. Posteriormente se aade la sonda, y se deja transcurrir un periodo para

que tenga lugar la hibridacin si existe la cadena complementaria. La unin de la
sonda a la secuencia complementaria se detecta mediante la seal radiactiva que
emite la sonda o mediante mtodos enzimticos.

A continuacin se presentan una lista con ejemplos de bacterias que han sido
detec- tadas e identificadas por medio de sondas de ADN:

Bacterias gram negativas: Neisseria gonorrhoeae, Campylobacter

jejuni, Campylobacter coli, Haemophilus influenzae.

Bacterias gram positivas: Streptococcus Grupo A, Streptococcus Grupo B,

Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Listeria
monocytogenes.

Micobacterias: Mycobacterium tuberculosis, M. Avium, M. Intracelulare.

Hongos: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitis, Cryptococcus

neo- formans, Coccidiodes immitis.

Siempre que sea posible se debe utilizar el mtodo ms eficiente y ms barato.

Las identificaciones utilizando PCR son muy costosas debido a los equipos, los
reactivos y los materiales de laboratorio que se deben utilizar. El rea donde se
realiza una parte del ensayo slo puede utilizarse para un determinado agente.

2.4 Preservacin de microorganismos.

Los tres objetivos que hay que alcanzar para conservar correctamente las cepas microbianas
en los laboratorios de microbiologa son: que el cultivo a conservar sea puro, evitando que se
produzcan contaminaciones durante el proceso de conservacin; que durante el tiempo de
conservacin sobrevivan al menos el 70-80% de las clulas, y por ltimo, que estas clulas
permanezcan genticamente estables. Los dos primeros objetivos no son muy difciles de
conseguir cuando se conoce bien la tcnica microbiolgica, pero el tercero puede presentar
dificultades, y este es el motivo por el cual existen varios mtodos de conservacin para los
microorganismos, y ninguno de ellos es de utilizacin general. Vamos a resumir estos mtodos
agrupndolos en tres apartados, que son: Mtodos de eleccin o de conservacin a largo
plazo, mtodos alternativos y mtodos restringidos.

Mtodos de eleccin o de conservacin a largo plazo.

Son los mejores porque en ellos se paraliza el crecimiento de las clulas microbianas, pero
stas no han muerto. As se garantiza al mximo la estabilidad gentica, por evitarse la
aparicin de generaciones sucesivas. An as no se puede descartar algn cambio originado
por el mtodo preparatorio en si mismo. Los mtodos de conservacin pertenecientes a este
grupo son dos: Congelacin y liofilizacin.
a

Conservacin por congelacin.

Se congelan las clulas en suspensin en un lquido con un agente crioprotector y se guardan

a temperaturas inferiores a cero grados centgrados, con lo que el agua se congela. De esta
forma, al no disponer las clulas de agua en forma lquida, no hay crecimiento. Cuando se
quiere trabajar con las clulas as conservadas, se recuperan subiendo la temperatura. Este es
el mejor mtodo de conservacin desde todos los puntos de vista, pero tiene el inconveniente
de requerir aparatos especiales, y adems existe el peligro de que algn fallo del sistema
produzca una subida no deseada de la temperatura durante el almacenamiento. Tambin
resulta ser el mtodo ms molesto para realizar el envo de las cepas. Los cuatro factores que
influyen en la viabilidad y estabilidad de las clulas conservadas por este mtodo son los
siguientes:
1 Edad de las clulas: En la mayora de los casos conviene utilizar clulas maduras
del inicio de la fase estacionaria de la curva de crecimiento, pero cuando se trate
de organismos que presenten en su ciclo vital algn estado que les prepare para la
resistencia a condiciones adversas, es preferible alcanzar este estado. Esto sucede
en el caso de microorganismos que esporulan, en algunos pleomrficos e incluso
en algunos ms sencillos.
2

Velocidad en la congelacin y descongelacin: Aunque hay programas de

congelacin bien estandarizados para determinados casos o circunstancias, en
general es mejor que las variaciones de la temperatura sean rpidas, tanto para la
congelacin como para la descongelacin, por lo que para descongelar conviene
poner las clulas a 37C.

Temperatura de almacenamiento: Debe ser lo ms baja posible. Lo mejor es

guardar tubos cerrados o sellados, que contengan las clulas microbianas,
sumergidos en nitrgeno lquido, que tiene una temperatura de 195C, o bien en
la fase gaseosa del nitrgeno lquido, con una temperatura de

140C.

En el mercado existen variados tipos de armarios congeladores, de los cuales los

ms aconsejables son los que alcanzan temperaturas por debajo de 70C.
Aquellos que slo alcanzan temperaturas entre 20C y 40C, como ocurre con la
mayora, no son aconsejables, entre otras cosas porque debido a la gran
concentracin de solutos que existen en la suspensin celular, su punto de
congelacin baja. El dao que se produce en las clulas es debido a que a estas
temperaturas hay frecuentes congelaciones y descongelaciones. Si se aade un
crioprotector no inico, como por ejemplo el glicerol, se reduce la cantidad de hielo
que se produce y se evita el aumento de la concentracin inica.
Para la conservacin en armarios congeladores, las clulas se almacenan en
criotubos (tubos de plstico esterilizables resistentes a la congelacin que cierran
hermticamente), preparando lotes de varios tubos para cada cepa a conservar y
utilizando en su totalidad un tubo para cada ocasin. De esta manera se evita que

las cepas se congelen y se descongelen varias veces. Esto tambin se puede

evitar empleando tubos con criobolas (bolas de tipo abalorio que se impregnan con
la solucin celular a congelar), ya que para tomar una muestra basta con emplear
una o varias bolitas sin necesidad de descongelar el resto. Este mtodo no se debe
emplear para la conservacin de microorganismos anaerobios, como por ejemplo
el gnero bacteriano Clostridium, ya que al estar las clulas en una superficie hay
un mayor contacto con el oxgeno y puede afectarse la viabilidad.
4

Empleo de agentes crioprotectores: Estas sustancias protegen del dao que se

pueda producir en las clulas microbianas en el momento de la congelacin.
Existen muchos compuestos que se pueden utilizar como crioprotectores, pero el
que se utiliza con ms frecuencia es el glicerol, a una concentracin del 15 al 20%.
Tambin se pueden utilizar el dimetilsulfxido, la leche descremada y carbohidratos
como glucosa, lactosa, sacarosa, inositol, etc. En su eleccin influye el tipo de
microorganismo que se quiera conservar.

Conservacin por liofilizacin.

Tampoco se da crecimiento en las clulas conservadas por este mtodo, puesto que se les ha
quitado el agua mediante la liofilizacin, que es un proceso suave. Con ello la estabilidad
gentica es alta, pero a veces no tanto como en la congelacin, porque la liofilizacin se
consigue por sublimacin del hielo de las clulas. Por lo tanto, primero tenemos que congelar el
agua libre de las clulas y despus eliminarla mediante el vaco, sin que haya necesidad de
subir la temperatura, lo que acabara afectando a la viabilidad del microorganismo. Para este
proceso se emplean los aparatos denominados liofilizadores, de los que hay muchos modelos
en el mercado. Las clulas microbianas as conservadas se someten a un tratamiento ms
complejo que en el caso de la congelacin, pues la liofilizacin se hace en dos etapas y se
aade la sublimacin del agua a la congelacin previa. Sin embargo, este es un mtodo muy
recomendable por su comodidad para el almacenamiento y para el envo de las cepas, pues
una vez conseguidos los lifilos pueden almacenarse a temperatura ambiente (18C-20C), con
lo cual su envo es muy cmodo.
Los factores que hay que tener en cuenta para hacer una buena liofilizacin son lgicamente
los mismos que influyen en la congelacin, a los que habr que aadir otros que surgen como
consecuencia de la deshidratacin. Sin embargo, antes de pasar a explicar stos, tenemos que
hacer unas breves consideraciones sobre los que antes hemos mencionado para el caso de la
congelacin. La congelacin puede hacerse rpida o lentamente, la primera sumergiendo los
tubos en nitrgeno lquido. Respecto a los crioprotectores, ya vimos que se pueden utilizar
varios dependiendo del tipo de microorganismo, pero para liofilizar no se debe utilizar glicerol,
debido a su elevado punto de evaporacin y a su higroscopicidad, que provoca que los lifilos
queden muy viscosos. Tampoco es conveniente utilizar el dimetilsulfxido, porque es algo
txico, y al concentrarse por la evaporacin del agua puede daar a las clulas microbianas.
Por lo tanto, para la liofilizacin se recomiendan como crioprotectores el inositol para la mayora
de las bacterias y la leche descremada para hongos y actinomicetos, pero para algunos
microorganismos pueden ser ms convenientes otros crioprotectores, como por ejemplo el
glutmico-glutamato para las bacterias lcticas, mezclas de glucosa con caldo hgado o
chopped meat (sin carne) para bacterias anaerobias, etc.
Los nuevos factores que influyen especficamente en la eficacia de la liofilizacin como medio
de conservacin son:
1 Tipo de microorganismo. Hay algunos microbios que no resisten la liofilizacin y
lgicamente sern aquellos que contengan ms agua en su interior. Algunos hongos
filamentosos, especialmente los no esporulados, no se pueden guardar liofilizados y
hay que recurrir a otros mtodos.

Concentracin celular. Lo mejor es liofilizar suspensiones celulares con una

concentracin del orden de 10 8-109 clulas/ml en el caso de las bacterias y algo inferior
en el caso de hongos filamentosos y levaduras.

Temperatura durante la sublimacin. Debe ser lo ms baja posible, sin subir por encima
de 50C.

Grado de deshidratacin alcanzado. Debe ser lo ms alto posible, aunque la

concentracin de solutos puede conllevar una pequea cantidad de agua remanente
que no es perjudicial.

Atmsfera de oxgeno en el tubo. Las clulas liofilizadas se guardan en tubos cerrados

al vaco para evitar, tanto la rehidratacin como la presencia de algn gas dentro del
tubo, como el oxgeno que puede daar a las clulas.

Condiciones de almacenamiento. La temperatura debe ser constante, preferentemente

a 18C y sin bajar de los 0C. Los lifilos se deben guardar en la oscuridad.

Mtodos alternativos.

Son los que se utilizan cuando no se pueden emplear los mtodos de eleccin, bien por
carecer de los equipos necesarios, o bien porque la cepa microbiana no resiste los tratamientos
de la conservacin por estos mtodos. Conviene tener en cuenta que nunca se debe usar un
nico mtodo alternativo, sino que se recomienda conservar el microorganismo empleando
varios de estos mtodos.
a

Conservacin por transferencia peridica.

La cepa microbiana se guarda en forma de cultivo activo en el medio de cultivo en el que ha

crecido. Sin embargo, estas clulas no pueden permanecer indefinidamente en el mismo tubo,
porque al seguir activas excretan productos txicos del metabolismo que se acumulan,
provocando el envejecimiento y muerte celulares, por lo que es necesario transferirlas a otro
tubo con medio de cultivo fresco. Este es el peor mtodo para conseguir la estabilidad gentica,
puesto que al estar las clulas creciendo hay una alternancia de generaciones, y al cabo del
tiempo las clulas que se estn guardando sern descendientes lejanas de las clulas iniciales
y es posible que ya no conserven algunas de sus caractersticas. Si se va a utilizar este mtodo
es aconsejable retardar el envejecimiento y alargar los periodos entre dos resiembras. Esto se
puede conseguir de varias maneras como por ejemplo: disminuyendo la cantidad de inculo;
rebajando la proporcin de algunos nutrientes en el medio de cultivo; inoculando en picadura
los microorganismos que son anaerobios facultativos, ya que el crecimiento en presencia de
oxgeno es ms rpido y origina productos generalmente txicos; y almacenando los cultivos a
4C-8C. A veces tambin se suele recubrir el crecimiento con una capa de aceite mineral
estril. Con esto se consigue tambin evitar en la medida de lo posible la desecacin del medio
de cultivo, que podra ser txico para las clulas al aumentar su concentracin. Hay que tener
en cuenta que los microorganismos muy aerobios, como por ejemplo los hongos filamentosos,
no se pueden guardar en tubos completamente cerrados. Por ltimo, otro inconveniente que
tiene la transferencia peridica es que la contaminacin de los cultivos resulta ms fcil al tener
que manejar los tubos a lo largo del tiempo y tambin por la posibilidad de entrada de caros
en los mismos.
b

Conservacin por suspensin en agua destilada o en agua de mar estril.

Es un mtodo alternativo muy utilizado y que da altos porcentajes de viabilidad en diversos

tipos de microorganismos, tanto hongos filamentosos como levaduras y algunas bacterias.
Consiste en suspender en agua estril unas cuantas clulas del cultivo que se quiere
conservar. Se pueden preparar en criotubos de los anteriormente mencionados. En este caso la
concentracin celular no debe ser superior a 10 4-105 clulas/ml en el caso de bacterias y
levaduras. Para los hongos filamentosos que no esporulan, se pueden poner en suspensin

trocitos de agar con el crecimiento del hongo. En el caso de microorganismos marinos, la

suspensin se hace en agua de mar diluida.
Los resultados obtenidos por la CECT en la conservacin de microorganismos por este mtodo
muestran altos porcentajes de viabilidad en periodos a veces superiores a 5 aos. La
estabilidad para caracteres morfolgicos y fisiolgicos es buena, pero no se ha comprobado
para caracteres especficos como la virulencia, el poder fermentativo, etc.
C

Mtodos restringidos.

En este grupo se engloban mtodos no empleados habitualmente, pero a los que es necesario
recurrir a la hora de conservar grupos de microorganismos muy determinados que no resisten
bien la liofilizacin o la congelacin, como por ejemplo los gneros bacterianos Spirillum,
Rhodospirillum, etc. Los cuatro mtodos que vamos a citar se basan en la paralizacin del
crecimiento por eliminacin del agua disponible para las clulas.
a Desecacin en papel de filtro.
Se utiliza un papel bastante absorbente (Whatmann n 3) que se impregna con una solucin
muy densa de clulas y se deja secar al aire (en condiciones estriles). Tambin es posible
desecarlos por el procedimiento que se llama desecacin lquida (L-Dry) porque se utiliza para
ello el liofilizador, pero sin que haya habido congelacin previa de las clulas. El vaco
producido por el liofilizador deseca las clulas, pero hay que evitar que un vaco excesivo
provoque evaporacin brusca con ebullicin o que la temperatura disminuya demasiado,
ocasionando la congelacin incontrolada de las clulas.
b

Desecacin en suelo, arena, silicagel, etc.

Se aaden las clulas a estos sustratos que las protegern al desecar. Los microorganismos
productores de esporas se pueden conservar durante bastante tiempo por este mtodo.
c

Desecacin en bolitas de alginato.

ste es un procedimiento bastante eficaz. Las clulas se encuentran en una matriz de alginato
y la eliminacin del agua se hace por tratamiento con soluciones hipertnicas sucesivas y
posterior desecacin al aire hasta que se pierde un 70% de su contenido en agua. Estas bolitas
de alginato se pueden conservar en tubos cerrados hermticamente y a temperaturas de entre
4C y 18C, pudindose guardar incluso a 80C debido al bajo contenido en agua de las
clulas y la proteccin que suministra el soporte de alginato. Este es un mtodo que se est
utilizando incluso para la conservacin de algas y clulas vegetales.
d

Desecacin en sal gorda para halobacterias.

Para su conservacin por este mtodo se mezclan las clulas con sal y se dejan desecar
espontneamente. Debido a la higroscopicidad de la sal, la desecacin no es total, pero las
clulas dejan de multiplicarse por ser insuficiente el nivel de agua disponible.
Por ltimo, y a modo de resumen, unas consideraciones finales. Cualquiera que haya sido el
mtodo empleado en la conservacin de las cepas microbianas, cuando stas se recuperan
para hacer nuevos lotes para su conservacin o para trabajar con ellas, se recomienda no
utilizar directamente las clulas que se han estado guardando, porque stas vienen de una
situacin de estress ms o menos fuerte (sobre todo cuando se han conservado por
liofilizacin) y por lo tanto no son adecuadas para ningn tipo de prueba. Primero habra que
revitalizarlas o rejuvenecerlas sembrndolas en un medio no selectivo, es decir, un medio que
asegure lo ms posible el crecimiento, y a partir de este primer crecimiento ya se puede
trabajar con ellas, cultivndolas en medios selectivos cuando sea necesario. Igualmente hemos
de tener presente que, dada la enorme diversidad microbiana, cada microorganismo soportar
determinados mtodos de conservacin mejor que otros, o ser necesario tomar precauciones
especiales en su conservacin. Como ya dijimos al comienzo, no existe un mtodo general de
conservacin de los microorganismos, aunque no resulta difcil determinar el ms aconsejable
en cada caso. La mayora de microorganismos de inters sanitario pueden conservarse a largo
plazo con los mtodos generales de congelacin y/o liofilizacin, y para periodos cortos pueden

mantenerse vivos por alguno de los mtodos alternativos si se hace en las condiciones
adecuadas y bien controlados por un microbilogo.

Unidad 3 Microrganismos procariotas

3.1 Bacteria (Eubacteria).
MORFOLOGA DE LAS BACTERIAS.
La morfologa bacteriana debe considerarse desde dos puntos de vista:
1)
como clulas individuales observables slo al microscopio y
2)
como colonias bacterianas apreciables a simple vista despus de desarrollarse en la
superficie de medios de cultivo slidos.
Las diferencias en el tamao, forma y ciertos detalles estructurales son caractersticos de los
principales grupos de bacterias, y proporcionan las bases fundamentales para su estudio
sistemtico e identificacin. De la misma forma, las colonias bacterianas, compuestas por
masas de clulas individuales, tienen caractersticas de tamao, consistencia, textura y color
que poseen un valor sistemtico, pero no tienen la importancia fundamental de la morfologa
celular.
Tamao de las bacterias.
El tamao de las clulas bacterianas se mide habitualmente en micrmetros, oscilando entre
los 1 x 10 m de los bacilos grandes como Bacillus anthracis, y los 0,2 x 0,7 m de Francisella
tularensis. Existen ligeras variaciones de tamao de las clulas bacterianas dentro de algunas
especies, siendo mayores las fluctuaciones entre las formas bacilares que entre las formas
esfricas. Los lmites de tamao entre las clulas bacterianas y los virus no tienen una frontera
bien definida, pues curiosamente existen virus ms grandes que ciertas bacterias.
Formas de las bacterias.
Desde el punto de vista microscpico, la diferencia ms importante entre las bacterias es su
forma, existiendo tres tipos morfolgicos claramente distinguibles:
Formas esfricas o cocos. Formas alargadas o bacilos.
Formas curvadas, comas o espirilos
Cocos
Las bacterias esfricas son las ms homogneas con respecto al tamao, presentando un
dimetro medio de 0,6 a 1,0 m. La forma no siempre es exactamente esfrica, observndose
como ms comunes las siguientes variaciones:
Formas lanceoladas. Formas en grano de caf.
Formas cocobacilares (achatadas)
Las diferencias entre los subtipos de cocos se basan en los agrupamientos celulares. Estos
aparecen como consecuencia de dos factores: el plano o planos de divisin celular y la
tendencia de las clulas hijas a permanecer unidas entre s, una vez que se completa la
divisin.
Los cocos que se separan completamente despus de la divisin aparecen individualmente, y a
esta forma se le llama coco. Cuando hay una ligera tendencia a que las clulas hijas
permanezcan unidas y la divisin celular ocurre en un solo plano, los cocos se agrupan
predominantemente en pares, llamados diplococos. Si la unin es ms marcada, se ven largas
cadenas de cuatro cocos o ms; estos agrupamientos se conocen como estreptococos.
Cuando los cocos se dividen en varios planos, y hay una elevada tendencia a que
permanezcan unidos, aparecen racimos irregulares de cocos, semejantes a racimos de uvas;
estos agrupamientos se denominan estafilococos.
Sin embargo, la separacin de subtipos morfolgicos no es absolutamente ntida, y en una
misma colonia pueden observarse cadenas o racimos junto con formas aisladas o en parejas. A
pesar de todo esto, los grupos morfolgicos tienen mucho valor prctico en la identificacin y
clasificacin de cocos.

Bacilos
Las formas alargadas o bacilares agrupan una gran cantidad de subtipos morfolgicos. Las
diferencias en anchura, longitud y forma de los extremos de la clula proporcionan una
considerable heterogeneidad a la forma bacilar. En funcin de la tendencia de las clulas hijas
a permanecer unidas, los bacilos presentan tambin agrupaciones celulares caractersticas,
citando como ejemplo las formas en empalizada ( ///// ) o en V ( <<< ) o en letras chinas.
Aunque son hasta cierto punto caractersticos, los agrupamientos de clulas bacilares no tienen
la misma importancia morfolgica que el agrupamiento de cocos.
Espirilos:
El tercer tipo morfolgico es la forma espirilar, que puede considerarse como un bacilo que se
ha torcido adoptando la forma de hlice. Aunque la curvatura se observa ocasionalmente en
muchas formas bacilares, en el gnero Vibrio es suficientemente constante como para tener
importancia diferencial. Los vibrios pueden presentar una forma espirilar si las clulas
permanecen unidas por sus extremos.
Las verdaderas bacterias espirilares pueden ser de dos tipos: con espira rgida o con espira
flexible. Al conjunto de las formas espirilares flexibles se le conoce como espiroquetas. La
clasificacin y diferenciacin de las espiroquetas patgenas se basa en criterios morfolgicos
tales como la longitud de vuelta, el ngulo en los extremos de la clula, la presencia de una
envuelta externa y la composicin del filamento axial.
Caractersticas de las colonias bacterianas.
Cuando las bacterias crecen en la superficie de un medio de cultivo slido, las clulas en
divisin permanecen aproximadamente fijas en su posicin y forman masas de muchos
millones de clulas visibles a simple vista. Las colonias as formadas varan desde un tamao
diminuto, apenas visible, hasta masas de varios milmetros de dimetro.
Su tamao, forma, textura, olor y en algunos casos color son, a veces, muy orientativos para la
identificacin de las bacterias que la componen. Aunque estas caractersticas dependen a
menudo de la naturaleza del medio de cultivo y de las condiciones de incubacin, cuando stas
se controlan cuidadosamente, son muy constantes y, en muchas ocasiones, tienen un valor
diferencial considerable.
La morfologa de las colonias es una de las caractersticas bsicas de las bacterias y es
indispensable su estudio para comenzar correctamente una identificacin preliminar. Las
caractersticas morfolgicas ms importantes de una colonia bacteriana aislada sobre un medio
de cultivo slido son:
Tamao:
El tamao de las colonias bacterianas es, en condiciones de cultivo favorables, bastante
uniforme para cada especie o tipo. La visualizacin del tamao se suele hacer a simple vista,
aunque a veces es preferible utilizar lupas o estereoscopios para poder discernir con mayor
claridad las caractersticas morfolgicas a observar. Las colonias de estreptococos, por ej., son
relativamente pequeas (menos de 1 mm de dimetro), mientras que las de estafilococos o las
de algunos bacilos pueden alcanzar hasta 1 cm de dimetro. Es importante destacar que las
caractersticas de una colonia deben estudiarse siempre sobre el mismo tipo de medio de
cultivo, para evitar las diferencias surgidas por la diferente composicin de los mismos.
El tamao de las colonias bacterianas podemos expresarlo en las siguientes categoras:
Pequeas o puntiformes: 1 mm de dimetro o menor
Medianas: hasta 4 mm de dimetro
Grandes: mayores de 4 mm de dimetro
El tamao de las colonias debe ser considerado y medido en la parte final de la zona de
aislamiento, que es donde presentan su mximo tamao. No deben valorarse ms que colonias
bien aisladas.
Morfologa:
La morfologa de una colonia viene dada por su borde y forma de elevarse sobre el medio de
cultivo.
El borde puede ser liso (redondeado u ovalado) o irregular (aserrado, lobulado o espiculado).
Si pudisemos hacer un corte en un plano perpendicular a la base de la colonia podramos
encontrar las siguientes posibilidades:

semiesfrica o convexa
plana o en disco
acuminada

cerebroide
plana con bordes elevados (en crter).
plana con centro elevado (en huevo frito)

Superficie:
La superficie de la colonia, examinada mediante luz reflejada, puede mostrar un aspecto liso y
brillante a la luz o, por el contrario, una textura irregular, rugosa y mate, sin brillo. Puede
mostrar un aspecto filamentoso o cerebroide.
La utilizacin de una lupa estereoscpica permite la observacin de esta caracterstica
mediante la deteccin del reflejo del filamento de la lmpara en la superficie de la colonia.
Consistencia:
Las colonias bacterianas pueden tener una consistencia variable, desde seca y frgil a
grasienta y cremosa o viscosa y pegajosa. Esta caracterstica slo se aprecia cuando tocamos
las colonias con el asa de siembra.
Podremos observar colonias "duras" que se deslizan fcilmente por la superficie del medio,
siendo difcil manipularlas con el asa. A menudo estas colonias se fragmentan al intentar
cogerlas.
Otras colonias tienen apariencia cremosa, con superficie brillante generalmente y fciles de
manipular con el asa. La mayora de las colonias tienes consistencia mantecosa, siendo muy
fcil obtener pequeas porciones de la misma, que quedan bien adheridas al asa de siembra.
En algunas ocasiones las colonias son extremadamente viscosas y tienden a formar filamentos
mucosos cuando intentamos retirarlas con el asa.
Pigmentacin:
Es caracterstico slo de unas pocas especies bacterianas. La pigmentacin slo se observa en
colonias, y nunca en clulas individuales. Dentro de las bacterias patgenas, una de las formas
pigmentadas ms importantes es Staphilococcus aureus, cuyas colonias son normalmente de
color amarillo dorado. En ocasiones, el pigmento difunde al medio, dando a ste una tonalidad
caracterstica en algunas especies. Pseudomonas, por ejemplo, produce un pigmento verdoso
que puede ser fcilmente reconocido en medios incoloros como el Mueller-Hinton.
Hay que tener especial precaucin para no atribuir una falsa pigmentacin a colonias que se
han desarrollado en medios con determinadas sustancias nutritivas (azcares) e indicadores de
cambio de pH. Por ejemplo, los grmenes que utilizan la lactosa para su metabolismo darn
colonias de color amarillo en un medio que contenga este azcar y un indicador de pH
adecuado.
Hemlisis:
Algunas bacterias, fundamentalmente los cocos, pueden ser capaces de hemolizar los
hematies de un medio nutritivo slido como el agar sangre. Esto es debido a la liberacin de
unas sustancias denominadas hemolisinas. La hemlisis de los hematies adyacentes a la
colonia puede ser intensa o ligera y se observa como un halo verdoso ms o menos claro
alrededor de la colonia. La hemlisis intensa se denomina eta hemlisis; la hemlisis parcial
se conoce como alfa hemlisis y la ausencia de sta se define como gamma hemlisis. La
produccin de hemlisis en una placa de agar sangre es una de las caractersticas que ayudan
a diferenciar los diferentes tipos de estreptococos.
Olor:
Ciertos tipos de bacterias descomponen los sustratos que utilizan para su metabolismo
desprendiendo sustancias voltiles que proporcionan un olor caracterstico a los cultivos puros
de dichas bacterias. Como intentar definir un olor es tan difcil como subjetivo, slo os dir que

ser nicamente la prctica diaria la que os permita un reconocimiento adecuado de esta

caracterstica.
Puesto que estas caractersticas aparecen en grados y combinaciones variables de unas
bacterias a otras, el aspecto de las colonias es a menudo bastante caracterstico, permitiendo
distinguir distintas clases de bacterias en cultivos mixtos o contaminados. La diferenciacin en
base a un criterio morfolgico de las colonias es slo orientativa, y para poder identificar una
bacteria se necesita un estudio detallado de sus caractersticas fisiolgicas e inmunolgicas.
ESTRUCTURA BACTERIANA.
La primera aproximacin que vamos a efectuar al mundo de las bacterias comenzar por un
detallado anlisis de su anatoma, la cual slo ha sido posible desde la utilizacin del
microscopio electrnico. Tras estudiar con detalle las estructuras de que estn compuestas las
bacterias, abordaremos su estudio morfolgico como entidades individuales, considerndolas
segn la morfologa celular y su forma de agrupamiento. Por ltimo veremos como se agrupan
las bacterias en gigantescos acmulos (comparados con su tamao) y podremos observarlas a
simple vista en forma de colonias, cuyas caractersticas tambin estudiaremos.
Aunque las bacterias son unidades funcionales que actan como un solo individuo,
realizaremos una divisin de sus estructuras vlida solo desde un punto de vista didctico.
Vamos a considerar las estructuras segn la posicin que ocupan en relacin con la envuelta
celular, que consideraremos el lmite normal de cualquier clula:
Estructuras de la envuelta celular,
Estructuras externas,
Estructuras internas.
Estructuras de la envuelta celular.
La clula bacteriana propiamente dicha est limitada por una estructura integrada, la envuelta
celular, de complejidad variable. En la mayor parte de las clulas, la envuelta celular consta de
pared celular y de membrana citoplasmtica subyacente. La existencia de bacterias con formas
distintas a la esfrica demuestra que esta estructura tiene la suficiente rigidez como para
soportar la presin superficial y la presin interna de la clula. Algunas bacterias poseen una
pared celular muy delgada, casi confundida con la membrana citoplasmtica; otras en cambio
presentan una tercera capa o membrana externa adosada a la pared celular. La pared celular
es la responsable de la diferente impregnacin tintorial de las bacterias al ser teidas mediante
la tincin de Gram, que tan bien conocis ya.
Membrana citoplasmtica:
La membrana citoplasmtica es una estructura indispensable para todas las clulas
bacterianas. Est situada en la superficie interna de la pared celular y rodea totalmente al
citoplasma. Las membranas citoplasmticas bacterianas son similares, en cuanto a
composicin y estructura, al resto de las membranas biolgicas. Las membranas
citoplasmticas de las clulas eucariotas poseen esteroles entre la bicapa fosfolipdica,
mientras que las bacterias poseen un componente diferente: los hopanoides.
La membrana citoplasmtica tiene escasa resistencia mecnica y no contribuye
significativamente al mantenimiento de la forma de la bacteria, ya que las formas alargadas
tienden a adoptar formas esfricas cuando se elimina la pared celular. Aunque la membrana es
una estructura diferente de la pared celular, ambas estn unidas por algo ms que la cohesin
lateral, y hay evidencias que sugieren la existencia de algn tipo de enlace entre las dos
estructuras. La membrana puede invaginarse para formar orgnulos conocidos como
mesosomas, que adoptan diversas formas. Su funcin principal parece centrarse en su
participacin como iniciador de la divisin celular.
Pared celular
La forma y rigidez de las bacterias se debe casi por completo a la presencia de una estructura
polimrica grande que sirve de apoyo y se extiende por el exterior de la membrana
citoplasmtica, formada por una mezcla de azcares y pptidos: el peptidoglucano. El cido
murmico parece ser caracterstico de los peptidoglucanos de las paredes celulares
bacterianas. Para un estudio ms detallado sobre la composicin y estructura de la pared

celular y para la observacin de abundantes dibujos y esquemas, os remito a la pgina web del
Todars, Texbook on line of Bacteriology, o al cap. 4 del libro Biologa de Microorganismos
(Brock).
Membrana externa
La membrana externa tiene una forma y una constitucin similar a la de otras membranas
biolgicas. Se comporta como una barrera hidrofbica para difusin de una gran cantidad de
sustancias, participa en la conjugacin y en la divisin celular y contiene protenas especiales,
las porinas, que intervienen en la toma de nutrientes y la difusin pasiva de pequeas
molculas hacia el espacio periplsmico. Tambin contiene lipopolisacridos que son los
principales componentes antignicos de superficie.
La funcin de la envuelta celular es la de una barrera osmtica y de un sistema regulador que
separa el citoplasma del medio, y proporciona a la bacteria el entorno relativamente aislado que
necesitan los organismos vivos.
Estructuras externas.
En el exterior de las clulas bacterianas podemos encontrar tres clases de estructuras: los
flagelos, u orgnulos relacionados con la locomocin y quimiotaxis; las fimbrias o pilli, y la
cpsula, o capa mucosa que rodea a la clula. Ninguna de ellas resulta esencial para la
existencia de la clula, pudiendo eliminarse por diversos medios y sin que exista inhibicin del
crecimiento bacteriano o alteracin de su funcin metablica.
Flagelos
Los flagelos bacterianos son prolongaciones filamentosas largas que se extienden ms all de
la superficie celular. Son los responsables de la locomocin de las bacterias y se hallan
implicados en la quimiotaxis y en la percepcin bacteriana. Debido a su delgadez, son difciles
de ver en las preparaciones en fresco, siendo necesario teirlos mediante tcnicas especiales
para ponerlos de manifiesto.
Los flagelos aparecen sobre todo en los bacilos. Su nmero es relativamente constante dentro
de cada especie bacteriana. Los flagelos pueden estar localizados solo en los extremos de la
bacteria o estar repartidos a lo largo de la superficie celular.
Las bacterias flageladas se clasifican segn el nmero y localizacin de los flagelos: las
bacterias que tienen un nico flagelo se denominan montricas; las que tienen dos o mas
flagelos en uno de los extremos de la clula son loftricas; aquellas que tienen penachos en
ambos extremos son anftricas, y si los flagelos estn dispuestos por toda la superficie celular
se denominan pertricas.
Los flagelos se componen de tres porciones claramente diferenciadas: filamento, codo o
manguito y cuerpo basal. El filamento tiene una longitud media de 15 a 25 m y se halla unido
al cuerpo basal a travs del manguito. La composicin proteica del filamento hace que este
posea caractersticas antignicas que a veces son tiles para la identificacin bacteriana. El
manguito flagelar es una especie de "articulacin universal" que permite la transmisin del
movimiento desde el cuerpo basal hasta el filamento. El cuerpo basal es la porcin ms
compleja, encontrndose dentro de la envuelta celular y actuando como un verdadero motor.
Se observan dos tipos de movimiento flagelar: de deslizamiento y de rotacin. Los primeros son
los encargados de dirigir a las bacterias hacia sitios concretos. Una bacteria con movimiento de
traslacin puede llegar a alcanzar hasta los 55 m por segundo. Los movimientos de rotacin
provocaran desplazamientos aleatorios conocindose tambin como volteretas o vuelcos.
Gracias a los movimientos de traslacin, las bacterias son capaces de evitar situaciones
desfavorables o ser atradas hacia las favorables, por ej. la presencia de nutrientes. Esta
capacidad de reaccionar frente a determinados estmulos ambientales se denomina "taxia" o
"fobia" dependiendo de la direccin del movimiento. Un acercamiento hacia zonas oxigenadas
se denominara aerotaxia; un alejamiento de una fuente luminosa seria una fotofobia.
Fimbrias o pillis
Estas estructuras solo pudieron ser descubiertas gracias a la utilizacin del microscopio
electrnico, pues su longitud varia entre 0,3 y 1 m. Pueden aparecer en los extremos de las

clulas o pueden estar distribuidas por toda la superficie en nmero que oscila desde uno a
varios centenares por clula.
Las fimbrias pueden ser de dos tipos diferentes, tanto desde el punto de vista morfolgico como
funcional: los pilli sexuales estn implicados en la formacin de parejas especficas durante la
conjugacin bacteriana, y sirven para iniciar el contacto entre dos clulas, unindolas y
facilitando la transferencia de material gentico. Los pilli sexuales se distinguen de las otras
fimbrias por su mayor longitud y su menor nmero (de uno a diez por clula). Otras fimbrias
parecen tener propiedades adherentes que facilitan la unin a otros tipos de clulas; p. ej.
Eritrocitos o leucocitos. La adherencia es fundamental para la colonizacin bacteriana en el
husped animal.
Cpsula
La cpsula es una estructura de naturaleza polisacrida que rodea completamente a la clula.
El tamao aparente de la cpsula varia ampliamente, siendo con frecuencia mayor que el
dimetro de la bacteria. Su funcin es an objeto de estudio, considerndose que desempea
un importante papel en la proteccin de la bacteria frente a agentes externos tales como la
desecacin, los bacterifagos o los metales txicos. Quizs tenga mayor importancia la
adherencia de las bacterias encapsuladas a superficies inertes de su entorno natural y a
clulas adecuadas para su crecimiento y supervivencia.
Las cpsulas bacterianas no se tien con los procedimientos habituales, pues no retienen
colorantes con facilidad. Se pueden hacer visibles al microscopio ptico suspendiendo las
clulas en tinta china diluida; este mtodo se conoce como tincin negativa. La cpsula
desplaza las partculas de carbn coloidal y las clulas parecen hallarse en lagunas, que
representan las cpsulas, situadas sobre un fondo oscuro. Sin embargo, no todas las cpsulas
impiden la penetracin de las partculas de carbn, y algunas no pueden ser observadas de
este modo.
La cpsula es habitualmente inmunognica, y los anticuerpos inducidos reaccionan con ella.
Los anticuerpos se fijan a la cpsula favoreciendo su fagocitosis o penetrando en la matriz
capsular y reaccionando con los polisacridos. Esta reaccin altera el ndice de refraccin de la
cpsula, de manera que, en preparaciones hmedas no teidas observadas
microscpicamente, aparecen mejor definidas y ms grandes. En 1902, Neufeld aplic este
abultamiento capsular, o reaccin de Quellung, a la identificacin serolgica de neumococos, y
desde entonces se ha utilizado para la identificacin serolgica de diversas bacterias
encapsuladas.
Estructuras internas.
El nucleoide bacteriano
Todo el material gentico de la clula est contenido en una nica molcula de ADN que mide
de 100 a 1400 m de longitud cuando est totalmente extendida. Generalmente la estructura
del DNA es circular, y en la clula se encuentra en una configuracin superenrollada.
Citoplasma
El citoplasma en las clulas bacterianas parece ser menos complejo que el de las clulas
eucariticas. Est considerado como un gel que contiene ribosomas, enzimas y, con frecuencia
grnulos que pueden representar productos de almacenamiento. Los grnulos citoplasmticos
que generalmente se observan son aquellos que se tien con ciertos colorantes bsicos, y se
denominan corpsculos metacromticos. Se consideran como un depsito de energa
reutilizable.
La espora
La espora bacteriana es una estructura compleja que se forma dentro de la clula para
asegurar la supervivencia de la especie ante condiciones ambientales desfavorables. La
formacin de esporas es inherente a algunos tipos de bacilos.
Las esporas pueden observarse en el interior de las bacterias o libremente despus de la
desintegracin de las clulas progenitoras. Cuando son intracelulares, las esporas presentan
forma esferoidal, con el eje longitudinal paralelo al del bacilo. Su anchura puede ser
esencialmente la misma que la de la clula madre, o ser mayor, deformando la pared de la
clula vegetativa.

El tamao y localizacin de las esporas son relativamente constantes dentro de cada especie.
En funcin de su localizacin la espora puede ser central, subterminal (entre el centro y el
extremo), y terminal. En ocasiones, su tamao y localizacin pueden dar lugar a una morfologa
caracterstica, como en el caso del bacilo del ttanos, cuya espora terminal grande confiere a la
clula vegetativa que la contiene forma de palillo de tambor.
La espora es un estado extremadamente resistente en el desarrollo de la clula. No slo es
relativamente impermeable a los colorantes, sino que tambin es mucho ms resistente que las
clulas vegetativas a los efectos perjudiciales del calor, la desecacin, presin hidrosttica y
muchos agentes qumicos. Algunas esporas son extremadamente resistentes a los
procedimientos habituales de esterilizacin, necesitndose un periodo de casi tres horas en
autoclave para asegurar su destruccin.
Normalmente la iniciacin de la esporognesis en clulas que estn creciendo activamente es
inducida por depleccin de nutrientes. En cada clula slo se forma una espora. Cuando la
espora se encuentra en un medio favorable para el crecimiento de las clulas vegetativas,
germina y la clula comienza un nuevo ciclo vegetativo.

3.1.2 Reproduccin bacteriana.

La vida de una clula bacteriana comienza con su nacimiento y acaba con la formacin, por
fisin binaria, de dos clulas nuevas. Entre estos dos procesos, nacimiento y divisin celular, la
clula crece de manera que en el momento de la divisin todos los elementos celulares
presentes en el nacimiento se han duplicado para dar lugar a dos clulas esencialmente
idnticas. Las etapas necesarias para llevar a cabo la multiplicacin de las clulas bacterianas
constituyen el ciclo celular bacteriano.
El ciclo celular bacteriano, al igual que el de otros organismos, agrupa la progresin de varias
etapas que incluyen (63, 143): el crecimiento celular, la duplicacin del genoma o replicacin
(periodo C en bacterias y fase S en eucariontes), la separacin de los cromosomas replicados
(particin en bacterias y mitosis en eucariontes) y la divisin celular. La mayor diferencia entre
el ciclo celular de eucariontes y el bacteriano es que en eucariontes el tiempo requerido para la
replicacin del cromosoma, fase S, es siempre menor que el del ciclo celular completo,
mientras que en bacterias el periodo C puede ser mayor. En las clulas bacterianas los
procesos que constituyen el ciclo celular estn cuidadosamente controlados y coordinados
unos con otros para, en un amplio rango de condiciones ambientales, conseguir la produccin
del mximo nmero de clulas viables por biomasa en el menor tiempo posible.
Ciclo Celular engloba la secuencia

crecimiento

duplicacin del ADN

nuevo proceso de crecimiento

Comenzando a partir de la citocinsis, la clula hija resulta pequea y posee un bajo contenido
de ATP resultante del gasto experimentado en el ciclo anterior. La acumulacin del ATP
necesario y el incremento de tamao acontecen durante el intervalo G1 de la interfase. Cuando
adquiere el tamao suficiente y el ATP necesario comienza la fase S, la clula sintetiza ADN
(replicacin del ADN) proceso que da como resultado final "un original y una copia" del ADN,
destinadas a las dos clulas que se originan del proceso. Dado que el proceso de sntesis
consume una gran cantidad de energa la clula entra nuevamente en un proceso de
crecimiento y adquisicin de ATP: la fase G2. La energa adquirida durante la fase G2 se utiliza
para el proceso de mitosis.

Mitosis

La mitosis es el proceso de formacin de dos clulas (generalmente) idnticas por replicacin

y divisin de los cromosomas de la original que da como resultado una "copia" de la
misma.
Las clulas eucariota poseen un mayor nmero de cromosomas que por otra parte son mucho mas
grandes que los de los procariotas.
La estructura de los cromosomas replicados y condensados tiene varios aspectos de inters. El
cinetocoro es el punto donde "anclan" los microtbulos del huso. Los cromosomas replicados
consisten en dos molculas de ADN ( junto con sus protenas asociadas: las histonas) que se
conocen con el nombre de cromtides. El rea donde ambas cromtides se encuentran en
contacto se conoce como centrmero, cinetocoro se encuentra en la parte externa del
centrmero. Se debe hacer hincapi en que los cromosomas son cromatina (ADN ms
histonas) y sealar la particularidad de que en los extremos del cromosoma (que toman el
nombre de telmero) se encuentran secuencias repetidas de ADN.
Durante la mitosis los cromosomas replicados se posicionan cerca de la mitad de la clula y luego se
segregan en manera tal que cada clula resultante recibe una copia de cada cromosoma
original (si se comienza con 46 cromosomas en la clula original se termina con 46
cromosomas en las clulas resultantes). Para realizar esto las clulas utilizan microtbulos (que
en este caso en conjunto forman el huso mittico) que "tiran" de los cromosomas para llevarlos
a cada futura clula. Las clulas animales (excepto un grupo de gusanos conocidos con el
nombre de nematodos) poseen centrolos. Las plantas y la mayor parte de los otros eucariotas
no poseen centrolos y los procariotas, por supuesto, carecen de huso y centrolos; en
procariotas la membrana celular suple esta funcin al traccionar los cromosomas a ella
pegados durante la citocinesis de la fisin binaria. Las clulas que contienen centrolos tambien
poseen una "corona" de pequeos microtbulos, el aster, que se extienden desde los centrolos
a la membrana nuclear.

Control del ciclo celular

De lo anterior se deduce que debe de existir algn tipo de acoplamiento entre las ondas de
replicacin y la divisin celular. Este es un campo de investigacin an joven, del que no
conocemos todava todos los detalles.
Las copias de cromosomas recin replicadas se encuentran en principio adyacentes de la
membrana citoplsmica (unidas a sendos mesosomas?) probablemente unidas a travs de
sus respectivos orgenes de replicacin (oriC). No se sabe muy bien cmo esas copias se van
separando de modo que cada una va a parar a una clula hija. Se sabe que en este reparto o
particin de los cromosomas intervienen varias protenas, entre ellas ParA y ParB, que en las
clulas a punto de dividirse se sitan en los dos polos opuestos. Es posible que exista algn
mecanismo activo para separar estos cromosomas, pero parece ser que tambin intervienen
los mecanismos pasivos de crecimiento de membrana y pared celular en el tabique
transversal en crecimiento.
Tambin se sabe hoy que existen dos secuencias paralelas e independientes de
acontecimientos que controlan el ciclo celular: un control es sensible a una masa umbral celular
para desencadenar el inicio de la replicacin del cromosoma, y el otro responde a cierta
longitud umbral (en el caso de los bacilos) para que ocurra el reparto de los cromosomas y la
formacin del tabique.

El comienzo de la replicacin del cromosoma se indica mediante la unin de muchas

unidades de la protena DnaA (unida a ATP) al origen de replicacin (oriC). Una vez
que se ha iniciado una ronda de replicacin en oriC, esta regin queda hemimetilada,
pero en vez de ser metilada inmediatamente, queda secuestrada u ocultada a efectos
de la metilasa Dam y de la maquinaria de replicacin. Se sugiere que en este
fenmeno est implicada una protena (SeqA), que a su vez ayudara a esconder
aoriC en la membrana. Slo ms tarde (y por factores desconocidos, pero que puede
que tengan que ver de nuevo con la proporcin entre sitios de inicio y algn

parmetro celular como masa o volumen), vuelven a quedar

secuencias oriC disponibles para su metalicin y uso en una nueva ronda.

las

El comienzo de la tabicacin parece que requiere dos seales:

por un lado, el cromosoma ha debido terminar su replicacin y las copias hijas deben
de estar separadas en extremos opuestos

por otro lado, la clula debe haber alcanzado una longitud umbral

Como ya vimos en el captulo 5, llegado el momento, la protena FtsZ (que hasta entonces
estaba diseminada por toda la clula), se concentra ahora en la parte central, sealando el
plano de la tabicacin: se forma un anillo citocintico o divisoma, en el que la FtsZ se va
contrayendo hacia el interior (hidrolizando GTP hasta GDP). A continuacin se van
ensamblando en el divisoma varias protenas Fts, entre ellas la PBP3, que como vimos es una
transglucosidasa-transpeptidasa especfica del tabique, que va produciendo peptidoglucano en
el septo transversal. La terminacin del tabique seala el final del ciclo celular.

3.1.3 Metabolismo bacteriano.

TODOS los seres vivos llevan a cabo el procesamiento de los nutrientes que los mantienen
vivos. A este conjunto de procesos, se le conoce como metabolismo y consiste de un gran
nmero de reacciones qumicas destinadas a transformar las molculas nutritivas en elementos
que posteriormente sern utilizados para la sntesis de los componentes estructurales; como
pueden ser las protenas. Otra parte importante del metabolismo es la de transformar y
conservar la energa que est contenida en una reaccin qumica en algn proceso que
requiera de energa, como puede ser el trabajo o el movimiento.
Es evidente que los nutrientes son transformados cuando entran en un organismo, ya que en
ningn caso el alimento contiene todas las molculas que una clula requiere. Esto se vio con
claridad al observar el crecimiento normal de levaduras en un medio de cultivo que slo
contena glucosa como nica fuente de energa. As pues, se pens que la sntesis de todos los
componentes celulares se llevaba a cabo en el interior de las levaduras. Hoy sabemos que las
transformaciones que sufre la glucosa no ocurren en un solo paso, sino que, por el contrario, se
forman varios productos intermedios que en muchas ocasiones no tienen una funcin
especfica a no ser la de formar parte de lo que se conoce como va metablica.
La transformacin de los nutrientes en compuestos tiles para la subsistencia de un organismo
se lleva a cabo por medio de las reacciones qumicas que realizan unas protenas conocidas
como enzimas. De tal forma que no podemos hablar del metabolismo si no describimos
brevemente qu son y cmo funcionan las enzimas.

A pesar de la gran diversidad metablica mostrada por los microorganismos, la mayora de

ellos pueden ser considerados en uno de los cuatro tipos nutricionales de acuerdo a su fuente
primaria de obtencin de energa, fuente de carbn y de e- / H+.

De acuerdo al rbol de la Vida de Woese, microbilogo creador de la nueva taxonoma

molecular basada en la comparacin entre especies de la fraccin 16s del ARN ribosomal, se
proponen 3 dominios Archaea, Bacteria y Eucarya, en los que se incluye a todos los seres
vivos, aunque existen controversias.
1

ESPIROQUETAS.

Bacilos flexuosos en forma de espiral con movilidad debida a un filamento axial y

semejante a un sacacorchos. Son Gram negativos.
Orden
Familia
Gnero
Especie
SPIROCHAETALES
SPIROCHAETACEA TREPONEMA
T. Pallidum
E
BORRELIA
B.
LEPTOSPIRACEAE
LEPTOSPIRA
Recurrentis
L.
2

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS AEROBIAS O MICROAEROFILAS

(VIBRIOIDES):

Gnero CAMPYLOBACTER: Bacilos espirales curvados y mviles

Parsitos del hombre y animales.
Especies: C. fetus, C. jejuni y C. coli
Gnero HELICOBACTER. Especie: H pylori, agente productor del Ulcus pepticum.
3
BACILOS Y COCOS GRAM
Familia PSUDOMONADACEAE.

NEGATIVOS AEROBIOS:

G. PSEUDOMONAS. Especie Pseudomonas auruginosa.Bacilos gram negativos con

flagelos polares. Producen citocromo oxidasa.
Familia MORAXELACEAE.
G MORAXELLA. Especies: M. lacunate, M
catharralis. G ACINETOBACTER. Especie: A
baunannii.
Familia XANTHOMONADACEAE
G STENOTROPHOMONAS. Especie: S. maltophilia.
Familia BURKHOLDERIA
G BURKHOLDERIA. Especie B. cepacea
Familia LEGIONELLACEAE.

G. LEGIONELLA. Bacilos mviles de vida libre. Patgenos para el hombre. Especie:

L. pneumophila.
Familia NEISSERIACEAE.
G. NEISSERIA. Cocos agrupados en parejas con las zonas adyacentes planas.
Especies patgenas: N. meningitidis, N. gonorrhoeae.
G. KINGELLA. K. kingae.
Familia
BARTONELLACEAE G
BARTONELLA
Familia BRUCELLACEAE
G. BRUCELLA. Cocobacilos gram negativos. Parsitos del hombre y animales.
B. melitensis, B. abortus.
Familia BRADYRHIZOBIACEAE
G AFIPIA. Especie: A. felis
Otros gneros de inters:
G. FLAVOBACTERIUM: F. meningosepticum.
G. ALCALIGENES. A. faecalis.
G. BORDETELLA. B. pertussis.
G. FRANCISELLA. F. tularensis.

BACILOS GRAM NEGATIVOS ANAEROBIOS FACULTATIVOS:

F ENTEROBACTERIACEAE: Bacilos gram negativos no esporulados. Fermentan
la glucosa con formacin de cido o cido y gas. Reducen los nitratos a nitritos
y no poseen citocromooxidasa.

Principales gneros y especies tipo:

G ESCHERICHIA. E. coli
G. SHIGELLA. S. dysenteriae, S. sonney
G. SALMONELLA. S. enterica
G. CITROBACTER. C. freundii
G. KLEBSIELLA. K. pneumoniae
G. ENTEROBACTER. E. cloacae, E. aerogenes
G. SERRATIA. S. marcescens
G. PROTEUS. P. mirabilis
G. YERSINIA. Y. enterocolitica, Y. pseudotuberculosis, Y. pestis
. MORGANELLA. M. morganii
G. PROVIDENCIA. P. rettgeri, P. stuartii
G PLESIOMONAS
Otros gneros de interes
G. VIBRIO. V. cholerae
G. AEROMONAS. A. hydrophila
G. PASTEURELLA. P. multocida
G. HAEMOPHILUS. H. influenzae
5

BACTERIAS ANAEROBIAS GRAM NEGATIVAS:

Estn formadas por bacilos gram negativos anaerobios estrictos, no esporulados.

G. FUSOBACTERIUM. F. nucleatum
G. BACTEROIDES. B. fragilis
G. PREVOTELLA y G PORPHYROMONAS: antiguos Bacteroides pigmentados
6
COCOS ANAEROBIOS
Son inmviles. No esporulados.
F VEILLONELLACEAE.

GRAM NEGATIVOS:

G VEILLONELLA. Veillonella parvula

7

RICKETTSIAS Y CHLAMIDIAS:

Microorganismos pleomrficos que necesitan para su cultivo clulas vivas donde originan
corpsculos de inclusin.
G. RICKETTSIA. R. prowazecki, R. connori
G. COXIELLA. C. burnetti
F CHLAMYDIACEAE.
G CHLAMYDIA. C. trachomatis. C. psittaci, C. pneumoniae
1. MYCOPLASMAS
Carecen de pared celular. Son los menores microorganismos cultivables en medios
sintticos.
F. MYCOPLASMATACEAE.
G. MYCOPLASMA. M. pneumoniae, M. hominis
G. UREAPLASMA. U. urealyticum
2.

COCOS GRAM POSITIVOS:

Aerobios anaerobios
facultativos.
G. MICROCOCCUS. M. luteus.
G. STAPHILOCOCCUS. S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus
G. STREPTOCOCCUS. S. pyogenes, S. pneumoniae
G. ENTEROCOCCUS. E. faecalis. Otros ESTREPTOCOCOS.

Anaerobios estrictos:
G. PEPTOCOCCUS. P. niger.
G. PEPTOSTREPTOCOCCUS. P. anaerobius
G. SARCINA
3.

BACILOS GRAM POSITIVOS ESPORULADOS:

G. BACILLUS. B. anthracis
G. CLOSTRIDIUM. C. tetani, C. boatulinum, C. perfringens

4.

OTROS BACILOS GRAM POSITIVOS:

G. LISTERIA. L. monocytogenes
G. CORYNEBACTERIUM. Bacilos gram positivos. Tendencia a agruparse en letras
chinas. C. diphtheriae
G. ACTYNOMYCES. Forman hifas o micelios rudimentarios. A. israelii
G. NOCARDIA. N. Asteroides
F. MYCOBACTERIACEAE. Bacilos Acido-Alcohol-resistentes.
G. MYCOBACTERIUM. M. tuberculosis, M. leprae

3.1.5 Importancia de las eubacterias.

Son usadas para la produccin de quesos, mantequilla, vinagre, leche fermentada o yogur.
Aqu principalmente se utilizan Lactobacillus y Streptococcus en conjunto con levaduras y
mohos. Tienen una gran importancia ecolgica, ya que son ellas las que descomponen grandes
cantidades de la materia orgnica de plantas y animales que mueren.
Adems que intervienen en muchos ciclos biolgicos como el ciclo del nitrgeno y del carbono
y en el metabolismo del azufre, del fosforo y del hierro. Son usadas en la industria para
producir alcohol y acetona (Clostridium acetobutylicum). Algunas otras bacterias son utilizadas
para la elaboracin de antibiticos (streptomyces y bacillus). Otras bacterias son utilizadas para
producir cido actico (gluconobacter y acetobacter)Algunas son patgenas, es decir que
causan enfermedades. Por mencionar algunas se encuentra: E. Coli y Salmonela.

Unidad 4.- Microorganismos eucariotas

4.1 Hongos pluricelulares y unicelulares.
Los hongos son unos seres vivos que tienen una serie de caractersticas propias que hace que
estn incluidos en un reino aparte, el Reino Fungi.
Son organismos tanto unicelulares como pluricelulares hetertrofos y con organizacin celular
eucariota. Se caracterizan por no formar tejidos teniendo su cuerpo una estructura taloftica
estando formado por una serie de filas o hileras de clulas denominadas hifas que en conjunto
constituyen el micelio. Sus clulas presentan una pared celular que en muchos casos no est
formada de celulosa sino de quitina.
Los hongos tienen digestin externa. Para ello, secretan enzimas digestivas al medio que
actan degradando la materia orgnica y produciendo molculas sencillas que son absorbidas
como nutrientes a travs de la pared y membrana celular.

Los hongos pueden ser:

Saprfitos: Degradan la materia orgnica muerta.
Parsitos: Degradan materia orgnica de uno organismo vivo sobre el que se asientan.
Simbiontes: Viven en simbiosis con otro organismo. Normalmente con algas dando
lugar a los llamados lquenes que destacan por su papel como indicadores de la contaminacin
atmosfrica.
Depredadores: Se alimentan de otro organismo al que matan.

Suelen vivir en lugares hmedos y oscuros pero pueden encontrarse en cualquier lugar en el
que haya materia orgnica. Necesitan humedad para desarrollarse.

Los hongos se pueden dividir en:

Unicelulares: levaduras.

Pluricelulares: mohos u hongos filamentosos. Estn formados por filamentos llamados

hifas, muy ramificadas y rodeadas de pared rgida.

Metabolismo de los hongos

Los hongos son tpicamente organismos hetertrofos quimiosintticos teniendo escasas
necesidades nutricionales, por lo que pueden crecer con gran facilidad. El lugar ms frecuente
en el que se desarrollan es el suelo, a una temperatura que oscila entre 10 y 50 C
(dependiendo de la especie) aunque tambin es comn encontrarlos en medios acuticos, en
piel de animales, en alimentos (pan, mermelada, fruta) , en bebidas (cerveza, vino) , en medios
de cultivo microbianos a los que han contaminado, etc.
Por otra parte, su pH vara entre 4,5 y 8 y se ven favorecidos por cierto grado de humedad.
Son las clulas jvenes quienes desarrollan la mayora de la actividad metablica del hongo,
liberando enzimas al medio y absorbiendo los nutrientes. La zona central, por otra parte, tiene
clulas en las que se acumulan las substancias de reserva que pueden ser necesarias para
que el micelio colonice nuevas zonas.

1.2

Mecanismos de reproduccin

Muchos hongos tienen la posibilidad de reproducirse sexualmente y todos ellos lo hacen

mediante esporas asexuales.

Reproduccin sexual:

Los que la poseen se denominan hongos perfectos. No suele ser un tipo de reproduccin
frecuente en los hongos que producen patologas al hombre.
Tiene lugar cuando el medio es deficiente en materias nutritivas. Entonces el microorganismo
se defiende formando clulas especiales muy resistentes (esporas).
La produccin de esporas se realiza por la fusin de dos ncleos haploides genticamente
diferentes. As se forma una clula diploide llamada zigoto que tras divisin meitica origina 4
clulas haploides las cuales se rodean de una cubierta formando las esporas.
Existen varios tipos de esporas sexuales:

Zigosporas:
Se producen por la fusin de dos gametos similares que se encuentran en el extremo de las
hifas.

Oosporas:
Se forman por la unin de dos gametos desiguales en cuanto a tamao.

Ascosporas:
Se producen por la unin de dos hifas, desapareciendo la pared celular que las separa.
Posteriormente ocurre la fecundacin, originando de 4 a 8 esporas dentro de un saco
denominado asco.

Basidiosporas:
Se forman por la fusin de dos ncleos de una hifa. Posteriormente los 4 ncleos haploides se
dirigen hacia fuera y se rodean de citoplasma dando lugar a las basidiosporas.

Reproduccin asexual:
Los que slo poseen reproduccin asexual se denominan hongos imperfectos. Tiene lugar
cuando el medio es rico en sustancias nutritivas. Existen varios tipos de reproduccin asexual:

Por gemacin.

En este tipo de reproduccin la clula hija se origina a partir de una yema de la clula madre.
Primero, la clula madre emite una yema al mismo tiempo que divide su ncleo por
estrangulacin. La yema aumenta de tamao y se provee de los elementos constituyentes de la
clula madre y finalmente se estrangula y se separa de la clula madre dando lugar a la clula
hija o blastosporo. Este proceso es caracterstico en levaduras del gnero Saccharomyces.
Por biparticin. Cuando una clula est en condiciones de reporducirse, comienza por dividir su
ncleo en dos ncleos hijos, cada uno de los cuales se rodea de una porcin de protoplasma.
Luego aparece un tabique por el ecuador de la clula, separndola en dos clulas hijas. Este
proceso es caracterstico en las levaduras del gnero Schizosaccharomyces.

Por esporulacin.

Se forman esporas que germinan posteriormente.Si se desarrollan directamente de la clula

vegetativa se denominan talosporas. Existen tres tipos:

Artrosporas: aparecen por segmentacin de las hifas.

Blastosporas: se forman por gemacin, sin separacin entre ellas, originando las
pseudohifas y pseudomicelios.

Clamidosporas: son esporas grandes rodeadas de una pared gruesa.

Hay otras esporas asexuales que se originan de estructuras especializadas:

Esporangiosporas: se forman dentro de estructuras saculares que se encuentran en los

extremos de las hifas no tabicadas.

Conidias: se originan a partir de hifas por un mecanismo de gemacin, separndose

posteriormente de ellas.

Aleurispora: similares a las anteriores pero se separan por ruptura del septo.

Reproduccin parasexual:

Es una forma de reproduccin muy rara, que consiste en la unin de una o varias hifas pero sin
existir fusin nuclear, dando unas estructuras con ncleos haploides.

Utilidades de los hongos

Los hongos tienen muchas utilidades. Entre ellas tenemos:

Alimentacin:

Hay muchos hongos comestibles pero tambin hay muchos venenosos. De los comestibles
muchos se cultivan como el champin, la trufa o el nscalo. Pero la seta que ms destaca por
su exquisito sabor es la Amanita caesarea, que fue considerada como el manjar de los csares.
Pero a la hora de su recoleccin hay que tener mucho cuidado y saber distinguirla y
determinarla bien ya que se parece mucho a otra seta tambin del gnero Amanita que es
sumamente peligrosa, llegando a ser mortal.
Tambin hay que destacar el uso de las levaduras para realizar la fermentacin alcohlica en la
produccin del vino, la sidra y la cerveza.
Otros hongos son utilizados para realizar la fermentacin lctica que da lugar a la produccin
de quesos y yogures, y otros son utilizados para la fabricacin del pan.

Medicina:

En el campo de la medicina cabe destacar la utilidad de hongos como el Penicillum del que se
obtiene la penicilina.

Investigacin:

Los hongos se utilizan mucho en la investigacin gentica y bioqumica. Esto se debe a

las caractersticas que presentan ya que son seres vivos muy sencillos que adems se
pueden cultivar en grandes cantidades necesitando para ello pocos requerimientos.

Ecolgica:

Los hongos al descomponer la materia orgnica actan contribuyendo al reciclado de la

materia en el ecosistema. Tambin contribuyen al mantenimiento de otros organismos como
bacterias y protozoos del suelo.
A su vez, tambin pueden alterar los ecosistemas la causar graves enfermedades en plantas
y en animales.

Importancia sanitaria y ambiental.

Hongos medicinales:
El hombre utiliza algunas especies de hongos en la fabricacin de productos farmacuticos y
en la industria. Entre los hongos de uso medicinal se encuentran el Penicillum notatun, del cual
se extrae la penicilina que es un antibitico, el Claviceps purpurea, produce una sustancia
llamada ergotina, que se utiliza para controlar las hemorragias, de este hongo tambin se
extrae el cido lisrgico, que es una droga que se conoce como L.S.D.
Hongos venenosos:
En la naturaleza, slo ciertas variedades de hongos son comestibles, el resto son txicos por
ingestin pudiendo causar severos daos e incluso la muerte.
Especies como la Amanita phalloides, Cortinarius orellanus, Amanita muscaria, Chlorophyllum
molybdites, Galerina marginata o la Lepiota helveola debido a sus enzimas txicas para el ser
humano causan sntomas como: taquicardias, vmitos y clicos dolorosos, sudor fro, exceso
de sed y cadas bruscas de la presin arterial, excreciones sanguinolientas. La vctima contrae
graves lesiones necrticas en todos los rganos especialmente en el hgado y el rin. Estos
daos son muchas veces irreparables y se requiere trasplante de rganos por lo general.

Unida 5.- Virus y partculas subvirasicas.

La Virologa ha sido la ciencia microbiolgica de origen ms tardo, habiendo surgido como
resultado del hallazgo de enfermedades infecciosas en las que la demostracin de implicacin
de microorganismos se demostraba esquiva con los medios habituales disponibles a finales del
siglo XIX. La euforia que se viva en los mbitos cientficos y mdicos, al socaire de la edad de
oro de aislamiento de bacterias patgenas, se plasm en el prejuicio de que la incapacidad de
hacer crecer los agentes causantes de ciertas enfermedades se deba a una tcnica inapropida
o mal aplicada.
El botnico ruso Dimitri Iwanovski haba observado (1892) que la enfermedad del mosaico del
tabaco poda ser reproducida experimentalmente usando el fluido que atravesaba los filtros de

porcelana que normalmente retenan a las bacterias, pero siendo incapaz de aislar y crecer el
supuesto microorganismo, abandon la investigacin. Pocos aos ms tarde (1898), y
probablemente sin tener noticias del trabajo de Iwanovski, Beijerink realiz experimentos
similares con el mismo sistema, y en otro rasgo de su genio, enfrentndose a los conceptos de
la poca, avanz la idea de que el agente filtrable (un contagium vivum fluidum, segn su
expresin), deba de incorporarse al protoplasma vivo del hospedador para lograr su
reproduccin. Este tipo de agentes infectivos que atravesaban los filtros de porcelana fueron
llamados en principio virus filtrables, quedando ms tarde su denominacin simplemente
como virus. Aquel mismo ao de 1898 Loeffler y Frosch descubren los virus animales al
comprobar que un virus filtrable es responsable de la glosopeda del ganado. En 1901 Reed
descubre el primer virus humano, el de la fiebre amarilla, y en 1909 Landsteiner y Pope
detectan el de la poliomielitis. A comienzos de siglo Copeman desarrolla su tcnica de
multiplicacin de virus animales en embriones de pollo, con la que P. Rous aisla y cultiva el
virus del sarcoma aviar (1911).
Los virus bacterianos fueron descubiertos en 1915 por F.W. Twort, si bien su trabajo no alcanz
la elegancia y claridad del desarrollado poco ms tarde por el canadiense Flix d'Hrelle
(1917); fue ste quien acu el trmino bacterifago, y supuso correctamente que el fenmeno
de lisis por estos agentes deba de estar ampliamente difundido entre las bacterias. Aunque su
esperanza en la aplicacin de los fagos como elementos bactericidas para uso mdico no pudo
satisfacerse, la contribucin de los virus bacterianos al avance de la gentica y biologa
moleculares ha sido decisiva: de hecho, los primeros estudios cuantitativos sobre replicacin
virsica se realizaron sobre fagos de Escherichia coli, lo que suministr modelos aplicables a
otros virus, incluidos los de animales. En 1925 Bordet y Bal describen por primera vez el
fenmeno de lisogenia, pero las relaciones entre los ciclos ltico y lisognico de los fagos no
fueron aclaradas hasta los estudios de Andr Lwoff (1950).
La primera visualizacin de un virus se debe a las observaciones a microscopio ultravioleta del
bacterilogo ingls Barnard (1925), y en 1939 se realiza la primera fotografa de un virus a
microscopio electrnico. Pero los avances ms significativos en el estudio de la composicin y
estructura de los virus se inician con la purificacin y cristalizacin, por Wendell M. Stanley, del
virus del mosaico del tabaco -TMV- (1935), aplicando procedimientos tpicos de la cristalizacin
de enzimas. Inicialmente Stanley comprob que el TMV contena gran proporcin de protena,
pero poco ms tarde detecta, adems, la presencia de cido nucleico. A partir de aqu, la
Virologa entra en una fase de ciencia cuantitativa, en la que participan numerosos fsicos,
bioqumicos y genetistas, en un esfuerzo interdisciplinar que da origen a la moderna Biologa
Molecular.
Un importante avance metodolgico para el estudio de los virus animales se debi a Enders,
Weller y Robbins (1949), al desarrollar por primera vez un mtodo para la multiplicacin
virsica sobre cultivos de tejidos de mamferos, tcnica que fue perfeccionada ms tarde por el
equipo de Renato Dulbecco. Los recientes progresos en las numerosas tcnicas de biologa
molecular han propiciado una autntica explosin de descubrimientos sobre la biologa de los
virus y de sus clulas hospedadoras; baste citar la replicacin del genomio de ARN de los
retrovirus por reversotranscripcin a ADN, los fenmenos de transformacin oncognica
virsica y su aplicacin a los estudios generales del cncer, el diseo de vacunas
recombinantes por manipulacin in vitro de genomios virsicos, la prxima aplicacin clnica de
la primeras terapias gnicas en humanos recurriendo a vectores virsicos, etc. En el terreno de
las necesidades urgentes, la metodologa existente ha permitido la rpida identificacin y
caracterizacin del virus de la inmunodeficiencia humana, lo que se est traduciendo en una
intensa y racional bsqueda de procedimientos para prevenir y eliminar la inesperada epidemia
de SIDA. En aos recientes han sido descubiertos dos nuevos tipos de entidades infectivas,
subvirsicas: T.O. Diener describi en 1967 la existencia de ARN desnudos infectivos en
plantas, a los que llam viroides, y en 1981 Prusiner puso de manifiesto que determinadas
enfermedades de mamferos se deben a partculas proteicas aparentemente desprovistas de
material gentico, a las que bautiz como priones.
Otro tipo de objetos de estudio de la microbiologa son las entidades no celulares, que a pesar
de no poseer ciertos rasgos atribuibles a lo que se entiende por vida, cuentan con
individualidad y entidad biolgica, y caen de lleno en el dominio de esta ciencia.

Los virus son entidades no celulares de muy pequeo tamao (normalmente inferior al del ms
pequeo procariota), por lo que debe de recurrirse al microscopio electrnico para su
visualizacin. Son agentes infectivos de naturaleza obligadamente parasitaria intracelular, que
necesitan su incorporacin al protoplasma vivo para que su material gentico sea replicado por
medio de su asociacin ms o menos completa con las actividades celulares normales, y que
pueden transmitirse de una clula a otra. Cada tipo de virus consta de una sola clase de cido
nucleico (ADN o ARN, nunca ambos), con capacidad para codificar varias protenas, algunas
de las cuales pueden tener funciones enzimticas, mientras que otras son estructurales,
disponindose stas en cada partcula virsica (virin) alrededor del material gentico
formando una estructura regular (cpsida); en algunos virus existe, adems, una envuelta
externa de tipo membranoso, derivada en parte de la clula en la que se desarroll el virin
(bicapa lipdica procedente de membranas celulares) y en parte de origen virsico (protenas).
En su estado extracelular o durmiente, son totalmente inertes, al carecer de la maquinaria de
biosntesis de protenas, de replicacin de su cido nucleico y de obtencin de energa. Esto
les obliga a un modo de vida (sic) parasitario intracelular estricto o fase vegetativa, durante la
que el virin pierde su integridad, y normalmente queda reducido a su material gentico, que al
superponer su informacin a la de la clula hospedadora, logra ser expresado y replicado,
producindose eventualmente la formacin de nuevos viriones que pueden reiniciar el ciclo.
Los viroides son un grupo de nuevas entidades infectivas, subvirsicas, descubiertas en 1967
por T.O. Diener en plantas. Estn constituidos exclusivamente por una pequea molcula
circular de ARN de una sola hebra, que adopta una peculiar estructura secundaria alargada
debido a un extenso, pero no total, emparejamiento intracatenario de bases por zonas de
homologa interna. Carecen de capacidad codificadora y muestran cierta semejanza con los
intrones autocatalticos de clase I, por lo que podran representar secuencias intercaladas que
escaparon de sus genes en el transcurso evolutivo. Se desconocen detalles de su modo de
multiplicacin, aunque algunos se localizan en el nucleoplasma, existiendo pruebas de la
implicacin de la ARN polimerasa II en su replicacin, por un modelo de crculo rodante que
genera concatmeros lineares. Esta replicacin parece requerir secuencias conservadas hacia
la porcin central del viroide. Los viroides aislados de plantas originan una gran variedad de
malformaciones patolgicas. El mecanismo de patogenia no est aclarado, pero se sabe que
muchos de ellos se asocian con el nucleolo, donde quiz podran interferir; sin embargo, no
existen indicios de que alteren la expresin gnica (una de las hiptesis sugeridas); cada
molcula de viroide contiene uno o dos dominios conservados que modulan la virulencia.
En 1986 se descubri que el agente de la hepatitis delta humana posee un genomio de ARN de
tipo viroide, aunque requiere para su transmisin (pero no para su replicacin) la colaboracin
del virus de la hepatitis B, empaquetndose en partculas similares a las de este virus. A
diferencia de los viroides vegetales, posee capacidad codificadora de algunas protenas.
Los ARNs satlites son pequeas molculas de tamao similar al de los viroides de plantas
(330-400 bases), que son empaquetados en cpsidas de determinadas cepas de virus (con
cuyos genomios no muestran homologas). Se replican slo en presencia del virus colaborador
especfico, modificando (aumentando o disminuyendo) los efectos patgenos de ste.
Los virusoides constituyen un grupo de ARNs satlites no infectivos, presentes en el interior de
la cpsida de ciertos virus, con semejanzas estructurales con los viroides, replicndose
exclusivamente junto a su virus colaborador.
Los priones son entidades infectivas de un tipo totalmente nuevo y original, descubiertas por
Stanley Prusiner en 1981, responsables de ciertas enfermedades degenerativas del sistema
nervioso central de mamferos (por ejemplo, el scrapie o prurito de ovejas y cabras),
incluyendo los humanos (kuru, sndrome de Gerstmann-Strassler, enfermedad de CreutzfeldtJakob). Se definen como pequeas partculas proteicas infectivas que resisten la inactivacin
por agentes que modifican cidos nucleicos, y que contienen como componente mayoritario (si
no nico) una isoforma anmala de una proteina celular. Tanto la versin celular normal (PrPC)
como la patgena (PrPSc en el caso del scrapie) son glicoprotenas codificadas por el mismo
gen cromosmico, teniendo la misma secuencia primaria. Se desconoce si las caractersticas

distintivas de ambas isoformas estriban en diferencias entre los respectivos oligosacridos que
adquieren por procesamiento post-traduccional.
A diferencia de los virus, los priones no contienen cido nucleico y estn codificados por un gen
celular. Aunque se multiplican, los priones de nueva sntesis poseen molculas de PrP que
reflejan el gen del hospedador y no necesariamente la secuencia de la molcula del PrP que
caus la infeccin previa. Se desconoce su mecanismo de multiplicacin, y para discernir entre
las diversas hiptesis propuestas quiz haya que dilucidar la funcin del producto normal y su
posible conversin a la isoforma patgena infectiva.
Recientemente se ha comprobado que, al menos algunas de las enfermedades por priones son
simultneamente infectivas y genticas, una situacin inslita en la Patologa humana,
habindose demostrado una relacin entre un alelo dominante del PrP y la enfermedad de
Creutzfeldt-Jakob. El gen del prin (Prn-p) est ligado genticamente a un gen autosmico
(Prn-i) que condiciona en parte los largos tiempos de incubacin hasta el desarrollo del
sndrome.

Cpsides
La cpside es una cubierta proteica externa que encierra y protege al genoma viral de la accin
de nucleasas y otros factores adversos del medio exterior. Adems, en los virus desnudos
carentes de envoltura, la cpside es la encargada de establecer a travs de alguna de sus
protenas la unin con la clula que ser parasitada por el virus. Asimismo, las protenas de la
cpside contienen los determinantes antignicos contra los que el sistema inmune del husped
elaborar la respuesta de anticuerpos en defensa del organismo.
Hay dos tipos bsicos de estructura que pueden presentar las cpsides
virales: simetraicosadrica, observndose el virin al microscopio de forma aproximadamente
esfrica, osimetra helicoidal, resultando nucleocpsides filamentosas tubulares pero que
pueden estar encerradas dentro de una envoltura que confiere a la partcula forma esfrica o
de bastn.

Simetra icosadrica: El icosaedro es un poliedro de 20 caras triangulares equilteras con 12 vrtices.

Presenta simetra rotacional 5.3.2, por lo que tiene 6 ejes de simetra quntuple que pasan a travs de pares
de vrtices opuestos; 10 ejes de simetra triple que pasan a travs del centro de las caras, y 15 ejes de
simetra binaria, a travs de los puntos medios de las aristas.

Envolturas
La envoltura de un virus es una membrana constituida por una doble capa lipdica asociada a
glicoprotenas que pueden proyectarse en forma de espculas desde la superficie de la
partcula viral hacia el exterior.
Los virus adquieren su estructura mediante un proceso de brotacin a travs de alguna
membrana celular. El nmero de glicoprotenas que presentan los virus animales es muy
variable.
Las glicoprotenas virales que forman las espculas son protenas integrales de membrana que
atraviesan la bicapa de lpidos presentando tres dominios topolgicamente diferenciables: 1) un
gran dominio hidroflico hacia el exterior de la membrana; 2) un pequeo dominio hidrofbico
formado por 20-27 aminocidos que atraviesa la capa lipdica y ancla la glicoprotena a la
membrana; 3) un pequeo dominio hidroflico hacia el interior de la partcula viral. Este ltimo
dominio interacta con las protenas de la nucleocpside, ya sea directamente o a travs de
una protena viral no glicosilada denominada M (de matriz), que se encuentra en algunos virus
animales por debajo de la bicapa.
Las glicoprotenas virales cumplen diversas funciones biolgicas durante el ciclo de vida de un
virus, siendo esenciales para la infectividad, ya que actan: 1) en la adsorcin a la clula
husped; 2) en el proceso de fusin que permite la entrada de la nucleocpside viral al
citoplasma; 3) en la brotacin, que permite la salida del virus envuelto a partir de la clula
infectada. Adems las glicoprotenas son el blanco de reaccin para el sistema inmune tanto en
la respuesta humoral como celular.

cidos nucleicos virales

Los virus se caracterizan, a diferencia de los otros organismos, por presentar una nica especie
de cido nucleico constitutiva que puede ser ADN o ARN, monocatenario o bicatenario con
estructura de doble hlice.
Tipos de ADN virales
La mayora de los virus ADN presentan un genoma bicatenario, con excepcin de los
parvovirus, constituidos por ADN monocatenario. Adems las molculas de ADN viral pueden
ser lineales o circulares.
La conformacin circular que presentan los Papovaviridae y Hepadnaviridae, confiere una serie
de ventajas al cido nucleico respecto de la estructura lineal, otorgndole proteccin frente al
ataque de exonucleasas, facilitando la replicacin completa de la molcula y su posible
integracin al ADN celular. En el caso de los papovavirus, el ADN puede presentar tres
conformaciones: la forma I corresponde a la molcula circular covalentemente cerrada y
superenrollada sobre s misma. Si se produce una ruptura en una unin en una de las cadenas,
la doble hlice se desenrolla y resulta una molcula circular relajada (forma II). Por ltimo, la
forma III es el resultado de una ruptura en la otra cadena que origina una molcula bicatenaria
lineal.
El ADN circular de los hepadnavirus tiene una estructura muy peculiar y de caractersticas
nicas dentro de los ADN virales: una de las cadenas (S, corta) es incompleta, de manera que
el 15-50% de la molcula es monocatenaria; la otra cadena (L, larga) presenta ruptura en un
nico punto de la molcula y adems tiene una protena unida covalentemente en el extremo
5`.
Tipos de ARN virales
Los ARN de los virus animales son en su gran mayora de cadena simple, siendo Reoviridae y
Birnaviridae las nicas familias que presentan como genoma ARN bicatenario. En algunos
grupos de virus, el ARN genmico est segmentado en varios fragmentos, cuyo nmero es
caracterstico de cada familia.
Adems de las caractersticas fsicas y qumicas mencionadas, la polaridad o sentido de la
cadena de ARN es una propiedad fundamental utilizada para definir los distintos tipos de ARN
viral. Se parte de definir como polaridad positiva la secuencia de bases correspondiente al
ARNm y polaridad negativa a la secuencia complementaria a la del ARNm. Un virus es de
cadena positiva cuando su ARN genmico tiene la polaridad que le permite actuar como ARNm,
o sea ser traducido en protenas, inmediatamente despus de haber entrado a la clula.
Por el contrario, en los virus de polaridad negativa el ARN genmico tiene la secuencia
complementaria al ARNm viral; por lo tanto, cuando se produce la infeccin y el ARN viral entra
en la clula debe sintetizar la cadena complementaria que ser el ARNm. Para ello, los virus de
polaridad negativa llevan en el virin asociada a su genoma una ARN polimerasa dependiente
de ARN, enzima denominada transcriptasa, que efecta la transcripcin del ARN mensajero a
partir del ARN genmico.

Estrategias de replicacin de los virus

Todos los virus, sin importar cul sea su genoma, resultan por diferentes mecanismos de
transcripcin en la produccin a nivel intracelular en la formacin de mRNA para la traduccin
final a protenas virales (figura 1.4). Los virus requieren de un sustrato de clulas vivas para su
multiplicacin, dado que son parsitos intracelulares obligados. Para que un virus se replique,
debe infectar una clula o individuo susceptible; recordemos que cada virus posee un rango
estrecho de clulas a las que puede infectar y que la susceptibilidad se refiere a la condicin
que tiene una especie, individuo o clula para infectarse con un agente determinado. Tambin
se debe tener en cuenta que la infeccin de una clula susceptible no garantiza que la
replicacin viral se lleve a cabo, como tampoco el hecho de que un individuo se infecte,
garantiza que ste sufra la enfermedad.

Ciclo ltico
Se denomina as porque la clula infectada muere por rotura al liberarse las nuevas copias
virales. Consta de las siguientes fases:

Fase de adsorcin o fijacin: El virus se une a la clula hospedadora de forma estable.

La unin es especfica ya que el virus reconoce complejos moleculares de tipo proteico,
lipoproteico o glucoproteico, presentes en las membranas celulares.

Fase de penetracin o inyeccin: el cido nucleico viral entra en la clula mediante una
perforacin que el virus realiza en la pared bacteriana.

Fase de eclipse: en esta fase no se observan copias del virus en la clula, pero se est
produciendo la sntesis de ARN, necesario para generar las copias de protenas de la
cpsida. Tambin se produce la continua formacin de cidos nucleicos virales y
enzimas destructoras del ADN bacteriano.

Fase de ensamblaje: en esta fase se produce la unin de los capsmeros para formar
la cpsida y el empaquetamiento del cido nucleico viral dentro de ella.

Fase de lisis o ruptura: conlleva la muerte celular. Los viriones salen de la clula,
mediante la rotura enzimtica de la pared bacteriana. Estos nuevos virus se encuentran
en situacin de infectar una nueva clula.

Ciclo lisognico
Las dos primeras fases de este ciclo son iguales a las descritas en el ciclo anterior. En la fase
de eclipse el cido nucleico viral en forma de ADN bicatenario recombina con el ADN
bacteriano, introducindose en ste como un gen ms. Esta forma viral se denomina profago, o
virus atenuado, mientras que la clula infectada se denomina clula lisognica.
En este estado el profago puede mantenerse durante un tiempo indeterminado, pudiendo
incluso, reproducirse la clula, generando nuevas clulas hijas lisognicas. El profago se
mantendr latente hasta producirse un cambio en el medio ambiente celular que provoque un
cambio celular, por ejemplo, por variaciones bruscas de temperatura, o desecacin, o
disminucin en la concentracin de oxgeno. Este cambio induce a la liberacin del profago,
transformndose en un virus activo que contina el ciclo de infeccin hasta producir la muerte
celular y la liberacin de nuevos virus.

Metodologa para el estudio de los virus.

Los mtodos utilizados para reconocer las infecciones por virus humanos pueden clasificarse
en DIRECTOS e INDIRECTOS, segn persigan demostrar la presencia del virus o de alguno

de sus constituyentes (antgeno o genoma viral) o bien la respuesta de anticuerpos especficos

por parte del husped en el curso de la infeccin.
Gran parte de las tcnicas utilizadas en el diagnstico clnico se basan en pruebas serolgicas
que identifican anticuerpos especficos frente a diversas protenas antignicas. Sin embargo,
existen circunstancias en las cuales son necesarias pruebas que detecten precozmente la
infeccin viral (tratamientos especficos, medidas profilcticas, etc.).
En algunas infecciones virales es posible detectar la presencia de antgenos virales
previamente al desarrollo de la seroconversin, siendo esta prueba la nica evidencia de la
exposicin al virus cuando no existe aumento de los niveles de anticuerpos circulantes
(pacientes inmunodeprimidos).
Igualmente la deteccin del genoma viral puede favorecer la precocidad del diagnstico viral y
su confirmacin. En la ltima dcada se han desarrollado una serie de tcnicas para el
diagnstico viral basadas en la deteccin de cidos nucleicos. De ellas la Reaccin en cadena
de la polimerasa (PCR) es la ms utilizada.
En el momento actual, la tendencia en el diagnstico virolgico consiste en emplear nuevas y
ms sensibles tecnologas de deteccin de antgenos y de investigacin de cidos nucleicos
con el propsito de lograr un diagnstico viral ms rpido. El desarrollo de quimioterapia
antiviral efectiva es responsable de esta tendencia que hace de la identificacin rpida,
sensible y especfica de los virus, una necesidad.

Aislamiento Viral - Cultivos Celulares

La base del diagnstico viral es la deteccin del virus o de sus componentes. El aislamiento del
virus era la tcnica standard de oro sobre la cual se medan todas las otras pruebas de
diagnstico viral, pero hoy en da con el desarrollo de las nuevas tcnicas de Biologa
Molecular ya no es la ms sensible. De igual forma el aislamiento de virus tiene una
sensibilidad y una especificidad muy alta. Debido a que slo se amplifica el virus, se aumenta la
sensibilidad sin disminuir la especificidad. Sin embargo, existen algunas desventajas en el
aislamiento del virus: El proceso suele ser lento, ya que demanda das a semanas para la
identificacin, y en consecuencia puede no estar disponible a tiempo para influir en la atencin
del paciente. Adems, es un proceso laborioso y caro. Por otra parte requiere el uso de
sistemas de cultivos adecuados, por ejemplo, se necesitan varias lneas celulares para la
deteccin ptima de virus.
Los cultivos celulares son, pues, los biosubstratos ms corrientemente empleados para la
propagacin de los virus.
Un cultivo celular es obtenido, de explantes de rganos o de embriones de animales.
Estas clulas obtenidas aspticamente se disocian tratndolas con una enzima (tripsina) que
rompe el cemento intercelular. La suspencin de celulas libres as obtenidas se coloca en la
superficie plana de un recipiente de vidrio o plstico en donde las clulas se adhieren y
multiplican formando una fina capa de clulas que se llama MONOCAPA CELULAR.
Esta monocapa de clulas crece en un medio de cultivo complejo que contiene albmina,
vitaminas, sales, glucosa, etc., en un sistema buffer. Se previene la contaminacin bacteriana
adicionndole a los medios antibiticos adecuados.
Los cultivos celulares en monocapa son los ms usados, aunque hay otros sistemas (cultivos
en suspensin, explantos, cultivos de rganos, cultivos en microcarriers, etc.).
Los cultivos celulares se dividen en:
Cultivos Primarios: Se obtienen a partir de clulas, tejidos u rganos tomados directamente
del organismo y pueden subcultivarse una o dos veces.

Lneas Celulares Diploides: Son aquellas que crecen en pasajes sucesivos hasta
aproximadamente 50 subcultivos y que conservan por lo menos en un 75% el cariotipo
correspondiente a la especie de que provienen.
Lneas Celulares Continuas: Permite un nmero finito de subcultivos y son heteroploides.
Para considerar que se ha logrado establecer una lnea continua, esta debe de haber sido
subcultivada por lo menos 70 veces. Las lneas celulares continuas ofrecen las siguientes
ventajas:

Disponibilidad para todos los investigadores de stocks de clulas idnticas, ya sea

congeladas en ampollas o en monocapa de botella de cultivos, con la posibilidad de
reconstituirlas cuando sea necesario.
Facilidad relativa del pasaje y mantenimiento en todos los laboratorios.
Libre de contaminacin con agentes extraos.

Los distintos cultivos celulares varan en cuanto a su susceptibilidad a los diferentes virus, ya
que existe una relacin especfica husped-virus, y es en funcin de los datos clnicos y del tipo
de muestra que se elige el cultivo para inocular el material.
Luego de inoculado el cultivo celular, se incuba a 35-37 C por un perodo de hasta 14 das
promedio, esperando la aparicin de efecto citoptico, toxicidad o degeneracin celular,
observando el cultivo al microscopio a las 24, 48, 72hs y luego 2 veces por semana. Se usan
cultivos celulares no inoculados para control y comparacin con cualquier cambio morfolgico
observado en los cultivos inoculados. El efecto citoptico es la visualizacin de cambios
morfolgicos ms o menos caractersticos en las clulas inoculadas producidas por la accin
del virus sobre el cultivo celular.
Cuando los virus no producen efecto citoptico, se puede recurrir a tcnicas que ponen en
evidencia la presencia de aquel en el cultivo. Las ms usadas son: hemadsorcin,
hemaglutinacin y tinciones con anticuerpos monoclonales. (Ver 2)
Hemadsorcin: Hay virus que durante su multiplicacin intracelular, expresan en la membrana
de la clula husped elementos estructurales virales llamados hemaglutininas, glicoprotenas
capaces de unirse a receptores especficos en la membrana de glbulos rojos de diferentes
especies animales. De modo que si se agregan glbulos rojos a un cultivo inoculado, se puede
poner en evidencia la infeccin de esas clulas a travs de la unin de los glbulos rojos a la
superficie celular.
Hemaglutinacin: Las hemaglutininas pueden ponerse en evidencia en el sobrenadante de los
cultivos utilizando el mismo fundamento que para la hemadsorcin.

Deteccin de Antgenos - Tcnicas Inmunolgicas

Las siguientes tcnicas inmunolgicas pueden utilizarse tanto para la deteccin de antgenos
(mtodos directos), como de anticuerpos (mtodos indirectos). En el caso de deteccin de
antgenos, se utiliza un anticuerpo especfico antiviral (por lo general IgG) a cuya fraccin Fc se
ha conjugado una molcula marcada, que puede ser isotiocianato de fluorescena
(Inmunofluorecencia), un istopo radioactivo 125I o 131I (RIA), o una enzima: peroxidasa,
fosfatasa alcalina, o biotina-avidina (EIA), para objetivar la reaccin.
Para el procedimiento indirecto (deteccin de anticuerpos), se emplea un anti-anticuerpo
marcado y la reaccin se realiza sobre un cultivo celular infectado por el virus en estudio.
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA (ID)
Es una de las tcnicas ms antiguas y de uso ms difundido en el laboratorio clnico. El
principio bsico de la inmunofluorescencia directa . Muestras clnicas apropiadas son
recolectadas y colocadas sobre portaobjetos donde se dejan secar y fijar. Luego se agregan
anticuerpos especificos marcados con isotiocianato de fluorescena que difunden a travs de la
membrana celular y se combinan con los antgenos vricos en el interior de las clulas. La
reaccin antgeno anticuerpo se visualiza con el microscopio de fluorescencia, por la aparicin
de fluorescencia de color verde manzana.

Esta tcnica se puede utilizar para una identificacin rpida del virus directamente sobre la
muestra (por ejemplo: clulas eluidas de un lavado nasal, o de un hisopado nasofarngeo), o se
la puede emplear para la confirmacin del efecto citoptico observado en cultivos celulares.
Sin embargo la realizacin de la reaccin es laboriosa, depende mucho de la calidad de los
reactivos, requiere un microscopio de fluorescencia y de una persona con experiencia para
llegar a un diagnstico certero, as como una recoleccin y preparacin de la muestra
adecuada. Aun as, el mtodo, en manos de una persona con experiencia resulta til para la
identificacin rpida de ciertos virus como los virus respiratorios, ya que nos proporciona un
diagnstico etiolgico en el curso de una jornada de trabajo. Adems puede estudiar varias
muestras simultneamente.
El advenimiento de los anticuerpos monoclonales, ha incrementado la especificidad y en
algunos casos la sensibilidad de estos ensayos. Esta tcnica requiere slo 2-4hs, y se ha
reportado una sensibilidad del 70-80 % comparada con cultivos celulares para la identificacin
de virus Herpes Simple, 80-95% para VRS y 71% para Influenza A. La tincin con
inmunoperoxidasa es similar a la de la inmunofluorescencia y es la tcnica de eleccin en
algunos laboratorios. El procedimiento implica unos pocos pasos adicionales ya que en este
caso el anticuerpo monoclonal est marcado con una enzima que requiere la adicin de un
substrato para evidenciar la reaccin por un cambio de color que es visible micro y
macroscpicamente.
TEST DE AGLUTINACION
El test de aglutinacin es un mtodo simple, de un solo paso, que a veces se usa para la
deteccin de antgenos virales en muestras clnicas. Los ensayos de aglutinacin, dependen de
la fijacin inicial de anticuerpos antivirales especficos sobre eritrocitos o partculas de ltex.
Luego este reactivo se incuba con la muestra clnica en la cual se investiga el antgeno y las
partculas se aglutinan si el antgeno adecuado se encuentra presente. Estas pruebas en
general se complementan o se confirman por medio de otros ensayos debido al elevado
porcentaje de reacciones inespecficas.
El test de aglutinacin ha sido usado para detectar antgeno de Rotavirus en heces (el ms
importante) mostrando una buena sensibilidad cuando se lo compara con el EIA para Rotavirus.
Adems es una tcnica rpida y barata. Tambin se la ha usado para detectar antgenos de
Adenovirus.
RADIOINMUNOENSAYO (RIA)
Fue originalmente aplicado para identificar el antgeno de superficie de la Hepatitis B (HBsAg) y
el anticuerpo anti-HBsAg. Estos ensayos tienen una buena sensibilidad y especificidad, pero la
aparicin de un mtodo como el ensayo inmunoenzimtico (EIA) con su mayor tiempo de
conservacin de los reactivos, su costo relativamente ms bajo y la ausencia de residuos
radioactivos, ha reemplazado las tcnicas de RIA en la mayor parte de los casos de deteccin
de antgeno viral.
ENZIMOINMUNOANALISIS (EIA)
Los EIA para la deteccin de antgeno se basan habitualmente en la captura del antgeno por
anticuerpos especficos unidos a una fase slida, en general el pocillo de una microplaca o una
pequea esfera de plstico. El antgeno viral presente en la muestra clnica se combina con el
anticuerpo fijado a la fase slida y el antgeno viral se detecta mediante la adicin de otro
anticuerpo especfico conjugado a una enzima. La enzima conjugada suele ser peroxidasa o
fosfatasa alcalina. El substrato para esas enzimas vara. En la reaccin con la peroxidasa el
substrato es un perxido capaz de oxidar un compuesto qumico incoloro que en su forma
oxidada tiene un color caracterstico.
En el caso de la fosfatasa la desfosforilizacin es la responsable directa de la aparicin del
color. Por esta tcnica se puede procesar gran nmero de muestras en forma rpida y
automatizada, no requiriendo de un observador experimentado para leer los resultados, ya que
estos se leen por medio de espectrofotmetros especialmente diseados, siendo entonces una
tcnica ms objetiva

Clasificacin de virus
Los virus se clasifican en base a su morfologa, composicin qumica y modo de replicacin.
Los virus que infectan a humanos frecuentemente se agrupan en 21 familias, reflejando slo
una pequea parte del espectro de la multitud de diferentes virus cuyo rango de huspedes van
desde los vertebrados a los protozoos y desde las plantas y hongos a las bacterias.
Nomenclatura
El nombre de los virus obedece a distintas consideraciones. Algunas veces se debe a la
enfermedad que ellos producen, por ejemplo el virus polio se llama as porque produce la
poliomielitis. Tambin puede deberse al nombre de los descubridores como el virus del EpsteinBarr, o a caractersticas estructurales de los mismos como los coronavirus. Algunos poseen un
nombre derivado del lugar donde se los hall por primera vez, tal es el caso del virus Coxsackie
o Norwalk.
El ICTV (International Committee on taxonomy of viruses) ha propuesto un sistema universal de
clasificacin viral. El sistema utiliza una serie de taxones como se indica a continuacin:

Orden (-virales)
Familia (-viridae)
Subfamilia (-virinae)
Gnero (-virus)
Especie ( )

VIRUS

ADN

Familia

Gnero

Ejemplo

Comentario

Herpesviridae

Alphaherpes
-virinae

Herpes simplex
virus type
1 (aka HHV-1)

Encefalitis,
estomatitis
aguda, llaga
labial del
resfrado.

Herpes simplex
virus tipo 2 (aka
HHV-2)

Herpes genital,
encefalitis

Varicella zoster
virus (aka HHV3)

Varicela, Herpes
Zster

Epstein Barr
virus (aka HHV4)

Mononucleosis
hepatitis,
tumores (BL,
NPC)

Gammaherp
es-virinae

Betaherpesvirinae

Sarcoma de
Kaposi, asociado
al herpesvirus,
KSHV (aka
Human
herpesvirus 8)

Probablemente:
tumores, inc.
Sarcoma de
Kaposi (KS) y
algunos linfomas
de clulas B

Cytomegaloviru
s Humano (aka
HHV-5)

Mononucleosis,
hepatitis,
pneumonitis,
congnitas

Human
herpesvirus 6

Rosola (aka E.
subitum),
pneumonitis

Human
herpesvirus 7

Algunos casos de
reseola?

Adenoviridae

Mastadenovirus

Adenovirus
Humano

49 serotipos
(especies);
infecciones
respiratorias.

Papovaviridae

Papillomavirus

Papillomavirus
Humano

70 especies;
verrugas y
tumores

Polyomavirus

JC, BK viruses

usualmente poco
graves; JC causa
PML en SIDA

Hepadnavirus

Virus de la

Hepatitis
(crnica), cirrosis,
tumores
hepticos.

Hepadnavirida
e

Hepatitis B

Poxviridae

Orthopoxvirus

Vaccinia virus

Virus de la
vacuna de la

viruela
Monkeypox virus Enfermedad
como la viruela,
zoonosis muy
rara (un brote
reciente en el
Congo; 92 cases
desde 2/96 2/97)

Parvoviridae

Parapoxvirus

Orf virus

Lesiones
drmicas
("pocks")

Parvo-virus

B19 parvovirus

Exantema.
Infecciosa. (5
enfermedad),
crisis aplstica,
prdida fetal.

Dependovirus

Virus Adenoasociado

til para terapia

gnica; se
integra en el
cromosoma

VIRUS ARN
Familia

Gnero

Ejemplo

Comentario

Picornaviridae

Enterovirus

Polioviruses

3 tipos; meningitis
asptica,
poliomielitis
paraltica

Echoviruses

32 tipos; Aseptic
meningitis, rashes

Coxsachieviruse

29 types; meningitis

asptica,
miopericarditis

Virus de la
Hepatitis A

Hepatitis aguda
(propagacin fecaloral)

Rhinovirus

Human
rhinoviruses

115 tipos; Resfrado

comn

Calicivirus

Norwalk virus

Enfermedad
gastrointestinal.

Hepevirus

Virus de la

Hepatitis aguda
(propagacin fecaloral)

Hepatovirus

Caliciviridae

Hepatitis E
Paramyxovirid
ae

Orthomyxoviri
dae

Paramyxo
-virus

Parainfluenza
viruses

4 tipos; Resfrado
comn, bronquiolitis,
neumona

Rubulavirus

Virus de las
Paperas

Paperas: parotitis,
meningitis asptica
(raro: orquitis,
encefalitis)

Morbillivirus

Virus del
sarampin

Sarampin: fiebre,
exantema (raro:
encefalitis, SSPE)

Pneumovirus

Virus Sincitial
respiratorio

Resfrado
comn(adultos),
bronquiolitis,
neumonia (nios)

Influenzavirus A

Influenza virus
A

Flu: fiebre, mialgias,

malestar general,
tos, neumonia

Influenzavirus B

Influenza virus
B

Flu: fiebre, mialgias,

malestar general,
tos, neumonia

Rhabdoviridae

Lyssavirus

Virus de la
Rabies

Rabia: incubacin
larga y despus
enfermedad del SNC
y muerte.

Filoviridae

Filo-virus

Virus de

Fiebre hemorrgica,
muerte

Ebola and
Marburg
Bornaviridae

Bornavirus

Borna disease
virus

No muy claro;
relacionado con
enfermedades
tipo:ezquizofrenia en
algunos animales.

Retroviridae

Oncovirinae

Human Tlymphotropic
virus type-1

Leucemia de clulas
T del adulto. (ATL),
paraparesia
espstica tropical
(TSP)

Spumavirinae

Human foamy
viruses

No se conoce
patologa

Lentivirinae

Virus type1 y 2
de la
inmunodeficien
cia humana

SIDA, enfermedad
del SNC

Rubi-virus

Virus de la
Rubela

Exantema;
malformaciones
congnitas.

Alphavirus

Virus de la
Encefalitis

Transmitida por
mosquitos,

Togaviridae

Flaviviridae

Flavi-virus

Hepacivirus

equina (WEE,
EEE, VEE)

encefalitis

Virus de la
Fiebre Amarilla

Mosquito-born;
fever, hepatitis
(yellow fever!)

Virus del
Dengue

Transmitida por
mosquitos;
hemorrhagic fever

Virus de la
Encefalitis de
San Luis

Transmitida por
mosquitos;
encephalitis

Virus de la

Hepatitis (con
frecuencia: crnica),
cncer heptico

Hepatitis C
Reoviridae

Bunyaviridae

Rota-virus

Rotaviruses
Humano

6 tipos; Diarrea

Colti-virus

Virus de la
Fiebre de
Garrapatas de
Colorado

Transmitido por
garrapatas; fiebre

Orthoreovirus

Reoviruses
Humanos

Enfermedad leve

Hantavirus

Sndrome
Pulmonar por
Hantavirus

Propagado por
roedores;
enfermedad
pulmonar (puede ser
letal, Ej brote de las
"4 esquinas")

Hantaan virus

Propagado por
roedores; fiebre

hemorrgica con
sndrome renal.
Phlebovirus

Importancia aplicada de los virus y partculas subvirales

Los virus han representado histricamente un problema muy grave para la salud de
los humanos. Despus del reconocimiento de estos agentes como causantes de
enfermedad, la virologa ha evolucionado muy rpido, incluso los virus fueron de los
primeros modelos para el estudio del funcionamiento del genoma, conocimiento
indispensable hoy en da para el trabajo de investigacin en ciencias biolgicas.
En general, la palabra virus inmediatamente refiere a enfermedad, y no es para
menos: en 1918 una pandemia de gripe (influenza) ocasion la muerte de ms de
30 millones de personas alrededor del mundo, posteriormente este virus ha
ocasionado epidemias de menor intensidad pero igualmente temidas. Entre 1957 y
1986 se estima que, slo en Estados Unidos, los virus de la influenza ocasionaron
ms de 10 000 muertes.
La fama de los virus es merecida en el caso del SIDA por ejemplo, actualmente una
de las causas ms importantes de mortalidad en el mundo, o bien, en el caso de la
viruela, que en el pasado provoc miles de muertes. Los casos ms recientes de
enfermedades altamente contagiosas son los hemorrgicos y letales filovirus
(Marburg y bola) y, por supuesto, el sndrome respiratorio agudo severo (SARS, por
sus siglas en ingls).
En el ltimo cuarto del siglo XX, los virus cobraron una importancia mdica
inusitada por la aparicin de enfermedades hasta entonces desconocidas como las
anteriormente mencionadas, as como el resurgimiento con mayor virulencia de enfermedades ya conocidas, como el sarampin, el dengue o la influenza. En 1999
hubo una gran epidemia en Europa ocasionada por el virus de la influenza que
ocasion la hospitalizacin de miles de personas y la muerte de varias decenas de
ellas; dos aos antes, en Hong Kong se tuvieron que sacrificar casi diez millones de
pollos por una epidemia de influenza aviar que ya amenazaba con expandirse a
regiones vecinas. Durante esta ltima tambin se registraron muertes entre
personas que tuvieron contacto con los animales infectados.
En los ltimos aos se detectaron algunos virus nuevos, como el de Hendra y el de
Nipah (ambos en Malasia, 1998), los cuales inicialmente ocasionaron problemas en
ganado equino y porcino respectivamente. Sin embargo, personas que tuvieron
contacto con los animales enfermos tambin fueron infectados, algunas de ellas
incluso murieron. Estos casos hacen destacar la importancia del estudio de los virus
que infectan animales, no slo por cuestiones ecolgicas o comerciales, sino
tambin por su influencia sobre la salud humana.
El surgimiento y resurgimiento de los virus se deben en parte a su relativo bajo nivel de
complejidad, por lo que pequeos cambios en su informacin gentica ocasionan grandes
cambios en su estructura y funcionamiento general, lo cual permite evadir la respuesta
inmunolgica de los organismos, variar sus comportamientos dentro de las clulas hospederas
y perder su sensibilidad a tratamientos comunes para esas enfer- medades. Un caso tpico son
los virus de la inmunodeficiencia humana (causantes de SIDA) cuyos tratamientos son
generalmente limitados porque los virus que infectan al paciente son sustancialmente
diferentes de los que evolucionan en su organismo en un determinado intervalo de tiempo.

Esta variabilidad de los virus, sin embargo, aparte de causarnos los problemas mencionados,
se convierte en una herramienta muy til en el estudio de la evolucin de los organismos en el
nivel molecular. El estudio de la variabilidad de los virus ha producido conocimientos en el
mbito de la evolucin, lo cual puede ser aplicado hasta cierto punto y en diferentes formas a la
generalidad de la biologa.
Actualmente se considera a los virus no slo como causantes de enfermedades sino tambin
como agentes muy importantes que colaboran en el mantenimiento del equilibrio ecolgico.
Los virus, adems de producir la disminucin de poblaciones animales o vegetales en un
determinado hbitat, sirven como mediadores en el intercambio gentico entre individuos de
una misma o de diferentes especies, cooperando en la variabilidad de los organismos que son
susceptibles de ser infectados.
Este fenmeno ha sido bastante estudiado en las bacterias que pueden ser infectadas por los
virus denominados bacterifagos (o simplemente fagos) y de esta manera poder intercambiar
informacin entre unas cepas bacterianas y otras, los fagos pueden contener informacin til
para que la clula bacteriana realice ciertas funciones que en otras condiciones no podra
realizar.
En los animales, de modo anlogo, los retrovirus y los adenovirus, entre otros, pueden
introducir informacin nueva a la clula infectada y posteriormente llevarse informacin a una
clula diferente logrando as una comunicacin gentica entre diferentes poblaciones celulares
o individuos.
De esta manera, algunas especies de virus revisten hoy una importancia clave en la medicina
porque pueden servir como vehculo para introducir informacin a clulas con algn defecto
gentico o adquirido que les permita alcanzar un funcionamiento normal. Esta rea de la
biomedicina es actualmente una de las ms apoyadas ya que representa una esperanza en la
cura de enfermedades genticas como la fibrosis qustica y el cncer.
Es imposible dejar de ver a los virus como peligrosos agentes causales de enfermedad, pero a
esto hay que agregar, por una lado, que tambin contribuyen al mantenimiento del equilibrio
ecolgico y, por otro, que en pocos aos pueden ser de gran utilidad en el tratamiento de
muchos problemas que aquejan a los humanos, incluyendo las enfermedades causadas por los
virus mismos.

Unidad 6.- Crecimiento y propagacin de

microorganismos.
La clula bacteriana es esencialmente una maquinaria de sntesis capaz de duplicarse a s
misma. El proceso de sntesis para el crecimiento bacteriano involucra unas 2000 reacciones
qumicas de una amplia variedad. Una vez sintetizados los polmeros, el crecimiento contina
con el ensamblaje y formacin de nuevas estructuras celulares que finalizan con la divisin en
dos clulas hijas. En una medio apropiada fsica y nutricionalmente, un cultivo se reproduce
continuamente como clulas vegetativas, los nutrientes absorbidos y metabolizados permiten
crecer al microorganismo.
Crecimiento individual
Es el incremento en el tamao y peso y es usualmente un preludio a la divisin celular
Crecimiento poblacional
Es el incremento en el nmero de clulas como una consecuencia del crecimiento y divisin
celular
Tasa de crecimiento
Es el cambio del nmero de clulas o masa por unidad de tiempo
Generacin
Intervalo para la formacin de dos clulas provenientes de una.
Tiempo de generacin
Tiempo que tarda una poblacin en duplicarse. Se puede definir tambin como la cantidad de
tiempo requerida para completar un ciclo de divisin.
Un experimento de crecimiento hipottico empezando con una simple clula, teniendo un
tiempo de generacin de 30 se presenta en la siguiente tabla:

Factores externos
Condiciones ambientales o culturales: pH, T, Aw, O2, CO2
Condiciones nutricionales: Tasa C/N 10:1, 12:1
Factores internos
Capacidad metablica
MEDIDA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO
Se mide por cambios sucesivos en el nmero de clulas o por el peso de la masa de
las clulas. Existen varios mtodos para contar las clulas o estimar la masa de
stas.

A) Recuento de clulas
1) Conteo de clulas al microscopio
Se emplea un dispositivo graduado con 25 cuadrados cuyo volumen y rea es
conocido. Ej.: Cmara de Petroff-Hausser, cmara de Neubauer, hemocitmetro.
Limitaciones: - Es muy tedioso, no es prctico para uun gran nmero de muestras
- No es muy sensible, se necesitan al menos 106 bact/ml para que sean observadas
al microscopio
- No distinguen clulas vivas de muertas

2) Conteo de clulas viables

Una clula viable es definida como aqulla que es capaz de dividirse y formar una
colonia en el medio de cultivo. El conteo en placas es el mtodo ms utilizado.
Pueden ser:
Diseminacin en placa (siembra en placa por extensin).Se asume que cada colonia surgi de una simple clula, contando el nmero de
colonias uno puede calcular el nmero de clulas viables en la muestra.
Mtodo de vaciado en placa.-

B) Medida de la masa celular

En muchos estudios es necesario determinar el peso de las clulas ms que el
nmero.
1) Peso seco
Se determina el peso seco o peso hmedo de una alcuota de la poblacin separada
por centrifugacin. El peso seco es por lo general el 20-25 % del peso hmedo.

2) Turbidimetra
A travs de un colormetro o espectrofotmetro midiendo la turbidez en unidades de
absorbancia. Debe prepararse curva estndar para cada organismo estudiado.
CICLO DEL CRECIMIENTO POBLACIONAL
Si analizamos el crecimiento microbiano en el tiempo, ste describe una tpica
curva de crecimiento que puede ser dividida en fases distinguibles. La curva de
crecimiento puede dividirse en diversas fases: fase lag, fase exponencial, fase
estacionaria y fase de muerte.

a) Fase lag o de retraso

Cuando una poblacin microbiana es inoculada en medio fresco, el crecimiento
generalmente no principia de inmediato sino despus de un cierto tiempo, llamado
fase lag que puede ser breve o largo, dependiendo de las condiciones. Si un cultivo
que crece exponencialmente es inoculado al mismo medio bajo las mismas
condiciones de crecimiento no se observa la fase lag y el crecimiento exponencial
contina a la misma velocidad. Sin embargo, si el inculo se toma de un cultivo
viejo (fase estacionaria) y se inocula en el mismo medio, generalmente se presenta
la fase lag, aun cuando las clulas del inculo estn vivas. Esto se debe a que las
clulas generalmente agotan diferentes coenzimas esenciales u otros
constituyentes celulares y se requiere de cierto tiempo para su resntesis. Un
retraso tambin se presenta cuando el inculo est formado por clulas daadas
(pero, no muertas) por tratamientos con calor, radiacin o sustancias qumicas,
debido al tiempo necesario para que las clulas puedan reparar dicho dao.
Tambin se observa cuando una poblacin se transfiere de un medio de cultivo rico
a uno pobre. Esto sucede debido a que para que contine el crecimiento en un
medio de cultivo en particular, es necesario que las clulas tengan un complemento
ntegro de enzimas para la sntesis de los metabolitos esenciales que no estn
presentes en dicho medio.
Cuando se les transfiere a un medio diferente, se requiere cierto tiempo para la
sntesis de nuevas enzimas Es una fase de preparacin y adaptacin al medio, su
duracin depende del medio de cultivo y el estado fisiolgico de las clulas vivas
b) Fase exponencial
Es una consecuencia del hecho de que cada clula se divide para formar dos
clulas, cada una de las cuales tambin se divide para formar dos clulas ms y as
sucesivamente. La mayor parte de los organismos unicelulares crecen
exponencialmente. La velocidad de crecimiento exponencial vara mucho de un
organismo a otro. Por ejemplo: Salmonella typhi crece muy rpidamente en cultivo,
con un tiempo de generacin de 20 30 , Mycobacterium tuberculosis, crece muy
lentamente, con slo una o dos duplicaciones por da. Las condiciones ambientales,
T, composicin del medio de cultivo, afectan a la velocidad de crecimiento
exponencial as como las caractersticas del microorganismo.

En general, las bacterias crecen con mayor rapidez que los organismos eucariotas y
los eucariotas pequeos se desarrollan ms aprisa que los grandes Cada clula que
se divide en dos. La tasa de crecimiento es exponencial.
c) Fase estacionaria
El crecimiento exponencial se detiene, los nutrientes indispensables se agotan, no
hay incremento o decremento en el nmero de clulas o masa, hay limitacin de
nutrientes y acumulacin de sustancias txicas. Los microorganismos son
fisiolgicamente activos y viables. En un sistema cerrado no se puede llevar a cabo
indefinidamente el crecimiento exponencial
d) Fase de muerte
Si la incubacin contina despus que una poblacin alcanza la fase estacionaria,
las clulas pueden seguir vivas y continuar metabolizando, pero lo ms probable es
que mueran. Si esto ltimo sucede, la poblacin se encuentra en la fase de muerte.
Durante esta fase, el conteo microscpico directo puede permanecer constante
pero la viabilidad disminuye lentamente. En algunos casos, la muerte se acompaa
por lisis celular, dando lugar a una disminucin del conteo de viabilidad.
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE NUTRIENTES
La concentracin de nutrientes puede afectar tanto a la velocidad de crecimiento como al
rendimiento del crecimiento de un microorganismo. A concentraciones muy bajas de nutrientes,
la velocidad de crecimiento se reduce, mientras que a niveles moderados y altos de nutrientes
llega a ser mxima. Si la concentracin aumenta an ms la tasa de crecimiento no se modifica
La dependencia de la tasa de crecimiento con la concentracin de nutrientes fue descrita por J.
Monod en 1950 y recuerda la cintica enzimtica establecida por la ecuacin de Michaelis &
Menten. La concentracin de nutrientes afecta la tasa de crecimiento microbiano y el
rendimiento en masa de los microorganismos. A una tasa mxima de crecimiento, el incremento
en la concentracin de nutrientes da lugar a un aumento en la biomasa total a cosechar.
MEDIOS DE CULTIVO
Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten energa y elementos
qumicos para la sntesis de sus constituyentes celulares. Dependiendo de la fuente de carbono
que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en auttrofos si es el CO2 atmosfrico
(microorganismos que fotosintetizan) y hetertrofos si utilizan carbono orgnico.
Medios de cultivo: Slido y Lquido
Una forma muy til de poder aislar, identificar y conservar los microorganismos es mediante el
uso de medios de cultivo, inicialmente ideados por Pasteur (que como ya sabemos se
considera el padre de la microbiologa), quien se dio cuenta que los microorganismos podan
crecer en soluciones que tuvieran azcar y una fuente de nitrgeno.
Medios semislidos
Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a stos un agente solidificante en una
proporcin menor que para preparar medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la
movilidad de las bacterias.

FACTORES FSICOS Y QUMICOS QUE INFLUYEN EN EL CRECIMIENTO

BACTERIANO.

Temperatura: Cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento adecuada.

Si consideramos la variacin de la velocidad de crecimiento en funcin de la
temperatura de cultivo, podemos observar una temperatura mnima por debajo de la
cual no hay crecimiento; a temperaturas mayores se produce un incremento lineal de la
velocidad de crecimiento con la temperatura de cultivo hasta que se alcanza la
temperatura ptima a la que la velocidad es mxima. Por encima de esta temperatura
ptima, la velocidad de crecimiento decae bruscamente y se produce la muerte celular.

El aumento de la velocidad de crecimiento con la temperatura se debe al incremento

generalizado de la velocidad de las reacciones enzimticas con la temperatura. Se denomina
coeficiente de temperatura a la relacin entre el incremento de la velocidad de reaccin y el de
temperatura. En trminos generales, la velocidad de las reacciones bioqumicas suele
aumentar entre 1.5 y 2.5 veces al aumentar 10C la temperatura a la que tienen lugar.
La falta de crecimiento a temperaturas bajas se debe a la reduccin de la velocidad de las
reacciones bioqumicas y al cambio de estado de los lpidos de la membrana celular que pasan
de ser fluidos a cristalinos impidiendo el funcionamiento de la membrana celular.
La muerte celular a altas temperaturas se debe a la desnaturalizacin de protenas y a las
alteraciones producidas en las membranas lipdicas a esas temperaturas.
Es importante tener en cuenta que a temperaturas bajas, el metabolismo celular es lento y las
clulas paran de crecer; aunque suelen morir. Sin embargo, cuando la temperatura es superior
a la ptima, se produce la muerte celular rpidamente y las clulas no pueden recuperar su
capacidad de divisin si baja posteriormente la temperatura. Esto permite esterilizar por calor y
no por fro.
Hay varios tipos de microorganismos en funcin de sus temperaturas de crecimiento mnima,
mxima y ptima.

Tipo de microorganismo

Mesfilo

Psicrfilo

Psicrtrofo

Termfilo

Los microorganismos psicrtrofos son mesfilos que pueden crecer a temperaturas bajas. Por
tanto, se les puede considerar como psicrfilos facultativos. Esto es importante desde el punto
de vista aplicado porque cuando se encuentran contaminando alimentos, son capaces de
crecer en condiciones de refrigeracin (4 - 8C) y de producir infecciones en los consumidores
del alimento (30 - 35 C).
Desde el punto de vista clnico, los microorganismos capaces de producir infecciones en
pacientes son los mesfilos y algunos psicrtrofos ya que sus temperaturas ptimas de
crecimiento coinciden con las corporales.

Actividad de agua (aw): Se denomina actividad de agua a la relacin entre la presin

de vapor de agua del substrato de cultivo (P) y la presin de vapor de agua del agua

pura (P0). El valor de la actividad de agua est relacionado con el de la humedad

relativa (HR).
El valor de la actividad de agua nos da una idea de la cantidad de agua disponible
metablicamente. Por ejemplo: comparemos el agua pura donde todas las molculas de agua
estn libremente disponibles para reacciones qumicas con el agua presente en una disolucin
saturada de sal comn (NaCl) donde una parte importante de las molculas de agua participa
en la solvatacin de los iones de la sal disuelta. En este ltimo caso, la actividad de agua
mucho menor que en el primero. Conforme aumenta la cantidad de solutos en el medio,
disminuye su actividad de agua.
El agua es un substrato en muchas reacciones bioqumicas (proteasas y lipasas, por ejemplo).
Cuando no hay agua disponible, estas reacciones se detienen y el metabolismo se para. Esta
falta de agua tambin detiene muchas de las enzimas que podran degradar las estructuras
biolgicas. Por ello, las clulas que no crecen por falta de agua no mueren rpidamente: los
sistemas de degradacin tampoco funcionan y no las degradan.
Es decir: cuando un microorganismo se encuentra en un substrato con actividad de agua
menor que la que necesita, su crecimiento se detiene. Esta detencin del crecimiento no suele
llevar asociada la muerte del microorganismo, sino que ste se mantiene en condiciones de
resistencia durante un tiempo ms o menos largo. En el caso de las esporas, la fase de
resistencia puede ser considerada prcticamente ilimitada.
La gran mayora de los microorganismos requiere valores de actividad de agua muy altos para
poder crecer. Los valores mnimos de actividad para diferentes tipos de microorganismos son, a
ttulo orientativo, los siguientes: bacterias aw>0.90, levaduras aw>0.85, hongos filamentosos
aw>0.80.
Como puede verse, los hongos filamentosos son capaces de crecer en substratos con actividad
de agua menor (ms secos) de la que permite el crecimiento de bacterias o de levaduras. Por
esta razn se puede producir deterioro de alimentos de baja actividad de agua (por ejemplo, el
queso o almbares) por mohos (hongos filamentosos) y no por bacterias.
En funcin de su tolerancia a ambientes con baja aw, los microorganismos que pueden crecer
en estas condiciones se clasifican en halotolerantes, halfilos y xerfilos segn toleren o
requieran condiciones salinas o hipersalinas, respectivamente.
La reduccin de la actividad de agua para limitar el crecimiento bacteriano tiene importancia
aplicada en industria alimentaria. La utilizacin de almbares, salmueras y salazones reduce la
actividad de agua del alimento para evitar su deterioro bacteriano.

pH: Es un parmetro crtico en el crecimiento de microorganismos ya que cada tipo de

microorganismo tiene un rango de pH en el que puede vivir adecuadamente, fuera de
este rango muere.

El pH intracelular es ligeramente superior al del medio que rodea las clulas ya que, en muchos
casos, la obtencin de energa metablica depende de la existencia de una diferencia en la
concentracin de protones a ambos lados de la membrana citoplasma.
El pH interno en la mayora del microorganismo est en el rango de 6,0 a 8,0. Los rangos de
pH tolerables por diferentes tipos de microorganismos son, tambin, distintos. Hay
microorganismos acidfilos que pueden vivir a pH=1.0 y otros alcalfilos que toleran
pH=10.0.
Hay que considerar que, como consecuencia del metabolismo, el pH del medio de crecimiento
suele tender a bajar durante el cultivo. Por otra parte, la bajada del pH del medio que producen
ciertos microorganismos les confiere una ventaja selectiva frente a otros competidores. As,
por ejemplo, las bacterias lcticas que producen grandes cantidades de cido lctico como

consecuencia de su metabolismo primario reducen el pH del medio a valores inferiores a los

soportables por otras bacterias competidoras (llegan a bajar el pH del medio hasta 4.5). De
esta forma, las bacterias competidoras mueren y las lcticas se convierten en la poblacin
dominante. La bajada del pH se puede deber a varios factores, uno de los cuales es la
liberacin de cidos orgnicos de cadena corta (frmico, actico, lctico) por ciertas bacterias.

Unidad 7.- Gentica microbiana.

El genoma microbiano.
El genoma microbiano comprende la secuencia completa de los genes de un microorganismo.
Su conocimiento permite una mejor comprensin de la patogenia, con aplicaciones en la
prevencin, en el diagnstico y en el tratamiento de las enfermedades infecciosas. Conocidas
la dinmica de los mecanismos de invasin, produccin de toxinas, capacidad de adaptacin a
ecosistemas adversos y otras mltiples posibilidades de variacin, pueden disearse nuevas
vacunas ms especficas, as como establecer combinaciones interespecies, o utilizarse
bacterias a virulentas de muy fcil cultivo para producir en forma industrial antgenos de
grmenes de crecimiento fastidioso. En el campo de los antibiticos, se abren perspectivas
hacia lneas absolutamente distintas, con drogas capaces de bloquear determinados pasos en
cadenas metablicas vitales. Ya existen mltiples aplicaciones de la gentica en diagnstico
microbiolgico, con tcnicas que indudablemente se irn simplificando y perfeccionando con el
conocimiento de la entera secuencia del genoma bacteriano: hibridacin, reaccin de polimeras
en cadena, etc. Por ltimo, el conocimiento del genoma tambin permitir la utilizacin
benfica, a escala industrial, de algn microorganismo en la produccin de hormonas,
vitaminas, aminocidos y antibiticos.
Organizacin de los genes diferencias entre procariotas y eucariotas.
Los procesos de deteccin y modelado de genes son aquellos mediante los que se identifican,
en el ADN, regiones codificantes y elementos reguladores asociados,, con los objetivos de
deducir la organizacin o estructura de los genes y predecir la secuencia de los productos
gnicos correspondientes, sean ARNs o protenas, y los mecanismos controladores de su
expresin.
Caractersticas de los genes Procariotas
Cromosoma circular.
105-106 pb.
Haploide.
Aproximadamente 90% codifica para protenas y el 10% para regulacin.
Operones polignicos o policistrnicos (que tienen muchos genes estructurales) y operones
monocistrnicos.
Caractersticas de los genes Eucariotas

Cromosoma lineal
107-109 pb
Haploide y diploide
La codificacin a protenas varia entre el 3% en humanos y 70% en levaduras.
Presencia de intrones (regiones no codificantes) y exones (regiones codificantes).
Diferentes estrategias detectar y modelar genes en Procariotas y Eucariotas
Varios factores hacen que las estrategias para identificar y modelar genes procariotas y
eucariotas tengan que ser diferentes:
* La organizacin de los genes es ms compleja en los organismos eucariotas,
fundamentalmente por la presencia de intrones. Algunos genes tienen ms de 50 intrones.
* El procesamiento de los ARN primarios puede ocurrir de varias maneras alternativas
(alternative splicing).
* La proporcin de secuencias codificantes frente a secuencias no codificantes es muy
diferente; slo un 1.5% del material gentico en humanos y otros eucariotas superiores, frente
a un 85% en bacterias, en las que las secuencias codificantes solapan a menudo.
* Los genomas eucariotas son ricos en secuencias repetidas, que dificultan el anlisis.
* El nmero de genomas eucariotas secuenciados es mucho menor que el de procariotas, lo
que impone ciertos lmites tcnicos a la hora de aplicar mtodos de prediccin tanto Intrnsecos
como Extrnsecos.
Plsmidos: tipos y funciones.
Los plsmidos, vectores o tambin llamados plasmidios, son molculas de ADN
extracromosmico circular o lineal que se replican y transcriben independientes del ADN
cromosmico. Estn presentes normalmente en bacterias, y en algunas ocasiones en
organismos eucariotas como las levaduras. Su tamao vara desde 1 a 250 kb. El nmero de
plsmidos puede variar, dependiendo de su tipo, desde una sola copia hasta algunos cientos
por clula. El trmino plsmido fue presentado por primera vez por el bilogo molecular
norteamericano Joshua Lederberg en 1952.
Las molculas de ADN plsmidico, adoptan una conformacin tipo doble hlice al igual que el
ADN de los cromosomas, aunque, por definicin, se encuentran fuera de los mismos. Se han
encontrado plsmidos en casi todas las bacterias. A diferencia del ADN cromosomal, los
plsmidos no tienen protenas asociadas.
En la mayora de los casos se considera gentico dispensable. Sin embargo, posee
informacin gentica importante para las bacterias. Por ejemplo, los genes que codifican para
las protenas que las hacen resistentes a los antibiticos estn, frecuentemente, en los
plsmidos. Hay algunos plsmidos integrativos, es decir, que tienen la capacidad de insertarse
en el cromosoma bacteriano. Estos rompen momentneamente el cromosoma y se sitan en
su interior, con lo cual, automticamente la maquinaria celular tambin reproduce el plsmido.
Cuando ese plsmido se ha insertado se les da el nombre de episoma.
Los plsmidos se utilizan en ingeniera gentica por su capacidad de reproducirse de manera
independiente del ADN cromosomal como as tambin porque es relativamente fcil
manipularlos e insertar nuevas secuencias genticas.
Los plsmidos usados en Ingeniera Gentica suelen contener uno o dos genes que les
confieren resistencia a antibiticos y permiten seleccionar clones recombinantes. Hay otros
mtodos de seleccin adems de la resistencia a antibiticos, como los basados en
fluorescencia o en protenas que destruyen las clulas sin uso de antibiticos. Estos nuevos
mtodos de seleccin de plsmidos son de uso frecuente en agrobiotecnologa, debido
a la fuerte crtica de grupos ecologistas contra la posibilidad de presencia de antibiticos en los
organismos modificados genticamente.
Tipos
Una forma de agrupar plsmidos es por su habilidad de transferirse a otra bacteria. Los
plsmidos conjugativos contienen tra-genes, los cuales ejecutan complejos procesos de
conjugacin, como la transferencia sexual de plsmidos a otra bacteria. Los plsmidos no-

conjugativos, son incapaces de iniciar una conjugacin, de all que ellos pueden transferirse
nicamente con la asistencia de los plsmidos conjugativos y lo hacen por accidente. Una
clase intermedia de plsmidos son los movilizables los cuales llevan solo un subtipo de genes
requeridos para la transferencia. Ellos pueden parasitar un plsmido conjugativo,
transfirindose a una alta frecuencia solo en su presencia.
Es posible para plsmidos de diferentes tipos el coexistir en una celular simple.
Siete tipos diferentes de plsmidos han sido encontrados en la E.Coli. Pero normalmente
plsmidos relacionados son incompatibles, en el sentido de que solo uno de ellos sobrevive en
la lnea celular, debido a la regulacin de las funciones vitales de los plsmidos. Por lo tanto,
los plsmidos pueden ser diferenciados de acuerdo a grupos de compatibilidad.
Otra forma de clasificar plsmidos es por funcin. Hay 5 clases principales:
Plsmidos de fertilidad: los cuales contienen tra-genes, son capaces de conjugarse.
Plsmidos de resistencia: los cuales contienen genes que pueden constituir resistencia contra
antibiticos o venenos. Histricamente conocidos como Factores R, antes de que se entendiera
la naturaleza de los plsmidos.
Col-plsmidos: los cuales contienen genes que codifican (determinan la produccin de)
colinas y protenas que pueden matar a otra bacteria.
Plsmidos degradativos: los cuales habilitan la digestin de sustancias inusuales como tolueno
o cido saliclico.
Plsmidos virulentos: los cuales convierten la bacteria en un patgeno.
Los plsmidos pueden pertenecer a ms de uno de estos grupos funcionales.
Los plsmidos solo pueden coexistir como una o ms copias en cada bacteria, debido a la
divisin celular pueden perderse en una de las bacterias segregadas.
Algunos plsmidos incluyen un sistema de adicin o Sistema de Muerte Postsegregacional
(PSK: Postsegregational Killing System). Ellos producen en conjunto un veneno de larga vida y
un antdoto de vida corta. Las clulas hija que retienen una copia del plsmido sobreviven,
mientras que una clula hija que falla al integrar el plsmido muere o sufre una reducida tasa
de crecimiento debido al veneno que obtuvo de la clula padre. Este es un ejemplo de
plsmidos como el ADN replicante.
Variabilidad gentica en microorganismos.
La recombinacin mezcla elementos genticos (genoma o partes de un genoma) de dos
clulas diferentes en una misma clula, dando lugar a un nuevo genotipo. Tiene como
consecuencia la dispersin de la variabilidad gentica entre organismos de una poblacin, y la
transmisin de caracteres genticos entre individuos de un poblacin. En la recombinacin
tiene lugar el apareamiento de molculas de ADN, que son homlogos y el intercambio de
estas cadenas de ADN. Se forma un genotipo recombinante:
En eucariotas, la recombinacin tiene lugar durante la reproduccin sexual. En ella se forman
gametos haploides y durante la fecundacin, se fusionan y forman un cigoto diploide. En
bacterias no existe la reproduccin sexual, pero si tenemos recombinacin, tiene lugar
mediante la transferencia de una porcin del genoma de una bacteria dadora denominada
exogenote a una bacteria aceptora o endogenote. Como consecuencia, se forma un merocigoto
(zigoto parcial). Este merocigoto contiene el genoma entero de laclula aceptora y slo una
parte de la clula dadora. En bacterias, la recombinacin es ocasional (slo de vez en cuando),
fragmentaria (slo se recombina parte del genoma) y no es necesaria para completar el ciclo de
vida de las bacterias. Lo que s es beneficioso es para la poblacin.
MECANISMOS DE RECOMBINACIN
Hay tres tipos:
TRANSFORMACIN: la clula aceptora toma genes de una molcula de ADN (de la clula
dadora) que se encuentra en el medio que rodea a la clula aceptora.
La clula dadora se fragmenta, y tambin lo hace la molcula de ADN. Uno de estos
fragmentos es captado por la clula aceptora, si hay segmentos homlogos tiene lugar el
intercambio de cadenas de ADN RECOMBINACIN propiamente dicha.
El descubrimiento de la transformacin fue muy importante, ya que permiti conocer cul era la
naturaleza del material gentico, se conoci que era el ADN.
Una primera parte del descubrimiento fue realizado por Griffith en 1924.

TRANSDUCCIN: es un mecanismo de recombinacin gentica en bacterias, que est

mediado por un virus bacteriano denominado bacterifago=fago. En este proceso, la clula
dadora es en primer lugar infectada por un fago. Se forma as una partcula viral que est
defectuosa, y que contiene parte del ADN del fago y parte del ADN de la bacteria. Ahora, esta
partcula viral se llama partcula transductora y es capaz de infectar a una bacteria receptora.
De esta manera hay una transmisin de ADN de una bacteria dadora a una bacteria aceptora, a
travs de un fago.
CONJUGACIN: es un mecanismo de recombinacin en bacterias que requiere el contacto
directo entre dos bacterias. Es un proceso polarizado, es decir, siempre va en la misma
direccin, por lo que hay clulas dentro de una poblacin de bacterias que siempre actan
como dadora, F + o Fertilidad +, y luego hay otras que actan siempre como aceptoras, F - o
Fertilidad-.
Slo las clulas F + contienen un plsmido llamado factor F. Durante la conjugacin, tiene lugar
la copia y transferencia del factor F desde la clula F + a la F -. As, al final de la conjugacin se
obtienen dos bacterias F +, la que era F + sigue conservando el plsmido y la F - se transforma
porque adquiere el factor F. Este mecanismo de recombinacin en bacterias es muy importante
porque tambin se van a transferir los caracteres genticos que estn codificados en el factor F.
Entre los caracteres puede haber en un factor F, se encuentran por ejemplo, los que confieren
resistencia a los antibiticos. As, si un individuo de la poblacin presenta resistencia a los
antibiticos, esta proporcin se va a extender a toda la poblacin.
Las etapas de la conjugacin son:

Contactos entre bacterias F + y F - a travs de las fimbrias. Los genes para la

formacin de estas fimbrias, est en el factor F, por lo que slo van a poder tener estas
estructuras las F +.
Movilizacin del plsmido, que consiste en la rotura de una de las dos cadenas del
factor F, en una secuencia determinada. La enzima que corta el ADN es una
endonucleasa que tambin est codificada por el factor F. Una vez que tiene lugar la
rotura de la cadena, se da la replicacin o duplicacin de la cadena que permanece
cerrada. Esto causa el desplazamiento de la cadena abierta y que es transferida a la
clula receptora a travs de la fimbria. Cuando se acaba esto, tenemos que la clula
que era F + conserva el factor F completo y la F - ha recibido una cadena del
plsmido. Replicacin de la cadena transferida. Se rompe el contacto entre las clulas
y al final las bacterias son F +. El factor F tiene una propiedad, se puede integrar en el
cromosoma de la bacteria. As, una bacteria que tiene el factor F integrado en el
cromosoma, se dice que es una bacteria Hfr (alta frecuencia de recombinacin).

Transmisin de caracteres genticos entre bacterias.

Transferencias genticas.
Estos procesos son realizados mediante la transmisin de caracteres hereditarios de una
bacteria dadora a una receptora. Existen varios mecanismos de transferencia gentica.
A lo largo de la transformacin, la bacteria receptora adquiere una serie de caracteres
genticos en forma de fragmento de ADN. Esta adquisicin es hereditaria. Este fenmeno
fue descubierto en los pneumecocos en 1928.
En la conjugacin, el intercambio de material gentico necesita de un contacto entre la
bacteria dadora y la bacteria receptora. La cualidad de dador est unida a un factor de
fertilidad (F) que puede ser perdido. La transferencia cromosmica se realiza
generalmente con baja frecuencia. No obstante, en las poblaciones F+, existen mutantes
capaces de transferir los genes cromosmicos a muy alta frecuencia.
La duracin del contacto entre bacteria dadora y bacteria receptora condiciona la
importancia del fragmento cromosmico transmitido. El estudio de la conjugacin ha
permitido establecer los mapas cromosmicos de ciertas bacterias. Ciertamente, la
conjugacin juega un papel en la aparicin en las bacterias de resistencia a los
antibiticos.
La transduccin es una transferencia gentica obtenida mediante introduccin en una
bacteria receptora de genes bacterianos inyectados por un bacterifago. Se trata de un
virus que infecta ciertas bacterias sin destruirlas y cuyo ADN se integra en el cromosoma
bacteriano. La partcula fgica transducida a menudo ha perdido una parte de su genoma

que es sustituida por un fragmento de gene de la bacteria husped, parte que es as

inyectada a la bacteria receptora. Segn el tipo de transduccin, todo gen podr ser
transferido o, por el contrario, lo sern un grupo de genes determinados.
Restriccin y modificacin del DNA.
Sistemas de restriccin-modificacin (M-R)
El sistema de restriccin-modificacin (M-R) es usado in vivo por bacterias para protegerse
de ataques de DNA xgenos (normalmente vricos) que ingresen en la bacteria,
distinguindolo del ADN propio, anlogo a un sistema inmune. El ADN propio no es
reconocido por sus enzimas de restriccin, puesto que previamente lo ha modificado por
metilacin a travs de la accin de una metiltransferasa, enzima que transfiere grupos
metilo desde S-adenosil-metionina (SAM) a bases especficas. Este sistema fue
descubierto en 1968, a resultas de una serie de estudios sobre la infeccin del fago l en
dos cepas diferentes de Escherichia coli (las llamadas cepas K12 y B). Este sistema
consta de dos partes:
* Restriccin: Este sistema le permite a la bacteria protegerse de DNA exgenos para
evitar la promiscuidad en los intercambios genticos. Esto le confiere inmunidad frente a
bacteriofagos que pudieran poner en peligro la individualidad gentica o incluso la vida de
la bacteria, lo que se realiza a travs de cortes mediante endonucleasas de restriccin a
los DNA exgenos que ingresen a la bacteria.
* Modificacin: Consiste en la introduccin de grupos metilo (CH3-) en determinadas
bases dentro de determinadas secuencias del ADN, lo cual est catalizado por una
metilasa especfica.
Existen varios mecanismos de accin generales de estos sistemas, de los cuales destacan
el tipo I y el tipo II:
* M-R tipo I: Fueron los primeros en ser descritos. Lo caracterstico de los sistemas M-R
de tipo I es que las actividades de modificacin y las de restriccin estn producidas por
un complejo multiproteico, que realiza los dos tipos de actividades.
Transduccin: generalizada y especializada.
La transduccin es la transferencia de informacin gentica desde un donador a un receptor y
est mediada por un bacterifago (fago). La cubierta del fago protege al DNA del medio
ambiente, as es que la transduccin, a diferencia de la transformacin, no se ve afectada por
las nucleasas en el medio ambiente. No todos los fagos pueden mediar la transduccin. En la
mayora de los casos la transferencia gentica se realiza entre miembros de las mismas
especies bacterianas. Sin embargo, si un fago en particular posee un amplio rango de
huspedes que l es capaz de infectar, entonces la transferencia entre las especies puede
ocurrir. La capacidad del fago para mediar la transduccin, est relacionada con el ciclo de vida
del mismo.
Tipos de Transduccin
Transduccin Generalizada - La transduccin generalizada es el mecanismo por el cual
potencialmente cualquier gene bacteriano de la donadora puede ser transferido a la clula
receptora. El mecanismo de la transduccin generalizada se ilustra en la Figura 3.
Los fagos que median la transduccin generalizada, normalmente cortan el DNA de la clula
husped en pequeas piezas y empacan ambos DNAs al interior de la partcula fgica
mediante un mecanismo llamado head full o llenado de las cabezas del fago. Ocasionalmente
una de las piezas del DNA de la bacteria husped resulta empacada al azar dentro de una
cubierta de fago. Por lo tanto cualquier gene de la bacteria donadora puede ser potencialmente
transferido, pero solamente se transferir tanto DNA como pueda caber en una sola cpside.
Cuando la clula receptora se infecta con un fago que contiene DNA de una donadora, el DNA
de la donadora puede entrar a la receptora. Ya dentro de la clula receptora puede ocurrir el
evento de la recombinacin generalizada, en el cual se substituye el DNA de la clula donadora
por el de la receptora.
Transduccin especializada La transduccin especializada es la transduccin en la cual
solo ciertos genes del donador pueden ser transferidos al receptor. Diferentes fagos pueden

transferir diferentes genes pero un fago individual solamente puede transferir unos pocos
genes. La transduccin especializada est mediada por fagos lisognicos o fagos temperados y
los genes que se llegan a transferir dependern del lugar donde el profago queda insertado en
el cromosoma. Durante la escisin (separacin) del profago, un error llega a ocurrir
ocasionalmente en el cual un poco del DNA del husped escinde (se separa del cromosoma)
junto con el DNA del fago. Solo puede ser transferido el DNA del husped que est
flanqueando cada lado del sitio donde el profago se ha insertado, (ej. transduccin
especializada). Despus de la replicacin y la liberacin del fago y a travs de la infeccin de la
clula receptora, puede ocurrir una lisogenizacin de la receptora dando como resultado la
transferencia estable de los genes de la donadora. La receptora ahora tendr dos copias de los
genes que le fueron transferidos. Tambin es posible que se lleve a cabo una recombinacin
legtima entre los genes de la donadora y de la receptora.
Importancia La conversin lisognica (mediada por fago) ocurre en la naturaleza y es la

fuente de donde proceden las cepas virulentas.

Conjugacin bacteriana: plsmidos conjugativos y transferencia de genes

cromosmicos.
Conjugacin
Para conjugar tiene que existir contacto fsico entre la bacteria donadora de ADN y la eceptora.
La capacidad de donar la proporciona el poseer un plsmido conjugativo que tambin se
denomina factor de fertilidad o plsmido sexual.
Conjugacin de dos bacterias Gram negativas a travs de un pili sexual.
La conjugacin entre bacterias Gram negativas suele ocurrir a travs de pili sexuales
codificados por el plsmido conjugativo (figura 2.4.). Entre stos el mejor estudiado es el
plsmido F de Escherichia coli. Las bacterias que lo poseen (F+) sintetizan 2 o 3 pili con los
que contactan con bacterias receptoras y se acercan a ellas. Entonces el plsmido F se rompe
por un lugar fijo (el origen de transferencia), y una de sus cadenas pasa a travs del puente
citoplsmico creado por el pili, hasta el citoplasma de la clula receptora. Mientras tanto la otra
gira en el citoplasma de la donadora (mecanismo del crculo rodante). En ambos citoplasmas
se van sintetizando las cadenas complementarias de forma que al final del proceso ambas
bacterias poseen un plsmido F completo.
Por tanto la conjugacin convierte a la bacteria receptora (F-) a su vez en donadora (F+), lo que
acelera el proceso de extensin del plsmido, y puede ocurrir entre bacterias de la misma o de
difrentes especies relacionadas. Por eso cuando los genes que proporcionan resistencia a los
antibiticos estn en plsmidos conjugativos se extienden muy rpidamente a travs de
diversas especies patgenas.
Conjugacin: transferencia del plsmido F (izquierda), e integracin del plsmido F con
posterior transferencia del episoma (Hfr) (derecha).
El plsmido F, como otros plsmidos conjugativos, puede integrarse en el cromosoma en forma
de episoma Hfr (high frequency of recombination). Si estando integrado se inicia un proceso de
conjugacin, el episoma se abre por su origen de transferencia y comienza a pasar a travs del
pili sexual arrastrando a su vez los genes cromosmicos prximos a su punto de integracin.
Como estos puntos (integracin y transferencia) no coinciden, pasa primero una parte del
plsmido y para que este se complete en la bacteria receptora debera pasar antes el
cromosoma completo, lo que tardara unos 100 minutos en ocurrir. Los puentes citoplsmicos
suelen romperse mucho antes por lo que cuando una bacteria Hfr conjuga con una F- no suele
convertirla en F+. Sin embargo las donadoras Hfr transfieren genes cromosmicos, con mayor
frecuencia cuanto ms cerca estn del punto de integracin. Este hecho ha permitido realizar
mapas cromosmicos basados en experimentos de conjugacin interrumpidos en diferentes
tiempos.
Cuando un episoma Hfr se libera del cromosoma a veces el proceso es imprecis e incluye
algn gen cromosmico prximo al punto de integracin del plsmido. As se forman los
denominados plsmidos F' que en procesos de conjugacin se autotransfieren y transfieren
siempre los genes cromosmicos arrastrados.

Manipulacin gentica
de microorganismos y mejora de cepas industriales.
En general los organismos aislados de la naturaleza productores de metabolitos de inters
industrial producen a los mismos en niveles muy bajos, por lo tanto se hace necesario
incrementar estos rendimientos para lograr una mayor rentabilidad de los procesos.
Una forma de mejorar el rendimiento es mediante la optimizacin del medio de cultivo y de las
condiciones de operacin, pero esto est limitado por la capacidad de sntesis mxima del
producto deseado que tiene el organismo. La otra posibilidades el mejoramiento gentico de la
cepa.
Como ya se dijo, la productividad potencial de un organismo es controlada por su genoma,
pudiendo el mismo ser modificado para incrementar los rendimientos.
Con el organismo modificado, se reexaminan las condiciones del cultivo para lograr
nuevamente la mxima productividad. Por lo tanto los programas de desarrollo involucran una
continua modificacin gentica del microorganismo, seguida por una readaptacin del medio de
cultivo a los nuevos requerimientos, mejoras de las condiciones de operacin y tambin de los
procesos de extraccin y purificacin.
La obtencin de cepas modificadas genticamente se puede realizar por
1. Seleccin natural de variantes,
2. Mutacin inducida, y
3. Recombinacin gentica.
1. Seleccin natural
Se debe tener en cuenta que en cada divisin celular hay una pequea probabilidad de que
ocurra un cambio gentico, por lo cual no es sorprendente que en una gran masa celular la
poblacin sea heterognea. Esta distribucin puede presentar problemas de rendimientos
debido a que en general las variantes tienen menores niveles de produccin que la poblacin
parental. Estos cambios definitivos (mutaciones) se deben distinguir de las variaciones
fenotpicas que dependen de las condiciones ambientales y que tienen lugar en todas las
clulas de la poblacin que expresan la misma modificacin fisiolgica, dentro de las
variaciones permitidas por su genotipo. En las mutaciones espontneas el elemento
responsable de la mutacin no es conocido, pero igual que las inducidas (el factor mutagnico
se conoce) son estables y hereditarias y tienen una frecuencia estadsticamente medible (tasa
de mutacin).
La frecuencia de mutaciones espontneas vara entre 10-6 a 10-9 mutaciones por genoma y
por generacin. Por lo tanto si se considera un valor de 10 -7 se debern estudiar un gran
nmero de organismos (> 10 7 ) en la bsqueda del tipo deseado.
En la seleccin de variantes naturales, una prctica que todava es utilizada se refiere a la
observacin de las caractersticas morfolgicas de las colonias, las cuales, en manos de un
operador avezado, se asocian con mayor o menor productividad, lo que permite seleccionar y
posteriormente estudiar los clones aislados.
Estos estudios involucran una etapa de crecimiento seguida por ensayos de evaluacin del
producto. En estos casos es ms adecuado realizar las experiencias en Erlenmeyer de hasta
500 ml, ya que si bien demanda una considerable mano de obra, los resultados de ensayos en
tubos o pequeos frascos son menos confiables.
A veces es posible el diseo de un procedimiento simple de "screening" selectivo para un tipo
particular de mutantes. Por ejemplo, clulas no mutadas que mueren en un plaqueo por
seleccin de mutantes resistentes a drogas, metales, etc. En estas condiciones se aslan
mutantes con un esfuerzo mnimo an de poblaciones donde la tasa de mutacin es menor a 1
x 106.
Cuando se comparan los incrementos en los rendimientos de cepas obtenidas por mutaciones
naturales como las que resultan del empleo de un agente tal como la luz ultravioleta se
observa, en general, que con agentes como el mencionado los incrementos en productividad
son superiores y con una mayor tasa de mutacin.
2. Mutacin inducida.
El procedimiento de mutacin mediante el empleo de un agente determinado implica dos
etapas, el tratamiento de la poblacin con el mutgeno elegido y luego el aislamiento de los
mutantes para su posterior ensayo y seleccin.

Empricamente el empleo de diferentes agentes resulta en el aislamiento de distintos

"espectros" de mutantes. La eleccin de un agente mutagnico depende en general de
consideraciones prcticas. En algunos de los casos es ms conveniente el empleo de ms de
uno en lugar del uso masivo de uno solo. La tcnica a emplear puede producir una alta tasa de
mutacin o puede favorecer la separacin de un nmero reducido de tipos deseables de un
gran nmero de productores mediocres.
Hasta donde sea posible el aislamiento del mutante debera utilizar la caracterstica mejorada
del mismo como factor de seleccin. El incremento de su productividad
podra ser el resultado de una modificacin en los mecanismos de control que limitan el nivel de
produccin y/o de una variacin en los precursores que llevan al producto. En este sentido el
conocimiento de las rutas y mecanismos de control de la biosntesis de un producto facilitan la
estrategia a seguir en el aislamiento.
Es importante en los programas de bsqueda y seleccin, tener una alta proporcin de
mutantes entre la poblacin sobreviviente al tratamiento, debido a que slo estos individuos son
los estudiados. Con el aumento de la dosis del mutgeno en general se incrementa esta
proporcin, aunque para cada mutgeno y cada organismo hay una dosis ptima.
Los agentes mutagnicos pueden ser agrupados en:
1) Fsicos, como la luz ultravioleta, que es un mutgeno muy conveniente. La longitud de onda
puede variar de 200 a 300 nm y el tiempo de exposicin entre 0.5 y 20 minutos, dependiendo
de la sensibilidad del organismo y tratando de lograr un porcentaje de muerte entre el 90 y
99.9%. Otros agentes como rayos X y rayos v son actualmente poco utilizados.
2) Qumicos: Estos agentes se emplean en concentraciones del orden de 0.05 M con
exposiciones de 0.5 a 12 horas. Como muchos de ellos son no txicos, el grado de mortandad
no es empleado como dato de eficiencia. El tratamiento se realiza adicionando el mutgeno a
una suspensin de clulas, la cual es incubada a temperatura constante un determinado
tiempo. Estas manipulaciones requieren personal con experiencia debido a las lesiones que
pueden ocasionar. Entre estos agentes se destacan los siguientes:
a. Acido nitroso. Este agente induce transiciones A-T --- G-C y/o deleciones por uniones
cruzadas en el interior de la cadena.
b. N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (NTG). Es uno de los mutgenos ms potentes,
produciendo una alta tasa de mutacin con bajo porcentaje de mortandad. Requiere de un
manejo sumamente cuidadoso.
c. Anlogo de base. Producen transiciones, como el 5-bromuracilo y la 2-aminopurina, siendo
otros anlogos menos efectivos. Sus modos de accin dependen de sus incorporaciones al
nuevo ADN formado y del lugar que ocupen al sustituir a la base normal.
d. Mutgenos estructurales, como la proflavina o naranja acridina que no son incorporados
covalentemente al ADN, sino que actuan como agentes de intercalado en la estructura,
promoviendo adiciones o deleciones simples durante la sntesis.
Debido a que el xito o fracaso de un proceso fermentativo comienza con el microorganismo
utilizado, en la eleccin del mismo se deberan tener en cuenta ciertos criterios generales que
se indican a continuacin:
1. La cepa a utilizar debe ser genticamente estable.
2. Su velocidad de crecimiento debera ser alta.
3. La cepa debe estar libre de contaminantes, includos fagos.
4. Sus requerimientos nutricionales deberan ser satisfechos a partir de medios de cultivo de
costo reducido.
5. Debe ser de fcil conservacin por largos perodos de tiempo, sin prdida de sus
caractersticas particulares.
6. Debera llevar a cabo el proceso fermentativo completo en un tiempo corto.
7. Si el objetivo del
proceso es un producto, ste debera ser de alto rendimiento y de fcil extraccin del medio de
cultivo.
Los microorganismos que se utilizan en un proceso, pueden ser obtenidos por aislamiento a
partir de fuentes naturales o de una coleccin de cultivos. A nivel industrial, en general, cada
firma posee su propia coleccin de organismos, muchos de los cuales han sido mejorados a
travs de tcnicas clsicas de mutacin o de ingeniera gentica. Sin embargo, estas cepas
slo son empleadas por la industria que las posee, debido al gran valor comercial de las
mismas. En algunos casos se dispone de organismos modificados genticamente para llevar a

cabo reacciones especficas de biosntesis, degradacin o biocatlisis, los cuales estn

protegidos por patentes. Esto significa que un gran porcentaje de organismos aislados o
modificados no son disponibles para uso general en laboratorios.
Existen en el mundo un gran nmero de colecciones depositarias de cultivos. Entre la
diversidad de colecciones se destacan: "American Type Culture Collection", USA, la cual
mantiene bacterias, levaduras, algas, actinomycetes, mohos, protozoos, virus y lneas
celulares; "Colletion Nationale de Cultures de Microorganismes" del Instituto Pasteur, Francia;
"Northern Regional Research Laboratory" (NRRL), de Peoria, USA, y "National Collection of
Type Cultures", Londres, Inglaterra.
Si el organismo a utilizar es aislado de fuentes naturales como agua, suelo, plantas y
desechos, la eleccin del material de partida puede hacerse teniendo en cuenta que el
organismo exprese en ese ambiente las propiedades que son de inters.
Por ejemplo, en suelos tratados con pesticidas se podran encontrar organismos adaptados a la
degradacin de estos productos qumicos; o en larvas de insectos muertos agentes causales
de la muerte.

Mtodos clsicos.
Elegida la fuente de aislamiento, las posibilidades de xito dependen de la tcnica elegida para
el mismo; en este caso las alternativas son:
a. aislamiento directo, o
b. enriquecimiento del cultivo con o sin pretratamiento de la muestra.
Una vez efectuado el muestreo y seleccin (screening) para el aislamiento de una cepa de
inters, la misma deber ser caracterizada. En este procedimiento se debe tener en cuenta que
la composicin qumica del material a partir del cual se va a realizar el aislamiento comienza a
variar a partir del momento en que es tomada la muestra, por lo tanto sta se debe procesar
rpidamente, tratando de evitar alteraciones que afecten a la poblacin de inters.
a) Aislamiento directo: en este caso es deseable que el medio que se utiliza para el aislamiento
permita la mxima expresin del material gentico del organismo.
Si se busca por ejemplo un organismo con accin antimicrobiana, se puede crecer al potencial
productor, en una caja de Petri en presencia del o los organismos contra los cuales se requiere
la accin antimicrobiana, observndose la produccin del inhibidor por las zonas de inhibicin
de crecimiento.
Para la deteccin de productores de factores de crecimiento tales como aminocidos y
nucletidos se utiliza la estimulacin del desarrollo de bacterias auxtrofas por un lisado del
organismo. Esto se puede llevar a cabo en medios slidos.
En este caso se debe tener una "rplica" de la caja a ensayar. Una vez obtenido el crecimiento
en la primera caja, se replica a una segunda, antes de "matar" las colonias con luz. U.V., por
ejemplo. Esta caja es luego cargada con agar conteniendo una suspensin del organismo
auxtrofo al producto buscado. Despus de un perodo de incubacin se observa crecimiento
en forma de halo alrededor de las colonias productoras, lo que permite el aislamiento de este
organismo de la placa rplica.
b) Enriquecimiento del cultivo: esta tcnica consiste en incrementar en una poblacin mixta el
nmero de organismos de inters en relacin al resto. De esta forma se busca favorecer el
crecimiento de un tipo dado de microorganismos mediante condiciones de cultivo adecuadas al
mismo, o de condiciones inapropiadas para el desarrollo de los otros. Esto se logra mediante el
empleo de sustratos especficos o ciertos inhibidores. Para mantener la fuerza selectiva del
medio, el cual se modifica por el crecimiento del organismo buscado, se realizan subcultivos
peridicos en medio fresco. Esto lleva a que el organismo de inters sea el dominante de la
poblacin, lo cual facilita su posterior aislamiento en medio slido.
Se debe considerar en este caso el efecto del medio sobre la velocidad especfica de
crecimiento (m). La seleccin de un organismo por este procedimiento depende de su valor de
m comparado con los de los otros organismos. Evidentemente el dominante de la poblacin
ser el que posea el mayor valor de m para las condiciones de cultivo empleadas.
Sin embargo no necesariamente ser ms til un organismo de mm ms alto; puede ser
deseable uno con mayor afinidad por el sustrato. El problema de seleccin puede ser superado
empleando el sistema de cultivo continuo, tema que se trata en el captulo 7, donde la fuerza de
seleccin se mantiene a un nivel constante y el organismo dominante ser seleccionado por su
afinidad por el sustrato, ms que por su u mxima.
En la Fig. 3 se muestra un modelo de competicin entre dos organismos capaces de crecer en
un cultivo continuo enriquecido. | |

En cultivo continuo el valor de mm est determinado por la concentracin de sustrato y es igual

en estado estacionario a la velocidad de dilucin (D). A valores de mm = D < mz se tiene que
mm A > mmB y por lo tanto el organismo A podr ser seleccionado a pesar de que mmA <
mmB (mz = valor de m a partir del cual mm B > mm A).

Mutagnesis: aislamiento de mutantes.

Las cepas utilizadas industrialmente estn peor caracterizadas genticamente que los
organismos que se utilizan normalmente en investigacin bsica no existiendo prcticamente,
en la actualidad, procesos aplicables diferentes a la mutagnesis por radiacin o con agentes
qumicos. Por lo tanto, a continuacin mencionamos otras posibilidades que en un futuro
pueden tener claras aplicaciones.
A. Mutagnesis por elementos transponibles
Si se produce la insercin de un elemento transponible dentro de un gen se pierde, en general,
la funcin del gen ya que se altera la secuencia codificadora del gen en el que se inserta. Los
elementos transponibles se usan con profusin por los genticos microbianos como agentes
mutagnicos ya que pueden integrarse en el cromosoma en varias localizaciones.
Hay tres tipos de elementos transponibles: secuencias de insercin (IS), transposones (Tn) y
algunos virus especiales (Mu). En los procariotas, las secuencias de insercin (IS) son el tipo
ms simple ya que no llevan otra informacin gentica que la requerida para desplazarse a
nuevos lugares. Los transposones (Tn) son ms largos que las secuencias de insercin (IS) y
llevan otros genes, algunos de los cuales confieren importantes propiedades al organismo que
los porta (marcadores de resistencia a frmacos y otros genes fcilmente seleccionables).
B. Mutagnesis dirigida
Los mtodos de mutagnesis que han sido discutidos hasta este momento son completamente
al azar. La tecnologa del DNA recombinante y el uso de DNA sinttico hacen que sea posible
inducir mutaciones especficas en genes especficos.
Cuando se asla y se determina la secuencia de un fragmento de DNA que contiene un gen
especfico, es posible construir una forma modificada de este gen cambiando una base o una
serie de bases. Este DNA modificado puede luego insertarse en una clula receptora y
seleccionar mutantes que se diferenciarn del tipo silvestre por el cambio introducido en ese
sitio especfico.
La mutagnesis dirigida tiene muchos usos en gentica microbiana y en biologa molecular y
resulta especialmente til en estudios sobre estructura y funcin de enzimas y otras protenas.

Ingeniera Gentica.
Todo organismo, an el ms simple, contiene una enorme cantidad de informacin. Esta
informacin se encuentra almacenada en una macromolcula que se halla en todas las clulas:
el ADN. Este ADN est dividido en gran cantidad de sub-unidades (la cantidad vara de acuerdo
con la especie) llamadas genes. Cada gen contiene la informacin necesaria para que la clula
sintetice una protena. As, el genoma (y por consecuencia el proteoma), va a ser la
responsable de las caractersticas del individuo. Los genes controlan todos los aspectos de la
vida de cada organismo, incluyendo metabolismo, forma, desarrollo y reproduccin. Por
ejemplo, la sntesis una protena X har que en el individuo se manifieste el rasgo "pelo
oscuro", mientras que la protena Y determinar el rasgo "pelo claro".
Vemos entonces que la carga gentica de un determinado organismo no puede ser idntica a la
de otro, aunque se trate de la misma especie. Sin embargo, debe ser en rasgos generales
similar para que la reproduccin se pueda concretar. Y es que una de las propiedades ms
importantes del ADN, y gracias a la cual fue posible la evolucin, es la de dividirse y fusionarse
con el ADN de otro individuo de la misma especie para lograr descendencia diversificada.
Otra particularidad de esta molcula es su universalidad. No importa cun diferente sean dos
especies: el ADN que contengan ser de la misma naturaleza: cido nucleico. Siguiendo este
razonamiento, y teniendo en cuenta el concepto de gen, surgen algunas incgnitas: Son
compatibles las cargas genticas de especies distintas? Puede el gen de una especie
funcionar y manifestarse en otra completamente distinta? Se puede aislar y manipular el
ADN?

La respuesta a todas estas preguntas se resume en dos palabras: Ingeniera Gentica.

2. Definicin de Ingeniera Gentica
La Ingeniera Gentica (en adelante IG) es una rama de la gentica que se concentra en el
estudio del ADN, pero con el fin su manipulacin. En otras palabras, es la manipulacin
gentica de organismos con un propsito predeterminado.
En este punto se profundizar el conocimiento sobre los mtodos de manipulacin gnica. El
fin con el cual se realizan dichas manipulaciones se tratar ms adelante, cuando se analicen
los alcances de esta ciencia.
Enzimas de restriccin.
Como ya se dijo, la IG consiste la manipulacin del ADN. En este proceso son muy importantes
las llamadas enzimas de restriccin, producidas por varias bacterias. Estas enzimas tienen la
capacidad de reconocer una secuencia determinada de nucletidos y extraerla del resto de la
cadena. Esta secuencia, que se denomina Restriction Fragment Lenght Polymophism o RLPM,
puede volver a colocarse con la ayuda de otra clase de enzimas, las ligasas. Anlogamente, la
enzima de restriccin se convierte en una "tijera de ADN", y la ligasa en el "pegamento". Por lo
tanto, es posible quitar un gen de la cadena principal y en su lugar colocar otro.
Vectores.
En el proceso de manipulacin tambin son importantes los vectores: partes de ADN que se
pueden autorreplicar con independencia del ADN de la clula husped donde crecen. Estos
vectores permiten obtener mltiples copias de un trozo especfico de ADN, lo que proporciona
una gran cantidad de material fiable con el que trabajar. El proceso de transformacin de una
porcin de ADN en un vector se denomina clonacin. Pero el concepto de clonacin que
"circula" y est en boca de todos es ms amplio: se trata de "fabricar", por medios naturales o
artificiales, individuos genticamente idnticos.
ADN polimerasa.
Otro mtodo para la produccin de rplicas de ADN descubierto recientemente es el de la
utilizacin de la enzima polimerasa. ste mtodo, que consiste en una verdadera reaccin en
cadena, es ms rpido, fcil de realizar y econmico que la tcnica de vectores.

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

La Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una tcnica "in vitro" que imita la habilidad
natural de la clula de duplicar el ADN.
Se trata de una tcnica usada para crear un gran nmero de copias de un segmento de ADN,
que utiliza ciclos de desnaturalizacin, apareamiento con cebadores y extensin por una ADN
polimerasa termoresistente.
Hasta la dcada de 1980, el nico mtodo para obtener grandes cantidades de un fragmento
de ADN era clonndolo en vectores adecuados e introducindolo y multiplicndolo en bacterias.
En el ao 1985, un investigador norteamericano, Kary Mullis (acreedor del Premio Nobel en
Qumica 1993 por este aporte), desarroll un mtodo que permite, a partir de una muestra muy
pequea de ADN, obtener millones de copias de ADN in vitro, en unas pocas horas y sin
necesidad de usar clulas vivas. Esta tcnica, llamada reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR), requiere conocer la secuencia de nucletidos de los extremos del fragmento que se
quiere amplificar. Estas secuencias se usan para disear dos oligonucletidos sintticos de
ADN complementarios a una porcin de cada una de las dos cadenas de la doble hlice.
1. La mezcla de reaccin contiene la secuencia de NA que se quiere amplificar, dos
oligonucletidos sintticos (P1 y P2) que servirn como cebadores, una DNA polimerasa
termoestable (Taq) y los cuatro desoxirribonucletidos trifosfato dATP, dGTP, dCTP y dTTP.
2. Proceso:

La mezcla de reaccin se somete a ciclos sucesivos, cada uno correspondiente a una fase de
desnaturalizacin, una de hibridacin o alineacin y una de elongacin.
a) Durante la desnaturalizacin, que se realiza por calentamiento de la mezcla a 95C, se
separan las dos cadenas del ADN molde.b) Durante la hibridacin, la temperatura de
incubacin se reduce para permitir el apareamiento de las bases de ambos cebadores en el
sitio donde encuentran una secuencia complementaria.
c) Durante la fase de elongacin, la mezcla se calienta a 72C y la enzima Taq ADN polimerasa
se usa para replicar las hebras de DNA. La Taq polimerasa comienza el proceso de extensin
de la cadena complementaria a partir del extremo 3 de los cebadores. Al finalizar cada ciclo, la
cantidad de ADN molde disponible para el ciclo siguiente aumenta al doble.
Entre muchas de las aplicaciones que la PCR pone a disposicin se encuentran la deteccin
precoz o prenatal de enfermedades genticas, la deteccin de infecciones virales latentes o la
produccin de grandes cantidades de fragmentos de ADN humano a una velocidad muy
superior a la posible mediante otros mtodos. Esta tcnica tambin se aplica para estudios de
identidad y filiacin.

Legislacin sobre la manipulacin gentica y la utilizacin de Microorganismos

modificados.
DE LEY DE BIOSEGURIDAD, A CARGO DEL C. DIPUTADO FERNANDO CASTELLANOS
PACHECO, DEL GRUPO PARLAMENTARIO DEL PARTIDO ACCIN NACIONAL
Con fundamento en los artculos 4, 25, 71, fraccin II, y 73 fraccin XXIX-F y XXX, y 90 de la
Constitucin Poltica de los Estados Unidos Mexicanos, del artculo 58 de la Ley Orgnica del
Congreso General de los Estados Unidos Mexicanos, as como 54 y 55 del Reglamento para el
Gobierno Interior del Congreso General de los Estados Unidos Mexicanos, los que suscribimos,
Diputados Federales integrantes de la LVII Legislatura y miembros del Grupo Parlamentario del
Partido Accin Nacional, presentamos a la consideracin de esta H. Cmara de Diputados la
iniciativa de Ley de Bioseguridad de conformidad con la siguiente:
Exposicin de Motivos
Recientemente se han desarrollado nuevas tcnicas biotecnolgicas, como la ingeniera
gentica, que consiste en modificar la informacin de la herencia contenida en las clulas, por
medio del desplazamiento de genes de un organismo a otro. Un gene es un segmento de cido
desoxirribonucleico (ADN), que es la molcula que encierra el cdigo necesario para crear una
protena concreta en un organismo vivo. Las tcnicas particulares consisten en cortar los
segmentos de ADN de un organismo donador e insertarlos dentro del ADN del organismo que
se desea transformar.
La biologa molecular consiste en buena medida en cortar ADN y empalmarlo nuevamente en el
organismo que ahora se llamar organismo modificado o recombinante. Si se hace
correctamente el organismo modificado tendr entonces un nuevo gene y har algo diferente,
crear una nueva protena. Se convertir en otro organismo vivo y transmitir a su progenie sus
nuevas caractersticas.
El desarrollo de estas tcnicas a principios de los aos setenta impuls a nivel internacional un
debate sobre la seguridad en biotecnologa moderna y en el verano de 1975 en Asilomar,
California, se dio lugar a una reunin para tratar estas cuestiones. La Conferencia de Asilomar
aport un cierta cautela en forma de llevar a cabo las investigaciones de ingeniera gentica y
con el pasar de los aos se ha obtenido una mayo miembros del Grupo Parlamentario del
Partido Accin Nacional, presentamos a la consideracin de esta H. Cmara de Diputados la
iniciativa de Ley de Bioseguridad de conformidad con la siguiente:
Exposicin de Motivos
Recientemente se han desarrollado nuevas tcnicas biotecnolgicas, como la ingeniera
gentica, que consiste en modificar la informacin de la herencia contenida en las clulas, por
medio del desplazamiento de genes de un organismo a otro. Un gene es un segmento de cido
desoxirribonucleico (ADN), que es la molcula que encierra el cdigo necesario para crear una
protena concreta en un organismo vivo. Las tcnicas particulares consisten en cortar los
segmentos de ADN de un organismo donador e insertarlos dentro del ADN del organismo que
se desea transformar.
La biologa molecular consiste en buena medida en cortar ADN y empalmarlo nuevamente en el
organismo que ahora se llamar organismo modificado o recombinante. Si se hace

correctamente el organismo modificado tendr entonces un nuevo gene y har algo diferente,
crear una nueva protena. Se convertir en otro organismo vivo y transmitir a su progenie sus
nuevas caractersticas.
El desarrollo de estas tcnicas a principios de los aos setenta impuls a nivel internacional un
debate sobre la seguridad en biotecnologa moderna y en el verano de 1975 en Asilomar,
California, se dio lugar a una reunin para tratar estas cuestiones. La Conferencia de Asilomar
aport una cierta cautela en forma de llevar a cabo las investigaciones de ingeniera gentica y
con el pasar de los aos se ha obtenido una mayor onfianza. Sin embargo, es necesario
recordar que el nuevo organismo modificado es capaz de producir protenas distintas del
organismo natural y por lo tanto su posible impacto en el medio ambiente y en la salud humana
puede tener giros inesperados que no necesariamente se pueden observar en el laboratorio o
en experimentos en los que se mantienen confinados.
La utilizacin de estos organismos en gran escala y completamente libre en el medio ambiente
es relativamente nueva. No se cuenta con la experiencia suficiente en el uso de dichos
organismos, sobre todo en zonas en las que hay parientes silvestres u organismos nativos que
puedan recibir la informacin gentica novedosa y por lo tanto es de vital importancia estudiar
los posibles impactos que ese nuevo gene introducido en algn organismo pudiera tener en las
poblaciones no modificadas por tcnicas de ingeniera gentica.
Este es precisamente el caso de Mxico, en cuyo territorio se originaron el maz y algunos otros
cultivos de importancia comercial a nivel global como el frijol, el tomate, el cacao, el chile, las
calabazas, entre otros. Es gracias a la domesticacin y cultivo milenario que en Mxico se ha
realizado de estas especies, que nuestro pas es considerado tambin centro de diversidad ya
que muchas variedades ms, se encuentran en nuestro territorio en forma nica y existen
muchas otras especies que son propias de una regin geogrfica dentro del territorio nacional
consideradas especies endmicas.
Cabe recordar que Mxico particip activamente durante la Conferencia de las Naciones
Unidas sobre Medio Ambiente y Desarrollo (CNUMAD) celebrada en Ro de Janeiro n junio de
1992, durante la cual se aprob el Programa 21 el cual en su captulo 16 establece una
"gestin racional de la biotecnologa". En dicho documento se reconoce que, aun cuando la
biotecnologa no puede resolver todos los problemas fundamentales del medio ambiente y el
desarrollo, cabe esperar, no obstante que aporte una importante contribucin al desarrollo
sustentable.
El captulo 16 del programa 21 reconoce asimismo que la comunidad en general se podr
beneficiar al mximo de la biotecnologa si se desarrolla y aplica de forma racional y
juiciosamente.
Asimismo, en la misma Conferencia se firm por parte de nuestro pas el Convenio sobre
Diversidad Biolgica el 13 de junio de 1992, el cual fue ratificado por el Senado de la Repblica
el 3 de noviembre de 1993 y publicado en el Diario Oficial de la Federacin el 7 de mayo de
1993.
El Convenio dispone en su artculo 8g, que cada pas signatario establecer la legislacin y
dems reglamentacin para administrar o controlar los posibles riesgos derivados de la
utilizacin y la liberacin de organismos modificados genticamente resultantes de la
biotecnologa moderna y que sea probable que tuvieran repercusiones ambientales adversas
que pudieran afectar a la conservacin y a la utilizacin sustentable de la diversidad biolgica,
tomando tambin en cuenta los riesgos a la salud humana.
Por su parte, en el artculo 19 prrafo 3, se estipula que las Partes del Convenio estudiarn la
necesidad y las modalidades de un protocolo para la transferencia, manipulacin y utilizacin
seguras de cualesquiera organismos vivos modificados resultantes de la biotecnologa que
puedan tener efectos para el medio ambiente o la salud humana.
En el prrafo 4 de ese mismo artculo se estipula que cada Parte Contratante proporcionar,
directamente o exigindoselo a toda persona fsica o moral bajo su jurisdiccin, que suministre
toda la informacin disponible acerca de las reglamentaciones relativas al uso y la seguridad
para la manipulacin de dichos organismos, as como toda la informacin disponible sobre los
posibles efectos adversos de los organismos vivos modificados de que se trate.
La implementacin de dichos artculos llev a la comunidad internacional a partir del mes de
noviembre de 1995 a establecer un Grupo de Trabajo Especial de Composicin Abierta
encargado de elaborar un protocolo sobre bioseguridad de la biotecnologa centrado en el
movimiento transfronterizo de cualesquiera organismos vivos modificados o resultantes de la
biotecnologa moderna, que estableciera en particular procedimientos adecuados para la
aplicacin del acuerdo fundamentado previo.

A partir de este momento se llev a cabo una serie de reuniones internacionales de este grupo
de trabajo especial en las cuales se discuti a partir de las propuestas de texto legal
presentadas por cada pas, incluyendo el nuestro, un texto consolidado que a travs de las
negociaciones lleg a convertirse en el articulado que hoy conforma la redaccin del Protocolo
de Cartagena y que fue adoptada por 129 pases el 28 de enero del presente ao.
El Protocolo de Cartagena establece el mandato para que cada pas adopte las medidas
legales y administrativas para implementar las obligaciones derivadas del mismo con base en
el principio precautorio y establece la posibilidad de prohibir la internacin al pas de dichos
organismos ante la falta de certeza cientfica que asegure un nivel adecuado de proteccin a la
biodiversidad y la salud humana.
Dado que en Mxico se ha venido dando una expansin en la utilizacin de la biotecnologa
moderna y una experiencia adquirida con ciertos tipos de utilizacin a nivel experimental y
recientemente comercial, consideramos que es el momento oportuno de adoptar una
legislacin sobre seguridad en biotecnologa.
Tomando en consideracin que Mxico cuenta ya con ciertas disposiciones legales y
reglamentarias relacionadas con la investigacin y uso de productos biotecnolgicos en las
reas de salud y sanidad vegetal, y que se encuentra dispersa en una serie de leyes,
reglamentos y normas oficiales mexicanas, se requiere de la participacin coordinada de
diversas dependencias del Ejecutivo Federal en la aplicacin y vigilancia de la normatividad
existente, para remediar las lagunas legales que an existen en materia de bioseguridad.
Aunado a lo anterior, existe un vaco legislativo en materia de evaluacin de los posibles
impactos que pudieran afectar el medio ambiente y a la salud humana, toda vez que la
legislacin vigente slo establece las normas para la liberacin a escala experimental de
plantas modificadas genticamente, careciendo de un marco regulatorio integral que coordine
las facultades de las dependencias relacionadas en materia de bioseguridad desde un punto
de vista transectorial.
Por ello se consolida la creacin de una autoridad intersecretarial y los rganos necesarios
para facilitar sus funciones, con el objeto de coordinar las polticas de la administracin Pblica
Federal relativas a la bioseguridad y a la produccin, comercializacin, importacin,
exportacin, movilizacin, propagacin, liberacin, consumo y en general, uso y
aprovecahamiento de organismos genticamente modificados, sus productos y subproductos.
La existencia de una ley federal establece las condiciones para disminuir los mrgenes de
discrecionalidad en la toma de decisiones en materia de evaluacin y manejo del riesgo
derivados de la utilizacin de organismos modificados genticamente y por lo tanto establecer
las medidas de prevencin y control de los posibles impactos negativos en el medio ambiente y
la salud humana, bajo criterios cientficos, para las solicitudes de liberacin de estos
organismos en el medio ambiente.
Una ley como la que se propone derivada de disposiciones constitucionales aplicables en las
materias de medio ambiente, salud, ciencia y tecnologa establecen las bases de los
instrumentos de poltica en bioseguridad, disposiciones y mecanismos legales para dar
cumplimiento efectivo a estas as como a compromisos internacionales, adoptando principios
previstos en el Protocolo de Cartagena, y los que se disponen en la presente iniciativa
considerando, nuestra especial y reconocida condicin de pas megadiverso y centro de origen
de una gran variedad de especies, cultivos de importancia estratgica.
Es importante mencionar tambin la insuficiencia de instrumentos y e in situ ya que es de vital
importancia conservar y proteger los sitios que actualmente ocupan los hbitats naturales de
las especies de las que Mxico es centro de origen y mecanismos nacionales para la creacin
y fortalecimiento de capacidades con relacin a recursos humanos y financieros, as como
capacidades de infraestructura. Entre ellos, es de vital importancia atender las necesidades
nacionales y sumarse a las polticas actuales de conservacin de la biodiversidad a travs de
medidas que impulsen la creacin de colecciones ex situ, como sera la creacin de bancos de
germoplasma, diversidad, a manera de conservar todas sus caractersticas genticas fuera del
alcance del flujo gentico proveniente de Organismos modificados genticamente. Esta ley
propone la creacin y fortalecimiento de bancos de germoplasma regionales o nacionales.
Se considera la creacin de un fondo para la reparacin de los posibles efectos adversos al
medio ambiente o a la salud humana, que pudieran derivarse del uso y aprovechamiento de
organismos modificados genticamente sus productos y subproductos. As como tambin para
impulsar la investigacin de la biotecnologa moderna con el fin de satisfacer las demandas y
necesidades de la sociedad en materia de salud y alimentacin.