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s.XVII),
desde
entonces
se
ha
perfeccionado
incesantemente
Microscopio
Condensador: Es un dispositivo que contiene una lente que concentra y focaliza la luz
proveniente de la fuente sobre la seccin de tejido. Dispone de tornillos que lo elevan
o bajan alterando el cono de luz hasta una posicin precisa
Partes de un microscopio
Objetivo: Sistemas de lentes de aumento. Generan una imagen real, invertida y aumentada
del objeto. Colocados en la parte inferior del tubo en el revlver (pieza mecnica que permite
cambiarlos rpidamente). Las magnificaciones de los objetivos ms usados suelen ser de 10x,
20x, 40x y 100x. Cuando se usan objetivos de 100 aumentos (100x) es necesario emplear
aceite de inmersin entre el objetivo y la muestra (VER)
Ocular: llamado as por estar cercano al ojo. Constituido por dos lentes simples que captan la
imagen suministrada por el objetivo y la amplan ms originando una imagen virtual,
aumentada y derecha.
Tubo: elemento cilndrico y hueco en cuyos extremos estn ubicados los oculares y objetivos
Partes de un microscopio
Revlver: Es un sistema que agarra los objetivos, y que rota para utilizar un objetivo
u otro.
Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca
la preparacin, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de
iluminacin situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos
sobre la platina y los tornillos laterales permiten centrar o producir movimientos
circulares
Aumento: relacin entre el tamao de un objeto percibido a simple vista y la que obtenemos
al observarlo con el microscopio (n veces que el objeto es ampliado). En el objetivo el
aumento es n seguido de x (10x, 40x, 100x). El aumento total es el producto del aumento de
cada lente. Ej. Si la lente del objetivo es 100x y el ocular (o lente de proyeccin) aumenta, por
lo general, 10 veces, el aumento final registrado por el ojo humano es de 1.000 veces: que es la
magnificacin mxima que alcanza el microscopio ptico
Poder de resolucin: Distancia mnima a la que pueden estar dos puntos para ser poder
distinguirlos como tales (=D). Capacidad para revelar detalles adyacentes a un objeto. Cuanto
menor sea D, mayor ser el poder de resolucin
D= 0.61/N sen
= mitad del ngulo de apertura del cono de luz que ingresa en el objetivo desde la muestra
(VER)
N= ndice de refraccin del medio entre la muestra y la superficie de la lente objetivo; =
longitud de onda de la luz incidente (la resolucin mejora a longitudes de onda ms cortas)
El ndice de refraccin del aceite es mayor que el del aire. Con objetivos secos N=1. Cuando se
emplea aceite N=1.56 (D ser menor)
objetivo
muestra
condensador
De forma general todos los tejidos de origen animal son incoloros salvo que
contengan algn pigmento (ej. piel melanina de color marrn, o en la sangre la
hemoglobina de color rosada)
Para poder ser visualizados, los tejidos y clulas han de ser teidos. la tincin
radica en la propiedad de los tejidos para incorporar y fijar diversas sustancias
coloreadas (colorantes)
Antes de ser teidas, las clulas han de ser tratadas con un fijador que las
inmovilice, las mate y conserve su estructura
Los compuestos fijadores establecen puentes entre las molculas de modo que
quedan estabilizadas y bloqueadas en su posicin original. Adems hace que las
clulas sean permeables a los colorantes.
Manejo
La luz debe estar a una intensidad media para que no se funda la lmpara
Situar el condensador:
Bajo: si se utiliza un objetivo con poco poder de ampliacin
Mitad de recorrido: objetivo 40x
Alto: si se usa objetivo de inmersin (100x)
Mirando por fuera de los oculares, la platina ha de ascenderse con el tornillo macromtirco
hasta que el objetivo est muy cercano a la preparacin, pero sin tener contacto con ella, a
continuacin se contina ascendiendo lentamente mirando por los oculares
Con el objetivo de inmersin (100x) hay que usar aceite y baja intensidad de luz. El objetivo
ha de estar en contacto con la gota. Limpiar objetivo tras el uso (ter si el aceite se ha
secado pero retirarlo para que no disuelva el pegamento de lente)
Microscopio ptico
Microscopio de polarizacin
Microscopio de fluorescencia
Microscopio invertido
De tal modo que la luz incidir sobre la muestra de forma oblicua y slo aquella
luz que sea reflejada por la muestra llegar a los objetivos
2-MICROSCOPIO-OPT-1_.pdf
Microscopio de polarizacin
La luz natural, la procedente del sol, vibra en cualquier momento en todas las
direcciones del espacio
Un polarizador deja pasar nicamente la luz que vibra en un nico plano (luz
polarizada)
Son microscopios a los que se les han aadido dos polarizadores (uno entre el
condensador y la muestra y el otro entre el objetivo y el ocular)
Sin embargo, si entre ambos filtros hay estructuras que contienen molculas
orientadas (con un alto grado de organizacin ej. fibras de colgeno con
disposicin paralela, filamentos de miosina, microtbulos o microfilamentos),
estas estructuras aparecern brillantes sobre un fondo oscuro
Slo sirven para observar estructuras con una disposicin espacial ordenada.
Esto ocurre porque las molculas orientadas son anisotrpicas o birrefringentes:
capaces de desdoblar un rayo de luz incidente en dos rayos linealmente
polarizados de manera perpendicular entre s
Los objetos se ven oscuros o claros en un fondo gris, de manera semejante a las
imgenes del microscopio de contraste de fases, pero sin halos de difraccin
Emplea luz polarizada la cual pasa por dos prismas birrefringentes que la
fraccionan la luz dos rayos cuyos trayectos e ndices de refraccin son diferentes
(VER)
Tras este recorrido, la luz pasa por el muestra y las diferencias de densidad del
tejido provocarn alteraciones en la luz que se dirige hacia los objetivos, los
cuales transformarn esas diferencias en cambios en la luminosidad
Microscopa de fluorescencia
Microscopa de fluorescencia
Microscopa de fluorescencia
In this composite micrograph of a cell in mitosis, three different fluorescent probes have been
used to stain three different cellular components. The spindle microtubules are revealed with a
green fluorescent antibody, centromeres with a red fluorescent antibody and the DNA of the
condensed chromosomes with the blue fluorescent dye DAPI. (Courtesy of Kevin F. Sullivan.)
Este instrumento utiliza como fuente de luz un lser, que permite enfocar
nicamente una regin en un plano determinado del espcimen (dado que el lser
no se dispersa como la luz), eliminando la luz (fluorescencia) procedente de las
regiones que no estn en el plano de enfoque
Hay un diafragma en el detector que es confocal con el punto luminoso que slo
recoge la luz procedente de ese punto y no la de que est fuera del plano focal (la
luz procedente de otros planos est fuera del foco del diafragma