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1. Introduccin
Aunque el sndrome de Cushing endgeno es una enfermedad rara con una incidencia
anual como de 2 a 3 casos por milln de la poblacin [1], conduce a una alta
mortalidad por comorbilidades incluyendo cardio - y enfermedades cerebrovasculares
[1,2]. En cuanto a la mayora de este sndrome que son causados por adenomas
pituitarios y llamado enfermedad de Cushing, la supervivencia de los 5 aos es slo un
50% sin tratamientos eficaces [3]. A pesar del hecho de que la extirpacin quirrgica
de tumores conduce a la curacin o remisin en 65 a 85% de los pacientes, las
repeticiones se observan en hasta un 20% de los casos [1]. Adems, las investigaciones
indican una alta prevalencia de subclnico sin diagnosticar el sndrome de Cushing en
particular en pacientes con diabetes tipo II y la osteoporosis [4,5]. Aunque no hay
sntomas evidentes distintos niveles altos de cortisol en plasma se observan en estos
pacientes, este sndrome se considera exacerbar enfermedades concomitantes. Ms
grave es que el que sndrome de Cushing subclnico se considera ser asociado con
demencia metablica y promover la progresin de la enfermedad de Alzheimer [6]. Al
parecer, para estos casos recurrentes y subclnicos, farmacoterapia a travs de la
inhibicin de la 11b-hidroxilasa (hCYP11B1), que cataliza la hidroxilacin de 11deoxycortisol al cortisol, para reducir los niveles circulantes de cortisol es superior.
Metirapona (IC50 15 nM, tabla 1) como un inhibidor de la esteroidognesis
suprarrenal se ha empleado para aliviar los sntomas de los pacientes antes de la
ciruga [7]; y sus aplicaciones a largo plazo tambin se presentaron para controlar con
xito los niveles de cortisol y manifestaciones psiquitricas [8,9]. En la fase clnica 1
2.2. Qumica
En los esquemas 1-3, se muestran las sntesis de los compuestos diseados. Para la
mayora de los compuestos deseados, se emple una sencilla ruta general (esquema
1). Los fenoles a partir de bromo que fueron sustituidos con grupos diversos, tales
como NO2, F, OMe, CF3, CN y CONMe2, eran comercialmente disponibles u obtenidos
del clivaje de los precursores de metoxi correspondiente. En primer lugar ellos eran
alquilados utilizando los bromuros correspondientes a ter intermedios 4-6a, 10a, 12a,
14a, 16a, 18a, 20a y 22a antes los grupos de 3 o 4 piridil fueron introducidos va
reaccin de acoplamiento de Suzuki dando por resultado final compuestos 4-23. Esta
secuencia de la reaccin fue establecida despus de haber observado rendimientos
bajos de alquilacin con piridil fenoles sustituidos. En la mayora de los casos, la
ordinaria Suzuki acoplamiento condicin, ebullicin, es decir, los reactivos
correspondientes con Pd (PPh3) 4 y Na2CO3 en una mezcla de etanol, tolueno y agua,
dieron rendimientos satisfactorios; mientras que, para compuestos 10-13, 18, 19 y 23,
PdCl2(dppf) tuvo que emplearse como una alternativa. El grupo nitro en el compuesto 4
se redujo a aminocidos (3) uso de hidrato de hidracina y Pd/C, que era ms acilada
con cloruro de acetilo o cloruro de 4-fluorobenzoyl para obtener compuestos finales 1 y
2, respectivamente. Para lograr la introduccin de un grupo metileno entre el piridil y el
ncleo del benceno, el grupo de bromo en la 5a fue convertido primero en borato (24a)
usando bis diboro (pinacolato) bajo la catlisis de PdCl2 (PPh3) 2, posteriormente junto
con 3 - o 4 - piridina (bromometil) para producir compuestos de 24 y 25,
respectivamente.
potencial hidrgeno, formado por el grupo amida. Como era de esperar, el compuesto 1
resultante, exhibe preferencia por inhibicin de la hCYP11B1 con un SF de 2.3, que es
aproximadamente 5 veces mejor que la del compuesto IV de plomo. Sin embargo, la
inhibicin de la hCYP11B1 al mismo tiempo se redujo a 279 nM. Un grupo abultado 4fluorobenzamido (2) disminuy an ms la potencia inhibitoria nM 4-doblez 1207. Esta
observacin es probablemente el resultado de enfrentamientos estrico causado por
mayor volumen o rotacin de libertad despus de quitar el astriction del anillo
betalactmico. La sustitucin de grupos amido por un grupo amino (3) slo condujo a
una inhibicin moderada de la hCYP11B1 (IC50 540 nM). Sorprendentemente, el nitro
4 analgicas demostraron inhibicin potente hCYP11B1 con un valor de IC50 de 23 nM,
que es dos veces ms potente que el plomo IV (IC50 44 nM). Sin embargo, no
exhiben superioridad para plomo IV sobre selectividad sobre el hCYP11B2 compuesto 4
(SF 0,7). Con el grupo nitro sostenido, posteriormente se investig la influencia de la
longitud de la cadena de la molcula de alcoxilo. Como el aumento de unidades de
metileno, la inhibicin de hCYP11B1 fue elevada de 23 nM (4, n 0, benzoxy) a 13 nM
(5, n 1) y a 6 nM (6, n 2 ). A pesar del hecho de que todos los compuestos tambin
mostraron inhibicin potente de la hCYP11B2, mejora de la selectividad en
comparacin con el plomo compuesto IV (SF 0.5) logr, en particular para el
compuesto 5, que exhibi un SF de 4.1. El desplazamiento de 3-piridil por 4 piridil no
influy mucho la potencia inhibitoria de la hCYP11B1. El benzoxy correspondiente
compuesto 7 era tambin un potente inhibidor con un valor de IC50 de 50 nM. Con la
insercin de ms unidades de metileno, se observ un aumento similar de la potencia
inhibitoria. Phenethoxy analgica 8 (n 1 , IC50 2 nM) fue 25 veces ms potente que
el benzoxy compuesto de 7; mientras que un IC50 de 8 nM se observ para el
phenylpropoxy compuesto 9. Siendo el ms potente inhibidor de la hCYP11B1 en este
estudio, compuesto 8 fue 22 - y 7 veces ms potente que el plomo compuesto IV y
metirapona, respectivamente y tambin exhibi una selectividad similar sobre
hCYP11B2 como la metirapona. El hecho de que ambos compuestos de piridil 3 y 4
mostraron potencia similar es indicativa de un relativo gran bolsillo, en la que el ciclo
benceno podra derivar un poco para proporcionar el ngulo adecuado para formar la
coordinacin NeFe. La alta flexibilidad de la cadena lateral de alcoxilo podra permitir
los compuestos para adaptarse al cambio de ngulo. En contraste, la posicin del grupo
alcoxilo era obviamente ms decisiva para la inhibicin de la hCYP11B1. El cambio de
la ortho-(con respecto a los piridil) a la metaposition result en decesos de potencia por
85 - y 600 veces para los anlogos de 3 y 4 piridil (10, IC50 508 nM; y 11, IC50
1201 nM), respectivamente. Desde phenethoxy anlogos mostraron mejor selectividad
(SF de 4.1 para el compuesto 5 y 3.5 de 8 compuestos), la longitud de esta cadena fue
sostenida en las modificaciones posteriores. Por el contrario, ambos anlogos de 3 y 4
piridil fueron sintetizados para evitar faltar cualquier inhibidor potencialmente fuerte.
Aunque los grupos nitro se presentan en un nmero considerable de frmacos en uso
clnico, como la nifedipina, tienen el potencial de ser reducida a nitrosos aromticos,
que puede unirse covalentemente al DNA y protenas y por lo tanto son cancergenos
[47]. Por lo tanto, cautelosamente fue puesto en los grupos de nitro y se intent la
sustitucin de nitro por otros sustituyentes. *
Conclusiones
Como lo demuestra la aplicacin clnica de metirapona y la fase I estudio clnico de
LCI699, la inhibicin de la hCYP11B1 es un enfoque elegante para tratar el sndrome de
Cushing, en particular para los casos recurrentes y subclnicos. Para superar los
inconvenientes en la realizacin de prueba de concepto en ratas, que es causada por la
impotencia de nuestros inhibidores de la hCYP11B1 previamente descubierto contra la
correspondiente enzima de rata, pagaron los esfuerzos para identificar nuevos
compuestos con diferentes estructuras. Modi-especificaciones de un potente inhibidor
promiscuo (IV) de hCYP11B1, hCYP11B2 y hCYP19 (valores de IC50 de 44, 22 y 35 nM,
respectivamente) que exhiben inhibicin moderada rCYP11B1 (IC50 1500 nM)
conducida a compuesto 8 como un nuevo plomo prometedor compuesto. En
comparacin con el punto partida IV compuesto, Este inhibidor mostraron elevaciones
no slo 22 - y 9 veces en ambos humanos y rata CYP11B1 inhibicin con valores de IC50
de 2 y 163 nM, respectivamente, pero tambin una mejora significativa de selectividad
sobre hCYP19 (54-fold, IC50 1900 nM). Por consiguiente, compuesto 8 fue alrededor
de 7 y 28 veces ms potente que la droga metirapona con respecto a la inhibicin de
humanos y ratas CYP11B1. Aunque su selectividad sobre hCYP11B2 tambin aument
por un factor de 7 (SF de 3,5 vs 0.5) en comparacin con el compuesto IV llegando a un
nivel similar como la metirapona (SF 4.9), se consider necesario actual y queda por
mejorar. Con ms optimizaciones en el nuevo plomo compuesto 8 que fue identificado
con xito en este estudio, frmacos candidatos con perfiles que satisface esperan a ser
descubiertas para el desarrollo consecuente de la droga y la investigacin de la
fisiopatologa que implican CYP11B1.
4. Seccin experimental
4.1. Qumica
4.1.1. Mtodos analticos y qumicos
Puntos de fusin fueron medidos en un aparato de punto de fusin Mettler FP1 y estn
sin corregir. 1 H NMR y 13C NMR se registraron en un Espectrmetro Bruker AM500 a
500 MHz y 125 MHz, respectivamente, en 300 K. qumica cambios son registrados en
partes por milln (ppm), por referencia a los residuos hidrogenados de los disolventes
deuterados como estndar interno. Todas constantes de acoplamiento (J) se dan en
Hertz (Hz). Espectros de masas (LC/UV/MS: ESI) se registraron en un instrumento
SpectraSystem/MSQ Plus (ThermoFinnigan) con una columna de 5-100-RP18
(MachereyeNagel). Un gradiente agua/acetonitrilo fue utilizado como sistema eluyente.
Todos los compuestos son > productos qumicos 95% pura medida por rastro LC/UV a
254 nm. Reactivos fueron utilizados como obtenidos de proveedores comerciales sin
una posterior purificacin. Solventes fueron agua destiladas antes del uso. Si es
necesario, se secaron solventes por destilacin del adecuado secado reactivos antes de
su uso. Se realiz cromatografa flash gel de silicona de 40 (35/40e63/70 mM) con
acetato de etlico/ter de petrleo o mezclas de CH2Cl2/metanol como eluyentes.
Progreso de la reaccin fue monitoreado por cromatografa en capa fina (TLC) en TLC
Silicagel 60 F254 (Merck KGaA). Se logr la visualizacin con luz UV. 4.1.2. general
procedimiento A: methoxyl escote con solucin de boro tribromuro A del metoxilo
correspondiente a partir de material en DCM (4 mL/mmol) fue enfriado a 20 C antes de
tribromuro de boro (3 eq, 1 M en DCM) fue agregado en atmsfera de nitrgeno a la
misma temperatura. La solucin agitada fue posteriormente calentada a la temperatura
ambiente durante la noche. La mezcla de reaccin resultante se diluy con agua y se
separaron las fases. La capa acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo y las
capas orgnicas combinadas se secaron sobre Na2SO4. El solvente fue eliminado bajo
presin reducida y el crudo producto se purific mediante cromatografa flash sobre
Silicagel. 4.1.3. eterizacin de B: procedimiento general a la correspondiente de
bromofenol en etanol (5 mL/mmol) se agreg K2CO3 (1,2 eq). La mezcla resultante se
agit por 2 h en condiciones de reflujo (90 C) antes de la correspondiente bromuro (1,3
eq) y KI (5 mol %) fueron agregados. El reflujo fue continuado durante la noche.
Despus de enfriar, el disolvente se elimin a presin reducida y el residuo se lava con
salmuera y extrae tres veces con acetato de etilo. Las capas orgnicas combinadas se
secaron sobre Na2SO4, el disolvente se elimin a presin reducida y el producto crudo
se purific mediante cromatografa flash sobre Silicagel.
694 (vs); 1 H NMR (CDCl3, 500 MHz): dH 8,78 (s, 1H), 8.63 (d, J 4,7 Hz, 1H), 7.90
(d, J 8,5 Hz, 1H), 7.88 (d, J 7,3 Hz, 1H), 7.40e7.46 (m, 1H), 7.26e7.30 (m, 4H),
7.18e7.23 (m, 1H), 7.14 (dd, J 1.4, 8,4 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 4.32 (t, J 6,8 Hz, 2H),
3.14 (t J 6,8 Hz, 2 H); 13C NMR (CDCl3, 125 MHz); C.c. 152.9 148.5 147,0, 143,3,
139,5, 137,4, 135.8, 135,4, 129.2, 128.6, 126.8, 126.5, 124.2, 119.1, 113.2, 70.9, 35.7;
MS (ESI): m / z 320.88 [M+H] +.
(m, 2H), 6.67e6.75 (m, 2H), 4.20 (t, J 6,5 Hz, 2H), 3.03 (t, J 6,5 Hz, 2H); 13C NMR
(CDCl3, 125 MHz) C.c. 35.4, 69,4, 100.4 (d, JCF 25,7 Hz), 107,7 (d, JCF 22,0
hertzios), 123.6 (d, JCF 3.7 Hz), 124.4, 126.7, 128,5, 129.0, 131.3 (d, JCF 10,1 Hz)
137,8 146.0, 148.8, 157.0 (d, JCF Hz 9,2), 163.9 (d, JCF 248,4 Hz); MS (ESI): m/z
293.91 [M+H] +.
4,7 Hz, 1H), 7.66e7.69 (m, 1H), 7.37e7.40 (m, 1H), 7.20e7.31 (m, 5H), 7.15e7.17 (m,
1H), 7.12e7.15 (m, 2H), 4.24 (t, J 6,6 Hz, 2H), 3.03 (t, J 6,6 Hz, 2H); 13C NMR
(CDCl3, 125 MHz): C.c. 156.0 149.8 148.4, 137,8, 137.2, 133.0, 131.5 (q, JCF 32,5
Hz) 130.9 130.6, 129.0, 128,5, 126,6, 122,9, 123,8 (q, JCF 272,2 Hz), 117.8 (q, JCF
3.7 Hz), 108.8 (q, JCF 3.7 Hz), 69.5, 35.5; MS (ESI): m/z 343.81 [M+H] +.
2H), 4.3 (t, J 6,5 Hz, 2H), 3.1 (t, J 6,5 Hz, 2H); 13C NMR (CDCl3, 125 MHz): dC
155.9 149.4 144.5, 137.6, 132.6, 131.1, 128,9, 128.5, 126.8, 124.9, 124.1, 118.4, 115.2,
113.4, 69.6, 35.4; MS (ESI): m/z 300.96 [M+H] +.
149.8, 148.2, 144.7, 141.8, 137.6, 137,4, 133.7, 129.0, 128.6, 126.8, 123,8, 123,0,
119.5, 69,4, 35.6; MS (ESI): m / z 276.95 [M+H] +.
140.7, 137.5, 134.1, 130.8, 128.7, 126,9, 124.7, 116.1, 106.4, 69.2, 35.9, 35.4; MS
(ESI): m/z 334.99 [M+H] + .
4.2. Biologa
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos a Jeannine Jung para realizar laspruebas in vitro y agradecemos a la Prof. J
. J. Rob Hermans, Universidad deMaastricht, los pases
bajos, para proporcionar las clulas V79MZhCYP11B1.