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INTRODUCCION
Es una prueba de toxicidad para determinar la dosis o concentracin de un toxico
que provoca una cierta respuestas en una coleccin de organismos.
Los bioensayos permiten evaluar el grado de afectacin que una sustancia
qumica tiene en cuenta a los organismos vivos, se usa un tejido vivo, o grupo de
organismos, como reactivo para evaluar los efectos de cualquier sustancia
fisiolgicamente activa. Recientemente se han instrumentado bioensayos rpidos
con el empleo de plantas como organismos de prueba, los que funcionan como
buenas herramientas de pesquisa inicial. Los bioensayos in vitro han ganado
aceptacin en las estrategias de biomonitoreo, fundamentalmente porque
suministran resultados confiables, son costo-efectivos, simples y rpidos. Estos
bioensayos pueden auxiliar en la evaluacin de los efectos a la salud (toxicidad
humana y animal) y de los efectos ecolgicos de millares de sustancias qumicas
txicas que son introducidas por varias vas en el ambiente y permiten su
aplicacin en programas de monitoreo en la evaluacin de la toxicidad.
Se sealan las ventajas que tienen las plantas para ser incorporadas en bateras
de ensayo para medir alarma de peligro ambiental. Se destaca la importancia del
empleo de bioensayos con plantas en la deteccin y control de los contaminantes
txicos ambientales. Se hace referencia a dos de los bioensayos con plantas que
pueden resultar disponibles y de utilidad en la evaluacin toxicolgica de muestras
ambientales

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INDICE
BIOENSAYO EN PLANTAS MEDICINALES
I.

DEFINICION

II.

TIPOS DE BIOENSAYO.

II.1. Por el lugar de desarrollo.

a. Bioensayos en laboratorio
b. Bioensayos in situ:
II.2. Por el tiempo de duracin.
a. Bioensayos de corta duracin:
b. Bioensayos de duracin intermedia:
c. Bioensayos de larga duracin
II.3. Por sus efectos.
a. Ensayos de toxicidad aguda
b. Ensayos de toxicidad crnica
II.4. Por la aplicacin en sus tratamientos.
a. Bioensayos estticos
b. Bioensayos con renovacin peridica
c. Bioensayos de flujo continuo
III.

REALIZACION DE BIOENSAYOS.

IV.

REFERENCIA BIBLIOGRAFIA

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BIOENSAYO EN PLANTAS MEDICINALES

I.

DEFINICION
Son pruebas en las que se usan organismos vivos para detectar o medir la
presencia y efectos de una o ms substancias txicas, as como determinar
el lmite de tolerancia de dichas substancias con respecto a los organismos.

II.

TIPOS DE BIOENSAYO.
El efecto se puede evaluar a diferentes niveles (subcelular, enzimtico,
morfolgico, fisiolgico, histolgico, sistmico, poblacional o de la
comunidad) y clasificarse en cuantal (cantidad de organismos afectados) o
gradual (grado de alteracin).
2.1.

Por el lugar de desarrollo.

a. Bioensayos en laboratorio:
Los bioensayos se pueden realizar en el laboratorio bajo
condiciones controladas o en el campo, es decir, directamente en
el medio natural.
Los

bioensayos

de

laboratorio

pueden

ser

mono

multiespecficos. Los monoespecficos estn diseados para

obtener informacin acerca de los efectos de la calidad de agua
sobre la supervivencia y aspectos de la estructura y dinmica de
una poblacin dada.
Los multiespecficos pueden ofrecer informacin sobre el impacto
a nivel de una comunidad determinada. Se pueden efectuar las
siguientes pruebas:

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Mortalidad
Proporcin de crecimiento
Biomasa
Reproduccin
Estimulacin

inhibicin

de

sistemas

metablicos

enzimticos
Cambios de conducta
Histopatolgica
Nutricin
b. Bioensayos in situ:
Los

bioensayos

de

campo

consisten en la exposicin de una

o ms poblaciones a la accin
directa;

para

contenedores

ello
que

se

utilizan
permiten

mantener la poblacin en estudio

en un espacio adecuado, sin
afectar su relacin con el medio.

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2.2.

Por el tiempo de duracin.

Las pruebas pueden durar varios periodos de tiempo, pero las de
96 horas son las ms comunes. Los individuos son expuestos a
concentraciones crecientes del txico para determinar cambios en el
organismo. En general la muerte es el criterio ms utilizado en la
prueba de 96 horas.

a.

Bioensayos de corta duracin:

Estas pruebas pueden ser estticas, de renovacin o flujo
continuo, dependiendo de los organismos de prueba, los
objetivos, el equipo, el agua suministrada y el txico. Estas
pruebas se usan para dar una idea de la toxicidad de efluentes,

desechos o materiales para organismos acuticos especficos.

Sirven de base para la seleccin de concentraciones del efluente
o material de desecho que se usar en bioensayos a largo plazo.

b.

Bioensayos de duracin intermedia:

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Estos bioensayos tambin pueden ser estticos

o de flujo continuo, con duracin de 15 a 90
das. Estas pruebas pueden tener una duracin
de 24 hrs. con efluentes de baja toxicidad o que
son

de

actividad

lenta,

pero

se

pueden

continuar hasta 30 das, que es la duracin

general.
c. Bioensayos de larga duracin
Estas

pruebas

son

con

amplia

exposicin sobre todos los estadios del

ciclo de vida que sea posible, para
determinar la mxima concentracin
del efluente, desecho material que
no

produce

efectos

dainos

con

exposicin continua.
Este tipo de pruebas se utilizan para determinar efectos sobre
crecimiento, reproduccin, desarrollo de productos sexuales,
maduracin, logro de la nidada, crecimiento y supervivencia de
diferentes estados de vida, conducta y bioacumulacin.

2.3.

Por sus efectos.

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a. Ensayos de toxicidad aguda

Los ensayos de toxicidad aguda son pruebas donde la exposicin
se realiza en un periodo corto. Por lo general, el periodo corto es
de 24 a 48 horas, no obstante, puede variar dependiendo de la
especie evaluada, puesto que para un vertebrado 72 horas siguen
siendo un tiempo mucho menor que el de su ciclo de vida normal,
a diferencia de organismos como bacterias, protistas, quienes
pueden completar su ciclo de vida o reproducirse en menos de 24
horas.

Imagen n 1 Daphnia magna. usadas en ciertos

ambientes para probar los efectos de toxinas en el ecosistema,
convirtindolas en especies indicadoras, particularmente tiles
en el rea, debido a su corto ciclo de vida y capacidades
reproductivas.

Pero la caracterstica ms interesante es su sensibilidad a los txicos,

ya que es capaz de acusar la presencia de, por ejemplo, 0,005 mg. del
peligroso mercurio en el agua, y an menores concentraciones de
numerosos pesticidas y residuos industriales. Con Daphnia magna se
hacen, generalmente, dos tipos de bioensayos: de toxicidad aguda y
de toxicidad crnica. En los de toxicidad aguda se evala la
concentracin del txico (conocido o desconocido) que es capaz de

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matar o inmovilizar el 50 % de la poblacin (CL50 o CE50) en 48
horas. Si un test de toxicidad aguda no detecta efecto alguno de
mortandad o inmovilizacin esto no siempre significa que el agua
analizada no contenga sustancia alguna capaz de producir otro tipo de
dao. Para estos casos se utilizan los tests de toxicidad crnica en los
que la evaluacin se basa en la capacidad reproductiva o el
crecimiento de los individuos. Es posible, entonces, con estas
tcnicas, dar en pocas horas una respuesta sobre la incidencia de
efluentes industriales en un ambiente acutico.

Algunos autores proponen que los ensayos en organismos

unicelulares, con exposiciones de 24 a 48 horas, estaran mejor
clasificados como crnicos, ya que abarcan gran parte del ciclo de
vida, especialmente la fase reproductiva. Sin embargo, es comn
categorizar un ensayo por su duracin sin importar la especie
modelo empleada.

b. Ensayos de toxicidad crnica

Los ensayos de toxicidad crnica son pruebas que se realizan
durante un periodo largo, por un tiempo en el que la exposicin es
considerada continua o repetida. Este tipo de bioensayo se lleva a
cabo especialmente para determinar la dosis mxima que no
presenta efectos txicos fuertes a exposiciones constantes y para
reconocer los mecanismos de toxicidad acumulativos, que
complementan o contrastan, con los observados para ensayos de
toxicidad aguda.

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2.4.

Por la aplicacin en sus tratamientos.

a.Bioensayos estticos
Se

efecta

sin

la

renovacin

continua del flujo constante de las

diluciones sometidas al ensayo. Son
pruebas dirigidas en laboratorio para
determinar los efectos de toxicidad
sobre

algunas

especies

de

organismos acuticos, sometiendo los

ejemplares de prueba a condiciones ms o menos arbitrarias; la
toxicidad evaluada no est asociada con la demanda de oxgeno
y

es

debida

sustancias

relativamente

estables.

Los

bioensayos estticos se usan para organismos de prueba de

fitoplancton, zooplancton y peces, porque no es necesario
renovar su solucin a prueba antes de 96 hrs.

b. Bioensayos con renovacin peridica

Los especmenes se someten a una preparacin fresca de la
misma concentracin inicialmente empleada, peridicamente
(generalmente cada 24 horas). Los bioensayos a corto plazo de
renovacin

flujo

continuo

son

usados

con

macro

invertebrados y peces. Pueden realizarse con organismos en

diferentes estados de su ciclo de vida. Determinan la toxicidad
comparativa de diferentes desechos o efluentes, as como la
sensibilidad de los organismos a un material dado, determinan
tambin los requerimientos en corto plazo de oxgeno, pH,
temperatura y otros factores ambientales.

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c. Bioensayos de flujo continuo

Circula continuamente una corriente de sustancia de prueba

nueva en contacto con los individuos experimentales. Se
realizan con la renovacin continua o casi continua de las
diluciones sometidas al ensayo, con el fin de mantener casi
constantes las concentraciones de las sustancias txicas activas

III.

REALIZACION DE BIOENSAYOS.

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En todo laboratorio de bioensayos, cada vez que se inicia un estudio de

toxicidad se deben preparar un cronograma de actividades y un listado
general del tipo de pruebas.
Estos dos procedimientos permitirn hacer una revisin rpida de cada
proyecto.

Bioacumulacin
Son las sustancias que se acumulan en las plantas, las grandes
concentraciones de sustancias txicas en los tejidos pueden causar la
muerte, pero el organismo es capaz de acumular durante algn tiempo
cantidades menores sin sufrir dao.
Los bioensayos permiten, mediante el uso de las sustancias txicas,
evaluar el grado de afectacin de los organismos el cual se produce
como un efecto acumulativo; aunque no se mide directamente la
bioacumulacin, s podemos determinar mediante el CL50 el intervalo
de concentracin que los afecta.
EJEMPLOS 1.
Artemia salina Leach
Se comprueba la existencia de actividad biolgica con este bioensayo, "cuando el
valor de LC 50 de los extractos expresado en g/ml es inferior a 1,000.
El valor de I-C 50 para los extractos acuosos y etanlicos de las especies de
Bidens, indican que los extractos acuosos poseen menor actividad que los
etanlicos y entre estos los de Bidens pilosa L. mayor actividad. Los resultados se
observan en los Cuadros N. 2 y 3, que nos llevan a afirmar que este bioensayo
debe ser utilizado como soporte de la informacin etnobotnica, ya que reduce al
mnimo la probabilidad de que especies vegetales sin propiedades bioactivas en el
organismo humano se colecten para estudios farmacolgicos y qumicos.

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1. Ensayo de citotoxicidad en Artemia salina Leach

Se evala la actividad txica de los extractos frente a las larvas de Artemia
salina (crustceo conocido como camarn de mar) que es un identificador de la
actividad biolgica de los extractos crudos o compuestos puros aislados de
plantas superiores.
El resultado de mortalidad de las larvas significa la existencia de grupos de
compuestos potencialmente activos.
2. Actividad antiulcerosa
Para este ensayo se utiliz ratas Winstar de peso entre 200-410 g, las cuales
fueron sometidas a ayuno por 24 horas.
Se distribuyeron en cinco grupos al azar.
A tres grupos se les administr por va per oral los extractos de las drogas en
estudio 200 mg/kg de peso. El cuarto grupo recibi bismuto coloidal 70 mg/kg
de peso y el ltimo recibi el solvente; una hora despus se les administr a
todos indometacina, por la misma va 70 mg/kg, para inducir lceras en la
mucosa gstrica, luego se realiz el estudio fisiopatolgico de la mucosa
gstrica para evaluar el ndice de ulceracin considerando el N. total de
lceras, coloracin de la mucosa, edema, hemorragia y lcera con erosiones
menores de 1 min y lceras perforadas.

EJEMPLO 2
BIOENSAYO DE SANGRE DE GRADO (CROTON LECHLERI)

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Sangre de Grago es el nombre que recibe popularmente el

ltex exudado al rasgar la corteza de algunas especies
vegetales tropicales. Es un lquido viscoso de color rojo
sangre y sabor astringente.
1. Composicin qumica
Los componentes mayoritarios aislados de la sangre de drago de Croton
lechleri,

son:

catequina,

epicatequina,

galocatequina,

epigalocatequina

(monmeros de flavan-3-oles) y proantocianidinas de diferentes tamaos. El

SP-303 es un oligmero proantocianidnico heterogneo, aislado del ltex de C.
lechleri, cuyos componentes bsicos son (+)-catequina, (+)-galocatequina, (-)epicatequina y galoepicatequina, siendo predominantes (+)-galocatequina y
(epigalocatequina. Entre los compuestos minoritarios, se encuentran el
alcaloide taspina, un lignano denominado dimetilcedrusina, y diterpenos como
cido hardwickiico, bicantriol, crolequinol, cido crolequnico, korberina A y
korberina B. Adems estn presentes -sitosterol y -sitosterol-3-O--Dglucopiransido,1,3,5- trimetoxibenceno, 2,4,6-trimetroxifenol, 3,4-dimetoxifenol,
alcohol 3,4-dimetoxibenzlico y alcohol 4-hidroxifenetlico.

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2. Potencial teraputico
ACTIVIDAD CICATRIZANTE
Una de las actividades ms conocidas, y de las primeras estudiadas, de
sangre de drago es la cicatrizante, y en ella est involucrado ms de un
principio activo. El sangre de Grado estimula la contraccin de la herida,
ayuda en la formacin de la costra y regenera rpidamente la piel ayudando a
la formacin de colgeno. A esta accin contribuyen la taspina, la 3'-4-Odimetilcedrusina y los polifenole (catequinas y proantocianidinas), y se ha
demostrado que el ltex total es ms activo que sus componentes aislados.
La sangre de grado mezclada con xido de zinc puede ser utilizada en el
tratamiento de la alveolitis seca dolorosa, ya que induce la formacin del tejido
de granulacin de los alveolos secos, elimina el dolor y el mal olor presente en
esta enfermedad en perodos que fluctan entre 24 horas y 4 das posteriores
al tratamiento.

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La taspina promueve las fases tempranas de la curacin de una herida y su

mecanismo de accin podra estar relacionado con la estimulacin de la
quimiotaxis de fibroblastos. Sin embargo, no se ha encontrado actividad en
ensayos especficos sobre la quimiotaxis de macrfagos, estimuladora de
neutrfilos o de la proliferacin de fibroblastos. La taspina acta en el inicio del
proceso de cicatrizacin in vivo en ratn durante las primeras 60 horas,
transcurrido este perodo de tiempo no se observa ninguna diferencia
significativa con el proceso normal de cicatrizacin. Este alcaloide muestra un
efecto cicatrizante dosis-dependiente (DE50 = 0,375 mg/Kg) en pruebas in
vivo en ratones. Adems, se ha estudiado el efecto de la taspina en el
tratamiento de la lcera gstrica aguda inducida por indometacina en rata. La
taspina reduce los ndices de ulceracin, aumenta el espesor y la consistencia
de la capa de mucus gstrico.
El lignano 3'-4-O-dimetilcedrusina tambin interviene en la accin de curacin
de heridas con sangre de drago. Sin embargo, el ltex es cuatro veces ms
efectivo en la curacin de heridas que la dimetrilcedrusina o la taspina
aisladas. Sangre de drago facilita la curacin lceras gstricas, reduciendo la
actividad mieloperoxidasa, el tamao de la lcera y la sepsis. Los polifenoles
juegan un papel importante en la accin cicatrizante del ltex, probablemente
debido a la accin secuestradora de radicales libres. Las proantocianidinas
estimulan la contraccin de la herida y la formacin de una costra oscura que
recubre la herida. De hecho, muestras de ltex que no presentaron 3'-4Odimetilcedrusina y contienen muy baja proporcin de taspina han mostrado
actividad cicatrizante.

ACTIVIDADES ANTIMICROBIANA Y ANTIVIRAL

Numerosos estudios avalan la actividad antimicrobiana y antiviral de sangre de
drago, y principalmente del SP-303. Esta proantocianidina inhibe diferentes
virus DNA y RNA, incluyendo el virus herpes (HSV tipos 1 y 2), el virus de la
hepatitis (A y B), el virus de la influenza A (FLU-A) y el virus de la
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parainfluenza. Tambin es efectivo contra el virus RSV (virus sincitial

respiratorio). La actividad viral contra los dos tipos de virus herpes simple,
incluye tambin el tipo I timidinaquinasa deficiente, ya que impide la
penetracin del virus en la clula. Sin embargo, es inactivo frente el
citomegalovirus

humano.

En

ensayos

vaginales

en

ratn,

reduce

significativamente la formacin de la lesin cuando se aplica tpicamente al 510%. EL SP-303 se encuentra en fase clnica como tratamiento tpico de
pacientes de SIDA con lesiones recurrentes por herpes genital, y como terapia
de diarreas en enfermos de SIDA. Adems se ha demostrado su eficacia en el
tratamiento de las producidas por la toxina colrica.
La sangre de drago de C. lechleri es poco activa frente a Bacillus subtilis y
Escherichia coli. El 1,3,5-trimetoxibenceno y el 2,4,6-trimetoxifenol son muy
activos frente a B. subtilis, ms potentes que la penicilina y el cloranfenicol.
ACTIVIDAD INMUNOMODULADORA
Sangre de drago ha demostrado actividad inmunomoduladora in vitro.
Observaciones clnicas, de un grupo de mdicos del CEIA, han apuntado
sobre el posible inters de la sangre de drago de C. lechleri como adyuvante
en el tratamiento de una serie de enfermedades, que tienen en comn un
importante componente inmunolgico (autoinmunes, cancerosas, neurolgicas
y virales). Sangre de drago presenta una potente actividad inhibidora sobre las
vas clsica y alternativa del sistema del complemento e inhibe la proliferacin
de clulas T estimuladas. Muestra una accin dual en la modulacin de la
produccin

de

especies

antioxidante/prooxidante)

reactivas
de

la

de

fagocitosis

oxgeno

(actividad

(inhibicin/estimulacin),

dependiendo de la concentracin ensayada.

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IV.

REFERENCIA BIBLIOGRAFIA

Dr. Orlando A. Abreu Guirado. Revista Cubana de Plantas

Medicinales.publicado 24 de julio de 2008. [internet] [citado 04 de julio del
2015]. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1028-47962008000300009 .

Claudia Kuklinski. Farmacognosia. 1ra Edici. Editorial Omega. 2003.

Espaa, CAP VI

Farmacognosia

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