Se conoce como transgnesis al proceso de transferir genes en un

organismo. La transgnesis se usa actualmente para hacer plantas y animales

transgnicos.
Existen distintos mtodos de transgnesis como la utilizacin de pistolas de
genes o el uso de bacterias o virus como vectores para transferir los genes.
Transgnico se refiere a una planta o a un animal en cuyas clulas se ha
introducido un fragmento de ADN exgeno, o sea un ADN que no se encuentra
normalmente en ese organismo. Un ratn transgnico, por ejemplo, es uno al
que se ha inyectado ADN, en un vulo fertilizado que se reimplanta a una
madre adoptiva. El animal que nace tiene no slo su propio ADN, sino tambin
el fragmento de ADN exgeno que se reinyect en la etapa de fertilizacin del
vulo. Podemos estudiar qu efecto tiene este gen sobre todo el organismo, en
vez de mirar tan slo una clula en un tejido de cultivo. Esto es muy
importante porque muchas enfermedades no afectan a un solo tipo de clulas,
sino que afectan a las interacciones entre muchos tipos diferentes de clulas.
Este tipo de tecnologa permite modelar enfermedades humanas en otras
especies donde se puede estudiar la biologa y posibles terapias para la
enfermedad.
ndice
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1 Transgnesis de animales
o

1.1 Transgnesis por microinyeccion de cigotos

1.2 Transgnesis por manipulacin de clulas embrionarias

1.3 Animales transgnicos basados en cromosomas artificiales

2 Transgnesis de plantas
o

2.1 Cultivos transgnicos y resistencia a herbicidas

2.2 Incremento nutritivo de los cultivos

2.3 Inquietudes en la utilizacin de transgnicos

2.3.1 Plantas transgnicas y vacunas comestibles

2.3.2 Plantas transgnicas de tabaco para descontaminar

suelos

3 Referencias

Transgnesis de animales[editar]
La transgnesis se puede definir como la introduccin de ADN extrao en un
genoma, de modo que se mantenga estable de forma hereditaria y afecte a
todas las clulas en los organismos multicelulares. Generalmente, en animales,
el ADN extrao, llamado transgen, se introduce en cigotos, y los embriones que

hayan integrado el ADN extrao en su genoma, previamente a la primera

divisin , producirn un organismo transgnico; de modo que el transgn
pasar a las siguientes generaciones a travs de la lnea germinal (gametos).
Entre las aplicaciones de los animales transgnicos se pueden destacar:

La posibilidad de estudiar a nivel molecular el desarrollo embrionario y

su regulacin.

Manipular de forma especfica la expresin gnica in vivo.

Estudiar la funcin de genes especficos.

Poder utilizar a mamferos como biorreactores para la produccin de

proteinas humanas.

La correccin de errores innatos de metabolismo mediante terapia

gnica.

La transgnesis puede efectuarse siguiendo dos estrategias distintas:

Transgnesis por microinyeccion de cigotos[editar]
Desde que en 1995 se obtuviera una rata transgnica , la produccin de
animales transgnicos es cada vez ms cotidiana, existiendo ya animales
transgnicos de las siguientes especies: ratn, rata, conejo, cerdo, vaca, cabra
y oveja. La tcnica se realiza, fundamentalmente por microinyeccin y se
realiza de la siguiente forma:
En la primera fase, se aslan un nmero grande de vulos fertilizados. Se
consigue sometiendo a las hembras a un tratamiento hormonal para provocar
una superovulacin. La fertilizacin puede hacerse in vitro o in vivo. En la
segunda fase, los cigotos obtenidos se manipulan uno a uno y con una
micropipeta a modo de aguja, se introduce una solucin que contiene ADN.
En la tercera fase, estos vulos son reimplantados en hembras que actuarn
como nodrizas permitiendo la gestacin hasta trmino. Por ltimo, tras el
destete de los recin nacidos, stos se chequean, para ver si ha ocurrido la
incorporacin del transgn.
Transgnesis por manipulacin de clulas embrionarias[editar]
Una estrategia ms poderosa para la transgnesis implica la introduccin de
ADN extrao en clulas embrionarias totipotentes(clulas ES) o clulas
embrionarias madres (clulas EM). Estas clulas se toman del interior de la
blstula en desarrollo y se pasan a un medio donde se tratan con distintos
productos con lo que se conseguir que las clulas no se diferencien, y se
mantiene su estado embrionario.
El ADN extrao se introduce en las clulas ES mediante diversas tcnicas,
posteriormente las clulas transfectadas son reintroducidas en una blstula y
sta reimplantada en una hembra.

Con esta tcnica los neonatos son quimeras, o sea, tienen clulas de origen
distinto, parte con el material gentico original y parte transfectadas ;
mediante el cruce de con aquellas quimeras que hayan incorporado el transgn
en su lnea germinal se consiguen animales transgnicos.
Animales transgnicos basados en cromosomas artificiales[editar]
La tecnologa actual para transferir genes a travs de la lnea germinal de
mamferos requiere la integracin de ADN exgeno desnudo en un sitio
aleatorio dentro del genoma del hospedador. Sin embargo, este proceso puede
generar efectos de posicin indeseables as como mutaciones perjudiciales. Los
cromosomas artificiales de mamferos son buenos vectores para la produccin
de transgnesis, as como para la produccin de protenas celulares y
aplicaciones en la terapia gnica. Esto es as porque tienen la ventaja de:

Transportar grandes molculas de ADN

La posibilidad de replicarse paralelamente al genoma del hospedador,

pero sin integrarse en l.

Se transmiten a travs de la lnea germinal.

Los cromosomas artificiales basados en ADN satlite (SATAC) contienen:

Orgenes de replicacin no virales

Telmeros

Centrmero

Todo ello para permanecer estables en el cromosoma de la clula husped. 60

Mb son el prototipo de un SATAC e incluyen secuencias de heterocromatina no
codificante entremezcladas con genes marcadores como lac Z (galactosidasa) y hph (higromicina fosfotransferasa).
El procediento para la transgnesis y el posterior seguimiento de la presencia
del cromosoma artificial sera enesencia como sigue:

Aislamiento de SATACs y concentracin, mediante citometra de flujo, y

posteriormente se recogen por centrifugacin.

Se cultivan los embriones receptores, por ejemplo de ratn

Se realiza una microinyeccin de los SATACs en los proncleos de ratn,

utilizando micropipetas de vidrio borosilicadas.

Se extrae el ADN genmico total y se amplifica por PCR para probar la

presencia de higromicina. Luego se realiza una tincin de Bgalactosidasa para probar la actividad del gen lac Z (ambos genes estn
presentes en el SATAC).

Por ltimo se realiza una hibridacin in situ fluorescente (FISH) de los

embriones cultivados con un medio en colcemida (detiene las clulas en
fase M), con sondas de ADN satlite, lac Z y hph.

Se ha observado que los cromosomas artificiales se pueden transmitir

correctamente durante las mitosis y a la descendencia del individuo
transgnico, permitiendo la supervivencia de un porcentaje aceptable de
individuos. La creacin de ratones transgnicos con SATAC tambin abre
amplias aplicaciones en reas como la genmica funcional y la creacin de
animales modelo para enfermedades humanas. Y DE GRAN ACCION MUNDIAL
Tambin se han usado nucletidos artificiales sin ninguna de las bases
comunes, que ingresan a E coli por medio de una diatomea. La bacteria
sobrevive y se reproduce manteniendo el nuevo ADN .
Transgnesis de plantas[editar]
Cultivos transgnicos y resistencia a herbicidas[editar]
A nivel mundial, los daos producidos por las malas hierbas destruyen casi el
10% de los cultivos, y para evitarlo los agricultores utilizan herbicidas, con el
consiguiente gasto econmico y contaminacin de aguas y suelos. El generar
plantas resistentes a estos cultivos mejorara esta situacin, y para lograrlo se
transfieren vectores que transportan genes de resistencia a herbicidas. Un
ejemplo es la resistencia al herbicida glifosato en la soja y maz. Esta sustancia
es efectiva con bajas concentraciones, pero es txico para el ser humano y los
microorganismos descomponedores del suelo. La accin del glifosato es sobre
la enzima EPSP sintetasa, importante en la biosntesis de aminocidos, y por
tanto al inhibir dicha enzima la planta muere. Resulta un gran problema el uso
de estos organismos, ya que significara el desarrollo de supermalezas, debido
a la aplicacin masiva de este herbicida, lo que con el paso del tiempo genera
resistencia en malezas, adems de posibles cruzamientos con plantas similares
no trasngnicas. Muchos pueblos latinoamericanos se encuentran en lucha,
debido a la prdida de su maz criollo y variedades cultivadas de tiempos
remotos, debido a la gran taza de cruzamiento de esta especie, ya que el
medio de dispersin del polen es el viento.
Actualmente ya se encuentra maz y soja resistente a glifosato en mercados de
EEUU y otros pases desde su aparicin en 1996. Desde su introduccin en
1996, la soja transgnica ha tenido un aumento espectacular en cuanto a los
cultivos que se han desarrollado, con consiguientes prdidas de suelo y
erosin, debido al laboreo y falta de cobertura post-cosecha. Algo parecido ha
ocurrido con el maz, el algodn y la colza, que tambin han tenido un elevado
desarrollo casi a nivel paralelo, pero inferior a la soja. De todos estos cultivos,
los EEUU son los que producen dos terceras partes de la produccin mundial de
plantas de cultivo genticamente modificadas.
Incremento nutritivo de los cultivos[editar]
Durante los ltimos 50-100 aos, la mejora gentica de las plantas de cultivo
ha resultado en una mejora importante de la productividad e incremento en las
capacidades nutritivas, pero en los ltimos aos se han percibido descensos e
inclusive estancamiento en los niveles productivos, lo que puede ser debido a
falta de polticas de proteccin de suelos. Un ejemplo de cultivos a los que les
han sido subsanados alguna deficiencia nutricional por biotecnologa es el caso

del arroz dorado, con niveles incrementados de B-caroteno, un precursor de la

vitamina A. Para ello se introdujeron tres genes que codificaban enzimas de la
ruta biosinttica que conduce a la sntesis de carotenoides en el genoma de
arroz usando mtodos de recombinacin. Dos genes proceden del narciso y
uno bacteriano. Tras su implementacin se descubrieron variedades locales de
arroz en la india que tenan mayor contenido en vitamina A que el propio arroz
transgnico, por lo que se desestim su uso. As mismo existen alimentos ms
ricos en vitamina A que pueden ser cultivados en regiones secas y pobres,
como calabazas.
La deficiencia de esta vitamina se da en muchas partes de Asia y frica, y cada
ao son muchos los nios que adquieren ceguera permanente debido a esta
deficiencia. Otros estudios estn encaminados a incrementar los niveles de
cidos grasos, de antioxidantes y de otras vitaminas y minerales en las plantas
de cultivo.
Inquietudes en la utilizacin de transgnicos[editar]
La mayora de los productos modificados genticamente contienen un gen
introducido que codifica una protena que confiere el carcter deseado
(resistencia a herbicida, a insectos). Presenta este hecho consecuencias
medioambientales o para nuestra salud? En general, si las protenas no son
txicas ni alrgicas no tienen ningn efecto fisiolgico negativo. Por ejemplo,
en el caso de consumir el gen EPSP de resistencia a herbicida junto con la
planta, ste se degradar rpidamente. En Europa, a diferencia de EEUU es
obligatorio etiquetar los alimentos transgnicos. En cuanto a los riesgos, existe
un debate constante al existir una gran disidencia con respecto de si existe o
no riesgos. Hasta la fecha no se ha podido unificar una teora ya que no se ha
conseguido probar cientficamente que los cultivos transgnicos posean un
riesgo.

Plantas transgnicas y vacunas comestibles[editar]

Las vacunas requieren un proceso de fabricacin bajo condiciones controladas,
sin embargo en pases subdesarrollados existen problemas como la produccin,
transporte o almacenamiento de las mismas, ya que la mayora de las vacunas
requieren refrigeracin y todas ellas condiciones estriles. Es por ello, que se
estn desarrollando vacunas baratas sintetizadas en plantas comestibles. As,
el gen que codifica la subunidad antignica de la vacuna de la hepatitis B se ha
transferido a una planta de tabaco y ste se ha expresado en sus hojas. Del
mismo modo tambin se est empleando esta tcnica para combatir el clera,
as como el uso de otros vegetales o frutales como la patata o la banana para
ser considerados plantas comestibles.
Para la fabricacin de estas vacunas, por ejemplo en el caso de la patata,
hemos de:
1. Insertar el gen de un patgeno humano en una bacteria que infecta
plantas

2. La bacteria infecta fragmentos de hoja de patatera

3. Dichos fragmentos brotan y generan plantas enteras que contienen el
gen patgeno humano
4. Al ingerir dichas patatas, nuestro sistema inmune se activa, creando
anticuerpos para dicho patgeno, crendonos por tanto inmunidad
frente l.
Sin embargo, como lo que pasa a nuestro intestino es solo el gen, no el virus o
la bacteria completa, no hay posibilidad de que la persona contraiga la
enfermedad, pero si es lo suficiente, para que nuestro sistema inmune
responda protegindonos frente a una posible infeccin verdadera.
Plantas transgnicas de tabaco para descontaminar suelos[editar]
En este caso, las plantas transgnicas se emplean para la biorremediacin.
Este estudio fue llevado a cabo en una zona de entrenamiento de militares y
fabricacin de armamento durante la Segunda Guerra Mundial. El suelo est
contaminado con TNT residual, y para eliminar este problema, se han plantado
plantas de tabaco modificadas genticamente, capaces de generar un mayor
nmero de bacterias descomponedoras de este explosivo en elementos no
nocivos.

TRANSGENESIS
En qu consiste la transgnesis
La transgnesis consiste en la introduccin de un gen o genes de inters, previamente aislado y caracterizado, a
una planta, animal o microorganismo, mediante tcnicas de ADN recombinante para expresar una caracterstica
nueva o novedosa que normalmente no se encuentra en la especie de inters. El gen introducido es un segmento de
ADN quimrico compuesto por una secuencia promotora que conduce la expresin, una secuencia codificadora que
contiene la informacin nucletidos necesaria para producir una protena y una secuencia terminadora que es la
seal hasta donde llega la accin de expresin. Este gen construido en el laboratorio es denominado TRANSGEN y
una vez introducido y expresado en un organismo, el organismo que lo contiene constituye un organismo
transgnico. La transgnesis es una forma de modificacin gentica que se hace en el laboratorio. Aunque se utiliza
la denominacin de organismo genticamente modificados, para referirse a los transgnicos, es imperativo aclarar,
que este concepto en realidad hace referencia a modificaciones que ocurren por mutaciones, inducidas,
espontneas, por cruces naturales y por cruces dirigidos. En sntesis la transgnesis es una forma de transferencia
de genes de un organismo a otro, por medio de tcnicas de laboratorio, haciendo uso de las ventajas de la biologa
celular y la gentica molecular.
Cmo se da la transgnesis en plantas
En plantas, la transgnesis se da mediante la introduccin de un transgen que hace parte de un constructo gnico
denominado vector. Este proceso ocurre mediante la transferencia de ADN de manera directa o indirecta utilizando
varias metodologas. La introduccin de ADN directo o desnudo se puede hacer por microinyeccin, electroporacin,
polietilenglicol, wiskers o agujas plsticas y por bombardeo de micropartculas. La otra forma general de
introduccin de ADN es la indirecta, en la que el vector que contiene el transgen o gen quimrico, se introduce en
una cepa de Agrobacterium tumefasciens. Esta es una bacteria del suelo que tiene la capacidad de transferir, de
forma natural un segmento de ADN denominado ADN de transferencia o T-DNA, a las plantas que produce una
enfermedad denominada agalla de la corona. Esta capacidad fue explotada en el laboratorio para transferir
segmentos de ADN o genes benficos.

La transgnesis con biobalstica o bombardeo de partculas de oro o tungsteno, cubiertas del ADN de inters o
transgen permite la introduccin de nuevas caractersticas a cualquier tejido que d origen a un nuevo organismo. El
transgen se integra al azar en un cromosoma y luego se expresa. La transgnesis mediante Agrobacterium
tumefasciensocurre por el reconocimiento y la interaccin de la bacteria con las clulas de la plantas, generalmente
por una herida. La bacteria se activa y mediante el concurso de una serie de protenas, el transgen presente en el
vector denominado es transferido a la clula de la planta, el cual se integra al azar en un cromosoma y se expresa.
Este mtodo es ms atractivo puesto que generalmente genera una o pocas copias del transgen, comparado con la
metodologa anterior que puede dar origen a copias mltiples.
Componentes o herramientas de la transgnesis

1.

Seleccin y aislamiento del gen o genes de inters: construcciones gnicas o vectores.

2.

Sistema de regeneracin de plantas o sistema de introduccin de genes sin cultivo de tejidos

3.

Sistemas de transferencia del transgen o ADN de inters: directa e indirecta

4.

Mtodo de seleccin y anlisis de los transformantes: genes de seleccin, genes reporteros, presencia,
estabilidad y expresin.

5.

Bioensayos a nivel de planta.

Variables de la transgnesis

1.

El transgen y el constructo o vector a utilizar. El tipo de promotor

2.

El tipo de cultivo de tejidos, los explantes, medios de cultivo y condiciones in vitro a utilizar. Las clulas
vegetales deben ser competentes para tomar el ADN.

3.

El sistema biolgico a utilizar debe tener la respuesta suficiente para la transferencia de del transgen.

4.

La tcnica de transformacin o transferencia del transgen a utilizar: para biobalstica se requiere

establecer los parmetros adecuados de acuerdo al tipo de tejido a utilizar. En el caso de Agrobacterium, la
cepa y las condiciones de co-cultivo son determinantes en relacin con la especie de la planta bajo estudio.

5.

Agentes de seleccin si se utilizan genes de seleccin como resistencia a antibiticos y a herbicidas. Genes
reporteros con sustrato como gus o sin sustrato como gfp.