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RESPUESTAS ESPERADAS
ATENCIN: Aqu se encuentran las respuestas esperadas del primer parcial de IBMC
2015 para que les sirvan de gua para comprender las posibles correcciones que reciban.
Por supuesto son slo orientativas y puede haber otras respuestas compatibles con el
enunciado y que, debidamente justificadas, tambin fueron consideradas correctas.
Problema 1:
1) (5 puntos) Los polos positivos deben ubicarse en la parte inferior de cada uno de los 3
esquemas y los polos negativos en la parte superior de los mismos. En el Southern y
Northern, los cidos nucleicos migran hacia el polo positivo debido a su carga negativa,
que es aportada por los grupos fosfato. En el Western, todas las protenas
(independientemente de su carga original) adquieren carga negativa al ser tratadas con SDS
y por lo tanto migran hacia el polo positivo.
2) (6 puntos) Para el gen endgeno el molde es la hebra Crick. Para el transgn la
hebra Watson. Esto es as dado que la elongacin llevada a cabo por la DNA pol es de 5
a 3 y el concepto de antiparalelismo permite explicar por qu la hebra molde es la
complementaria para el caso del transgn que se insert de manera invertida.
3) (10 puntos) La nica banda de DNA que se observa en la calle normal del Southern
tiene una longitud de 8900 pb (desde sitio EcoRI ms 5en el esquema del gen y el ltimo
sitio ECoRI 3, sin contar al transgn). En la calle con material genmico del transgn
resulta en dos bandas de 16240 pb (incluye el gen normal ms el transgn hasta el sitio
ubicado ro abajo del promotor de ste ltimo) y otra de 2640 pb (que incluye el fragmento
de DNA contenido entre los ltimos sitios ECoRI ubicados en el extremo 3` del esquema).
4) (5 puntos) Porque las clulas de todo tejido tienen el mismo material de ADN, y por lo
tanto da resultados equivalentes en un ensayo de Southern Blot que extraigamos ADN de
uno u otro tejido. En el caso de un ratn transgnico, tanto el gen endgeno como el
transgn estn en todos los tejidos del animal. Y el material transgnico est inserto en el
mismo sitio en el material gentico presente en todas las clulas del ratn en cuestin.
5) (15 puntos) Se espera que se muestren las siguientes bandas: Para el ratn normal, tanto
en cerebro como en hgado una banda de 1650 bases (b) y otra de 1170 b (dado el splicing
alternativo del E2 de TFX en ratn). Para pncreas slo la banda de 1170 b (nunca se
incluye E2). Para el ratn transgnico en cerebro e hgado el mismo resultado que en el
normal (una banda de 1650 b y otra de 1170 b.) y para el ratn transgnico en pncreas dos
bandas, la de 1170 b correspondiente a la expresin del gen endgeno que no incluye al
exn 2 y una de 1850 b correspondiente a la expresin tejido especfica del transgn. No
corresponde que la presencia del microRNA influya en el modo en que los mRNA corren.
6) (15 puntos) No deben observarse bandas en las calles correspondientes a material de
cerebro tanto en el ratn normal como en el transgnico (dado el micro RNA que inhibe la
traduccin del mRNA de TFX). Debera observarse una banda de 30 kDa y otra de 14 kDa
en las calles correspondientes a material de hgado tanto en el ratn normal como en el
transgnico. En la calle correspondiente a pncreas del ratn normal slo debe mostrarse
una banda de 14 kDa, y en la calle que corresponde a pncreas del ratn transgnico debe
observarse tanto la banda de 30 kDa como la de 14 kDa.
7) (4 puntos) Al no expresarse la ribonucleasa torpedo la transcripcin no se interrumpe
y por lo tanto RNA polimerasas recorriendo el ADN en direcciones opuestas chocan al no
terminarse la transcripcin.
Problema 2:
1) (20 puntos)
tipo de
DNA Pol
Coli
Klenow
Taq
Pfu
primer A
SI 80
SI 80
NO
NO
37 C
primer B
SI 81*
SI 81
NO
NO
primer C
SI 90 *
NO *
NO
NO
primer A
NO
NO
SI 80
SI 80
72 C
primer B
NO
NO
NO *
SI 81
primer C
NO
NO
SI 90
SI 90
rompera esos puentes, de manera que con SDS se desplegara igual que Taq Pol y
correran juntas (Taq pol no se vera afectada por el pre-tratamiento).
6) (2 puntos) Se
usan
en
PCR
debido
a
que
resisten
las
altas
temperaturas
(aprox
90C)
de
la
etapa
de
desnaturalizacin
de
los
dplex
largos
en
cada
ciclo
de
la
reaccin.