Bioindicateurs Biomarqueurs

L'cotoxicologie
Bioindicateurs - Biomarqueurs
Daniela.Banaru@univmed.fr
&
Thierry.Perez@univmed.fr
L'cotoxicologie, rassemblant, comme son nom lindique,

toxicologie et cologie, a t dfinie en 1977 par Truhaut
comme "la branche de la toxicologie qui tudie les effets
toxiques provoqus par les substances naturelles ou les
polluants d'origine synthtique sur les constituants des
cosystmes animaux, y compris l'homme, vgtaux et microorganismes, dans un contexte intgr".
Les donnes d'ordre cotoxicologiques sont indispensables
pour l'valuation des risques et la gestion de l'environnement.
Effets biologiques des perturbations: fondements dcotoxicologie et

notions de bioindicateurs
1. Concept et utilisation de bioindicateurs de la qualit du milieu
1.1. Dfinitions
1.2. Concept dune stratgie de bio-surveillance idale
1.3. Le Contexte lgal : application de la DCE
2. Accumulation de contaminants dans les organismes
2.1. Mthodes de dtection : avantages et inconvnients des mesures
dans leau (air), les sdiments (sols) et les organismes
2.2. Les bioaccumulateurs idaux
3. Mesures deffets biologiques
3.1. Les biomarqueurs
3.1.1. Df. : marqueurs deffet, dexposition, spcifiques, non spcif.
3.1.2. Le systme de biotransformation
3.1.3. Gnotoxicit
3.1.4. Protines de stress
3.1.5. Mtallothionines
3.1.6. Marqueurs de neurotoxicit
3.1.7. Les marqueurs physiol. : ex. de limposex chez les gastrop.
3.1.8. Les marqueurs morphologiques
3.2. Les tests de toxicit
3.3. Effets biologiques au niveau des populations
3.3.1. Les indicateurs cologiques
1. Concept et Utilisation de bioindicateurs de la qualit du milieu - Dfinitions

1. Concept et utilisation de bioindicateurs de la qualit du milieu
1.1. Dfinitions
3.1.3. Gnotoxicit
BIOEVALUATION
BIOEVALUATION
BIOACCUMULATION
BIOINDICATEUR
BIOACCUMULATION
BIOMARQUEUR
BIOINDICATEUR
BIOMARQUEUR
Ensemble des procdures fondements biologiques

qui peuvent servir ltablissement de diagnostics
cologiques (Goldberg, 1976)
EVALUATION GLOBALE DE LA QUALITE

DU MILIEU MARIN
EVALUATION GLOBALE DE LA QUALITE DU

MILIEU MARIN
EVALUATION PHYSICO-CHIMIQUE
Paramtres physico-chimiques dans leau et les sdiments

(temprature, salinit, O2 etc.)

(temprature, salinit O2 etc.)
BIOEVALUATION
BIOEVALUATION
BIOACCUMULATION
BIOINDICATEUR
BIOACCUMULATION
BIOMARQUEUR
BIOINDICATEUR
BIOMARQUEUR
Organisme ou ensemble dorganismes qui, par rfrence

des variables biochimiques, cytologiques, physiologiques,
thologiques ou cologiques, permet, de faon pratique et
sre, de caractriser ltat dun cosystme ou dun
cocomplexe et de mettre en vidence aussi prcocement
que possible leurs modifications, naturelles ou provoques
Changement observable et / ou mesurable au niveau

molculaire, biochimique, cellulaire, physiologique ou
comportemental, qui rvle lexposition prsente ou passe
dun individu au moins un facteur de stress

MILIEU MARIN

MILIEU MARIN

(temprature, salinit O2, etc.

BIOEVALUATION
BIOEVALUATION
BIOACCUMULATION
BIOACCUMULATION
BIOINDICATEUR
BIOMARQUEUR
Accumulation par les organismes vivants de contaminants

directement depuis le milieu ambiant (bioconcentration) ou
depuis leur nourriture (biomagnification) jusqu des niveaux
suprieurs ceux de la contamination du milieu physique
BIOINDICATEUR
Indication des effets
moyen et long terme
sur les populations et
communauts
Indication des contaminants

biodisponibles, donc
potentiellement toxiques pour les
organismes
BIOMARQUEUR
Indication dune
exposition ou deffets
prcoces sur les
organismes

MILIEU MARIN

MILIEU MARIN


Le rle des bioindicateurs :

Dtecter les perturbations de lenvironnement marin
Mesurer les effets de cette perturbation
Apprcier les modifications des conditions environnementales rsultant
de la prise de dispositions remdiatrices
Une seule espce (approche) ne peut pas permettre datteindre ces

objectifs
Il faut abandonner ce concept au profit dune collection
dorganismes (d outils) situs diffrents niveaux trophiques et
couvrant tous les types dhabitats
Stress : ensemble de perturbations biologiques provoques par

une agression quelconque sur un organisme.
Facteurs de stress dun organismes
1. Concept et Utilisation de bioindicateurs de la qualit du milieu - Concept dune stratgie idale
Face un stress, ltat physiologique dun organisme peut tre

caractris par trois niveaux majeurs de stress. Ces niveaux sont
dtermins en fonction des dommages causs par les facteurs de stress
Les bioindicateurs doivent tre utiliss pour :

mettre
des
signaux
prcoces
de
problmes
environnementaux ;
identifier les relations de cause effet entre les facteurs
daltration et les effets biologiques ;
valuer ltat de stress global de lenvironnement travers
diffrentes rponses dorganismes indicateurs ;
valuer lefficacit de mesures rparatrices sur la sant des
systmes biologiques.
Une sensibilit dpendante du niveau dorganisation

biologique o leffet est mesur
DES BIOINDICATEURS REPRESENTATIFS DE CHAQUE NIVEAU DE STRESS
NIVEAU 1
NIVEAU 2
NIVEAU 3
TRES SENSIBLE
MOYENNEMENT
SENSIBLE
PEU SENSIBLE
Enzymes de dtoxication
Histopathologies
Paramtres de la population
Dommages lADN
Immunologie
Paramtres de la communaut
Mtabolites dans la bile
Energie
Altration du sex-ratio
Enzymes anti-oxydantes
Indices de condition
Altration du rgime alimentaire
Paramtres sanguins
Croissance
Relations entre les niveaux
Protines de stress
Reproduction
trophiques
Une bonne spcificit pour certains bioindicateurs

(+++ les biomarqueurs)
Contaminants
Sources
Biomarqueurs potentiels
Hydrocarbures et ptroles Puits de ptrole, industrie CYP1A, Mtabolites des HAP

du ptrole, trafic maritime,
accidents
Mtaux lourds
Extraction de minerais,
MT, HSP, Marqueurs de stress
mtallurgie, agriculture
oxydants
Pesticides
Agriculture, industries,
CYP1A, AChE, HSP, GST,
zones de loisirs
Vitellogenine
Organochlors
Activit industrielle,
CYP1A, HSP, GST,
transformateurs, combustion,Vitellogenine, Stress oxydant
dchets toxiques, etc.
Hydrocarbures
Mtallurgie, combustion CYP1A, HSP, GST, Mtabolites
polyaromatiques
des HAP, dommages lADN
TBT
Peintures antifouling, ports, Imposex
etc.
Alkyl phnols
Dtergents industriels,
Vitellogenine
plastiques, etc.
Le cadre lgal : DIRECTIVE 2000/60/CE
tablissant un cadre pour une politique communautaire dans le domaine de l'eau
dfinir des principes communs pour .

amliorer la qualit des eaux
protger les cosystmes aquatiques
assurer l limination de substances dangereuses prioritaires
obtenir dans l'environnement marin des concentrations qui soient
proches des niveaux de fond pour les substances prsentes
naturellement
etc. etc. etc...
Objectif 2015 !.
Bon tat cologique
Non dtrioration des milieux
Un effort sur les substances dites prioritaires
Mise en place de zones protges

Les paramtres slectionns
1) Paramtres physico-chimiques
(transparence, temprature, bilan oxygne, salinit, nutriments, polluants fixs par dautres textes)
2) Paramtres hydromorphologiques
(profondeur, zone inter-tidale, structure sdiment, dbit, exposition aux vagues, etc.)
3) Paramtres biologiques
ou plutt . cologique
Phytoplancton : composition, biomasse

Macrophytes benthiques : Phanrogames et macroalgues,
composition et abondance
Macrofaune benthique : composition et abondance
Ichtyofaune : composition et abondance, ge (eaux douces et
transition uniquement)
Notion de Bon tat
tat cologique
5 niveaux
Tr
Trs bon
Bon
Moyen
Mdiocre
Mauvais
tat physico-chimique
2 niveaux
Bon
Mauvais
Dcoupage, typologie des masses d eau
Dfinition dindicateurs
Sites de rfrences
Dfinir le TRES BON
Sites perturbs

1. Concept et Utilisation de bioindicateurs de la qualit du milieu
1.1. Dfinitions
3.1.1. Df/ : marqueurs deffet, dexposition, spcifiques, non spcif.
3.1.3. Gnotoxicit
Les bioaccumulateurs idaux

Trois types de mesures pour trois informations complmentaires
Dans leau : image instantane de la quantit totale de
polluants prsents dans le milieu (RNO)
Dans les sols, les sdiments : accumulation travers le temps,
intgration des sources de variations (problme de
granulomtrie)
Dans les organismes (biomoniteurs) : image de la fraction
biodisponible, potentiellement toxique (en fonction de la
biologie de lespce et du comportement trophique)
Limites de dtection des appareillages utiliss!...
des espces opportunistes, tolrantes faces aux

perturbations de l'environnement.
sdentaires et abondants sur les sites tudier.
faciles rcolter et identifier.
Accumule et non pas rgule les contaminants ;
reflte les variations de la qualit chimique du milieu
Les vgtaux : algues et phanrogames marines
sources dissoutes de contaminants
Les invertbrs filtreurs : bivalves et spongiaires
sources particulaires et dissoutes de contaminants
Les dtritivores : vers polychtes et crustacs
contaminants accumuls dans les sdiments
Ex. : Mussel watch

1.1. Dfinitions
3.1.3. Gnotoxicit
3. Mesures d effets biologiques
3. Mesures d effets biologiques
Bioindicateurs de quoi?
est-ce que les bioindicateurs peuvent attirer notre
attention sur la qualit de lenvironnement ?
est-ce quun bioindicateur peut suggrer une
cause responsable dune altration, et nous
permettre den dduire des consquences et
ventuellement des mesures de remdiation ?
est-ce quun organisme donn, prslectionn,
peut servir caractriser brivement ou exprimer
une gnralit ?
3. Mesures d effets biologiques - les biomarqueurs - Dfinitions
Les mesures deffets biologiques peuvent se faire diffrents

niveaux, de linfra-individuel jusqu lcosystme
Les biomarqueurs sont dfinis comme des paramtres biologiques

de rponses sub-ltales et deffets des polluants sur des organismes
aquatiques. Cette dfinition inclut un certain nombre de paramtres
molculaires, cellulaires et physiologiques, qui peuvent, en
principe, tre mesurs par des mthodes peu onreuses (Lagadic et
al., 1997).
Lunit biologique du monde vivant rend possible lutilisation
des mmes types de biomarqueurs chez des organismes
appartenant des groupes taxonomiques trs varis du rgne
animal et vgtal.
Xnobiotique
On distingue gnralement plusieurs types de biomarqueurs :

Organisme vivant
Le biomarqueur dexposition indique que le polluant prsent dans
le milieu a pntr dans lorganisme. Gnralement, il est le rsultat
dinteractions avec des molcules naturelles ou des liquides
biologiques.
Distribution tissulaire
Biotransformations
(systmes
enzymatiques)
Mtabolites
hydrosolubles
inactifs
Mtabolites ractifs
Toxicit
Macromolcules
cellulaires
limination
Le biomarqueur deffet indique, quaprs avoir pntr, le

polluant sest rpandu dans les diffrents tissus, en exerant des
effets toxiques ou non.
+ les indices gnraux de stress, dits non spcifiques et
les marqueurs plus spcifiques
difficult
valuer les consquences de la contamination des individus sur

des niveaux dorganisation biologiques plus levs (populations,
communauts), et finalement sur lcosystme.
3. Mesures d effets biologiques - les biomarqueurs - Systmes de biotransformation
La mtabolisation de toute molcule xnobiotique caractre hydrophobe met en jeu des

mcanismes permettant daugmenter son hydrosolubilit
Lutilit des biomarqueurs comme outil dvaluation de la

qualit de lenvironnement selon Wolfe, 1992
Xnobiotique
Organisme vivant
Distribution tissulaire
estimer la distribution de substances potentiellement toxiques

la fois dans lenvironnement et dans les organismes vivants,
Biotransformations
mettre en vidence des rponses des organismes lexposition

des contaminants,
Phase I
Phase II
tablir des relations de cause effet entre la prsence des

contaminants et les rponses biologiques,
valuer les consquences de la contamination des individus
sur des niveaux dorganisation biologiques plus levs
(populations, communauts), et finalement sur lcosystme
Phase I
Mtabolites
hydrosolubles
inactifs
Phase II
Mtabolites ractifs
Toxicit
Macromolcules
cellulaires
Elimination
Des transformations non enzymatiques peuvent galement se produire par captage de

formes actives de loxygne induites par le mtabolisme oxydant.= peroxydation
Malgr ces mcanismes de detoxication, certains mnent la formation
Phase I = phase de fonctionnalisation

une oxydation rendant la molcule plus polaire. Ce
mcanisme est assur par les complexes multienzymatiques
dpendants du cytochrome P450.
4 sources potentielles despces toxiques drives du contaminant

Xnobiotiques
des mtabolites issus de

la phase I
des drivs radicalaires
des espces ractives de
loxygne
Esp.toxiques lectrophiles
susceptibles de se lier de
manire covalente avec
des sites nuclophiles
(ADN, ARN, Prot.)
C
E
L
L
U
L
E
Pntration
Xnobiotiques
Xnobiotiques
Pigeurs de
radicaux
libres
Ractions
radicalaires
Mtabolisme de
Phase I
Mtabolites
Mtabolisme de
Phase II
Composs
radicalaires
Cycles
redox +
autres
Mtabolisme de
Phase I
Conjugus
Espces
ractives de
loxygne
protections
Le contaminant lui
mme
Enzymes
antioxydantes
Mtabolisme
de phase II
Mtabolites
lectrophiles
E
F
F
E
T
S
Dtrioration
des
membranes
T
O
XI
Q
U
E
S
Enzymes
inactives
Proxydation
lipidique
Dtrioration
de lADN
+ autres
Excretion
Les enzymes intervenant sont principalement les UDPglucuronosyl-transfrases, les glutathion-S-transfrases, les
sulfotransfrases et catalysent respectivement la conjugaison
du substrat avec l'acide glucuronique, le glutathion, le sulfate
ou une molcule d'eau. Les xnobiotiques, ainsi oxyds puis
conjugus, sont hydrosolubles et donc excrtables.
Effets subcellulaires
Conjugus
Mtabolisme
Phase II = phase de conjugaison
Activation
Protection
Toxicit

La distribution des monooxygnases P450 (ou MFO pour MultiFunction Monoxygenase) semble universelle
Des systmes enzymatiques complexes intervenant :
dans l'limination des substances trangres l'organisme
(xnobiotiques),
dans la mtabolisation de substrats physiologiques essentiels, le
P450 tant aussi impliqu dans le mtabolisme endogne. Cela
comprend des ractions d'hydroxylation du cholestrol, des
strodes, des vitamines A et D, d'alcanes et d'acides gras.

Cytochrome P-450, sousfamilles et substrats
principaux
IA
xnobiotiques plans
(ex: HAP)
IIB
xnobiotiques globulaires
(ex: barbiturates)
IIIA
(ex: strodes)
IVA
(ex: acides gras)
Inducteurs majeurs
HAP
3-mthylcholanthrne (3-MC)
- naphtoflavone
dibenzo-p-dioxines et
dibenzofuranes chlors
PCB plan
phnobarbital
PCB non plan
prgnnolone-16a-carbonitrile
phnobarbital
dexamthasone
clofibrate
esters de phtalate
Activits types
EROD
ECOD
BPH
PROD, EMND,
APND
EMND
T6H
P6H
LAH
EROD (7-thoxyrsorufine O-dthylase); ECOD (7-thoxycoumarine O-dthylase); BPH (benzo(a)pyrne hydroxylase);

PROD (pentoxyrsorufine O-dalkylase); EMND (thylmorphine N-dmthylase); APND (aminopyrine N-dmthylase); T6H
(testostrone 6-hydroxylase); P6H (progestrone 6-hydroxylase); LAH (laurate hydroxylase)
Phase II = phase de conjugaison

Le plus souvent indissociable de la phase I : la phase I prpare le
xnobiotique pour la conjugaison, tape finale de la dtoxication
Les ractions de phase II ont comme rle physiologique :
3. Mesures d effets biologiques - les biomarqueurs - Gnotoxicit
ADN = structure molculaire dpositaire du patrimoine

gntique
Lintgrit de sa structure complexe est essentielle la
survie de la cellule
la rgulation de l'activit biologique de composs endognes

tels que les hormones strodes
Modifiable par des agents dits gnotoxiques
le transport de ces hormones dans l'organisme afin de
prolonger leur demi-vie et d'atteindre slectivement leurs
cellules cibles
les plus importantes pour le
mtabolisme des xnobiotiques
la glucuronidation, la sulfatation et
la conjugaison au glutathion
Dtectable par :
lanalyse directe de la structure de lADN

la dtection des traductions fonctionnelles
Formation d adduits
Les xnobiotiques peuvent induire deux types daltrations
susceptibles dtre utilises comme biomarqueurs:
Liaisons covalentes entre un

xnobiotiques (
(lectrophiles) et les
sites nucl
nuclophiles de l
lADN
1) la formation de produits daddition entre le xnobiotique

et les nuclotides, appels adduits
N-2-benzo[a]pyrnediol-dsoxyguanosine
2) des cassures au niveau dun seul brin, ou des deux brins,

dADN conduisant parfois la formation de
micronoyaux.
Reprsentation schmatique de lactivation des
HAP amenant la formation dadduits lADN
Schma dactivation du benzo[a]pyrne en

carcinogne ultime (diolepoxyde) et
formation de ladduit correspondant
Fragmentation de l ADN
Cassures de monomono-brins
dADN (Single Strand
Break)
Extraction, dnaturation et droulement
de l ADN
Les brins casss sont les premiers
Sparation par chromatographie et
quantification
Le test comte
Pas d extraction
Analyse sur les noyaux inclus dans de
l agarose et prsents sur lame
Dnaturation et migration par
lctrophorse
3. Mesures d effets biologiques - les biomarqueurs - Protines de stress
Les protines de stress - toutes les protines inductibles

par un sens au sens large : protines de choc thermique,
protines glucose rgules , ubiquitine,
mtallothionines ou P-glycoprotines du systme MXR...
Une rponse similaire chez tous les organismes. Des
molcules ubiquistes, marqueurs phylogntiques.
La rponse universelle un stress = induction de
protines jouant un rle cl dans les processus de
protection, rparation et/ou limination des protines
endommages
Des protines susceptibles daccrotre la tolrance des
organismes
Leur accumulation peut permettre d identifier les organes
cibles de substances chimiques nouvelles
Thierry Perez
3. Mesures d effets biologiques - les biomarqueurs - Protines de stress - HSP

Famille
Protines de stress :
HSP 110
HSP 90 (83-90 kDa)
Maintien de l homostasie
cellulaire sous l influence de
stress environnementaux
HSP 70 (68-73 kDa)
Des gnes et des protines

remarquablement conservs
Fonctions
Localisation
Chaperon
Noyau
Association au rcepteur des
Cytoplasme,
strodes, antignes tumoraux
rticulum
Chaperon molculaire :
Cytoplasme,
- assemblage des protines
rticulum,
- translocation des protines
mitochondrie,
- maintien de la solubilit des
noyau
protines nuclaires et
cytosoliques
Des protines normalement exprimes en labsence de stress

Elles peuvent reprsenter jusqu 5% des protines cellulaires totales
Elles jouent un rle dans la rcupration (aprs dnaturation) ou dans
la mise en place initiale (aprs synthse) de la conformation
tridimensionnelle d autres protines
Elles sont sur-exprimes pour faire face une grande varit de stress
- ciblage des protines vers les

lysosomes
Protines de choc
thermique :
- apprtement de lantigne
HSP 60
Chaperon molculaire
Cytoplasme,
mitochondrie,
chloroplaste,
Plusieurs familles de HSP de

diffrents poids molculaires,
surexprimes en rponse
une grande varit de stress
cytoplasme
HSP de faible poids
Protines de liaison du collagne, Cytoplasme
molculaire (20-30
chaperons molculaires,
kDa)
constitution du protasome
Nucloplasmide
Formation du nuclosome
Noyau
Ferritine
Stockage du fer
Cytoplasme
Ubiquitine (7-8 kDa)
Constituant du protasome
Cytoplasme
Facteurs de
HSP
stress
Temprature,
70
PCB, TBT, Cd
Temprature
70
Actiniaires
Madrporaires Temprature 20-30, 70, 90
90
Octocoralliaires Temprature,
PCB (CB118)
Temprature,
70
Mollusques
Cd, PCB
bivalves
Spongiaires
Rfrences
Batel et al., 1993 ; Mller et al., 1995 ; Koziol, 1998 ;
Mller et al., 1998 ; Schrder et al., 1999
Sharp et al., 1994
Black et al., 1995
Wiens et al., 2000
Sanders, 1988 ; Brown et al., 1995 ; Bradley et al., 1998 ;
Smerdon et al., 1995 ; Chapple et al., 1998 ; Steinert &
Pickwell, 1993 ; Lundebye et al., 1997
3. Mesures d effets biologiques - les biomarqueurs - Protines de stress - HSP 70
PROBLEME
Bien que prometteur, ce biomarqueur a t rarement employ en
conditions naturelles
Une majorit dtudes effectues en conditions exprimentales de
stress aigu
OBJECTIFS
tudier in situ les variations des niveaux dexpression de la HSP 70
Confronter les rsultats aux variations de la qualit du milieu, et en
particulier aux variations de la contamination chimique de S.
officinalis
Une mthode de dtection : le western-blot
Expression des prot

protines de choc thermique
en relation avec les fluctuations saisonni
saisonnires
de temp
temprature
Temperature (C) 24
22
20
18
16
14
12
10
HSP 60 (g/
g/g
de prot
protine)
0.08
0.06
Analyse de corr
corrlation multiple :
temp
temprature et facteurs biotiques
Hemimysis margalefi
1 chantillonnage mensuel
2 p
priodes entre 2000 et 2004
HSP 85
pas de corr
corrlation avec la temp
temprature
aucun autre facteur pris en compte
nexplique la variabilit
variabilit
0.04
0.02
0
fev mar avr mai jun
jul
aou sep oct
2000
nov dec
jan
fev mar avr mai jun
2001
HSP 60 (g/
g/g de prot
protine)
HSP 60
corr
corrlation significative avec la temp
temprature
variation partiellement expliqu
explique par le % de
femelles gravides dans l
chantillon ( HSP)
lchantillon
Temperature (C)
24
22
20
18
16
14
12
10
0.08
0.06
0.04
HSP 45
corr
corrlation significative avec la temp
temprature
variation partiellement expliqu
explique par le %
dindividus immatures (
( HSP)
0.02
0
oct nov dec jan fev mar avr mai jun jul
2002
aou sep oct nov dec jan fev mar avr mai jun jul aou
2003
2004
3. Mesures d effets biologiques - les biomarqueurs - Protines de stress - Mtallothionines
Expression des prot

protines de choc thermique et
production de d
dfenses chimiques dans le contexte de
la maladie de 2003
10/09/2003
Des ligands intracellulaires inductibles par les mtaux
10/09/2003
HSP 70 (
(g / g prot.)
La famille des mtalloprotines : faible PM (<10Kda), de 25 64 AA,

thermorsistantes, et une composition en AA particulire
EC 50 g / ml
2,4
500
1,8
400
1,2
300
0,6
200
0,0
100
Riches en cystine
Dates (chantillonnage mensuel)

0
Cys
Cys
Cys
Cys
Cys
30 % des AA
Cys
Des groupements thiols

libres
Dates (chantillonnage mensuel)
Ref
Refrence
Maladie
27/08/2003
1re observation de n
ncroses
chez les spongiaires
1,96*Ec.-Type
1,00*Ec.-Type
Moyenne
Formation de complexes
metal-thiolates
Affinit pour les ions
mtalliques lourds : Zn, Cd,
Ag, Cu, Hg
Cys
Cys
Cys
Cys
Trois classes de protines de type MT (PTM ou MTLP)

Classe I : MT des vertbrs, certains invertbrs, certains champignons
Classe II : entre autre, les MT des oursins
Classe III : petits peptides non cods gntiquement, des plantes, des champignons
Deux rles essentiels

Homostasie : Zn et Cu sont essentiels, activit des
polymrases, facteurs de transcription et autres
mtalloenzymes. Les MT sont des formes de stockage de ces
ions et peuvent librer en cas de ncessiter.
Des groupements thiols

libres
Formation de complexes
metal-thiolates
Detoxication : Fixe (squestre, chlate) les mtaux. Leur

induction lors de contaminations suggrent leur implication
dans la protection contre la toxicit des mtaux.
Affinit pour les ions

mtalliques lourds : Zn, Cd,
Ag, Cu, Hg
3. Mesures d effets biologiques - les biomarqueurs - Marqueurs de Neurotoxicit
Action toxique des pesticides organophosphors et des

carbamates au niveau du systme nerveux
Toxicit lie leur action inhibitrice sur lactivit de
lactylcholinestrase
Lenzyme (AChE) met fin au signal
nerveux en liminant le neuromdiateur
des synapses
Sinon...
Blocage de linflux nerveux
Les toxiques prsentent des analogies

avec lactylcholine. Il s agit donc
d une inhibition comptitive
(fixation du comptiteur au niveau du
site actif de lenzyme)
3. Mesures d effets biologiques - les biomarqueurs - Marqueurs physiologiques
Atteinte du m
mtabolisme nerg
nergtique
BILAN METABOLIQUE = F (tat de sant)
Deux mthodes appliques en routine aux bivalves
Scope for Growth
C=R+F+U+P
(daprs Widdows)
C: consommation
R: nergie lie au catabolisme endogne, estime par la conso. en O2
ol
c
lo
ng
ea
nn
xo
-sa
F: nergie rejete sous forme particulaire

U: nergie rejete sous forme d urine (ou excrtion azote)
P: nergie disponible pour la production = gain brut (tissus, scrtion)
Stress on stress
(Daprs Viarengo)
= la rsistance l anoxie
c
e
ol
lie
ita
e
nn
En dautres termes le temps de survie

l air en laboratoire
Atteinte des fonctions reproductrices
Atteinte des fonctions reproductrices
Les facteurs du milieu exercent leur influence sur les gniteurs

(gamtognse et fcondit), sur les gamtes (fcondabilit,
spermiotoxicit, ovotoxicit) et sur ltat de la descendance
(embryotoxicit, tratognse)
Nucella lapillus (gastropodes)
IMPOSEX
Marqueur spcifique d une
contamination par les TBT
En grande partie due linteraction avec le
mtabolisme des strodes
Trs employ chez les poissons
Reproduction success
Trs employ chez les mollusques

+++ tests de toxicit
Employ chez les chinodermes
Apparition de caractres mle chez des

femelles
Un indice TRP (%) = moy X / moy Y
RSP
moy X = valeur moyenne (male) du rapport poids
penis / poids du corps
moy Y = valeur moyenne (femelle) du rapport
poids penis / poids du corps
3. Mesures d effets biologiques - les biomarqueurs - Marqueurs morphologiques
Changements
physiologiques et
biochimiques induits par
les contaminants
Lsions des cellules,

des tissus et organes
Les altrations
morphologiques permettent
dvaluer les effets
dexposition de longues
dures, mme de faibles
niveaux de contamination
3. Mesures d effets biologiques - les biomarqueurs - Marqueurs morphologiques
Ncroses chez les invertbrs

marins
Un concept applicable aux

mtazoaires et macrophytes
Biomarqueur deffet , indicateur cologiques ?
Variabilit
Variabilit de llexpression des prot
protines de
choc thermique chez un gorgonaire
Variabilit
Variabilit de llexpression des prot
protines de
choc thermique chez un gorgonaire
Un marqueur de rsistance au stress
Un marqueur de rsistance au stress

HSP 70 Paramuricea clavata
HSP 70 Paramuricea clavata

Peu de variabilit
variabilit intraintraindividuelle
Forte variabilit
variabilit intraintraindividuelle
Variabilit
Variabilit plus forte
faible profondeur :
Plane Cv = 85% (contre 40%)
Riou Cv = 40% (contre 22%)
Une variabilit
variabilit des capacit
capacits de r
rsistance visible lil
il nu !
Les limites des biomarqueurs

Les traitements des chantillons
La rfrence bruit de fond
Facteurs gntiques (MXR Multi-XenobioticResistance)
Facteurs physiologiques (lage, le sexe, les facteurs

nutritionnels, les saisons)
Les pollutions mixtes et les interactions avec

dautres polluants
La dure des effets biologiques
Le caging pour matriser les sources de variations
3. Mesures d effets biologiques - les tests de toxicit

1.1. Dfinitions
2.1. Mthodes de dtection : avantages et inconvnients des mesures dans leau
(air), les sdiments (sols) et les organismes
3.1.1. Dfinitions : marqueurs deffet, dexposition, spcifiques, non
spcifiques
3.1.3. Gnotoxicit
3.1.7. Les marqueurs physiologiques : exemple de limposex chez les
gastropodes
Les tests ltaux
Les tests subltaux
Ces tests sont les plus couramment utiliss en laboratoire, du fait de

leur simplicit et de leur rapidit de mise en uvre. Les effets ltaux
sont facilement identifiables et la courte dure du test ne pose pas de
problme en ce qui concerne le maintien technique des organismestest et des conditions exprimentales. Ces tests sont raliss partir de
concentrations en polluant nettement suprieures celles mesures
dans le milieu. De ce fait, leur manque de reprsentativit et la
difficult d'extrapolation au milieu naturel leur ont valu de
nombreuses critiques. Cependant, malgr leurs limites, ils restent
indispensables ( condition qu'ils soient rigoureusement conduits)
pour des tudes prliminaires sur l'valuation de l'impact de nouveaux
produits chimiques, le suivi des effluents, les accidents ptroliers
impliquant l'utilisation de dispersants, les "screening" des rejets de
produits chimiques et les installations offshore.
Ils sont bass sur l'apprciation d'effets indsirables sur les individus.
Ces effets ont souvent une origine biochimique tant donn que la
plupart des toxiques exercent leurs effets par le biais de modifications
d'activits enzymatiques. Les effets les plus couramment tudis
concernent des arrts de croissance, des perturbations de la
reproduction, des baisses de l'activit, des effets mutagnes L'effet
pourra tre qualifi "d'indsirable" dans la mesure o l'on connat sa
signification physiologique et cologique et o il ne s'agit pas d'une
raction d'adaptation bnfique pour l'espce tudie.
Les tests incluant des cosystmes exprimentaux

Ces tests consistent soit reproduire des cosystmes en laboratoire,
soit raliser des expriences in situ par contamination du milieu.
Leur finalit est l'tude des phnomnes de fixation et de
concentration des polluants rmanents travers les espces.
Diffrents tests de toxicit disponibles

Souvent empiriques (ne tiennent pas compte des
mcanismes biochimiques et physiologiques qui
aboutissent un effet ltal ou sub-ltal)
Pour une meilleure valuation de la qualit du milieu
est envisager de coupler des bio tests avec des
mesures de biomarqueurs
Tests de toxicit oprationnelles:

Tests letaux
Des tests standardiss

Effet ltal sur le loup ou la truite : CL 50
Acartia torsa
Chaetogamarus marinus
Crangon crangon
Brachionus plicatilis
Nitocra spinipes
Dicentrachus labrax
Artemia salina
Fundulus heteroclitus
boues de forage
effluents industriels
Test Microtox : bioluminescence dune bactrie Vibrio fischeri

(ex- Photobacterium phosphoreum)
produits chimiques
dispersants dHC
Tests subletaux
Photobacterium phosphoreum
Skeletonema costatum
Balanus improvisus
Mytilus edulis
Mysidopsis bahia
Arbacia punctulata
Cyprinodon variegatus
boues de forage
effluents

(ex-Photobacterium phosphoreum)
Expression des prot

production de d
la maladie de 2003
HSP 70 (
(g / g prot.)
Extraction des substances toxiques

dans un solvant organique
2,0
(mthanol/di-chloromthane)
1,6
Dissolution de lextrait dans de leau

de mer synthtique
EC 50 g / ml
400
300
1,2
0,8
200
0,4
100
0,0
Test pour une gamme de

concentrations constante
Chromatographie
(CCM, GCGC-MS)
Toxicit
Toxicit
EC 50
Rfrence
Composition
de l
lextrait
Maladie
Expression HSP 70
2 fois sup
suprieure
Ref
Refrence
Maladie
Production de d
dfenses chimiques
1,5 fois inf
infrieure
1,96*Ec.-Type
1,00*Ec.-Type
Moyenne
Expression des prot

production de d
la maladie de 2003
Des tests standardiss

Effet ltal sur le loup ou la truite : CL 50
EC 50 g / ml
Une diminution significative de la

production de d
dfenses chimiques
400

(ex- Photobacterium phosphoreum)
?
300
Expression de
certaines
mol
molcules
Test dinhibition de la croissance de Skeletonema costatum

200
Des critres de slection
100
Sensibilit : dceler des petites variations

0
Capacit
Capacit de d
dfense
=
Porte ouverte aux pathog
pathognes
Ref
Refrence
Maladie
Spcificit : rponse un paramtre donn

1,96*Ec.-Type
Reprsentativit : de phnomnes naturels
1,00*Ec.-Type
Moyenne

1.1. Dfinitions
3.1.3. Gnotoxicit
3. Mesures d effets biologiques au niveau des populations et communauts
Les indicateurs cologiques

Les changements de structure des assemblages benthiques peuvent
permettre une meilleure caractrisation de la distribution spatiotemporelle de la pollution. Il est ainsi possible de classer les espces des
diffrents grands groupes dorganismes marins selon leur sensibilit ou
leur tolrance aux perturbations dorigine anthropique (Glmarec,
1985) :
les espces sensibles, dominant largement le peuplement en conditions
normales,
les espces tolrantes, parmi lesquelles certaines ne fluctuent pas de
faon significative dans des conditions anormales, et dautres prolifrent
lorsquil y a une perturbation,
les espces opportunistes, supportant aisment des conditions de
perturbation extrmes.
Des espces indicatrices : prsence, absence, abondance,

morphologie (biomarqueur?)
Des indices mathmatiques ou indices biotiques : des indices

de diversit (Shannon), des distributions thoriques
Distribution log-normale (Gray, 1981; Warwick; 1993)

Indice trophique (Word, 1990)
Indice Annelidien de Pollution (Bellan, 1979)
Indices biotiques et coefficient biotiques (Borja et al., 2000)
etc etc.
des indices simplifies (peut tre la solution?)
Capo (1998). Evaluation des bryozoaires comme bioindicateurs. Diplome d'Etudes

Approfondies. Universit de la Mditerrane, 38 pages
Distribution des grandes esp

espces dress
dresses sur le gradient de pollution
Harmelin & Capo (2002). Effects of sewage on bryozoan diversity in

Mediterranean rocky bottoms. In : P. Wyse Jackson, C. Buttler & M. Spencer Jones
(eds), Bryozoan Studies 2001: Proceedings of the 12th International Bryozoology
Association Conference , Swets & Zeitlinger Publishers, Sassenheim.
Richesse sp
spcifique des assemblages de bryozoaires en soussous-blocs
Large erect bryozoans
Richness & abundance (x + sd)/quadrat
12
N Colonies
N Species
10
DOMINANT CIRCULATION: E - W
8
5000m
2400m
900m
700m
400m
400m
1300m
5000m
6
6
SEWER
OUTLET
4
4
1
0
0
Riou
Sormiou Vaisse 1 Vaisse 2
Calsom CORTIOU Melette
0
Cirque
Maire

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