Ecologa de los microorganismos

BIOFILMS

Andrea Volante
Jess Lpez Rodrguez
Yurena Navarro Garca
Marisela Domnguez Domnguez
David Garca Almeida

Biofilms
Que es una biopelcula?
- Una biopelcula o biofilm es un complejo de agregacin, un consorcio, de microorganismos marcado
por la excrecin de una matriz adhesiva protectora y que tiene un importante papel en los procesos
bioqumicos de la biosfera.

- Un 95-99% de los microorganismos se desarrollan formando biofilms.ya que en la

naturaleza la vida microbiana est estructurada como una asociacin en lugar de clulas
planctnicas.
- Microorganismos, especialmente los procariotas, se ven obligados a asociarse con otros
microorganismos para protegerse de efectos nocivos de los factores ambientales.
Nutrientes:
- Las superficies se consideran importantes para el hbitat microbiana porque pueden
absorber nutrientes.
-- La superficie en s misma puede ser un nutriente.
-- La formacin de polmeros extracelulares aumenta la capacidad de retener nutrientes del
medio.

Desarrollo del biofilm en la interfase

1) Slido Aire
2) Lquido Aire
3) Lquido Lquido (lquidos inmiscibles)
4) Slido Lquido

Estructuras tpicas de un biofilm

Superficie: Slido Lquido

1) Capa de clulas simple.

2) Agregacin no estructurada de microorganismos en una matriz comn.
3) Capas de microorganismos estratificados.
4) Microorganismos que forman protuberancias en bandas.
5) Protuberancias en forma de diente.
6) Protuberancias fungiformes: estructura tridimensional con la presencia de
canales, poros y cavidades.

La formacin de una Biopelcula

1) En condiciones naturales, un slido sumergido en el agua es inmediatamente cubierto

con una pelcula de molculas que cambian las propiedades de la interfase.
2) Adhesin reversible de microorganismos, colonizadores primarias (PC)
3) Adhesin irreversible y excrecin de matriz extracelular
4) Colonizadores secundarios (SC)
5) Fase de crecimiento y desarrollo de estructura tridimensional con la presencia de
canales, poros y cavidades.
6) En condiciones de crecimiento desfavorables, hay degradacin y liberacin de algunas
clulas.

Factores ambientales y propiedades de las clulas

microbianas que afectan el proceso de formacin de
biofilm

- Flujo de lquido: es el principal factor que afecta tanto al desplazamiento de los

microorganismos mviles como a los inmviles.
La sedimentacin puede desempear un papel importante en el sistema slo con el
flujo lento y slo para partculas de tamao significativo, tales como las bacterias o los
grandes agregados de bacterias
-

- Motilidad de los microorganismos

- Factores especie-especficos: hidrofobicidad (la carga de superficie tambin

influye en la adhesin), temperatura, pH, salinidad y concentracin de oxgeno

Interrelaciones entre las componentes del biofilm

- Microambientes del biofilm

- Comensalismo y protocooperacion son las interrelaciones

mas comunes entre los componentes microbianos.
Comensalismo: como el consumo de oxgeno de un
microorganismo aerbico facilita el crecimiento de
microorganismos anaerobios o microaerfilos.
Protocooperacin: colaboracin en la formacin o en el
consumo de los productos.
Intercambio de informacin gentica
- Permite la transferencia de plsmidos o fragmentos cromosomales.
- Entre los genes transferidos se encuentran genes de resistencia a antibiticos y enzimas de
degradacin de materia orgnica.
- Considerado como una estrategia eficaz de adaptacin.
- Una frecuencia ms alta de transferencia horizontal de genes respecto a cultivos planctnicos.

Estudio de la multicelularidad
- Las biopelculas se han tomado como modelo de estudio del
comportamiento multicelular de las bacterias y base de estudio en
organismos superiores.
- Avances en los sistemas de deteccin de expresin de los genes y
de la microscopa (SCLM) han permitido estos estudios.
- Uno de los objetivos centrales al estudiar estas estructuras es la
regulacin que permite la coordinacin de los individuos en el
biofilm, que es vital para el desarrollo de la matriz y el xito de sta.
- La sealizacin por va qumica (mensajeros qumicos y dianas)
extra e intercelular es la base del comportamiento multicelular de
los biofilms.

Microaltruismo: la PCD
-Dentro de la matriz de microcolonias maduras se han
observado disoluciones que contienen una
subpoblacin dispersa.
-Esto es debido a la accin de unas enzimas (ej. liasas)
que degradan los polisacridos estructurales.
-Esta lisis da ventaja a clulas cercanas que se
aprovechan de los nutrientes desprendidos.

PCD (muerte programada de la clula)

- La PCD es un mecanismo determinado genticamente
-Mtodos de PCD:
1.Secuencias de DNA que codifican para toxinas
(plsmidos y genoma
propio)
2.Genes que afectan a los receptores de fagos. Fagos filamentosos
simbiticos (Pf1 profago de P. aeuroginosa codifica homlogos de
protenas de PCD en E. coli)
3.Sntesis de enzimas lticas.
-La PCD toma importancia en procesos como la esporulacin
B. cereus esporula con ayuda de enzmas lticas de bacteriofagos.
B. subtilis y Myxococcus ssp. muerte de subpoblacin para la esporulacin

PCD (muerte programada de la clula)

-Los ciclos de vida de los biofilms pueden terminar con
la dispersin de clulas para la colonizacin de
nuevos enclaves.
-Estos sucesos se suelen dar en condiciones de
carencia de nutrientes.
-As la especie puede explorar nuevos hbitats,
pudiendo adoptar fenotipos mviles.

SOCIOMICROBIOLOGA
Estudio de cualquier comportamiento de los
biofilms (asociaciones microbianas)

SISTEMA DE PERCEPCIN DEL

QUORUM - AUTOINDUCCIN
Describir el comportamiento (comunicacin) de las
comunidades bacterianas.
Construccin y/o disolucin de biofilms
Sistemas que modulan la expresin de los genes
Homoserin- lactonas aciladas (acyl-HSL)(Gram-)
Pptido de seal (Gram+)
AI-2 (Gram+ y -)

Lactonas de homoserina acilada (acylHSL)

Cadena aclica C4 a C14 unida por enlace amido a
una homoserina-lactona
Complejo de homlogos de seal
Seal (enzima: sintasa familia LuxI)
Receptor citoplasmtico dependiente de ADN
(familia LuxR)

Sistema basado en pptidos de seal (Agr)

Seal: pequeos pptidos lineales o cclicos
Receptor: protena sensora de membrana (2
componentes)

Sistema AI2
Vibrio harveyi:
Seal extracellular: furanosyl borate diester
(sntesis: genes luxS)

No estudiado completamente en otras

especies

RELACIN: PERCEPCIN DEL

QUORUM-FENOTIPO DE
BIOFILMS
El acoplamiento (paso inicial): naturaleza de la
superficie y varios factores microbianos afectan la
adhesin.
Agr (S. aureus)

Homlogo LuxS (H.

pilori)

Salvaje

Salvaje

Mutante

Reprime
Unin
Reprime
adhesinas
ms
adhesinas de
de superficie eficiente superficie

Mutante
Unin ms
eficiente
(doble)

RELACIN: PERCEPCIN DEL

QUORUM-FENOTIPO DE
BIOFILMS
La maduracin
Biopelculas planas, homogneas
Biopelculas con alta estructuracin.
Sistema acyl-HSL
(S. liquefaciens)

Sistema CepI/R
(B. cepacia)

Sistema ahyR/I acyl-HSL

(A. hydrophila)

Sistema LuxS
(S. mutans)

Salvaje

Mutante
swrI

Salvaje

Mutante

Salvaje

Mutante
ahyI

Salvaje

Mutante

heterogneo

homogneo

Heterogneo
(robustas)

Detencin
fase
microcolonia

Reduccin
del n de
biopelculas
viables

Heterogneo

Menor
masa total

RELACIN: PERCEPCIN DEL

QUORUM-FENOTIPO DE
BIOFILMS

Agregacin y dispersin
Agregados formados en cultivos lquidos: caractersticas similares a
comunidad de biofilms
El proceso de dispersin parece estar mediado por los sistemas de
percepcin del qurum
Mutaciones en:
Sintasa acyl-HSL de R. sphaeroides hiperagregacin de clulas en
cultivo lquido
ypsI (regulador del sistema acyl-HSL) de Y. pseudotuberculosis
agregacin en cultivo lquido
rpfF, rpfC, rpfG en Xanthomonas campestris agregados en cultivos
lquidos e incremento en la formacin de biopelculas.
Sistema RPF/DSF (seal desconocida) produce una manosidasa
extracelular particin de xanthan (polisacrido secretado que media la
agregacin intercelular)
contribuye a la disolucin de agregados
hapR en V. cholerae superproduccin de exopolisacridos
agregacin.
sobrevivir al paso a travs de la barrera de pH cido del estmago y
promover la infeccin

 Creciente evidencia: la percepcin del quorum:

constituye un sistema global regulador en muchas
especies diferentes.
regula la arquitectura y la dispersin de las biofilms.
Anlisis microscpico y estudios de tolerancia
antimicrobiana para caracterizar biofilms
Estudios en condiciones experimentales confusas y/o
contradictorias (P. aeruginosa)

Las molculas de seal difunden

libremente en un bioflm?
Grado de hidrofobicidad modelo estructural
Acyl-HSL: hidrofbica
P. aeruginosa tiene 2 seales de acyl-HSL principales
butyryl-HSL: hidroflico
3-oxododecanoyl-HSL : hidrofbico

Degradacin de seales (fuente de energa) por lactonasas

(rompen anillo de homoserina) y acilasas (rompen la cadena
acil):
Gradientes de seal
Aislar clulas del bioflm

Las clulas de un bioflm producen

molculas de seal a la misma
velocidad?
Depende del estado metablico de la
clula: los sustratos para la sntesis de
seal se obtienen de metabolitos
generales
Interior del bioflm disminucin del
metabolismo gradientes de seal

Dnde se induce por primera vez

la percepcin del quorum?
Interior del bioflm (P. aeruginosa)
Bioflm (S. aureus)
Influenciado por:
Condiciones ambientales: fuente de carbono, tasa de flujo
Estructura
del bioflm

Formacin del Bioflm y el Medio

Ambiente
En el contexto de la evolucin y adaptacin es probable que los bioflms proporcionasen la
homeostasis frente a condiciones fluctuantes y extremas de la tierra primitiva (temperaturas
extremas, variaciones de pH y exposicin a rayos UV) proveyendo un medio ambiente
suficiente para generar altas concentraciones de nutrientes, que permiti el desarrollo de
interacciones complejas entre clulas individuales y la motilidad en gradientes qumicos
(Quimiotaxis).

Adaptacin de la Estructura del Bioflm

en el Medio Ambiente
La habilidad de las Procariotas de
adoptar diferentes estructuras de
Bioflms dependiendo del medio
ambiente se debe a su capacidad
de regulacin gentica,
selectividad y de localizacin de
patrones de crecimiento
determinados por la cantidad de
nutrientes.
1. Formando filamentos en cintas
alongados en serpentinas
2. Formando mezcla compleja de
algas, cianobacterias,
microorganismos hetertrofos y
detritos (Pheriphyton)
3. Formando un tapete microbiano
(Estromatolitos)

Propiedades de los Bioflms y su

Adaptacin a las superficies
1. Propiedades del Bioflm para su adaptacin y desarrollo:
Sustancia Polimrica
Extracelular
(Viscoelasticidad)

Funciona
Funciona como
como un
un gel
gel que
que le
le otorga
otorga al
al Biofilm
Biofilm
estabilidad
estabilidad yy lo
lo ayuda
ayuda aa adherirse
adherirse aa las
las superficies
superficies

Sntesis Celulosa

Ayuda
Ayuda aa la
la unin
unin aa superficies
superficies de
de plantas
plantas

La modulacin de su
densidad sobre s
misma
Los Magnetosomas

Formando
Formando diferentes
diferentes niveles
niveles de
de columnas
columnas las
las
cuales
cuales se
se sumergen
sumergen en
en el
el agua
agua para
para producir
producir
vesculas
vesculas de
de gas,
gas, sntesis
sntesis de
de carbohidratos
carbohidratos oo
formar
formar agregados
agregados
Estructuras
Estructuras intracelulares
intracelulares de
de mineral
mineral magntico
magntico
rodeado
rodeado por
por una
una membrana
membrana que
que causa
causa el
el pasivo
pasivo
alineamiento
alineamiento de
de las
las clulas
clulas

La Congregacin

Incrementa
Incrementa la
la interaccin
interaccin clula
clula aa clula
clula yy la
la tasa
tasa
de
de sedimentacin
sedimentacin celular;
celular; as
as mismo
mismo permite
permite la
la
versatilidad
versatilidad fenotpica
fenotpica de
de las
las clulas
clulas hijas
hijas

Las Adhesinas

Permite
Permite adherirse
adherirse no
no solo
solo aa superficies
superficies sino
sino
interactuar
interactuar con
con otras
otras bacterias
bacterias

Propiedades de los Bioflms y su

adaptacin a las superficies
2. Ventajas de las superficies para la adaptacin y desarrollo del
Biofilm:
Proveen un espacio adecuado para ser
utilizado en su desarrollo, brindndoles
la estabilidad necesaria para poder
crecer y poder ejecutar sus funciones
catalticas localizando clulas en las
proximidad de la bacterias Biofilm
(Quorum Sensing).

Le brindan proteccin a la formacin

de Biofilms ante los desafos del medio
ambiente (la radiacin UV, metales
txicos, exposicin a cidos,
deshidratacin y salinidad, fagocitosis
y varios agentes antimicrobianos)

Bioflms y las Enfermedades Infecciosas

Los Bioilms han sido reconocidos

progresivamente como factores
importantes en la patogenia de
muchas infecciones humanas
persistentes, incluyendo:
Placa dental, caries, infeccin
periodontal, otitis media,
neumona por Pseudomonas en
fibrosis qustica, cistitis crnica,
endocarditis bacteriana,
osteomielitis y prostatitis crnica
as como en dispositivos mdicos
(implantes), entre otros.

Cateter
Contaminatio
n
Gum Disease

Implant
Contamination

Bioflms y las Enfermedades Infecciosas

Infecciones en dispositivos mdicos:
1. Catteres urinarios, endovenosos y arteriales, prtesis de vlvulas de corazn,
marcapasos, prtesis ortopdicas, tubos endotraqueales, entre otros, pueden
portar Biofilms provocando infecciones.
2. Los microorganismos frecuentemente asociados con las infecciones de
dispositivos mdicos son el Staphyloccus seguido de Pseudomonas aeruginosa.
3. La caracterstica mas notable de la
adherencia de los estafilococos
colonizando implantes mdicos , es la
abundante cantidad de SPE que
recubre y protege las clulas de las
defensas de husped y del tratamiento
con antibiticos.

Bioflms y las Enfermedades Infecciosas

Endocarditis Infecciosa:
1. Es una infeccin del revestimiento de las cmaras y vlvulas del corazn, causada por
bacterias, hongos u otras sustancias infecciosas y el consecutivo depsito de plaquetas y
fibrina; all se implantan luego los microbios aglutinados por los anticuerpos.
2. Las endocarditis relacionadas con el implante usualmente surgen en la unin de los
tejidos naturales y la prtesis, originadas en su mayora, por estreptococos y
estafilococos.

Las clulas endoteliales

secretan fibronectina, que es
utilizada como receptor por
adhesinas especificas de la
superficie de las bacterias que
se multiplican en la lesin y
forman el Biofilm.

Bioflms y las Enfermedades Infecciosas

Fibrosis Qustica:
1.Es una enfermedad autosmica recesiva, causada por una mutacin en un gen
llamado regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis qustica (CFTR),
que resulta en una disfuncionalidad en la secrecin y absorcin de electrolitos.
2.El moco glutinoso acumulado en la vas respiratorias estrechas estimula el
desarrollo de microambientes bacterianos (biofilms) que resultan difciles de penetrar
para las clulas inmunes y los antibiticos.
3. En una primera etapa,
Staphylococcus aureus y
Haemophilus influenzae colonizan e
infectan los pulmones. Ms tarde, sin
embargo, prevalece Pseudomonas
aeruginosa.

Bioflms y las Enfermedades Infecciosas

Infeccin o enfermedad
Caries dental
Periodonditis
Otitis media
Infecciones del msculo-esqueleto
Fascitis necrotizante
Osteomelitis
Prostatitis bacteriana
Endocarditis de la vlvula nativa
Neumona por fibrosis qustica
Meloidosis
Infecciones nosocomiales
Neumona (cuidados intensivos)
Suturas
Orificios de salida
Vas arteriovenosas
Bucles esclerales
Lentes de contacto
Cistitis por catteres urinarios
Peritonitis por dilisis peritoneal
DIU
Tubos endotraqueales
Catteres hickman
Catteres centrales venosos
Vlvulas mecnicas del corazn
Injertos vasculares
Bloqueo del conducto biliar
Dispositivos ortopdicos
Prtesis del pene

Especie bacteriana formadora de biofilm

Cocos gram-positivos acidognicos (ej.
Streptococcus)
Bacterias anaerbicas orales gram-negativas
Cepas no tipables de Haemophilus influenzae
Cocos gram-positivos (ej. Staphylococcus)
Streptococos Grupo A
Varias especies bacterianas y fngicas,
generalmente mezcladas
Escherichia coli y otras bacterias gram-negativas
Streptococcus del grupo viridans
Pseudomonas aeruginosa y Burkholderia cepacia
Pseudomonas pseudomallei
Bacilos gram-negativos
Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus
aureus
S. epidermidis y S. aureus
S. epidermidis y S. aureus
Cocos gram-positivos
P. aeruginosa y cocos gram-positivos
E. coli y otros bacilos gram-negativos
Una variedad de bacterias y hongos
Actinomyces israelli y muchos otros
microorganismos
Una variedad de bacterias y hongos
S. epidermidis y Candida albicans
S. epidermidis y otros
S. epidermidis y S. aureus
Cocos gram-positivos
Una variedad de bacterias entricas y hongos
S. epidermidis y S. aureus
S. epidermidis y S. aureus

Bioflms y Resistencia a los Antibiticos

1.

2.
3.
4.
5.

Las bacterias que conforman los Bioflms

son muy resistentes a los antibiticos,
debido a diversos factores:
Las bajas actividades metablicas de las
bacterias Biofilm (especialmente aquellas
situadas ms profundamente) por
limitacin de oxgeno y nutrientes.
Las seales intercelulares alteran la
fisiologa del Biofilm.
La matriz del Biofilm dotada de carga
negativa.
La existencia de poblaciones
especializadas con fenotipos resistentes
llamadas clulas persistentes.
La diversidad de poblaciones gentica as
como fisiolgica.

Bioflms en sistemas automatizados de agua

Los bioflms son la fuente de muchas de las
bacterias planctnicas en sistemas de aguas,
entre las cuales se pueden encontrar patgenos
secundarios como Pseudomonas aeruginosa.

Factores que afectan a la

adherencia y el crecimiento del
bioflm
Superficie del material: se estudia el aadir antibiticos.
rea de superficie: mayor bioflm a mayor rea.
Rugosidad de la superficie: implica un rea de superficie
total ms grande que a su vez permite mayor
adherencia bacteriana.
Velocidad de flujo: despreciable en la zona prxima a la
superficie.

Factores que afectan a la

adherencia y el crecimiento del
bioflm
Limitacin de nutrientes: necesarios para crecer
y dividirse.
Nutricin mediante el sustrato: como fuente de
carbono orgnico.
Purificacin del agua: difcil alcance del nivel
necesario para filtrar toda la materia orgnica.

Proporciones del bioflm frente a

los sistemas de riego
Grit como unidad para el acabado de una superficie: a
mayor grit, menor rugosidad.
Nivel de rugosidad medido mediante profilometros.
Rugosidad media de una tuberia entre 150-180 grit
(entre -34 y -14 micropulgadas).
Rango de una bacteria tpica: 12-31 micropulgadas de
ancho por 40-47 micropulgadas de largo.

Proporciones entre el bioflm y los

sistemas de riego

Proporciones entre el bioflm y los

sistemas de riego
Bioflm frente a velocidad de flujo: limita el grosor
del bioflm. El aumento del grosor puede dar lugar a
ambientes anaerobios donde las bacterias
expulsaran sustancias nocivas.
Tamao del bioflm mucho ms grande que las
irregularidades de la superficie, lo que implica la
poca importancia de stas en la adherencia
bacteriana.

Biocorrosin
Agotamiento del oxgeno: provoca dao
de la capa que protege la superficie, y
genera ambientes anaerobios donde se
generarn productos corrosivos.
Productos del metabolismo microbiano:
cido actico, cido sulfrico,etc.

Mtodos de saneamiento frente

a los bioflms
Biocidas oxidantes: de mayor a menor grado de
efectividad seran ozono> dixido de cloro>
cloro> perxido de hidrgeno.
Biocidas no oxidantes: compuestos cuaternarios
de amonio, formaldehdo y agentes
surfactantes.
Tratamientos fsicos: calor y eliminacin
mecnica.

Resistencia a los biocidas

Los biocidas tienen muchas mas dianas
de ataque a diferencia de los antibiticos
que tienen pocas.
Se defienden de ellos usando su capa de
polisacridos que acta como un escudo.
Estas bacterias son mas difciles de matar
y retirar cuando se realiza un
saneamiento, por lo que se suele dar una
recuperacin rpida del bioflm.

Factores que pueden influir en la

rpida recuperacin
El bioflm restante puede contener suficientes bacterias que
no necesitan una fase estacionaria en situaciones de
recrecimiento.
El bioflm residual hace la superficie mas rugosa.
El cloro suele retirar el polisacrido pero no las bacterias.
Comportamiento de los organismos supervivientes a estos
ataques con cloro.
Seleccin de los organismo menos sensibles al saneamiento
qumico.

Deteccin y contaje de
bacterias
El mtodo de contaje tradicional no tiene porque
reflejar la realidad.
Liberacin mnima de bacterias al medio del que
tomamos la muestra.
Problemas al contar colonias aisladas.
Medios de crecimiento no adecuados.
Grandes fluctuaciones temporales en el contaje
de bacterias de zonas puntuales de nuestra
superficie.

Aplicacin de bioflms: Biorremediacin

- Los biofilms son empleados como mtodo de
inmovilizacin de bacterias en biorremediacin.
- Se emplean en tratamiento de aguas por:
1. Mayor resistencia a la toxicidad
2. Menor impacto ante variaciones de pH y T
3. Mayor eficacia degradacin (diversidad enzimtica,
utilizacin de subproductos)
4. Posibilidad de intercalar en poco espacio procesos
aerobios y anaerobios (eliminacin de nitrato).

Aplicacin de bioflms: Biorremediacin

-La aplicacin de biofims se da en reactores
de lecho fijo o en suspensin

-Ejemplos:
1.Biodiscos
2.Reactores de lecho en suspensin (flujo
ascendente, etc.)

Ejemplos de biorremediacin con biofilms

REACTOR LECHO
EN SUSPENSIN

BIODISCOS