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Le phénomène d'ARN interférence (RNAi, RNA interference)

Le RNA silencing: mécanisme d’inactivation de
mécanisme de défense naturel.
l’expression
un nouveau moyen d'inactivationdes
des gène
gènes

C'est un processus post-transcriptionnel qui est déclenché par

l'introduction d'ARN double-brin (ARNdb) dans la cellule et qui mène
à l'inactivation d'un gène d'une manière séquence-spécifique.
.
 ARN INTERFERENCE

• Principe

• Phénomène d'ARN interférence est un

mécanisme en deux temps qui se déroule
dans le cytoplasme :
 ARN INTERFERENCE

• on peut résumer le mécanisme de l'interférence à RNA ainsi

• - Si un ARN double-brin (DsRNA) apparaît dans la cellule (qu'il soit introduit,

ou issu du génome), il est coupé par l'enzyme Dicer à une longueur précise de
21-23bases (cela devient un siRNA)

• - Un complexe enzymatique RISC le prend en charge, sépare les deux brins du

siRNA et lorsque le brin siRNA trouve à s'apparier sur une ARN messager, une
partie de RISC (slicer ou argonaute) coupe cet ARNm.

• -L'ARNm ainsi exposé est rapidement dégradé par d'autres enzymes.

• En effet les nouvelles extrémités produites n'ont pas de 5' cap ni de
terminaison polyAAAAAA qui protègent normalement ces extrémités contre
les ribonucléases.
 ARN INTERFERENCE

• - Fin de la traduction de cet ARNm.

• La possibilité de désactiver (ou au moins fortement limiter l'expression : on
réduit de 80-90%) les gènes à un endroit et à un moment donné sans devoir
créer un organisme génétiquement modifié.

Applications
• D'innombrables applications en recherche et bientôt en médecine ( désactiver
des gènes pour lutter contre les virus, le cancer, ou comme thérapie génique
paraît très prometteur).
Mécanisme générale de l’ARN
interférence
 ARN INTERFERENCE

• A) génération des siARN

• introduction de l'ARNdb dans la cellule, il y a dégradation de

cet ARNdb en petits ARN interférents (siARN, small
interfering RNA) d'une longueur de 21 à 25 nucléotides.
• Cette dégradation se fait par une RNAse III spécifique des
ARNdb appelée Dicer.
• siRNA double brin avec une extrémité 5‘ phosphate et une
extrémité 3'OH et 2 ou 3 nucléotides non appariés à l'extrémité
3'.
 ARN INTERFERENCE

• B) Activation du complexe RISC

• signaux pour activer le complexe protéique appelé RISC
(RNA-Induced Silencing Complex)
Ceux-ci sont incorporés dans le complexe RISC où ils sont
déroulés grâce à l'activité hélicase du complexe. Cette étape
est dépendante de l'ATP. Une fois déroulés, le simple brin anti-
sens guide le complexe RISC à l'ARNm de séquence
complémentaire et il en résulte un clivage endonucléolytique
de l'ARNm. Ce qui conduit à l'inhibition de l'expression des
protéines correspondantes.
Mécanisme générale
de l’ARN intérférence
 ARN INTERFERENCE

• Application

• Le phénomène de l'ARN interférence est apparu comme un

outil important pour disséquer et comprendre la fonction des
gènes.
 ARN INTERFERENCE

• Développements thérapeutiques

• L'ARN interférence devient rapidement une méthode importante pour

analyser la fonction des gènes chez les eucaryotes.

• Cette technique est prometteuse pour le développement de l'extinction de

gènes à des fins thérapeutiques. cancers et autres maladies infections
virales telles que le HIV la sclérose latérale amyotrophique (maladie
neurodégénérative progressive et mortelle.
Mécanisme d’action des miARN
 Importance biomédicale des protéines
• Les protéines exécutent des rôles multiples et sont donc d’une importance
vitale.

► Le cytosquelette, maintient la forme cellulaire et l'intégrité physique.

► L'actine et des filaments de myosine, L'hémoglobine, les anticorps , les enzymes, les
récepteurs cellulaires, hormones etc

• La médecine moléculaire a pour but l'identification de protéines dont la présence,

l'absence, ou le manque sont associés aux conditions physiologiques spécifiques ou à
des maladies (cible thérapeutique, diagnostique moléculaire etc).
Méthodes d’études des protéines: exploration d’une protéine
 Électrophorèse bidimensionnelle 2D

• Deux méthodes électrophorétiques sont utlilisées pour analyser les

protéines :
– 1. la focalisation isoélectrique (gradient de pH).
– 2. l’électrophorèse de zone (SDS-PAGE, masse moléculaire) 3. révélation

• Les deux méthodes sont souvent couplées pour réaliser une séparation
bidimensionnelle à haute résolution.
 Exploration d’une protéine
• Étude d’une protéine spécifique

• Anticorps:
• épitope (Ac monoclonal)
• plusieurs épitopes (Ac polyclonal)
• 1- Dosage radio-immunologique
• 2-Dosage immunoenzymatique
• 3- Western blot
• 4- Immunohistochimie
 Western blot

• 1. Électrophorèse
• 2. Electro transfert sur membrane
• 3. Incubation avec anticorps
• 4. Lavage
• 5. Révélation