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1 Fundamentos del mtodo y etapas


El mtodo Kjeldahl mide el contenido en nitrgeno de una muestra. El contenido en
protena se puede calcular seguidamente, presuponiendo una proporcin entre la protena y
el nitrgeno para el alimento especfico que est siendo analizando, tal y como
explicaremos ms adelante.
Este mtodo puede ser dividido, bsicamente en 3 etapas: digestin o mineralizacin,
destilacin y valoracin. El procedimiento a seguir es diferente en funcin de si en la etapa
de destilacin el nitrgeno liberado es recogido sobre una disolucin de cido brico o
sobre un exceso conocido de cido clorhdrico o sulfrico patrn. Ello condicionar la forma
de realizar la siguiente etapa de valoracin, as como los reactivos empleados. En este
artculo docente se explica el primer procedimiento, cuando el nitrgeno se atrapa sobre
cido brico.
(a) Etapa de digestin: un tratamiento con cido sulfrico concentrado, en presencia de un
catalizador y ebullicin convierte el nitrgeno orgnico en in amonio, segn la ecuacin 1.
Catalizadores/ calor n - C -NH2 + H2SO4 CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2 (ec. 1)
Procedimiento: Se introducen de 1 a 5 g de muestra un tubo de mineralizacin y se ponen 3
g de catalizador que suele estar constituido por una mezcla de sales de cobre, xido de
titanio o/y xido de selenio. De forma habitual se utiliza como catalizador una mezcla de
K2SO4 : CuSO4 : Se (10:1:0,1 en peso). Despus se adicionan 10 mL de H2SO4
concentrado y 5 mL de H2O2. Posteriormente se digiere a 420 C durante un tiempo que
depende de la cantidad y tipo de muestra. Se sabe que la digestin ha terminado porque la
disolucin adquiere un color verde esmeralda caracterstico.
En esta etapa, el nitrgeno proteico es transformado en sulfato de amonio por accin del
cido sulfrico en caliente. En la actualidad, para llevar a cabo este proceso se utilizan
digestores automticos que son capaces de digerir un nmero determinado de muestras al
mismo tiempo (imagen 1).
Imagen 1. Unidad de digestin
(b) Etapa de destilacin (imagen 2): se alcaliniza la muestra digerida y el nitrgeno se
desprende en forma de amoniaco (ecuacin 2). El amoniaco destilado se recoge sobre un
exceso desconocido de cido brico (ecuacin 3).
(NH2)SO4 + 2 NaOH 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O (ec. 2)
NH3 + H3BO3 NH4 + H2BO3 (ec. 3)
Procedimiento: Despus de enfriar se adicionan al tubo de digestin 50 mL de agua
destilada, se pone en el soporte del destilador y se adiciona una cantidad suficiente de
hidrxido sdico 10 N, en cantidad suficiente (50 mL aprox.) para alcalinizar fuertemente el
medio y as desplazar el amoniaco de las sales amnicas. El amoniaco liberado es
arrastrado por el vapor de agua inyectado en el contenido del tubo durante la destilacin, y
se recoge sobre una disolucin de cido brico (al 4 % p/v).

Imagen 2. Unidad de destilacin


(c) Etapa de valoracin:
La cuantificacin del nitrgeno amoniacal se realiza por medio de una volumetra cidobase del in borato formato, empleando cido clorhdrico o sulfrico y como indicador una
disolucin alcohlica de una mezcla de rojo de metilo y azul de metileno (ecuacin 4). Los
equivalentes de cido consumidos corresponden a los equivalentes de amoniaco destilados.

CONCLUSIONES: * El mtodo se basa en la destruccin de la materia orgnica con cido


sulfrico concentrado, formndose sulfato de amonio que en exceso de hidrxido de sodio
libera amonaco, el que se destila recibindolo en: a) Acido sulfrico donde se forma sulfato
de amonio y el exceso de cido es valorado con hidrxido de sodio en presencia de rojo de
metilo, o b) Acido brico formndose borato de amonio el que se valora con cido
clorhdrico
* Existe una gran necesidad del anlisis de protenas con el fin de obtener el contenido
proteico total, composicin de aminocidos contenido de alguna protena particular,
contenido proteico durante el aislamiento y purificacin de una protena, nitrgeno no
proteico y valor nutritivo relacionados con un alimento especfico a analizar. * Constituyen
fuentes de error en del mtodo de Kjeldahl son: la inclusin de nitrgeno no proteico como
parte de la protena; la prdida de nitrgeno durante la digestin, la digestin incompleta
de la muestra.