Determinacin de metabolitos secundarios y

ensayo de biotoxicidad en Artemia salina del

caldo de cultivo de Pleurotus ostreatus y del
extracto acuoso de Ganoderma sp.

INTRODUCCION
En la actualidad, consumir alimentos que contengan gran cantidad
de nutriente y que tenga sobre todo, tenga un efecto positivo sobre la
salud del consumidor es esencial para el mercado y para la sociedad que
est al tanto de la existen de esto alientos alimentos. Esto nos trae a la
mente a los hogos, que de tiempos inmemorables son conocidos por su
alta capacidad de almacenar nutrientes necesarios para el organismos,
sino que tambin tiene un efecto positivo en aquel que lo consume. En
la actualidad se est comercializando hongos como Pleurotus ostreatus y
otros no muy conocidos estn empezando a llamar la atencin como los
hongos del genero ganoderma.
Los hongos Ganoderma conocidos por la cultura japons como
Reishi y por cultura china como "Ling Zhi" por ms de 4.000 aos. Sus
milagrosas aplicaciones han sido empleados por las culturas orientales
durante siglos, pero slo se han introducido en el mundo occidental en
los ltimos 30 aos. Reishi es el legendario rey de todos los
medicamentos considerados como hierbas superiores, debido a su
eficacia mdica y la ausencia de efectos secundarios y toxinas en su
consumo. Los hongos Reishi han sido ampliamente utilizados en la
medicina por los chinos tradicionales como un enfoque alternativo para
la salud y el tratamiento de las enfermedades. Sin embargo, este
enfoque ha no ha sido ampliamente respaldado por la medicina
occidental debido a la falta de amplias investigaciones realizadas por los

profesionales. Un nmero creciente de mdicos e investigadores

Occidentales estn trabajando ahora para a entender mejor las terapias
a base de hierbas como el consumo de reishi rojo para que puedan
ayudarle a tomar decisiones en cuestiones mdicas (Ramacharaka,
2012).
El Pleurotus es un hongo comestible gastronmicamente de
primersima calidad. Su color es blanco o castao, aunque hay
variedades azuladas y rosadas. Su carne es compacta en el sombrero y
fibrosa y blanca en el pie con sabor y olor agradable. Esta especie es
cosmopolita y crece saprofiticamente en ambientes naturales sobre
troncos de rboles cados y otras plantas leosas en descomposicin. Es
un hongo semianaerbico que soporta un 32 % de CO2 y fija el nitrgeno
atmosfrico. Debido a sus poco requerimientos nutricionales y a su fcil
adaptacin a los ambientes de cultivo, requiere de tcnicas simples y
baratas para su cultivo y sus desechos, con capacidad para degradar
materiales lignocelulsicos, por lo que quedan convertidos en

pienso

animal. En ese sentido resulta interesante obtener un alimento tan rico

en protenas con la simple conversin de residuos agroindustriales
(Guzmn y Mata, 1993).
El

objetivo

del

presente

trabajo

es

determinar

los

metabolitos

secundarios que contienen el medio de cultivo de Pleurotus ostreatus y

el extracto acuosos de Ganoderma spp. y determinar el grado de
toxicidad que tienes estas soluciones sobre Artemia salina.

MATERIAL Y MTODOS
Material biolgico
Los hongos tanto Ganoderma sp. Como Pleurotus ostreatus fueron
proporcionados por el profesor Jos Arellano Barragan.
Obtencin del medio de cultivo de Pleurotus ostreatus
Se coloc el hongo en un matraz Pyrex de 1000 ml, el cual forma parte
del equipo de reflujo continuo, se le agrego un volumen de agua hasta
que cubra completamente al hongo y sobrepase unos 2 cm. Luego se
hizo hervir durante 12 horas y finalmente se filtr al vaco. El medio de
cultivo se coloc en un envase de vidrio y se mantuvo en refrigeracin.
Obtencin del extracto de Ganoderma sp.
Se coloc el hongo molido en el matraz, del equipo de reflujo continuo,
se le agreg agua y se hizo hervir durante 12 horas, se filtr al vaco. El
extracto obtenido de coloco en un encase de vidrio y se mantuvo en
refrigeracin.
MARCHA FITOQUMICA PRELIMINAR DEL MEDIO DE CULTIVO DE
Pleurotus ostreatus
Fraccin A

Se coloc una pequea cantidad del medio de cultivo de Pleurotus

ostreatus en 2 tubos de ensayo para efectuar la Fraccin A.
Determinacin de taninos: se le agreg la solucin de cloruro
frrico (FeCl3).
Determinacin de Flavonoides: se realiz

la prueba de

Shinoda que consiste en agregar limadura de Magnesio

y unas

gotas de HCl cc.

Fraccin C
Se coloc 7 ml del medio de cultivo en un tubo de ensayo y se evapor
a bao Mara, se agreg 5 gotas de HCl 1%. Luego se verti el contenido
del tubo de ensayo a una pera de decantacin, se le adicion cloroformo
y se agit vigorosamente. Se dej reposar hasta obtener 2 fases, la fase
clorofrmica se utiliz para trabajar la fraccin C y la fase acuosa se
conserv para trabajar la fraccin D.
Se coloc una pequea cantidad de la fase clorofrmica en 2 tubos de
ensayo, se llev a bao Mara hasta sequedad.
Determinacin de alcaloides: en un tubo se agreg unas gotas
del reactivo de Mayer.
Determinacin de esteroides: en el otro tubo se agreg 5 gotas
de cido actico y 2 gotas de cido sulfrico.
Fraccin D y E
Se utiliz la fase acuosa de la fraccin C a la cual se le agreg
cloroformo-

etanol

3:

2,

se

agit

vigorosamente

obteniendo

nuevamente dos fases la fase clorofrmica etanlica, se utiliz para la

fraccin D y la fase acuosa se utiliz para la fraccin E.
Fraccin D

Se coloc una pequea cantidad de la fase orgnica en tres tubos de

ensayos y se llev a bao Mara hasta sequedad.
Determinacin de flavonoides: En el tubo 1 con la muestra
seca se agreg unas gotas de alcohol, limadura de Mg y 2 gotas
HCl cc.
Determinacin de alcaloides: En el tubo 2 con la muestra seca
se agreg 5 gotas de HCl 1% y 2 gotas del reactivo de Mayer.
Determinacin de esteroides: En el tubo 3 con la muestra seca
se agreg 3 gotas de cido actico glacial y 2 gotas de cido
sulfrico.
Fraccin E
Determinacin de flavonoides: Se coloc en un tubo de ensayo
una pequea cantidad de la fase acuosa, se agreg limaduras de
Magnesio y unas gotas de HCl cc.
MARCHA FITOQUMICA PRELIMINAR DEL EXTRACTO ACUOSO DE
Ganoderma sp.
Para Ganoderma sp. Solo se realiz la fraccin D y E.
Se coloc 7 ml del extracto acuoso en un tubo de ensayo y se evapor a
bao Mara, se agreg 5 gotas de HCl 1%. Luego se verti el contenido
del tubo de ensayo a una pera de decantacin, se le adicion cloroformo
y se agit vigorosamente. Se dejo reposar hasta obtener 2 fases, con la
fase acuosa se trabaj la fraccin D.
Fraccin D y E
Se utiliz la fase acuosa de la fraccin C a la cual se le agreg
cloroformo-

etanol

3:

2,

se

agit

vigorosamente

obteniendo

nuevamente dos fases la fase clorofrmica etanlica, se utiliz para la

fraccin D y la fase acuosa se utiliz para la fraccin E.
Fraccin D
Se coloc una pequea cantidad de la fase orgnica en tres tubos de
ensayos y llevar a bao Mara hasta sequedad.
Determinacin de flavonoides: En el tubo 1 con la muestra
seca se agreg unas gotas de alcohol, limadura de Mg y 2 gotas
HCl cc.
Determinacin de alcaloides: En el tubo 2 con la muestra seca
se agreg 5 gotas de HCl 1% y 2 gotas del reactivo de Mayer.
Determinacin de esteroides: En el tubo 3 con la muestra seca
se agreg 3 gotas de cido actico glacial y 2 gotas de cido
sulfrico.
Fraccin E
Determinacin de flavonoides: se coloc en un tubo de ensayo
una pequea cantidad de la fase acuosa, se agreg limaduras de
Magnesio y unas gotas de HCl cc.
Prueba de toxicidad en Artemias salina de medio de cultivo de
Pleurotus ostreatus
Se realiz un diseo experimental de cuatro tratamientos
problema y un control con tres repeticiones cada uno, las
concentraciones fueron de 50%, 25%, 12,5% y 6,25% del medio de
cultivo de Pleurotus ostreatus. El control fue agua de mar, para dar
validez a nuestro diseo experimental. Al transcurso de 24 horas se
realiz el contero de las artemias sobrevivientes.

Prueba de toxicidad en Artemias salina de extracto acuoso de

Ganoderma sp
Se realiz un diseo experimental de cuatro tratamientos
problema y un control con tres repeticiones cada uno, las
concentraciones fueron de 50ppm, 25ppm, 12,5ppm y 6,25ppm del
extracto acuoso de Ganoderma sp. El control fue agua de mar, para dar
validez a nuestro diseo experimental. Al transcurso de 24 horas se
realiz el contero de las artemias sobrevivientes
Posteriormente se realiz el anlisis estadstico correspondiente para
cada dselo experimental.

RESULTADOS:
Tabla N 01. Resultados de la marcha fitoqumica del medio de
cultivo de Pleurotus ostreatus
RESULTADOS DE LA MARCHA FITOQUMICA DEL MEDIO DE CULTIVO DE
Pleurotus ostreatus
FRACCIN
PRUEBA
RESULTADO
Taninos
Positivo
FRACCIN A
Flavonoides
Positivo
FRACCIN B
Esteroides
Positivo

FRACCIN C
FRACCIN D
FRACCIN E

Cardenlidos
Alcaloides
Esteroides
Flavonoides
Alcaloides
Esteroides
Flavonoides

Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo

Tabla N 02. Resultados de la marcha fitoqumica del extracto

acuoso de Ganoderma spp.
RESULTADOS DE LA MARCHA FITOQUMICA DEL EXTRACTO ACUOSO
DE
Ganoderma spp.
FRACCIN
PRUEBA
RESULTADO
Flavonoides
Positivo
FRACCIN D
Alcaloides
Positivo
Esteroides
Positivo
FRACCIN E
Flavonoides
Positivo

Tabla N 03. Supervivencia de los individuos de Artemia salina

que fueron expuestas a las concentraciones de 50%, 25%, 12.5% y
6.25% del caldo de cultivo de Pleurotus ostreatus.
N de Artemia salina que sobrevivieron a las
concentraciones del caldo de cultivo de Pleurotus
ostreatus.
Tratamien
T1
T2
T3
T4
T5
to
Control
6.25%
12.5%
25%
50%
/Repeticio
(0%)

nes
R1
R2
R3

9
9
10

9
10
10

10
10
10

8
8
8

10
10
8

Tabla N 04. Supervivencia de los individuos de Artemia salina

que fueron expuestas a las concentraciones de 50%, 25%, 12.5% y
6.25% del extracto acuoso de Ganoderma spp.
N de Artemia salina que sobrevivieron a las
concentraciones del caldo de cultivo de Ganoderma spp.
Tratamien
T1
to
T2
T3
T4
T5
Control
/Repeticio
6.25%
12.5%
25%
50%
(0%)
nes
R1
9
7
6
3
0
R2
9
8
4
4
0
R3
10
6
4
3
0

ANLISIS ESTADSTICO DE LOS DATOS DE Artemia salina

EN LAS CONCENTRACIONES DE Pleurotus ostreatus.

Grfico N 01. Grfico de medias para los datos de N de

Artemia salina expuesta a los concentraciones de caldo de
cultivo de Pleurotus ostreatus.
Tabla N 05. Tabla ANOVA para los datos de N de Artemia
salina expuesta a los concentraciones de caldo de cultivo
de Pleurotus ostreatus.
Fuente

Suma de Cuadrados

Gl

Cuadrado Medio

Razn-F

Valor-P

Entre grupos

6.93333

1.73333

4.33

0.0273

Intra grupos

4.0

10

0.4

Total (Corr.)

10.9333

14

Tabla N 06. Pruebas de Mltiple Rangos para los datos de

N de Artemia salina expuesta a los concetraciones de
caldo de cultivo de Pleurotus ostreatus
Mtodo: 95.0 porcentaje LSD

TRATAMIENTOS

Casos

Media

Grupos Homogneos
X

8.0

9.33333

9.33333

9.66667

10.0

Contraste

Diferencia

+/- Lmites

1-2

-0.333333

1.15061

1-3

-0.666667

1.15061

1.33333

1.15061

1-5

1.15061

2-3

-0.333333

1.15061

1.66667

1.15061

0.333333

1.15061

2.0

1.15061

0.666667

1.15061

-1.33333

1.15061

1-4

2-4

Sig.

2-5
3-4

3-5
4-5

* indica una diferencia significativa.

ANLISIS ESTADSTICO DE LOS DATOS DE Artemia salina

EN LAS CONCENTRACIONES DE Ganoderma spp.

Grfico N 02. Grfico de medias para los datos de N de

Artemia salina expuesta a los concentraciones de extracto
acuoso de Ganoderma spp.
Tabla N 07. Tabla ANOVA para los datos de N de Artemia
salina expuesta a los concentraciones de extracto acuoso
de Ganoderma spp.

Entre grupos

Suma de
Cuadrados
151.733

Intra grupos

6.0

10

Total (Corr.)

157.733

14

Fuente

Gl

Cuadrado Medio

Razn-F

Valor-P

37.9333

63.22

0.0000

0.6

Tabla N 08. Pruebas de Mltiple Rangos para los datos de

N de Artemia salina expuesta a los concentraciones de
extracto acuoso de Ganoderma spp.
Mtodo: 95.0 porcentaje LSD
TRATAMIENTOS
5
4
3
2
1

Casos
3
3
3
3
3

Media
0
3.33333
4.66667
7.0
9.33333

Grupos Homogneos
X
X
X
X
X

Contraste

Sig.

Diferencia

+/- Lmites

1-2

2.33333

1.4092

1-3
1-4
1-5

*
*
*

4.66667
6.0
9.33333

1.4092
1.4092
1.4092

2-3
2-4
2-5

*
*
*

2.33333
3.66667
7.0

1.4092
1.4092
1.4092

3-4
3-5
4-5

*
*

1.33333
4.66667
3.33333

1.4092
1.4092
1.4092

* indica una diferencia significativa.

DISCUSIN:

Al realizar una marcha fitoqumica preliminar se originaron resultados

positivos por la presencia de diversos metabolitos secundarios, presentes
en el hongo Pleurotus ostreatus, estos resultados pueden ser avalado por
otras investigaciones como la de Chidinma y Chigozie (2008) que
trabajaron con el gnero Pleurotus spp., en donde lograron identificar que
es rica en flavonoides y taninos, moderadamente rica en alcaloides. Segn
Breene (1990) P. ostreatus, tiene una buena cantidad de esteroides.

Rada (2013) indica que el hongo Ganoderma spp. contiene gran cantidad
de antioxidantes como polifenoles y flavonoides. Adems Snchez (2013)
argumenta que Ganoderma spp. entre sus constituyentes activos presenta
alcaloides. Con estos reportes podemos avalar nuestros resultados
positivos en la marcha fotoqumica preliminar realizados en la especie
Ganoderma spp.

Referente a la prueba de toxicidad de P. ostreatus sobre Artemia salina

podemos validar nuestros resultados con otras investigaciones como la de
Nieto (2008) que en su trabajo afirma que P. ostreatus no presenta toxicidad
sobre A. salina en concentraciones inferiores a 1.000 mg/ml.

Sasidharan y col. (2011) en su prueba de toxicidad en Artemia salina no

mostr resultado de toxicidad significativa para la exposicin a corto plazo
del extracto de metanol de Ganoderma spp. (LC50 valor de 2,214 mg / ml
(6 h) y unos resultados significativos de toxicidad para la exposicin a largo
plazo (LC50 del valor de 0.640 mg / ml (24 h), es por eso que podemos
deducir que exposiciones a largo plazo en un extracto de Ganoderma spp.
se origina mayor toxicidad en Artemia salina y por ende menor
supervivencia de los especmenes.

CONCLUSION:

Mediante la marcha fotoqumica preliminar se determin que Pleurotus

ostreatus da reaccin positiva en la Fraccin A (Taninos y Flavonoides),
Fraccin B (Esteroides y Cardenlidos), Fraccin C (Alcaloides y
Esteroides), Fraccin D (Flavonoides, Alcaloides y Esteroides) y Fraccin E
(Flavonoides).

Mediante la marcha fotoqumica preliminar se determin que Ganoderma

spp. da reaccin positiva en la Fraccin D (Flavonoides, Alcaloides y
Esteroides) y fraccin E (Flavonoides).

En la prueba de toxicidad del caldo de cultivo de Pleurotus ostreatus y

extracto acuoso de Ganoderma spp. sobre Artemia salina, se determin
que existe mayor supervivencia de especmenes con el caldo de cultivo de
Pleurotus

ostreatus,

evidenciando

que

existe

mayor

toxicidad

de

Ganoderma spp.

BIBLIOGRAFIA:
-

Chidinma, C. y Chigozie, J. 2008. Chemical profile of Pleurotus tuberregium

(Fr) Sings scleroria. The Pacific Journal of Science and Technology.

10(1):295-299.
Guzmn, G. y Mata, G. 1993. El cultivo de los hongos comestibles, con
especial atencin a especies tropicales y subtropicales en esquilmos y

residuos agro-industriales. Instituto Politcnico Nacional. Mxico.

Ijeh, I., Okwujiako, I., Nwosu, P. y Nnodim, H. 2009. Phytochemical
composition of Pleurotus tuber regium and effect of this dietary incorporation
on body/organ weights and serum triacyglycerols in albino mice. Journal of

medicinal Plants Research. 3(11): 939-943.

Nieto R, Ivonne J; Salama, Ahmed M; Catao P, Jorge E; Chegwin A,
Carolin. 2008. Determinacin de la toxicidad de Pleurotus ostreatus,
Pleurotus pulmonarius y Paxillus involutus sobre Artemia salina. Rev

Iberoam Micol; 25(3): 186-187, 2008. ilus. Article em En | IBECS | ID: 75041
Rada A. 2013. 30 Razones Para Consumir Productos GanoLife con
Ganoderma

Lucidum.

Ganoderma

es

salud.

Disponible

http://www.ganodermaessalud.com/30-razones-para-consumir-ganocafe/

en:

Ramacharaka, Y. 2012. El poder de la Ganoderma en la Salud de hoy.

Asociacin AMYCO.
Snchez W. 2013. Ganoderma lucidum segn el Dr. Waldemar Snchez.
Disponible

en

http://ganosalud.jimdo.com/ganoderma-segun-el-dr-

waldemar-sanchez/
Sasidharan S., O. Jinxuan, L. Yoga Latha and S. Amutha. 2011. In vivo
toxicity study of Ganoderma boninense. Institute for Research in Molecular
Medicine (INFORMM), Universiti Sains Malaysia, 11800, USM, Penang,
Malaysia. African Journal of Pharmacy and Pharmacology Vol. 5(16), pp.
1819-1823, 29 October

ANEXOS:
IMAGEN 1: Extracto acuoso de Ganoderma spp.

IMAGEN 2: Extracto de Ganoderma spp. En el sistema de reflujo.

IMAGEN 3: Filtrado al vaco del extracto acuoso de Ganoderma spp.

IMAGEN 4: Dilucin del extracto acuoso de Ganoderma spp. Con alcohol de 960
para la obtencin de precipitados de -glucanos.

IMAGEN 5: Precipitacin de -glucanos del extracto acuoso de Ganoderma spp.

por efecto del alcohol etlico.

IMAGEN 6: separacin de la fase organica de la fase acuosa en extracto

acuoso de Ganoderma spp..

IMAGEN 7: Cultivo de Artemia salina.

IMAGEN 8: Dilucin del caldo de cultivo de Pleurotus spp. A tres

concentraciones diferentes cada uno con tres repeticiones. Se realiz la misma
operacin para la dilucin del extracto acuoso de Ganoderma spp.

IMAGEN 9: Incorporacin de 10 individuos de Artemia salina por cada repeticin

del extracto acuoso de Ganoderma spp. y del caldo de cultivo de Pleurotus
spp.

IMAGEN 10: Prueba de toxicidad del extracto acuoso de Ganoderma spp. en

Artemia salina.

IMAGEN 11: Prueba de toxicidad del caldo de cultivo de Pleurotus spp. en

Artemia salina.

IMAGEN 12: conteo de las Artemia salina sobrevivientes a los extractos acuoso
de ganodema sp. Y Pleurotus ostreatus.