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acotinasa: estructura
cristalina del complejo
citrato de la S642A con
una resolucin de 1,8
angstroms.
(Fe4) tras su activacin. Este hierro interacta con grupos carboxilo e hidroxilo del
sustrato y con molculas de solvente. Anteriormente se han obtenido estructuras de alta
resolucin de la enzima libre de sustrato y de complejos de la enzima unida al isocitrato
o al inhibidor, ya que la enzima nativa cristaliza preferentemente unida al isocitrato, por
lo que no ha sido posible obtener cristales de la enzima unida al citrato o al cisaconitato.
El mutante S642A se eligi para el anlisis estructural basandose en las propiedades
cinticas y de EPR. Este mutante presenta la mayor reduccin de la V max con respecto a
la enzima nativa y una Km ligeramente superior. Adems, exhibe una interaccin nativa
del citrato con el cluster [4Fe-4S].
En el mecanismo propuesto, la Ser642 ser la base que abstrae un protn del C del
citrato (C del isocitrato). La estructura cristalina de los complejos citrato e isocitrato
del mutante S642A , da apoyo directo a la suposicin de la existencia del modo citrato.
La estructura cristalina de los complejos citrato e isocitrato del mutante S642A de la
acotinasa mitocondrial fue refinada a 1,8 y 2 angstroms de resolucin respectivamente.
Figura 2. Superposicin de los complejos isocitrato de la aconitasa. a) Los complejos isocitrato (verde
oscuro) con la enzima nativa (Ser642) y con el mutante (Ala642); b) El complejo isocitrato (verde
oscuro) con la enzima nativa (Ser 642) y el complejo citrato (verde claro) con el mutante (Ala642).
En el complejo isocitrato del mutante, el sustrato de une de una manera muy similar que
en la enzima nativa, demostrando que el reemplazamiento de la Serina por Alanina no
altera el modo de unin del sustrato al sitio activo. (Figura 2a)
En el caso del complejo citrato, el citrato est coordinado directamente al Fe4 del
cluster a travs del C carboxlico y el tomo de oxigeno del grupo hidroxilo. Dando
lugar a la inversin del enlace C-C con respecto al isocitrato lo que confirma la
presencia del modo citrato en el mecanismo (Figura 2b).