El uso de Lippia alba (Mill.) N. E. Br. ex Britt. & Wills.

* / Verbenaceae (falso
melissa) en la medicina popular brasilea se debe, principalmente, a las
propiedades sedantes
atribuido a esta especie. Estas propiedades y las caractersticas sensoriales
de sus hojas son la razn de lo que esta especie se llama falsa melissa. El
sedante
propiedades atribuidas a L. alba son muy a menudo relacionados con la
presencia de aceites voltiles (Craveiro et al., 1988). Algunos quimiotipos de
L. alba se han identificado en el
Noreste de Brasil, citral, b-mirceno, limoneno; citral, limoneno y carvona,
limoneno, que han demostrado
anticonvulsivo entre otros efectos centrales (Vale et al.,1999). Sin embargo,
un intento de clasificar los subtipos utilizando la composicin de aceite
voltil ha sido difcil debido
a la alta variabilidad de este tipo de marcadores (Gomes et al., 1993; Zoghbi
et al., 1998). El ms comnmente preparado utilizado en la medicina
popular es una infusin de
las hojas en agua caliente que puede indicar que el voltil fraccin podra
tener un papel en la putativo CNS actividad, como se inform en nuestro
estudio preliminar con el
extractos hydroethanol (Santos et al., 1998). Sin embargo, en ambos tipos
de preparacin informaron, infusin o hydroethanol extracto, la presencia de
aceite voltil no puede ser
descartado por completo. El presente trabajo fue diseado para evaluar el
sedante, anticonvulsivante y miorrelajante efectos de los extractos lquidos
L. alba que contienen slo el
fraccin no voltil de la planta, as como a determinar el contenido de
flavonoides totales en estos extractos. Adems, se evala la viabilidad
tecnolgica de la preparacin en polvo secado por aspersin y su actividad
en el SNC.
2.1. material
Las partes areas de L. alba (Mill.) N. E. Br. ex Britt. Y Wils. se recogieron en
la ubicacin de la Costa da Lagoa, Floriano' polis, Santa Catarina, Brasil, en
abril y
Agosto de 1998. Bono especmenes fueron depositados en el herbario del
CIE (UFSC, Floriano' polis, Carolina del Sur) con el nmero 31 260. Despus
se seca a 50 8C, el material era

triturada y una mezcla (1: 1) del material a base de hierbas de los dos
cosecha se us para preparar los extractos lquidos.
2.2 Preparacin de extractos lquidos
Tres extractos lquidos, ES40%, ES60 y ES80%% se prepararon de
percolacin etanol 40, 60 o 80% (v / v) a travs de 50 g de polvo de L. alba
en un flujo de 1,5 ml / min. Anterior maceracin se llev a cabo durante 24
h utilizando 12% del volumen de disolvente. Cada extracto lquido se filtr y
el volumen se complet hasta 500 ml con el disolvente correspondiente.
Para las pruebas farmacolgicas, 250 ml cada uno extractos se
concentraron previamente al vaco a 40 ml.
2.2.1. residuo seco
El residuo seco en% ES40, ES60%, ES80%, se determin segn el mtodo
de la Farmacopea Alemana (DAB 9), utilizando 20 g de las muestras. Cada
anlisis se repiti tres veces. Este parmetro representa las sustancias
extractivas no voltiles totales en los extractos lquidos y las dosis
administradas en los ensayos farmacolgicos se calcul basndose en este
parmetro.
2.3. El contenido total de flavonoides El contenido de flavonoides totales en
ES40%, ES60% y
ES80% se determin de acuerdo con el mtodo general DAB 9, utilizando
AlCl3 5% (m / v). Etapa de purificacin anterior se llev a cabo con muestras
de ES40% (37,98 g),
ES60% (27,36 g) y ES80% (17,32 g) que se diluy hasta 100 ml con etanol
al 40, 60 y 80% (v / v), respectivamente. Diez mililitros de cada una de estas
soluciones eran
diluido a 25 ml y un volumen de 1 ml de cada uno se purificaron utilizando
columna de fase inversa slido (Sep-Pak , C18, Vac 3 ml, 500 mg, Waters,).
Las muestras se
se eluy con etanol al 40% (v / v) y el volumen se complet hasta 10 ml.
Estas soluciones se utilizaron como soluciones de compensacin. El mismo
procedimiento se emplea para la
muestras, con adicin de 1 ml de AlCl3 5% antes de que constituyen 10 ml.
La absorcin de estas soluciones de muestra se midi a 390 nm, despus de
20 min. El contenido de flavonoides total se calcula a partir de la ecuacin
C? AFd ME1% 1 cm donde C es el contenido en flavonoides total expresado
en gramos de la apigenina en 100 g de muestra, A es la absorcin medido
(UA), Fd es un factor de dilucin (1250), m es el peso de la muestra (g) y E1
cm 1% es la absorcin especfica de apigenina? compleja / AlCl3 (336.5).
Cada

donde C es el contenido de flavonoides total, expresada como gramos de

apigenina en 100 g de muestra, A es la absorcin medido (AU), Fd es un
factor de dilucin (1250), m es
el peso de la muestra (g) y E1 cm 1% es la absorcin especfica de
apigenina? complejo / AlCl3 (336,5). Cada anlisis se repiti tres veces.
2.5.1. Animales y procedimientos generales para Adultos ratones machos
suizos, con un peso de 35? / 40 g, se utilizaron en todos los estudios. Los
animales fueron criados y mantenidos en un Desmadre bajo luz controlada
(de 12 h luz: 12 h oscuridad a las 07:00 h) y la temperatura (229/1 8C)
condiciones, recibiendo agua del grifo y comida ad libitum, excepto durante
el experimentos. Los animales recibieron p.o. los extractos en dosis
correspondientes a 200 mg de residuo seco por kilogramo de peso corporal
(200 mg / kg) una dosis basado en nuestros estudios anteriores (Klueger et
al, 1997;.. Santos et al, 1998). Para eso, L. alba concentr extractos (ES40%,
ES60 y ES80%%) se diluyeron en una cantidad adecuada de
solucin fisiolgica (NaCl 0,9%) hasta la concentracin de 20 mg / ml del
residuo seco. Cada animal recibi una dosis nica por va oral (po por
sonda). Control
grupos recibieron solamente NaCl 0,9% en el mismo volumen por la misma
ruta. Cada animal se usa slo una vez. Todos los procedimientos
experimentales se realizaron de conformidad con las normas internacionales
de bienestar animal recomienda
por la Sociedad Brasilea de Neurociencias y Comportamiento (Ley 1992) y
aprobado por las directrices institucionales. Se emplearon El nmero mnimo
de animales y de duracin de la observacin requerido para obtener datos
coherentes. 2.5.2. Pre-tratamientos Los siguientes extractos lquidos se
utilizan como tratamiento previo: ES40%, extracto lquido de L. alba en
etanol al 40% (v / v); ES60%, extracto lquido de L. alba en etanol
60% (v / v) y ES80%, extracto lquido de L. alba en etanol 80% (v / v).
Doscientos cincuenta mililitros de cada solucin se mezclaron a 250 ml de
agua destilada y
se concentr bajo vaco a 50 8C a 40 ml. Las soluciones concentradas
(correspondientes que contienen, respectivamente, residuo seco de 0,119,
0,108 y 0,103 g / ml)
se diluyeron hasta 50,0 ml con solucin fisiolgica, a fin de obtener
soluciones que contienen 20 mg / ml de residuo seco. Estas soluciones se
administraron a la
animales (0,1 ml / 10 g de peso corporal).
2.6. Preparacin de polvos secados por pulverizacin (SDP) Dos polvos
secados por pulverizacin se prepararon a partir ES80% usando un secador

de BU CHI 190 Mini-pulverizacin con tobera de dos componente y el flujo

co-corriente bajo las siguientes condiciones de funcionamiento: temperatura
de entrada, 143 8C9 / 2; temperatura de salida, 105 8C9 / 2; tasa, 3 ml /
min y presin, 2 bar alimentar. ES80% (500 ml) se concentr previamente (2
veces) y se sec por pulverizacin en presencia de 32% (w / w) de dixido
de silicio coloidal (CSD; Aerosil ) 8% de polisorbato 80, obteniendo SDP1.
Se emple el mismo procedimiento para preparar pulverizacin SDP2 polvo
seco, donde 32% (w / w) de una mezcla (1: 1) de la CDS: b-ciclodextrina y
8% de polisorbato 80 fueron empleados como excipiente. SDP1 y SDP2
contiene, por lo tanto, 40% de excipientes y 60% de las sustancias
extractivas.
2.7. Se determin Prdida por desecacin La prdida en el secado de SDP1 y
SDP2
en una balanza Mettler PM200 acoplado a un secado por infrarrojos M.
Ze'tola et al. / Diario de Etnofarmacologa 82 (2002) 207? / 215 209 sistema
(LP16) en 105 8C, usando muestras de 300 mg. Cada anlisis se repiti tres
veces. Considerando que
slo trazas de compuestos voltiles estaban presentes en los extractos
lquidos, la prdida en el secado fue considerado ser aproximadamente el
agua residual de SDP.
2.8. Evaluacin del efecto sedante putativo de los polvos secados por
pulverizacin el efecto sedante putativo de los polvos secados por
pulverizacin SDP1 y SDP2 fueron evaluados en la prueba de sueo inducido
pentobarbital-, como se describe anteriormente a la
extractos lquidos. Una muestra de 333 mg de cada extracto seco se
dispersa en agua y se diluy a una concentracin final de 20 mg / ml de
sustancias extractivas y administrado po, 1 h antes de la ip inyeccin de
pentobarbital sdico 50 mg / kg. Las evaluaciones de comportamiento eran
similares a la descrita anteriormente para los otros extractos (ES).
2.7.
Prdida
por
secado
La prdida en el secado de SDP1 y SDP2 se determin en una balanza
Mettler PM200 acoplado a un sistema de infrarrojos de secado (LP16) en 105
8C, usando muestras de 300 mg. Cada anlisis se repiti tres veces.
Teniendo en cuenta que slo trazas de compuestos voltiles estaban
presentes en los extractos lquidos, la prdida en el secado fue considerado
ser
aproximadamente
el
agua
residual
de
SDP.
2.8.
Evaluacin
del
efecto
considerado
sedante
de
los
Polvos secados por pulverizacin el efecto considerado sedante de los
polvos secados por pulverizacin SDP1 y SDP2 fueron evaluados en la
prueba de sueo inducido por pentobarbital, como se describi
anteriormente para los extractos lquidos. Una muestra de 333 mg de cada
extracto seco se dispersa en agua y se diluy a una concentracin final de
20 mg / ml de sustancias extractivas y administrado po, 1 h antes de la ip

inyeccin de pentobarbital sdico 50 mg / kg. Las evaluaciones de

comportamiento eran similares a la descrita anteriormente para los otros
extractos (ES).
2.7. Loss on drying
The loss on drying of SDP1 and SDP2 was determined in a Mettler PM200 balance
coupled to a drying infrared system (LP16) at 105 8C, using samples of 300 mg.
Each analysis was repeated three times. Considering that only traces of volatile
compounds were present in the liquid extracts, the loss on drying was considered
be approximately the residual water of SDP.

2.8. Evaluation of the putative sedative effect of the

Spray-dried powders the putative sedative effect of the spray-dried powders
SDP1 and SDP2 were evaluated in the pentobarbital induced sleep test, as
previously described to the liquid extracts. A sample of 333 mg of each
dried extract was dispersed in water and diluted to a final concentration of
20 mg/ml of extractive substances and administered p.o., 1 h before the i.p.
injection of sodium pentobarbital 50 mg/kg. The behavioral evaluations were
similar to that described above to the other extracts (ES).