Instituto Superior de Agronomia /ULisboa

Tcnicas Laboratoriais
de Qumica e Bioqumica
- Tcnicas laboratoriais em
Ecotoxicologia M Jos Cerejeira mcerejeira@isa.ulisboa.pt
Colab: Ana S.Pereira anapereira@isa.ulisboa.pt

Contedo programtico
(3 Semanas - 15h de aulas tericas e prticas)
Local praticas:
Laboratrio de Ecotoxicologia do ISA
Unidade de anlise de resduos e Unidade de avaliao de efeitos txicos de substncias
qumicas orgnicas (pesticidas)
Tcnicas Laboratoriais em ecotoxicologia.
Noes fundamentais. mbito e planeamento do trabalho laboratorial. Abordagens integradas e
aplicaes prticas.
Tcnicas de avaliao da exposio ambiental a resduos de substncias qumicas.
Metodologia laboratorial de extraco dos analitos. Tcnicas de extraco lquido-lquido (LL),
extraco em fase slida (SPE) e micro-extraco em fase slida (SPME). Vantagens e
inconvenientes. Outras tcnicas. Exigncias e metodologias para diversas amostras a analisar.
Metodologia de Doseamento dos analitos por Cromatografia Gasosa (GC) e por Cromatografia
Gasosa acoplada a Espectrometria de Massa (GC-MS).
Prtica laboratorial doseamento de resduos de pesticidas por GC-MS.

Tcnicas de avaliao de efeitos txicos no biota. Aplicao ao biota aqutico.

Vantagens e inconvenientes das tcnicas tradicionais e dos microbiotestes. Descrio de
metodologias laboratoriais em diversos organismos para analise de efeitos txicos em gua e
sedimento e solo.
Prtica laboratorial execuo da tcnica laboratorial no mbito da avaliao de efeitos txicos de
substncias quimicas para o biota aqutico

Toxicologia
Efeitos em organismos individuais

Ecotoxicologia
Efeitos nos ecossistemas

Organismos
teste

TOXICOLOGIA

ECOTOXICOLOGIA

Rato, coelho, co, macaco

Aquticos (algas, Daphnia, peixe)

Terrestres (plantas, minhocas, abelhas,
pssaros)

Extrapolao
para

HOMEM

Objectivo

Proteco dos indivduos

ECOSSISTEMAS

Manuteno da estrutura e
funcionamento do sistema

Evoluo da ecotoxicologia nas ltimas trs dcadas.

Newman, 2003

Ecotoxicologia
Conceitos fundamentais em
ecotoxicologia.
Exposio vs. Efeitos

ECOTOXICOLOGIA
Cincia que estuda os efeitos de agentes
qumicos e fsicos nos organismos vivos,
nomeadamente, em populaes e
comunidades dos ecossistemas; inclui,
tambm, as vias e interaces de tais agentes
com o ambiente.

Ecotoxicologia

Exposio

PECs

Efeitos

NEC, EC50

Avaliao Comparativa

Terminologia relacionada com a avaliao da

exposio:
PED

Predicted Environmental Distribution

(Distribuio Ambiental Prevista)

PEC

Predicted Environmental Concentration

(Concentrao Ambiental Prevista)
PECs- solo
PECgw- gua subterrnea
PECsw- gua superficial

Ex:

PECsw Concentrao de resduos (estimada) neste

compartimento, aos quais os organismos aquticos no
visados podero estar expostos

Exprime-se em ug s.a/L gua

Terminologia relacionada com a avaliao de

efeitos:
LC50

Lethal concentration (median)

EC50

Effect concentration (median)

IC50

Inhibition concentration (median)

NOEC

No Observed Effect Concentration

LOEC

Lowest Observed Effect Concentration

Determination of toxicity threshold values

CONTROL

10
Survival

2.5 g/L

5 g/L

10

10

10 g/L

20 g/L

40 g/L

NOEC

LOEC

LC50

No
Observed
Effect
Conc.

Lowest
Observed
Effect
Conc.

Lethal
Conc.
50%

Use of Cost-Effective Laboratory Bioassays for the Toxicity Evaluation of Groundwater and Surface Water

RELAES ENTRE A ECOLOGIA, A ECOTOXICOLOGIA

E A LEGISLAO

ECOLOGIA

LEGISLAO

aspectos gerais
compartimentos
ambientais
percepo

Ciclos bioqumicos

cadeias trficas
nveis trficos
comunidades
transferncia
de energia

ECOTOXICOLOGIA

Dinmica das
populaoes

proteco

WQC
PEC
IRS
NOEL
QSAR
AF
M

preveno

ESQUEMA DA
RELAO ENTRE
EFEITOS,
EXPOSIO
E A AVALIAO
DO PERIGO

Identificao do Perigo: tem como objectivo

identificar, numa primeira fase, substncias quimicas que
apresentem preocupao, tendo em considerao as
propriedades das substncias

Hazard Identification

Avaliao do Perigo: avaliao do potencial perigo

de uma substncia provocar efeitos adversos no
ambiente e homem. necessria informao relativa
exposio ambiental e efeitos. usualmente expresso
atravs da relao entre PEC/LC50

Hazard Assessment

Avaliao do Risco: frequentemente utilizada como

avaliao do perigo. Contudo, refere-se probabilidade
de um determinado efeito adverso ocorrer como
resultado de presena (concentrao) de uma dada
substncia qumica. No dever ser utilizado caso no
tenha sido efectuado nenhum clculo de probabilidade.

Risk Assessment

Gesto do Risco: uso de medidas apropriadas que

levam diminuio significativa da presena da
substncia (e consequentemente do perigo) no
compartimento ambiental em risco.

Risk Management

HAZARD ASSESSMENT:
avaliao do perigo potencial

RISK ASSESSMENT:
avaliao do risco potencial

RISK MANAGEMENT:
tomada de deciso

Na avaliao do perigo recorre-se a INDICADORES DE

PERIGO
Ex: TER (Toxicity Exposure Ratio)
RQ (Risk Quotient)
TER- relao entre a concentrao relativa a um dado
efeito e a estimativa da exposio a um composto qumico

RQ- relao entre a estimativa da exposio a um

composto qumico e a concentrao relativa a um dado
efeito

Processo de avaliao do perigo potencial da utilizao de pesticidas e

valores limites de TERs segundo o Anexo VI da Directiva 91/414/EEC

TER = EC50 / PEC

TERa
(peixes e Daphnia)

< 100

> 100

ou
TERlt
(peixes e Daphnia)

< 10

> 10

TER
(algas ou plantas)

< 10

> 10

refine
aceite
exposio

refine
aceite
exposio

refine
aceite
exposio

TER refinado

TER refinado

TER refinado

< 100

aprovao
recusada*

> 100

aceite

< 10

aprovao
recusada*

> 10

aceite

< 10

aprovao
recusada*

> 10

aceite

ALVO

Nvel de
exposio

Nvel de
efeito

Quociente
do risco

Ecossistema
aqutico

Concentrao na
gua superficial
(Cgua)

Nvel sem efeito

(NELaq)

Cgua/ NELaq

Ecossistema
terrestre

Concentrao no
solo (Csolo)

Nvel sem efeito

(NELterr)

Csolo/ NELterr

Seres Humanos
(exposio
indirecta)

Ingesto diria
total (TDI)

Dose sem
efeitos (DWE)

TDI/DWE

Contributo do aumento de preciso para a reduo da

incerteza dos valores

ETAPES na AVALIAO DO RISCO

EMISSO

Passo

EXPOSIO

EFEITOS

Incerteza elevada

Propriedades
fsico-qumicas

Toxicidade aguda

Padro do uso

(worst case)

(L(E)C50)

Menor incerteza

Degradao

Toxicidade crnica

Dados existentes

Adsoro

(NEC)

Passo

(PEC)

Passo
Incerteza baixa
Cenrios especficos

Degradao

Testes adicionais

Mobilidade

Estudos de campo

Previso da distribuio
ambiental
(Identificao do compartimento
ambiental em risco)

Laboratrio de Ecotoxicologia do ISA

Constitudo por duas Unidades:

... Unidade de anlise de resduos de pesticidas...

... Unidade de avaliao de efeitos txicos ...

Laboratrio de Ecotoxicologia

Unidade de Anlise de Resduos

Anlise de resduos de pesticidas em
amostras de gua por SPME / GC-MS

Laboratrio de Ecotoxicologia

Unidade de Anlise de Efeitos

Txicos
Anlise da toxicidade de amostras de gua
e de sedimento para o biota atravs de
metodologias expeditas

Laboratrio de Ecotoxicologia

Anlise de efeitos txicos de pesticidas

em espcies com interesse ambiental
Daphnia magna
Pseudokischneriella subcapitata
Artemia salina
Thamnocephalus platyurus

Heterocypris incongruens