CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

Objetivos
Conocer la tcnica de cromatografa en capa fina, (ccf), sus caractersticas y
los factores que en ella intervienen.
Aplicar la tcnica de cromatografa en capa fina como criterio de pureza e
identificacin de sustancias.
Conocer la tcnica de cromatografa en columna, sus caractersticas y los
factores que en ella intervienen.
Utilizar la cromatografa en columna para la separacin de mezclas de
compuestos orgnicos.

Introduccin
Concepto de cromatografa
La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms
compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la
otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles, dependiendo de la
naturaleza de las dos fases involucradas: slido liquido (capa fina, papel o
columna), liquido -lquido y gas-liquido ( fase vapor ).
Todas las tcnicas cromatografcas dependen de la distribucin de los
componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada
tambin activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en
relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un
lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un lquido.
Todos los slidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o
menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente' todas las
sustancias pueden ser adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este
fenmeno de adsorcin selectiva es el principio fundamental de la cromatografa.
La cromatografa en columna se usa para separar grandes cantidades de
Material: >100 mg. El proceso de cromatografa consta de una fase mvil
(eluyente) y una fase estacionaria (adsorbente), los cuales dependen de las
sustancias que se deseen separar.
Concepto de Rf
Rf es el registro, es una relacin de distancias, y se define como:

p1 = (a) distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicacin

(b) distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.
El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo
de adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor
de saturacin, etc."). Tiene una reproducibilidad de +,- 20%, por lo que es mejor
correr duplicados de la misma Placa.
Cromatografa en capa fina
En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un
pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por
capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta
produciendo "manchas" de los componentes.
En la cromatografa en capa fina (ccf), el grado de elucin de las sustancias
depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado'
El adsorbente se coloca en forma de una capa delgada adherida sobre un soporte
rgido, que pueden ser placas de vidrio, aluminio o polister. Los tamaos de la
placa para ccf convencional son: 20 x 20; 10 x20 y 5x2 cm.
Hay adsorbentes que contienen un indicador de fluorescencia para facilitar la
identificacin de muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son
coloridos, se requerirn otras tcnicas de revelado.
Eluyentes ms comunes para cromatografa en capa fina
- ter de petrleo
- cloruro de metileno
- n-hexano - acetato de etilo
- ciclo hexano - acetona
- tolueno
- iso-propanol
- dietil-ter - etanol
- t-butil-ter - metanol
- cloroformo - cido actico
Reveladores ms comunes para cromatografa en capa fina
Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras
pueden revelarse mediante:
a) Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase
estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F254 F366), el
nmero que aparece como subndice nos indica la longitud de onda de
excitacin del indicador utilizado"

b) La introduccin de la placa en vapores de yodo

c)

El roco con una solucin de agualH2SOa 1 :1 (dentro de un

compartimiento especialmente protegido y bajo una campana de extraccin
de gases). Despus calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero.
hasta carbonizar los compuestos.

Adsorbentes ms comunes para cromatografa en capa fina.

a) Gel de slice (se utiliza en el 80% de las separaciones)
b) Oxido de Aluminio o Almina (cida, neutra o bsica)
c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
d) Poliamidas
Para la seleccin del adsorbente deber tomar las siguientes consideraciones:
a) Polaridad
b) Tamao de partcula
c) Dimetro
d) rea superficial
e) Homogeneidad
f) Pureza
Factores que influyen en una separacin por cromatografa de capa fina.
a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase
estacionaria.
b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire.
c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o
agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas
deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y
despus dejar secar completamente antes de aplicar la muestra.
d) Pureza de los disolventes
PREPARACIN DE CROMATOPLACAS Y CAPILARES.
Se pueden utilizar cromatofolios ya preparados (comerciales), o bien, preparar las
cromatoplacas en el laboratorio.
Para preparar las cromatoplacas, se introducen portaobjetos juntos, limpios y

Secos, en una suspensin de gel de slice al 35% en acetato de etilo, se dejan

secar al aire y se separan con cuidado. Se preparan las cromatoplacas y se
ordenan sobre una hoja de papel.
Para aplicar las soluciones a las cromatoplacas utilice capilares, que previamente
deben ser estirados en la flama del mechero (flama pequea), con el fin de que
tengan el dimetro adecuado
APLICACION DE LA MUESTRA Y EFECTO DE LA CONCENTRACION
Con la micro pipeta, tome una pequea cantidad de la solucin-problema y aplique
Una gota sobre la capa de Silicagel, a 1 cm. aprox. del borde inferior de la placa y
trace una marca, con un lpiz fino, en el borde derecho, para no perder el punto de
aplicacin.
Para desarrollar el cromatoqrama, introduzca la placa en una cmara de elucin,
(que puede prepararse con un frasco de tamao apropiado), a la que previamente
se le coloca por dentro un cuadro de papel filtro para aumentar la saturacin de los
vapores del eluyente, coloque unos 4 ml de acetato de etilo y tpela.Una vez que
la placa est dentro de Ia cmara, no debe moverla. Cuando el frente del eluyente
est casi en el borde superior de la capa de Silicagel, abra el frasco, retire la placa
y marque el frente del eluyente con un lpiz fino. Coloque la placa en su hoja de
papel, donde anotar sus datos, y djela secar al aire.
Preparacin de la columna cromatografa en columna
Para empacar la columna sujtela en el soporte con las pinzas. Si la llave es de
vidrio, engrsela ligeramente y mantenga la posicin de cerrado. Introduzca hasta
el fondo un pequeo pedazo de algodn ayudndose con la varilla de vidrio,
agregue 8 ml de eluyente y presione suavemente el algodn para que quede bien
colocado y sin burbujas
Prepare una suspensin de.l0 g de gel de slice para columna en 40 ml de
eluyente y agite por 5 min para eliminar las burbujas de aire. A travs del embudo
de vidrio vierta la suspensin en la columna golpeando ligeramente con los dedos
para que el empacado sea uniforme. Abra la llave para eliminar el exceso de
disolvente teniendo cuidado de no dejar la gel de slice sin disolvente
En un vaso de precipitado de 100 mL disuelva 0.4 q de la mezcla problema con la
mnima cantidad de eluyente (4 o 5 mL), ayudndose con el agitador, virtala con
cuidado para que quede distribuida uniformemente encima de la superficie de la
gel de slice. Abra la llave para colectar el disolvente y que se adsorba la muestra
aplicada (cuidando que no se seque la columna).
Colecte fracciones (eluatos) de 6 mL en los frascos viales y verifique la separacin
haciendo cromatoplacas (Notas 3 y 4) de cada una de las fracciones usando una
muestra testigo.

La elucin y separacin termina en el momento en el que ya no se observa en la

cromatoplaca presencia del producto separado. En un matraz rena las fracciones
que contienen producto.

Bibliografa
Pasto D.J., Johnson C.R. and Miller M.J. Experiments and Techniques in
Organic Chemistry. Prentice Hall, Englewood Cliffs, 1992.

Pavia D. L-, Lampman G. M. and Kriz G.S. introduction to Organic

Laboratory Techniques, a Contemporary Approach, 3'.ed.Saunders College,
Fort Worth,1988.

Abbott D. Y Andews R. S. Introduccin a la Cromatografa, 3a ed.,

Alhambra, Madrid, 1970.

Bates R.8., Schaefer J.P. Tcnicas de Investigacin en Qumica Orgnica,

Prentice-Hall Internacional. Madrid. 1977.