Datos y resultados n 13.

Recuento y estudio bioqumico del Clostridium perfringens

FECHA: 21 de febrero de
GRUPO: 2
2014
NOMBRE: Beatriz Henao, Alejandra Romn
NOMBRE: Leisa Gmez Vlez
Parte uno de la prctica (siembras)
1. Tres objetivos:

Determinar la presencia de esporas de clostridium sulfito reductores es una

muestra de carne de cerdo.

Familiarizarse con los mtodos de aislamientos de bacterias anaerbicas en

alimentos.

Tomar conciencia de los peligros que ocasionan la presencia de estos

microorganismos en los alimentos.

Describa brevemente lo que realizo en el laboratorio:

Se toman 10 g de muestra escogidos de diferentes partes, en 90 ml de agua

peptonada que siempre ser una dilucin 10:10
Homogenizar en stomacher y dejar reposar por 5 min.
Se toma 1 ml de esta solucin madre en tubos que contengan agar sulfito,
polimixina sulfadiazina ( s.p.s )
Llevar las diluciones a bao mara a 85C por 10 min.
Cumplido el tiempo pasar de inmediato a recipiente con hielo hasta que los tubos
estn fros.
Incubar a 35C por 24 a 48 horas.

Parte dos de la prctica (lecturas)

Resultados:
De la muestra del alimento se pudo aislar las esporas de Clostridium sulfito-reductores,
donde la presencia de sulfuro de hierro se puso de manifiesto en la dilucin 10 -3 con la
formacin de colonias color negro.
Para el recuento, se cont el nmero de colonias negras crecidas en el agar y se
multiplico por el factor de dilucin del tubo, la cifra obtenida fue:
Recuento u.f.c de esporas de clostridium sulfito reductoras 500/g

Medio de cultivo utilizado, temperatura y tiempo de incubacin:

Para el recuento de clostridium sulfito reductores se ha dispuesto medios

especficos tales como el sulfito, polimixina sulfadiazina ( s.p.s ).
este despus de licuado y regenerado debe enfriarse a una temperatura de 45C
y pH ajustado a 7,2 +/- 0,2.
El crecimiento ptimo en una incubacin de este microorganismo se da a 37 C
por 24 a 48 horas.

Descripcin de las colonias:

Colonias de color negro y bordes redondos en la parte de la anaerobiosis y produccin de
sulfito en el medio.

Caractersticas microscpicas de las colonias en el Gram.

Bacilos Gram positivos con esporas terminales y subterminales.

Reacciones bioqumica:
Movilidad
Reduccin de Nitrato
Licuefaccin de gelatina

(+) El sulfuro se expandi por todo el

tubo.
(-) no hubo cambios en el caldo, y al
adicionar el reactivo gris tampoco se
evidencio cambio de color.
(-) no hubo licuefaccin de la gelatina, el
agar se encuentra slido.

Fundamento de los nitratos:

Es un medio para estudiar simultneamente la reaccin de oxidacin o fermentacin de
glucosa y la reduccin de nitratos a nitritos, por bacilos Gram negativos de fcil desarrollo.
Esta prueba es til para diferenciar especies bacterianas.
La reduccin del nitrato a nitrito o gas nitrgeno por medio de la enzima nitrato reductasa,
es un proceso de oxidacin por el cual el nitrato proporciona oxgeno para ser usado
como aceptor de electrones. El nitrito presente en el medio puede detectarse con el
reactivo de Griess A (B15-501-61) y Griess B (B15-502-61) Britania, dando un compuesto
diazoico
coloreado.
Si se observan burbujas en el medio, stas son de gas nitrgeno, ya que el nitrito
intermediario inhibe las decarboxilaciones.
Los resultados pueden ser:
-Positiva: desarrollo de color rosado-rojo luego del agregado de los reactivos Griess A y
B.
- Negativa: ausencia de color rosado rojo luego del agregado de los reactivos Griess A y
B.
Fundamento de lactosa gelatina:
Se usa para valorar la licuefaccin o licuacin de la gelatina por accin de las gelatinasas
bacterianas producidas por algunas Enterobacterias. La reaccin positiva hace que el
medio permanezca lquido despus de la incubacin an despus de dejarse en
refrigeracin durante media hora. La reaccin negativa permite nuevamente la
solidificacin.
PROTEASAS O GELATINASAS (+): En esta prueba se determina la produccin de
enzimas de carcter proteoltico en un medio nutritivo de gelatina; donde la gelatina ha se
hidroliza por proteasas extracelulares de la bacteria. Dando como resultado la licuefaccin
de la gelatina dado que ha sido hidrolisada hasta aminocidos individuales.
PROTEASAS O GELATINASAS (-): En esta prueba se determina la produccin de
enzimas de carcter proteoltico en un medio nutritivo de gelatina. En el video se observa
la prueba de gelatinasas NEGATIVA en donde la gelatina contina siendo un polipeptido y
por lo tanto NO hay proteasas extracelulares que puedan degradarla hasta aminocidos
individuales. Se observa que la gelatina contina en estado Slido y no pierde su
consistencia.

Parmetros segn la legislacin Colombiana:

Instituto colombiano de normas tcnicas 1325
Requisitos microbiolgicos para productos crnicos procesados no enlatados
Recuento de esporas clostridium sulfito reductes UFC/g
n
3

m
<10

M
100

C
0

PREGUNTAS
1. En qu condiciones favorecen el crecimiento de este microorganismo en
carnes cocidas? Explique.
Las condiciones que favorecen el crecimiento y la produccin de toxinas de
Clostridium son:
Alta cantidad de protenas
Baja concentracin de sal
pH ligeramente cido o alcalino (superior a 4,6)
Ausencia de oxgeno, multiplicndose en alimentos envasados al vaco o en atmsfera
modificada
Bajas temperaturas.

2. Mencione dos
microorganismo?

caractersticas

morfolgicas

importantes

de

este

Bacilar, G+, anaerobias estrictas, capaces de formar esporas y con capacidad de reducir
el sulfito a sulfuro.

Conclusiones.
Al comparar la muestra de carne con los parmetros de calidad establecidos por la NTC
1325 se concluye que el producto se encuentra contaminado por bacterias esporuladas lo
cual indica que dicho establecimiento no cuenta con una buena calidad higinico sanitaria,
ya sea que la contaminacin provenga del manipulador o del ambiente, lo cual es de
cuestionarse ya que estas esporas podran ser transmitidas los consumidores y
generarles una toxiinfeccin alimentaria.

REFERENCIAS
1. http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/gluconitragar.htm
2. Microbiologa Alimentaria: Metodologa Analtica para Alimentos y
Bebidas. By Mara del Rosario Pascual Anderson, Vicente Caldern y Pascual
Recuperadode
http://books.google.com.co/books?
id=9EIfkks8uxMC&pg=PA74&lpg=PA74&dq=como+son+las+colonias+de+clostridiu
m+sulfito+reductores&source=bl&ots=RHfNYikcj&sig=70S16SB0gI8ENFBqAf5TgC5iIh8&hl=es419&sa=X&ei=RlAFU46wEZOHkQfU9YDoBg&ved=0CCYQ6AEwAA#v=onepage&
q=como%20son%20las%20colonias%20de%20clostridium%20sulfito
%20reductores&f=false
3. http://kathe-microblog.blogspot.com/2008/06/pruebas-bioquimicas.html
4. http://www.slideshare.net/jamesdays/ntc1325-10521142