PRIONES

INTRODUCCIN
Los priones son protenas infecciosas que existen en ms de un estado
conformacional, es decir, pueden adoptar distintas conformaciones en distintas
condiciones, por lo cual, son excepciones a la teora clsica del plegamiento de las
protenas, que afirma que la secuencia de aminocidos determina un nico
plegamiento de la protena, es decir, su conformacin o estructura terciaria.
Adems, los priones llevan informacin en dicha conformacin, de manera
anloga a los genes. Cada conformacin tiene una informacin distinta que es
heredable. Se comportan no solo como agentes infecciosos sino tambin como
genes. Pueden transmitir, replicar y expresar en forma de algn fenotipo la
informacin que contienen.
Se conocen varios tipos de prion, en mamferos se encuentra el prion prp,
responsable de las encefalopatas espongiformes transmisibles (TSEs), que son
enfermedades neurolgicas invariablemente letales y que actualmente no tienen
tratamiento. Este prion puede existir en dos conformaciones: prpsc y prpc. Prpsc
es la versin infecciosa, que causa TSE, mientras que prpc es la versin normal
de la protena y no produce enfermedad, al contrario cumplira funciones celulares
normales.

Este prion est altamente conservado en la evolucin y estara

presente no solo en mamferos sino tambin en la mayora de los grupos de

vertebrados, por ejemplo se lo encontr en el pollo y en reptiles (1,2). Hasta donde
se conoce, solo en mamferos produce enfermedad.
Los dems priones conocidos actualmente son los de levaduras y hongos
filamentosos. Adems, recientemente se detect un nuevo prion en un molusco
marino (genero Aplyssia) que cumple funciones relacionadas con la formacin y
mantenimiento de la memoria, lo cual es muy novedoso (3).
En Saccharomices cerevisiae se encuentran los priones que forman amiloides,
denominados URE3, PSI y PIN (4,5). Adems, actualmente, la proteasa vacuolar
beta de levadura tambin es considerada un prion. La versin normal de esta

protena es simplemente una proteasa que degrada protenas innecesarias. La

versin infecciosa es denominada simplemente beta y activa a su propio
precursor, de esta forma se autorreplica comportndose como prion (6). Por otra
parte, en el hongo filamentoso Podospora anserina se encuentra el prion Het-s (7).
Los priones Het-s y beta cumplen funciones celulares: Het-s interviene en la
incompatibilidad citoplasmtica mientras que beta como fue indicado, participa de
la degradacin de protenas innecesarias. URE3 y PSI son infecciosos, se
comportan en forma anloga al prp de mamferos. Aparentemente, PIN es neutral
(no cumple funciones celulares ni produce enfermedad) (4,5,6,7).
Todos los priones son protenas codificadas en el genoma del organismo
hospedador. Invariablemente presentan ms de una conformacin y cada una de
ellas otorga una caracterstica fenotpica distinta. Tienen la capacidad de
autopropagarse en forma infecciosa y de ser heredables. Adems, en todos los
casos (excepto en el prion beta), la conformacin infecciosa es capaz de formar
agregados del tipo amiloide proteasa resistentes (6).
En cuanto a la nomenclatura, se denomina prion a la conformacin infecciosa de
una dada protena, la que tiene caractersticas autorreplicativas y se nombra con
otro nombre a la conformacin considerada normal de la misma. Por ejemplo, en
el caso de la protena prp, se toma como prion a la conformacin prpsc y a prpc se
lo considera simplemente una protena normal no prinica. De esta manera, es
comn encontrar en la bibliografa frases como por ejemplo que prpsc es un prion
de prpc o que Psi es un prion de la protena Sup35. No hay que olvidar que
aunque se utilice esta nomenclatura, en realidad

las conformaciones son

versiones distintas de una misma protena (con una nica secuencia de

aminocidos). Por esto, en principio se podran considerar como prinicas a todas
ellas y la diferencia estara dada por el hecho de que algunas conformaciones son
autorreplicativas comportndose como priones clsicos y otras cumplen otra
funcin. De esta forma, por ejemplo prp es un prion mientras que prpsc y prpc son
las posibles conformaciones que puede tener. En sentido amplio, tal vez se

debera definir como prion a cualquier protena con distintas conformaciones cada
una con diferente funcin y capaz de cambiar de una conformacin a otra.
En presente trabajo se har una revisin sobre diversos aspectos acerca de la
biologa de priones, haciendo hincapi en lo que actualmente se conoce acerca
del prion PrP de mamferos. Adems se describirn brevemente los priones de
levaduras y otros hongos.
PROPIEDADES GENERALES
Los priones son partculas proteicas infecciosas con propiedades particulares que
los hacen resistentes a mecanismos de inactivacin que otras protenas no
toleraran y que s modifican los cidos nucleicos. El nombre prin fue propuesto
por Stanley Prusiner en 1982, para describir al agente causal de las patologas
degenerativas

del

sistema

nervioso

central

que

se

conocen

como

ENCEFALOPATAS ESPONGIFORMES TRANSMISIBLES (EET). stas son

enfermedades crnicas y progresivas. En 1997, S. Prusiner recibi el premio
Nobel de Fisiologa y Medicina por la identificacin de los priones como agentes
de la EET.
Aunque existen distintas hiptesis, actualmente se considera que los priones estn
constituidos por una protena: PrP sc. PrPsc se producira debido al plegamiento
errneo de una protena celular (PrPc).
La conversin de una protena prinica comn (PrP C, el superndice C significa
celular) en una isoforma resistente a la accin de las proteasas, la PrP Sc (el
superndice

Sc

del

ingls

scrapie,

escrapie

en

espaol,

enfermedad

neurodegenerativa que se presenta en los ovinos, 2), es el evento clave en la

patognesis de todas las enfermedades PrP transmisibles, donde la PrPSc, de
acuerdo con la teora prinica, es el nico componente de la partcula infecciosa
(1). La protena prinica madura tiene de 208 a 220 residuos de aminocidos
dependiendo de la especie, dos sitios de glicosilacin y uno de anclaje a la
membrana del tipo del glicosilfosfatidilinositol (GPI) ubicado en el extremo
carboxilo terminal. En las dos terceras partes de la protena, hacia el extremo

carboxilo terminal, hay tres -hlices y 2 lminas -plegadas estrechamente

asociadas (Fig. 1A). Los 80 a 100 residuos de aminocidos restantes en el
extremo amino terminal, incluyendo los dominios para la fijacin del cobre,
adquieren una estructura muy flexible y poco definida. La isoforma PrPSc,
resistente a las proteasas, carece de este segmento amino-terminal, y debido a
esto se ha sugerido que dicha regin puede tener poca importancia en la
transmisin de las encefalopatas; sin embargo, la isoforma PrPSc que se acumula
en las afecciones cerebrales puede presentar la secuencia del extremo aminoterminal (1). En la clula, el polipptido PrP que se sintetiza de novo tiene un
pptido seal de secuencia convencional que se acopla al complejo ribosomaRNAm y al canal translocador de partculas localizado en la cara citoplsmica del
retculo endoplsmico rugoso (RER) (3). En general, el paso de la protena PrP a
travs de este canal se inicia por el extremo amino terminal y se contina hasta
que se adiciona el anclaje del GPI y el enramado de carbohidratos, modificaciones
que permiten su trnsito hacia la membrana plasmtica. Sin embargo, algunos
cambios en la secuencia de los residuos de aminocidos disminuyen la velocidad
de translocacin de la protena, lo que permite la aparicin de un intermediario
estructural, denominado Ctm-PrP, el cual tiene su extremo amino terminal en el
lumen del RER y su extremo carboxilo terminal en el citosol. Esto puede favorecer
la autoasociacin del intermediario y la formacin de las fibras amiloideas. La
mutacin Val 117 ala en el gen del prion humano es de este tipo y est
estrechamente relacionada con la herencia dominante del sndrome de
GerstmannStraussler-Scheinker (GSS). La expresin de la mutante Val 117Ala
(adems de otras mutantes) produce la acumulacin del CtmPrP en el cerebro de
los ratones transgnicos (Tg), los cuales sufren una rpida degeneracin del
sistema nervioso central sin la formacin de la isoforma infecciosa del prion, la
PrPSc. Esto sugiere que la Ctm-PrP puede ser una molcula neurotxica comn
tanto para las enfermedades genticas como las adquiridas (1). La protena PrPC
se expresa en el sistema nervioso central, en el tejido linftico y en las uniones
neuromusculares en forma de una glicoprotena asociada a la membrana
plasmtica por medio de un anclaje de GPI (Fig. 1). La estructura covalente de la

forma patgena (PrPSc) es idntica a la PrPC, pero tiene una conformacin

tridimensional radicalmente diferente, lo cual produce su agregacin y la formacin
de partculas estables. Aunque la PrPSc an no se ha purificado a homogeneidad,
se han obtenido fracciones proteicas con un alto grado infeccioso, las cuales
contienen una gran proporcin de la PrPSc. La ausencia de cidos nucleicos en
estas preparaciones, adems de la evidencia gentica, permite concluir que la
encefalopata espongiforme transmisible (TSE de sus siglas en ingls) es un
conjunto de enfermedades producidas nicamente por protenas (4). Debido a que
la PrPSc presenta un ncleo resistente a la accin de la proteinasa K (PK) en el
tejido cerebral infectado, la isoforma PrPC puede ser rpidamente degradada,
mientras que la isoforma infecciosa se mantiene presente (5). La microscopa
electrnica de la fraccin enriquecida con este material resistente a la accin de la
PK muestra la presencia de material fibrilar (6).
El prion prp
La protena prp fue identificada por primera vez en experimentos que intentaban
demostrar la presencia de cidos nucleicos virales como componentes del agente
infeccioso de las encefalopatas espongiformes transmisibles (TSEs). El agente
causante de las mismas, purificado

parcialmente del cerebro de animales

enfermos de TSE result ser una protena insoluble de 33 kD que fue denominada
prpsc que significa prion del scrapie por el nombre de la TSE estudiada que era el
scrapie, que afecta al ganado ovino. Pronto se observ que el tratamiento de esta
protena con proteinasa K generaba un fragmento de 27-30 Kd que fue identificado
como el principal componente del agente infeccioso. Este fragmento resulta ser
infectivo cuando es inoculado en animales de laboratorio (8). Con tcnicas de
secuenciacin se obtuvo la secuencia aminoacdica de la porcin N-terminal de la
protena prpsc y con esta fue posible sintetizar la secuencia de nucletidos
correspondiente que se utiliz como sonda para encontrar el supuesto gen de
origen viral. Este gen se encontr donde menos se lo esperaba: en el genoma del
hospedador y no corresponda a un gen viral sino a un gen cromosomal copia
nica ubicuo en las distintas especies de vertebrados (1,2) independientemente de
la existencia o no de infeccin por prpsc (9).

Dicho gen fue denominado PRP (tambin conocido como PRNP) y su producto
gnico es la protena prp, mayormente la versin normal (denominada prpc, por
cellular prion protein. Esta protena puede originar una isoforma patognica
(denominada prpsc) de forma espontnea si su gen PRP presenta alguna
mutacin puntual que favorezca un cambio de conformacin. La presencia de
prpc es totalmente necesaria para que la infeccin por priones ocurra. Los ratones
knockout para el gen PRP son resistentes a la infeccin con priones prpsc
inoculados por diversas vas como la perifrica o la intracerebral (9).
La secuencia de aminocidos de prpc y de prpsc por supuesto es la misma, como
ya fue indicado anteriormente, ambas son la misma protena pero con distinta
conformacin. Se las puede llamar confrmeros o isoformas. Las diferencias entre
ambas isoformas radican en el hecho de que prpc presenta un 40% de -hlices y
menos del 10% de lminas en su estructura terciaria mientras que prpsc tiene
alrededor de un 50% de lminas (figura 1). La capacidad de prpsc de ser
infecciosa radica en su conformacin (8,10), se trata de una versin alterada de
prp que perdi su funcin fisiolgica normal pero gano la capacidad de autor
replicarse mediante la conversin de molculas de prpc (que utiliza como molde)
en ms molculas de s misma. Otra caracterstica que permite distinguir a prpc de
prpsc es la resistencia al tratamiento con proteasas: prpc es totalmente degradada
pero prpsc resulta ser parcialmente resistente a estas enzimas. El tratamiento de
prpsc con proteinasa K produce un pptido de 142 aa denominado prp 27-30 que
tiene la capacidad de polimerizar en amiloides y es neurotxica (10).
Prpc est altamente conservada en la evolucin. La similitud entre la Prpc de
distintas especies de mamferos oscila de un 85% al 97%, mientras que al
comparar la secuencia entre primates y humanos la similitud es del 92,9 -99,6 %
(11).

Figura1.

Estructuras

proteicas

obtenidas con Rasmol. A la derecha se

muestra

la

estructura

de

prpc,

mientras que la imagen de la izquierda

corresponde a prpsc. Se observa el
mayor contenido de lminas en
prpsc,

mientras

que

en

prpc

predominan las -hlices.

Prpc es una protena celular normal que se expresa en las neuronas y clulas de
la gla en el cerebro y mdula espinal. Tambin est presente en otros tejidos,
principalmente tejido linfoide como el bazo y en las clulas del sistema inmune
tales como clulas dendrticas y linfocitos B (12, 13, 14,15). El mensajero de prpc
aparece en el cerebro de ratn y de pollo en etapas tempranas del desarrollo
embrionario y su nivel aumenta en el transcurso de la embriognesis (13,14). En el
cerebro adulto, el mRNA de prp esta ampliamente distribuido y se concentra en
zonas tales como las clulas de Purkinje del cerebelo, neuronas hipocampales,
neocorticales y motoras (16).
Se han realizado multitud de experimentos para demostrar la naturaleza de los
priones:
Propiedades Fsicas y Qumicas
Filtrable con poros 25 nm o 100 nm.
Es invisible al microscopio ptico y electrnico.
Resistente
Formaldehdo
EDTA
Proteasas
Nucleasas

Tripsina,
(

ribonucleasas

Radiacin ultravioleta
Radiacin ionizante

Mtodos de inactivacin:
Autoclave >134 C, 18 minutos
Hipoclorito sdico (20C, 1hora)
Hidrxido sdico 2N
Fenol 90%
ter
Acetona
Permanganato potsico 0.002 M
Urea 6 M
2 Cloroetanol
Cloroformo

Los procedimientos rutinarios de desinfeccin y esterilizacin son inadecuados

para la eliminacin de priones causantes del CJD. A saber: alcohol, xido de

etileno, formaldehdo, glutaraldehdo, perxido de hidrgeno, yodo, radiacin

ionizante, fenoles, amonios cuaternarios o esterilizacin convencional por vapor de
agua a 121C.
La funcin del prin.
Los priones son protenas observadas comnmente en la superficie de las
neuronas de todos los mamferos estudiados. La funcin que cumple esta protena
fue estudiada por un grupo de investigadores japoneses liderados por Suchiro
Sakaguchi, de la Universidad de Nagasaki. En donde se tomaron en muestras de
ratones y observaron alteraciones en el cerebelo haba una grave deficiencia de
las neuronas de Purkinje.Sin embargo despus de varios estudios y experimentos
la funcin de la forma celular del prin es hoy an desconocida.
La clula diana de los priones es la neurona pero la activacin de los astrositos es
muy precoz, quizs los priones se replican en estas clulas que desempearan
un papel muy importante en la patogenia de la enfermedad.
La entrada de los priones en la transmisin de la enfermedad es la va oral o ,
hasta llegar al cerebro los priones en la transmisin parenteral ,hasta llegar al
cerebro, los priones se multiplican lentamente casi 2 aos, en lugares no bien
conocidos( referentes al periodo de incubacin). Uno de estos lugares podra ser
el sistema inmunitario es especial los rganos linfoides as el prin cepa 4 se
acumula en gran cantidad en las amgdalas.
NOMENCLATURA Y TAXONOMA
En la tabla siguiente se enumeran las enfermedades prin conocidas hasta ahora y
alguna informacin nomenclatural referente a ellas:
Tabla 1: Enfermedades prin y su informacin nomenclatural.
Enfermedad

Husped natural

prin

Scrapie

Ovejas y cabras

Scrapie

Prion encefalopata transmisible del visn (TME)

Visn

prin TME

Chronic wasting disease (CWD)

Mulos, ciervos y Alces

prin CWD

Encefalopata espongiforme de los bovinos (BSE)

Vacas

prin BSE

Encefalopata espongiforme de los felinos (FSE)

Gatos

prin FSE

Encefalopata de los ungulados Exticos (EUE)

Nyala y el gran Kudu

prin EUE

Kuru

Humanos

prin kuru

Creutzfeldt-Jakob disease (CJD)

Humanos

prin CJD

Sndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker (GSS)

Humanos

prin GSS

Fatal familiar insomnia (FFI)

Humanos

prin FFI

La clasificacin de las enfermedades por priones humanas deriva de los

acontecimientos histricos y contiene todas las ignorancias que todava persisten;
es por tanto una clasificacin provisional.
Espordicas:

Enfermedad de Creutzfeldt Jakob

Clsica

Variante de Heidenhain
Variante de Brownell-Oppenheimer
Panencefaloptica

Adquiridas

Kuru (canibalismo)
Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob yatrognica
Hormona de crecimiento
Gonadotrofina
Trasplante de cornea
Electrodos (EEG) de implantacin directa
Implante de duramadre

Familiares

Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob familiar

Sndrome de Gerstmann-Strussler-Scheinker

Insomnio familiar fatal

Enfermedades por priones atpicas (mutaciones)

Los priones incluyen a seis especies de priones del gnero Pachyptila y al Petrel
Azulado, cercanamente emparentado a las anteriores. Conocidos en el pasado
como whalebirds (aves ballena), tres especies tienen un pico largo con filamentos
que utilizan para filtrar el planctoncomo lo hacen las ballenas. Aunque el viejo
nombre deriva de su asociacin con las ballenas, sus picos no (sin embargo el
nombre priones, deriva de la antigua palabra griega para definir a la sierra). Son
pequeos procellariidae (2530 cm) con plumaje gris, que habitan los Ocanos del
Sur.
ESTRUCTURA
La protena PrP est constituida por cuatro regiones de estructura secundaria
llamadas H1, H2, H3 y H4, en estas regiones se identifican tres zonas de hlice,
llamadas A,B Y C , Y DOS DE HOJA S1 y S2.
En la estructura van alternndose sucesivamente segmentos
helicoidales (en verde), laminares, (en amarillo) y planos (en
azul).
En los priones patgenos esta

estructura

se

altera

ocasionando la enfermedad. Las letras N y C designan los

respectivos extremos dela cadena: N (nitrgeno), el extremo
N-terminal (con un grupo amino libre); C (carbono), el
extremo C-terminal (con un grupo carboxilo libre).
Estructura de prpc
El gen humano PRP est situado en el brazo corto del cromosoma 20. Posee un
solo exn a diferencia de los correspondientes a ratones, vacas y ovejas que
tienen 2 exones. Los promotores de los genes de hamster y de ratn poseen
varias copias de secuencias repetidas ricas en G+C pero carecen de TATA box
(17,18).

El gen PRP codifica a prpc, que posee alrededor de 250 aminocidos segn la
especie. El transcripto primario de prpc no presenta splicing alternativo (19).
La protena prpc consta de dos dominios: una porcin N-terminal flexible capaz de
unir iones cobre, con una serie de 5 repeticiones de octapptidos ricos en prolina y
glicina y una porcin C-terminal con un segmento hidrofbico central altamente
conservado que posee tres -hlices (denominadas H1, H2, H3) (20). Adems en
el extremo C-terminal posee una secuencia para la adicin de un ancla de
fosfatidilinositol (GPI) mientras que en el extremo N-terminal posee un pptido
seal de 22 aa (KDEL) para dirigir la biosntesis de la protena al retculo
endoplsmico. Dicho pptido es clivado una vez que prpc es translocada al
retculo (21).

Por otra parte, en lo que respecta

a la conformacin prpsc, como se
indic, presenta mayor porcentaje
de lminas que prpc. El cambio
conformacional

principal

que

distingue a prpsc de prpc es la

ausencia de la -hlice H1 de
prpc que esta transformada en
lmina en prpsc (20),

esto

afecta las propiedades fisicoqumicas de la protena y su funcionalidad. Prpsc

presenta escasa solubilidad en detergentes no inicos, capacidad de formar
agregados y resistencia parcial a la digestin con proteinasa K (20). La digestin
de prpsc con dicha enzima produce un fragmento truncado en el extremo Nterminal denominado prp27-30 o prpres (por resistente in vitro). Adems, en
condiciones fisiolgicas est favorecida la conformacin rica en -hlice de prpc
siempre y cuando el gen PRP no este mutado. Muchas enfermedades causadas
por priones se deben a mutaciones en el gen PRP que resultan en la sntesis de
prpc con conformaciones alteradas ricas en lminas como la de prpsc. Se trata
de autnticas molculas de prpsc obtenidas en ausencia de infeccin por prpsc
exgena. En la figura 2 se muestra la estructura de prpc basada en la informacin
de (21).

Fig. 2. Estructura y procesamiento posttraduccional de prpc. En la parte superior

se muestra la protena recin sintetizada. Abajo se muestra la estructura de prpc
madura. A y B son las posiciones de clivaje, C es la posicin de clivaje que ocurre
en la conformacin prpsc cuando se la trata con proteinasa K, generando el
fragmento prp37-30. B est cercano al aa 110, C al aa 89 y A se encuentra en el
GPI entre el motivo de diacilglicerol y el residuo de etanolamina.
REPRODUCCIN
Los priones son partculas de protenas que son producidas en forma normal por
las clulas. Cuando esas partculas cambian su forma molecular integral se
convierten en priones infecciosos (Pr = protena; i = infecciosa) y se acumulan en
el citosol, provocando la inhabilitacin de la transferencia de informacin en la
clula que las produjo o que las contiene. En la Encefalitis Espongiforme Bovina
(EEB), o Mal de las Vacas Locas y en otras formas de enfermedades
degenerativas, los priones pueden originarse en una especie distinta a la del
anfitrin. Por ejemplo, la EEB tambin conocida como "enfermedad de las vacas
locas" puede afectar los tejidos de los borregos, las cabras, los venados, los gatos,

los cerdos, las ranas, los caballos y los humanos. Los priones, evidentemente, son
partculas inertes que pueden autoreplicarse. Sin embargo, su replicacin ocurre
por resonancia molecular Algo muy parecido a la va de transferencia de
radiacin electromagntica a cualquier medio acuoso. Cuando un prin extrao se
pone en contacto con un prin celular normal, las partculas en movimiento y sin
carga elctrica del prin infeccioso modifican la estructura de las partculas
proteicas celulares normales hasta convertirlas en rplicas exactas del prin
infeccioso. Los priones se propagan mediante la transmisin de protenas
anmalas con mal plegamiento. Cuando un prion entra en un organismo sano
acta sobre la forma normal del mismo tipo de prion existente en el organismo,
modificndola y convirtindola en prion.
IMPORTANCIA
Aunque conocemos muchas enfermedades causadas por bacterias, la mayora no
son patgenas y ejercen una accin benfica para muchos seres vivos. Su
presencia es indispensable en el mantenimiento del equilibrio ecolgico de la
Tierra. Los priones no son seres vivos, son partculas exclusivamente proteicas sin
cido nucleico. Su accin patgena consiste en ser una forma modificada de una
protena natural existente en el organismo que al entrar en contacto con las
protenas originales las induce a adoptar la forma del prin, que suele ser una
forma anormal y disfuncional, todo ello en una accin en cadena que acaba por
destruir

la

operatividad

de

todas

las

protenas

sensibles

al

prin.

Durante muchos aos se crey que las enfermedades prinicas eran causadas
por virus de baja actividad. Estas enfermedades fueron incluso denominadas
como enfermedades de virus lentos, transmisibles o enfermedades vricas no
convencionales. Pero basndose en descubrimientos, el trmino "prion" fue
introducido para distinguir las partculas proteicas infecciosas que causan el
scrapie tanto de los viriones como de los virus. Quizs, la definicin de prion con la
que mejor se trabaja es: partcula proteica infecciosa que pierde el cido nucleico.
Una gran abundancia de datos soporta la teora de que los priones del scrapie

pueden estar compuestos solamente de protenas que adoptan una conformacin

anormal.
Funcin de prpc:
Esta protena se localiza en la superficie celular (es una glicoprotena de
membrana) esto sugiere que podra tener alguna funcin relacionada con la
transduccin de seales, uptake de ligandos, adhesin celular y reconocimiento
celular. Prpc se vera imposibilitada de cumplir su funcin normal en presencia de
prpsc, que le hace cambiar su conformacin y esto sera responsable en parte de
los sntomas que aparecen durante las encefalopatas espongiformes.

Sin

embargo, en experimentos con ratones en los que se hace knock out gnico del
gen

PRP no aparece ningn cambio fenotpico, ni anormalidad visible (22),

aunque otros autores encuentran efectos sobre el ritmo circadiano y el patrn de

sueo (23), anormalidades fisiolgicas y estructurales en el hipocampo (24,
25,26), prdida de clulas de Purkinje en el cerebelo (27) y cambios en los
patrones de aprendizaje y memoria (28,29). Aun as, otros investigadores no
encuentran estas anormalidades (22, 30, 31).

Esto estara relacionado con

diferencias entre las lneas de ratn utilizadas que pueden tener diferencias en las
regiones del gen PRP que se mutagenizan o se reemplazan, siendo ms o menos
susceptibles a la ausencia de prpc funcional. Por otra parte, diferencias
ambientales tambin pueden influir en el fenotipo. En ciertas condiciones, prpc
podra ser necesaria, evidencindose entonces una anormalidad fenotpica en los
mutantes nulos, Por ejemplo un ratn mutante nulo para prpc expuesto a factores
ambientales que aumenten su nivel de estrs oxidativo probablemente presente
anormalidades en el fenotipo relacionadas con la ausencia de prpc ya que esta
protena interviene en la defensa antioxidante. Otra posibilidad es que
simplemente, prpc sea una protena redundante, es decir, tiene una funcin que
tambin poseen otras protenas, de modo tal que la ausencia de prpc est siendo
suplida total o parcialmente por otras protenas, resultando en la ausencia de un
cambio fenotpico visible. La realidad es que actualmente no existe una sola

funcin de prpc de la cual haya podido determinarse inequvocamente que ocurre

en las clulas in vivo salvo permitir la infeccin por parte de prpsc.
Entre las funciones que se cree posee prpc se pueden destacar:
El posible papel en el metabolismo del cobre y defensa antioxidante:
Como anticip en el apartado anterior, prpc cumplira funciones relacionadas con
la defensa frente a los radicales libres. Esta defensa la ejercera mediante su
capacidad de secuestrar iones cobre libres del medio celular (estos iones
participan en reacciones de Fenton involucradas en la produccin de especies
oxidantes) y mediante su asociacin con superoxido dismutasas (SODs) que son
enzimas que participan de la defensa antioxidante convirtiendo el radical libre
anin superxido en perxido de hidrgeno, a las cuales prpc les proporcionara el
cobre. Adems existe evidencia de que la propia prpc tendra funcin enzimtica
de superoxido dismutasa.
Evidencia experimental a favor de dicha funcin de prpc:
Ratones nulos para PRP tienen menor contenido de cobre asociado a membrana
plasmtica y una menor actividad de superxido dismutasas que requieren cobre
como cofactor por lo que son ms propensos a estrs oxidativo (32,33, 34, 35).
Adems, tanto prpc recombinante como tambin pptidos derivados de prpc son
capaces de unir iones cobre a travs de las repeticiones ricas en histidina
presentes en la mitad N-terminal de la protena. La regin con repeticiones
contiene 5 motivos en tndem de octapeptidos cuya forma general es P (H/G)
GGGWGQ y est altamente conservada en las distintas especies de mamferos,
mientras que en la prpc aviar existe una regin similar que consta de ocho
repeticiones en tndem de octapptidos (32).
El cobre parece ser importante para mantener la conformacin de prpc ya que
estabiliza las -hlices de la protena al unirse a esta en forma cooperativa. Esto
se vio en estudios de espectroscopa que muestran que se unen cuatro iones
cobre por molcula de prpc en las histidinas (37, 38). Adems, como es necesario

como cofactor de enzimas e interviene en la produccin de radicales libres cuando

est en forma libre, es necesario su unin a protenas (como por ejemplo prpc) y
compartimentalizacin para minimizar sus efectos negativos.
El contenido de cobre en extractos de tejido cerebral enriquecidos en membrana
de ratones knock out para el gen PRP es de 10 a 15 veces menor que en ratones
control (que expresan prpc) mientras que no se observan variaciones en el
contenido de otros metales. Esto sugiere que prpc es una protena de unin a
cobre, importante para el metabolismo de este ion y podra controlar la actividad
de otras protenas asociadas a membrana que requieren cobre como cofactor
(33). Adems, mediante el empleo de cultivos primarios de clulas cerebelares
expresando diferentes cantidades de prpc se encontr que las clulas con alta
expresin de la misma tienen mayor resistencia al estrs oxidativo en comparacin
a clulas prpc- (29). Esto sugiere que la capacidad de prpc de unir cobre es capaz
de regular la actividad de enzimas involucradas en la defensa antioxidante, en
particular superoxido dismutasas que requieren cobre como por ejemplo la SOD-1
y en consecuencia modular la respuesta al estrs oxidativo. Si se sobreexpresa
prpc en ratones wild type no se observa aumento de expresin de estas enzimas
en ensayos de Northern, pero si su actividad. Los niveles de enzimas SOD son
los mismos en ratones wild type, knock out para PRP y en los que sobrexpresan el
gen, lo que vara es la actividad (29).
Adems segn algunos autores, prpc podra funcionar como un receptor para la
endocitosis de cobre (30), mientras que para otros, la misma prpc tendra dicha
actividad de superoxido dismutasa y unira iones cobre para emplearlos como
cofactor (32,33).
Interaccin con otras protenas: supervivencia, diferenciacin y transduccin de
seales:
Aunque est demostrada la unin de prpc a diversas protenas, la importancia
fisiolgica de cada una de dichas interacciones aun no est del todo clara y no
siempre las interacciones encontradas en estudios in vitro se corresponden con lo

que ocurre in vivo. Se requieren ms estudios para aclarar este punto.

Ciertas

caractersticas estructurales de prpc permitiran su interaccin con otras protenas.

Entre los sitios potenciales para las interacciones se encuentra una de las hlices ubicada en el centro de la molcula y el ancla de GPI (32).
Prpc es capaz de unirse a heparinas y compuestos similares a esta. La heparina
es

un

polianin

sulfatado

similar

los

glicosaminoglicanos.

Los

glicosaminoglicanos forman parte de la composicin de las placas amiloides que

se forman en presencia de prpsc. Aparentemente, las molculas de heparina
secuestran prpc impidiendo que se una a los glicosaminoglicanos por
competencia. En un ensayo de unin de prpc a los poli aniones mediante la
tcnica de surface plasmon resonance muestra que la afinidad de prpc
recombinantes por los polianiones esta correlacionada con una menor capacidad
de interactuar con prpsc (36).
En un trabajo del grupo de Edenhofer (37) se utiliz el sistema de doble hbrido de
levadura para buscar posibles protenas que interactan con prpc. En este estudio
se encontr que una chaperona celular (Hsp60) es un ligando especfico de prpc.
El sitio de interaccin fue mapeado entre los aa 180 y 210 de prpc.
Posteriormente se encontr que la protena Bip (otra chaperona) se asocia a prpc
(32). Dicha protena normalmente interacta con protenas mal plegadas o no
ensambladas y media su translocacin a los proteasomas donde son degradadas
(38).
Prpc tambin se une a la protena NCAM, una molcula de adhesin neuronal
(39), al factor 2 relacionado a NF-E2 (Nrf2) que es un factor de transcripcin (40),
a Bcl-2 (una protena antiapopttica (32,41) y a la apolipoproteina E (ApoE),
protena de membrana que est involucrada en la enfermedad de Alzheimer. Prpc
se une al extremo N-terminal de ApoE a travs de su regin N-terminal. Adems
esto ocurre en los hoyos revestidos de clatrina de la membrana plasmtica. No se
conoce que funcin cumple en la clula esta interaccin y algunos autores incluso
proponen que podra tener relacin con la conversin de prpc a prpsc (42,43).

Otra protena caracterizada como ligando de prpc es el precursor del receptor de

laminina de 37Kda (44). Se encontr que existe interaccin de este receptor y
prpc tanto in vitro como in vivo y adems est sobreexpresado en rganos que
acumulan prpsc (45)
Actualmente se cree que ste es el receptor de prpsc en las clulas de mamfero
in vivo, aunque muy probablemente no sea el nico.
Prpc tambin

se une a la laminina, y el complejo laminina-prpc favorece la

neuritognesis de clulas en cultivo tratadas con factor de crecimiento neuronal

(NGF) (46), por esto se piensa que prpc podra estar involucrada en el
reconocimiento de ligandos y adhesin celular, mediante los cuales se disparan
seales de proliferacin y supervivencia en las clulas (32,47).
La laminina es una glicoprotena de 880 kD compuesta por dos polipptidos
grandes y uno ms corto dando un heterotrmero. Cumple funciones relacionadas
con migracin celular, adhesin clula-clula, apoptosis, diferenciacin

proliferacin celular, mediante su interaccin con receptores de membrana. En el

sistema nervioso central, la laminina participa de la diferenciacin celular a travs
de su interaccin con integrinas y tambin de la migracin de clulas y
regeneracin axonal. Tambin evita la apoptosis de neuronas. Adems, la laminina
es degradada por la plsmina, que se produce a partir del plasmingeno por
accin del activador de plasmingeno. La deplecin de laminina en las neuronas
es seal de apoptosis (47).
En ausencia de prpc la degradacin de la laminina se encuentra aumentada,
haciendo a las neuronas ms sensibles a la apoptosis. Prpc acta como receptor
de la laminina de alta afinidad y saturable. Prpc se une a la cadena de la
laminina (que es la ms conservada en todos los tipos de laminina) a travs de su
extremo C-terminal (32) adems puede interactuar con el plasmingeno (48).
PrPc y transduccin de seales
A travs de su localizacin en la membrana, prpc podra participar en vas de
transduccin de seal. Segn algunos autores, la infeccin por priones afecta la

funcin de canales de calcio. Por ejemplo, se vio que en clulas infectadas

estimuladas con bradikinina (un estimulante de la funcin de los canales de calcio)
presentaron

una menor respuesta de los mismos en comparacin a clulas

control no infectadas (32).

Adems, un fragmento de prpsc de 21 kD (el prp 106-126) es txico para cultivos
primarios de clulas del hipocampo de rata. Este pptido es capaz de formar
canales permeables a iones Ca y Na en membranas plasmticas (32,

49).

Tambin se observ que el pptido incrementa la concentracin de calcio en

clulas de microglia en cultivo obtenidas de ratones prp-/- lo cual activa vas de
sealizacin (50). Dicho pptido permite la activacin de las kinasas Lyn y Syk
que participan de una cascada de transduccin que resulta en la liberacin de
calcio intracelular y activacin de la kinasa C y de una tirosin kinasa dependiente
de calcio denominada PYK2. Luego ocurre la activacin de MAP kinasas (ERK-1 y
2) (32).
Prpc dispara la cascada de sealizacin mediante el aumento del nivel de
fosforilacin de la tirosin kinasa fyn y la caveolina-1 es el factor intermediario entre
prpc que est del lado extracelular de la membrana y Fyn que es citoplasmtica
(32,43).
Por otra parte, la unin de prpc a la laminina aparentemente dispara la cascada de
cAMP y la liberacin de calcio (32).
Migracin celular:
Prpc en clulas endoteliales que forman parte de la barrera hematoenceflica se
acumula en las uniones clula-clula y participa de la transmigracin de monocitos
de los tejidos perifricos hacia el cerebro (51) posiblemente mediante
reconocimiento especfico de ciertas molculas de la superficie de los monocitos.
Biosntesis de prpc:
Prpc es sintetizada por ribosomas asociados al retculo endoplsmico. Al ser
translocada al lumen del retculo, se cliva el pptido seal N-terminal, se aade un

core de oligosacaridos con unin N en dos sitios (sitios A y B en la fig2), se forma

un puente disulfuro y se adiciona el GPI. La protena es transportada entonces en
vesculas al Golgi donde se procesa el oligosacrido, y se agrega cido sialico al
GPI y tambin al oligosacrido (21).
Como resultado se obtiene la protena madura prpc que es transportada a la
membrana plasmtica donde queda anclada por medio del GPI. La cadena de
oligosacaridos que se agrega inicialmente en el retculo es del tipo alta manosa y
es sensible a la digestin con endoglicosidasa H. Esta cadena de oligosacrido es
modificada en el Golgi y queda como un oligosacrido complejo que contiene
cido slico y resulta resistente a la endoglicosidasa H (35).
El ancla de GPI se agrega en el retculo luego del clivaje del segmento hidrofbico
C- terminal y posee una porcin central que es comn a otros GPIs, presentes en
otras glicoprotenas, este est compuesto de un residuo de etanolamina unido al
aa C-terminal por una unin amida, tres residuos de manosa, un residuo de
glucosamina no acetilado y una molcula de fosfatidilinositol (PI) que se encuentra
insertada en la membrana plasmtica. El GPI de prpc (y de prpsc) es poco comn
porque posee cido silico en la porcin central, (52). La cadena de oligosacrido
y el ancla de GPI de prpc son totalmente idnticas a la de prpsc, ambas isoformas
son sintetizadas de la misma manera y sufren las mismas modificaciones
posttraduccionales, existen diferencias en el oligosacrido entre las distintas cepas
de prion (53).
La modificacin experimental de la glicosilacin de prpc altera el transporte de la
misma. La mutacin de los dos sitios consenso de glicosilacin existentes en el
gen PRP de ratn o en la regin N-terminal producen plegamiento anmalo de la
protena y su acumulacin en un compartimiento proximal al Golgi medio (54),
Pero la glicosilacin correcta no es totalmente necesaria para el transporte ya que
la mutacin del sitio consenso C-terminal o la sntesis de prpc en presencia de
tunicamicina (un inhibidor de la glicosilacion) no impide que algunas molculas
lleguen a la superficie celular (54). Adems, en ausencia de inhibidores es posible
encontrar pequeas cantidades de prpc no glicosilada en la membrana (35,54).

Por otra parte, las molculas de prpc con alguno de los sitios de glicosilacin
mutados presentan caractersticas que las asemejan a prpsc, al igual que las que
son sintetizadas en presencia de inhibidores de la glicosilacion (54).

En

conclusin puede decirse que prpc tiene tendencia a adoptar la conformacin de

prpsc en condiciones fisiolgicas durante su biosntesis y transporte, pero las
cadenas de glicano que posee ayudan a impedir este cambio conformacional.
Adems, esto es coherente con el hecho de que existen distintas cepas de priones
y estas presentan diferentes patrones de glicosilacin, que las distinguen entre s
(21). Parece que en la mayora de los casos, lo que diferencia una cepa de otra
es precisamente el patrn de glicosilacin.
El papel de las Caveolas y vesiculas revestidas de clatrina
Muchos receptores celulares (como por ejemplo el receptor de LDL) se ubican en
dominios de la membrana plasmtica recubiertos de clatrina (chlatrin coated pits)
La clatrina es una protena oligomrica de alto peso molecular formada por tres
cadenas pesadas y tres cadenas livianas que se ensamblan formando una
estructura llamada triskelion que polimeriza en la cara citoslica de la membrana
plasmtica. Esto produce la invaginacin de la membrana que cuando es
endocitada origina vesculas recubiertas de clatrina.

Entre las

estructuras

celulares responsables de la endocitosis de prpc se encuentran estos dominios de

membrana plasmtica recubiertos de clatrina (21, 61).

Mediante microscopa

electrnica se localiz prpc marcada con oro en las vesculas recubiertas de

clatrina. Adems, la incubacin de clulas que expresan prpc en medio hipertnico
con sucrosa (esto lleva a la disrupcin de las uniones entre molculas de clatrina)
inhibe la endocitosis de prpc y en preparaciones purificadas de vesculas
recubiertas de clatrina de tejido cerebral es posible encontrar prpc mediante
anticuerpos especficos. El segmento N-terminal de prpc es esencial para la
endocitosis.

Si se deleciona esta regin, la internalizacin de la protena

disminuye considerablemente (62). Se sabe que los receptores transmembrana

que son internalizados por mecanismos dependientes de las vesculas recubiertas
de clatrina en general poseen residuos de tirosina que se unen a la clatrina a

travs de protenas adaptadoras. Resulta extrao que prpc sea internalizada por
dicho mecanismo ya que es una protena anclada a membrana mediante GPI y
este tipo de protenas no posee dominios citoplasmticos que puedan interactuar
con la clatrina a travs de las protenas adaptadoras (21).

Algunos autores

proponen que por esta razn prpc no puede ser endocitada en vesculas
recubiertas de clatrina sino que en realidad lo hara mediante un mecanismo
alternativo que involucra caveolas (63). Las caveolas tambin son dominios de
membrana que presentan cierta invaginacin, pero estn recubiertos de una
protena denominada caveolina del lado citoplasmtico en lugar de clatrina. Estas
estructuras estn involucradas en sealizacin celular y uptake de ligandos. Son
abundantes en fibroblastos, clulas musculares lisas y clulas endoteliales. Sin
embargo, clulas neuronales que expresan prpc y que no expresan caveolina son
capaces de internalizar prpc esto sugiere que o bien prpc es endocitada a travs
de la va endoctica clsica dependiente de clatrina a pesar de ser una protena
con GPI o lo hace por medio de otro mecanismo en dichas clulas.
Aparentemente, en las neuronas prpc se ubica en microdominios de membrana
que poseen otras protenas y cierta composicin de lpidos particular. Estas
regiones se denominan lipid Rafts (balsas lipdicas) y actualmente el modelo
aceptado para la endocitosis de prpc involucra a estos dominios ms que a la
clatrina (21). Por otra parte, el mecanismo va clatrina podra ser correcto si prpc
interactuara en la membrana con alguna protena receptora en los hoyos
recubiertos de clatrina. Esta protena aportara el dominio citoslico que se une a
las protenas adaptadoras que est ausente en prpc y adems poseera un
dominio extracelular capaz de unirse a la porcin N-terminal de prpc. La unin de
iones cobre a prpc estimulara la unin de sta a su receptor y en consecuencia se
favorecera la endocitosis del complejo cobre-prpc unido al receptor.

Dicho

receptor aun no fue identificado inequvocamente, ms bien se encontraron varios

posibles candidatos, por ejemplo laminina, NCAMs, etc. Una aproximacin
experimental para encontrar el receptor es la bsqueda de sitios de unin en prpc
para protenas conocidas. En un estudio de este tipo realizado con protenas de
fusin conteniendo el fragmento N-terminal de prpc se encontr que dicha regin

posee sitios de unin para glicosaminoglicanos (GAGs), en especial heparan

sulfato (21).
Prpc se asocia a lipid rafts ricos en colesterol y glicoesfingolpidos a travs de la
unin de su ancla de GPI con lpidos saturados presentes en estos dominios de
membrana y tambin mediante la interaccin de su extremo N-terminal con
protenas presentes en los rafts como por ejemplo la caveolina-1. Dichos dominios
lipdicos son resistentes a detergentes y presentan diversas protenas ancladas
por GPI (21).
En algunas clulas, prpc es endocitada a travs de caveolas, pero en las
neuronas, una vez que une cobre en las repeticiones de octapptidos de la regin
N-terminal, se transloca fuera de los rafts y va a regiones de membrana que se
solubilizan cuando son tratadas con detergentes desde donde accede a los hoyos
recubiertos de clatrina, donde es endocitada. La regin N-terminal de prpc es
importante para la unin de la protena adaptadora ubicada en las regiones
recubiertas de clatrina. La asociacin de prpc a los rafts ocurre a travs de
diversas molculas involucradas en la sealizacin celular, entre las que puede
destacarse la caveolina-1 y las tirosinkinasas Fyn y Scr. El agrupamiento de prpc
en los rafts dispara procesos relacionados con la transduccin de seales, entre
ellos, el reclutamiento de molculas de adhesin celular que promueven el
crecimiento de las clulas neuronales. Adems, los lipid rafts funcionaran como
un microambiente favorable para la conversin de prpc en la forma patolgica
prpsc (64).
La barrera de especies
Existe especificidad de especies para la transmisin de priones, lo que se conoce
como la barrera de especie, propuesta por Pattison (17, 18, 32,72), que se
manifiesta como un periodo de incubacin ms prolongado que lo esperado al
pasar de una especie a otra. Este efecto se observa an entre especies muy
cercanas, esto fue demostrado con ratones y hmsteres (18, 73).

La transmisin de priones entre distintas especies es un proceso estocstico. En

el caso de ocurrir, este proceso es muy poco eficaz y sucede con una
prolongacin del tiempo de incubacin que tras pases subsiguientes, o
adaptacin, se acorta y estabiliza y la transmisin deja de ser un proceso
probabilstico. Los priones sintetizados de novo reflejan la secuencia del gen PRP
del husped. En los primeros estudios al respecto se puso de manifiesto que la
barrera de especie era la manifestacin de las restricciones de secuencia de un
proceso de reconocimiento molecular. As, la infeccin ocurre a travs de un
complejo prpc-prpsc, cuya formacin est gobernada por el grado de identidad de
secuencia entre la protena endgena y la exgena. La identidad en el segmento
96-167 es necesaria pero insuficiente la interaccin de prpc con prpsc es ms
eficaz cuanto mayor es la identidad de secuencia en la regin 96-167. Se requiere
adems la presencia de una protena adicional que reconoce la regin C-terminal
de prpc. Dicha protena es una chaperona, originalmente denominada protena X.
La interaccin de prpc con la chaperona es ms eficiente cuando ambas son de la
misma especie (32).
La existencia de distintas cepas de priones:
Una de las caractersticas de los priones es su multiplicidad, es decir, la existencia
de mltiples cepas, (tambin denominadas inculos o strains) similar a lo que
ocurre con los virus y bacterias.

Las cepas se diferencian en el tiempo de

incubacin y en los patrones de lesin en el sistema nervioso cuando son

inoculados en lneas de ratn o hamster estandarizadas (32, 74). En esto se basa
un ensayo en animales de laboratorio de valor diagnstico y confirmatorio de TSEs
(ver seccin diagnostico). Todas las cepas de prpsc tienen la misma secuencia de
aminocidos pero se diferencian en el patrn de glicosilacion y en el tamao de los
fragmentos que se originan cuando son incubadas con proteasas, esto se debe a
que presentan variaciones en su conformacin que hacen que ciertas regiones de
la protena estn ms o menos expuestos a la accin de las proteasas. Las
caractersticas propias de cada cepa de prpsc son transferibles a prpc durante la
reaccin de cambio conformacional, pues prpc adquiere la conformacin exacta de

prpsc. Adems, para que la conversin ocurra, la secuencia aminoacdica de prpc

no solo debe ser lo ms similar posible a la de prpsc segn el postulado de la
barrera de especie sino que el patrn de glicosilacin tambin debe coincidir (32,
74).
El hecho de que las distintas cepas de priones produzcan distintos patrones de
lesiones cerebrales permite distinguirlas y tiene valor diagnstico.

Mediante

anlisis computarizado de imgenes de cortes de tejido se puede distinguir cada

cepa, pues el patrn de lesiones funciona como un sello de identidad til en el
diagnostico (18).
Mtodos de inactivacin de priones:
Muchas de las caractersticas biolgicas de los priones son similares a aquellas
correspondientes a los virus. Sin embargo, se distinguen de los mismos debido a
la marcada resistencia que presentan frente a los agentes inactivantes como el
calor y las radiaciones. Dicha resistencia frente a la mayora de los agentes
inactivantes que se utilizan contra virus y bacterias plantea un grave problema a la
hora de decidir qu procedimientos pueden asegurar la destruccin de la
infectividad (18).
Caractersticas fisicoqumicas y biolgicas de los priones prpsc :
Propiedades fsico - qumicas:

Filtrables (tamao de poro: 0.22 m)

No presentan estructuras de partculas (como los virus) definidas al

microscopio electrnico
Resistentes a: autoclavado, formol, radiaciones, etanol, agua oxigenada,

nucleasas, parcialmente resistentes a proteasas.

Propiedades biolgicas:
Prolongado perodo de incubacin
No inducen respuesta inmune en el hospedador infectado
Existencia de cepas (strains)
Composicin proteica exclusivamente: protena del prin (PrP)
Presentan barrera de especie

Los procedimientos que logran reducir el ttulo de la infectividad a valores

razonables incluyen: hipoclorito de sodio 10% (1hora), hidrxido de sodio 2 M,
permanganato de potasio 0,002 M, fenol 90%, autoclavado a 134C, 30 min,
cloroformo, ter, acetona y urea 6 M (9,18).
Los procedimientos mencionados aseguran la disminucin de la infectividad de
materiales contaminados por priones, pero aun as existen evidencias de que
materiales sometidos a una temperatura de 600C, a la cual la materia orgnica ya
se ha descompuesto, conservan restos de infectividad. Este hecho podra
explicarse considerando que debido a la carbonizacin que sufre la materia
orgnica a esa temperatura, se podran formar moldes de carbn sobre las
molculas de PrPSc y esos moldes inorgnicos seran los que induciran a PrPc a
plegarse de manera incorrecta (18).
Enfermedades causadas por priones: Las encefalopatas
espongiformes
Las encefalopatas espongiformes transmisibles (TSEs),

son enfermedades

neurodegenerativas fatales, con periodo de incubacin lento, pueden tardar aos o

dcadas en manifestar sntomas, y actualmente no tienen tratamiento. Se
producen debido a la acumulacin de priones prp

(especficamente la

conformacin prpsc de dicho prion) en el sistema nervioso. Esto desencadena la

muerte neuronal por apoptosis. Este tipo de enfermedad incluye la enfermedad de
Creutzfeldt- Jacob (CJD), el sndrome de Gerstmann-Strausler (GSS), el insomnio
fatal (FFI) y el kuru entre las que afectan a los humanos, pero se conocen muchas
ms que son propias de otras especies animales (Tabla 1), como por ejemplo la
enfermedad del cansancio crnico de los crvidos, el scrapie del ganado ovino y la
renombrada encefalopata espongiforme bovina (BSE), tambin conocida como el
mal de la vaca loca. Esta ltima tiene una variante surgida recientemente que es
capaz de infectar al ser humano dando los que se conoce como nueva variante de
CJD y se cree que la va de transmisin es a travs de carne vacuna contaminada
con el prion de la BSE.

El conocimiento del origen infeccioso de las TSEs tiene larga data: En 1939 se
logr transmitir el scrapie a cabras mediante inyeccin intraocular (74,79). En
1950, Carleton Gajdusek describi el kuru, que es endmico de una tribu de
Nueva Guinea y se transmite entre los miembros de la misma a travs del
canibalismo ritual. Posteriormente el veterinario William Hadlow noto las similitud
neuropatolgica entre el kuru y el scrapie. En trabajos siguientes se demostr que
el kuru y el CJD son transmisibles a primates. Estos trabajos despejaron toda
duda acerca de la naturaleza infecciosa de estas enfermedades (21, 74).
A principios de los aos 80, Stanley Prusiner propuso la hiptesis del prion (72),
esta establece que el agente infeccioso responsable de las encefalopatas
espongiformes est compuesto exclusivamente por un nico tipo de protena a la
cual denomin prion y actualmente se la conoce en la literatura como prpsc (por
protena del prion del scrapie) En trabajos posteriores se demostr que prpsc es
una versin alterada de una protena celular normal, codificada por el hospedador,
prpc (por protena del prion celular) y que adems es una protena altamente
conservada que se encuentra en todas las especies analizadas hasta la
actualidad.
Actualmente se sabe que prpsc propaga su conformacin entre las molculas de
prpc con lo cual todas quedan con la misma conformacin que prpsc. La reaccin
es autocataltica. As, los priones presentan un novedoso sistema de propagacin
que contradice el dogma central de la biologa pues se trata de transmisin de
informacin a travs de los cambios conformacionales de una protena y no a
travs de un cido nucleico.
Por otra parte, las enfermedades producidas por los priones son nicas porque
pueden ser tanto de origen gentico (debido a mutaciones en el gen PRP en la
lnea germinal), espordico (por mutacin somtica al azar no determinada) o
transmisible. Son las nicas enfermedades conocidas que pueden ser a la vez
genticas (familiar) e infecciosas (80,81). Dado que el agente que las produce
tiene la misma secuencia de aa que prpc, en estas enfermedades no aparecen
procesos inflamatorios ni respuesta del sistema inmune (82).

En trminos generales, los sntomas que presentan son demencia, disfuncin

motora, ataxia cerebelar, disautonoma y en el caso particular del FFI aparece
insomnio progresivo. Dichos sntomas aparecen luego de un periodo largo de
aos a dcadas luego de la exposicin inicial al patgeno. En el caso del kuru, FFI
y CJD aparecen a edades avanzadas, en general a partir de los 50 aos de edad,
luego de dcadas de incubacin, aunque vCJD se manifiesta a edades tempranas,
en la juventud. Por otra parte, GSS solo tiene unos 10-12 aos de incubacin
antes de que los sntomas comiencen a manifestarse (80). Por otra parte, en
cortes de tejido nervioso se observa espongiosis junto con atrofia del tejido
nervioso por perdida neuronal as como tambin deposicin de placas de tipo
amiloide, stas son ms prominentes en el GSS y el Kuru y se asemejan a la
amiloidosis producida en la enfermedad de Alzheimer, que tambin es producida
por una protena con plegamiento anmalo (80).
Existe evidencia de que vCJD se origin a partir de la transmisin del prion de la
BSE a humanos a partir de carne contaminada. Adems, el prion de la BSE seria
de origen ovino, derivado del prion causante del scrapie del ganado ovino, este
habra cruzado la barrera de especie alrededor de 1986 cuando se comenz a
alimentar al ganado con harinas de hueso y carne proveniente de ovinos
infectados de scrapie. Hacia 1988 la epidemia resultante de BSE fue suprimida
cuando se interrumpi esta prctica, pero en 1996 hubo otra epidemia por el
mismo motivo y a dems aparecieron los primeros casos en humanos (vCJD) (66).
Adems se conocen otra va de trasmisin de CJD aparte de la oral que es la va
iatrognica a travs de inyecciones de hormona de crecimiento obtenida de
pituitaria, trasplantes de crnea, instrumentos quirrgicos, etc., pues los priones
son bastante resistentes a los mtodos de esterilizacin (83,84).
Se estima que el 10 % de los casos de CJD y todos los de GSS y FFI se deben a
mutaciones en la lnea germinal en el gen PRP en el cromosoma 20 (17). Dichas
mutaciones favorecen el cambio espontaneo de conformacin de prpc a la forma
patognica prpsc sin necesidad de que exista infeccin con prpsc exgena.
Mutaciones puntuales en el extremo C-terminal de prpc estn asociadas a la

aparicin de FFI, CJD y GSS.

Por otra parte, mutaciones de insercin en el

extremo N-terminal estn asociadas a la aparicin de CJD y adems consisten en

la repeticin de un octapptido presente en la protena (1 a 9 copias del mismo).
Dicho octapptido es normal que este repetido solo 5 veces. Existe un
polimorfismo en el codn 129 del gen PRP, este codn puede codificar metionina
o valina y esto tiene influencia en el fenotipo de la enfermedad inducida por
mutaciones en otras posiciones (17).

Adems, se puede transmitir una

encefalopata espongiforme de tipo familiar (es decir de origen gentico producida

por mutacin de PRP) a animales de laboratorio, por ejemplo por inyeccin
intracerebral, en nervios perifricos e inoculacin oral de preparaciones
homogeneizadas de tejido del individuo que padece la TSE familiar, y esto
demuestra que en estas enfermedades genticas se forman partculas de prion
infectivo prpsc.
Por otra parte, en las variantes espordicas de estas enfermedades existe una
conversin espontnea de prpc a prpsc, segn se cree esto ocurre en ausencia de
mutaciones en el gen y en ausencia de prpsc exgena (74).

Algunas

investigaciones sugieren que en realidad podra haber alguna mutacin somtica

no detectada que favorece la conversin de prpc a prpsc, en el tejido con dicha
mutacin, o que podra tratarse de mutaciones en algn gen que codifica para
una protena que interacta con prpc afectando su conformacin, por ejemplo una
chaperona. Otra posibilidad es el cambio espontaneo de prpc normales a la forma
infecciosa en respuesta a algn cambio en el ambiente celular (por ejemplo
alteraciones producidas por otras patologas) que afecte su conformacin.
Principales lesiones que aparecen en el sistema nervioso
Deposicin de amiloides:
En muchas encefalopatas espongiformes se observan en las neuronas mediante
la coloracin con rojo congo partculas con forma de bastn similares a los
amiloides. Al microscopio electrnico se observan como fibrillas conocidas como

SAF (fibrillas asociadas a scrapie) y tambin como prion rods. Las partculas
SAF se deben a la agregacin de molculas de Prpsc formando amiloides (85).
Los amiloides son agregados proteicos en forma de fibrillas de unos 100 A de
dimetro compuestos por protenas con conformacin de lminas planas. En las
TSEs estn compuestos por prpsc. Son insolubles y bastante resistentes a
proteasas. Se tien intensamente con colorantes como el rojo congo y se
acumulan en el exterior celular como consecuencia de la muerte celular por
apoptosis.
Estos complejos son tpicos de enfermedades neurodegenerativas tales como el
Alzheimer y la enfermedad de Parkinson, aparecen tambin en las enfermedades
causadas por priones. Adems existen amiloidosis hereditarias, en las cuales se
forman amiloides debido a la mutacin en alguna protena que entonces adquiere
una conformacin que favorece su agregacin con ms molculas de s misma
(81).
Los amiloides no aparecen solo en el sistema nervioso de los mamferos y otros
vertebrados sino que seran bastante comunes entre los organismos eucariotas en
general. Los priones de S.cerevisiae tambin los producen.
Espongiosis
Se manifiesta tanto en la sustancia gris como en la sustancia blanca del sistema
nervioso central. Consiste en una intensa vacuolizacin del citoplasma de las
neuronas, quedando el ncleo y otras organelas en la periferia celular. Es decir,
se trata de la formacin de vacuolas intracelulares y no extracelulares como
originalmente se pens (estas aparecen en preparados de tejido nervioso pero
constituyen un artefacto producido por el tratamiento de fijacin) (66).
La vacuolizacion que se observa en las TSEs est relacionada con la
sobreexpresin de acuoporinas 1 y 4 que producen el incremento del contenido de
agua intraneuronal (86).

Otra lesin que puede observarse es la astrogliosis, que se puede detectar

mediante la coloracin de Nissl y Cajal. La astrogliosis es la hiperplasia e
hipertrofia de los astrocitos en respuesta a daos en el sistema nervioso y uno de
los marcadores bioqumicos de la misma es la presencia de alta concentracin de
la protena glial acdica (GFAP) (87).
Priones de levadura y otros hongos
Una manera en que un prion de levadura (o cualquier otro) puede manifestarse es
a travs del cambio en una protena codificada en un gen cromosmico, de forma
tal que la forma alterada de la protena es necesaria para la generacin de ms
molculas de la misma forma a partir de la forma no alterada (es lo que ocurre con
prpsc y prpc). Dicho cambio conformacional va a tener alguna consecuencia para
la clula: si la forma infecciosa es txica (caso de prpsc) entonces la clula ser
depletada de la forma normal y sufrir apoptosis. Esto es lo que ocurre con el
prion prp como explique antes. Ahora, si la conformacin infecciosa es la forma
inactiva de la protena normal entonces en las clulas en presencia del priones
infecciosos, la protena normal se inactivar al convertirse en ms molculas de la
forma infecciosa y el fenotipo se ser el mismo que se obtiene en un mutante nulo
para el gen de la protena en cuestin. Este es el caso del prion Psi, que es la
forma inactiva del terminador de la traduccin sup35 y del prion URE3, que es la
forma inactiva de ure2p (un regulador del catabolismo del nitrgeno). Si la
conformacin infecciosa es la forma activa en alguna funcin celular, entonces el
fenotipo dado por esta conformacin es el wild type. Esto es lo que ocurre con el
prion Het-s de podospora y con el prion beta de levadura. Ambos priones realizan
funciones celulares normales y por esto la mayora de las cepas de hongo wild
type los tienen. En cambio, psi est ausente en cepas wild type, su presencia
seria desventajosa debido a la inhibicin de la traduccin (66). Aun as se propaga
eficientemente en la poblacin pues siempre que se produzca un mating
(cruzamiento) entre una levadura psi positiva con una negativa, toda la progenie
ser psi positiva. La infeccin ocurre a travs del intercambio citoplasmtico entre
las levaduras. Se trata de una herencia citoplasmtica con genes no
cromosomales que adems son protenicos en forma anloga a la herencia de

mitocondrias. En los hongos filamentosos, el intercambio involucra la fusin de

hifas de colonias distintas y a travs de stas pueden pasar los priones.
Los priones de levadura poseen tres caractersticas que los distinguen de
los virus:
Curabilidad reversible: esto significa que la conformacin infecciosa se puede
eliminar por completo de las clulas infectadas mediante algn tratamiento y aun
as luego puede volver a aparecer en forma espontnea sin necesidad de fuente
externa

pues

la

protena

celular

puede

cambiar

espontneamente

de

conformacin con cierta frecuencia baja originando de novo la conformacin

infecciosa. Esto con un virus no puede ocurrir, una vez que es eliminado de una
clula no puede volver a aparecer en ella si no hay una nueva infeccin.
La presencia de la conformacin no replicativa es necesaria para la propagacin
de la conformacin infecciosa.
La sobreexpresin de la forma no infecciosa incrementa la frecuencia con que esta
aparece (es porque aumenta la probabilidad del cambio espontaneo.)
El prion URE3
Las clulas de levadura son capaces de reprimir la sntesis de las enzimas y
transportadores necesarios para el crecimiento en medios pobres en ciertos
nutrientes. Cuando crecen en medios ricos en nitrgeno como por ejemplo con
glutamato, amonio, etc., la protena Ure2p se une a los factores de transcripcin
Gln3p y Gat1p en el citosol impidiendo su transporte al ncleo con lo cual no
pueden actuar sobre los genes involucrados en el metabolismo de compuestos
pobres en nitrgeno como por ejemplo el alantoato y el ureidosuccionato (USA).
Entre los genes que intervienen

se encuentra el DAL5 que codifica para un

transportador de ambos compuestos mencionados y es inhibido por los factores

mencionados (5). Mutaciones en el gen ure2 que codifica la protena ure2p no
presentan la represin de los genes involucrados en el metabolismo de
compuestos pobres en nitrgeno aun en presencia de compuestos ricos en
nitrgeno como el amonio (1, 5, 112,113). La protena codificada por el gen ure2

puede existir en dos conformaciones, una de ellas es la protena ure2p

mencionada y la otra se denomina URE3 que tiene comportamiento infeccioso en
forma anloga al caso de prp. En presencia de URE3, las levaduras presentan el
mismo fenotipo que las levaduras mutantes nulas para el gen ure2 pues URE3
convierte a ure2p en ms copias de s misma. URE3 posee las tres propiedades
esperadas para los priones de levadura: puede ser eliminado de las clulas
infectadas mediante tratamiento con guanidina pero de los clones curados se
pueden aislar subclones que son URE3 positivos, La sobreexpresin de ure2p
aumenta la produccin de URE3, no por efecto del mRNA de ure2p sino por la
presencia de la protena (5,6) y por ltimo, como indiqu, el fenotipo de las clulas
URE3 positivas es el mismo que el de los mutantes nulos para Ure2p. Esto ocurre
porque al propagarse URE3 mediante conversin de molculas de ure2p, estas
cambian de conformacin tomando la conformacin infecciosa de URE3 y
entonces ya no pueden cumplir su funcin (113). Las clulas que presentan URE3
tienen tambin ure2p parcialmente resistente a proteasas y esta resistencia es
caracterstica de los amiloides (6) Ure2p se agrega especficamente en presencia
de URE3 en forma dependiente de la secuencia de su extremo N-terminal (5,6).
De hecho, el extremo N-terminal de 65 aa de Ure2p se denomina extremo prinico
y es necesario para la agregacin y tambin para la inactivacin de la protena.
Por otra parte, el dominio C-terminal de la protena es el que cumple la funcin
represora de la transcripcin. Adems, el dominio prinico es capaz de agregarse
en ausencia del dominio C-terminal y propagar a URE3. De esta manera, URE3 se
propaga mediante la conversin de molculas de ure2p en ms molculas de s
misma que luego se agregan en amiloides.
El prion PSI
Este prion tiene dos conformaciones: sup35 que es la versin normal con funcin
en la traduccin y psi que es la forma infecciosa que se propaga a si misma
mediante conversin de las molculas de sup35. Tambin forma amiloides como
URE3 y su propagacin puede ser tanto inhibida como favorecida por chaperonas
como por ejemplo hsp104, hsp40 y hsp70 (114,115). Sup35 es una subunidad de
un factor de terminacin de la traduccin con

funcin de reconocimiento de

codones stop y clivaje del pptido del tRNA. En presencia de tRNAs supresores se
establece una competencia entre el reconocimiento del codn de terminacin por
dicho tRNA lo cual permite insertar ms aminocidos y el reconocimiento del
codn de terminacin por parte del factor de terminacin, que resulta en la
terminacin de la sntesis. La presencia de la forma infecciosa psi repleta a las
clulas de sup35 y de esta manera la sntesis de protenas continua ms all del
codn de terminacin. (116,117). Al igual de lo que ocurre en el caso de ure2p, el
extremo C-terminal de sup35 es el que se encarga de la funcin celular normal, es
esencial para el crecimiento celular y presenta homologa con el factor de
elongacin de la traduccin EF-1 (112) mientras que el dominio N-terminal es el
que reconoce psi y est involucrado en el cambio conformacional y capacidad de
formar amiloides. Este dominio, in vitro es capaz de agregarse en presencia de psi
y se lo denomina dominio prion, es tpico de varios priones de levadura.
Mutaciones en este dominio pueden impedir la propagacin de psi (112) por otra
parte el dominio C-terminal es funcional por si solo en sistemas de traduccin in
vitro (116,117). El dominio prinico N-terminal de sup35 al igual que el de ure2p es
rico residuos de glutamina y asparagina. Adems, los residuos de glutamina son
importantes para la propagacin de la conformacin infecciosa (118) y el dominio
posee 5 repeticiones de octapeptidos similar al del prion prp (6). La delecin de
repeticiones inhibe la propagacin de psi, mientras que la adicin de nuevas
repeticiones en el dominio aumenta la frecuencia de aparicin de la conformacin
psi de novo (119).
En la figura 3 se muestra un esquema resumido de los mecanismos de accin de
los priones PSI (figura 3a) y URE3 (figura3b y c)

Figura 3. Algunos priones

de

levaduras

sus

mecanismos de accin. a)
Psi secuestra molculas de
sup35

(isoforma

normal),

que pasan a formar parte

del amiloide en crecimiento
(cuadrados rojos). De esta
forma

sup35

no

puede

cumplir su funcin en la
terminacin

de

la

traduccin

b) Ure2p regula el metabolismo del nitrgeno. Cuando las clulas crecen en

medio con nitrgeno, ure2p se une a gln3p, impidiendo la transcripcin de genes
necesarios para el crecimiento en medios pobres en nitrgeno, como por ej.
Dal5p, que es un transportador de alantoato y de ureidosuccinato (USA). El
alantoato es una fuente pobre de nitrgeno, mientras que USA es un
intermediario de la sntesis de uracilo.
c) El prion URE3 secuestra
molculas

de

ure2p

en

amiloides. De esta manera

disminuye la cantidad de
molculas disponibles para
la

regulacin

del

metabolismo del nitrgeno

(6)

Otros priones:
PIN
Es un prion que determina la inducibilidad del prion psi. La habilidad de la
sobrexpresin de sup35 de inducir la aparicin espontanea de psi es mayor en
presencia de PIN. Existe en dos formas, la conformacin normal se denomina
rnq1p y esta codificada en el gen RNQ1 y la conformacin prinica (pues es la que
se puede propagar) es PIN. En presencia de PIN, la protena rnq1p se agrega en
amiloides y toma la conformacin de PIN (6).
Het-s
Interviene en la incompatibilidad citoplasmtica en podospora, es decir, cumple
una funcin normal. Cada cepa de dicha especie posee su propia cepa de Het-s,
que se diferencia de la de las dems cepas en solo 13 de sus 289 aminocidos.
Las cepas de Het-s se comportan como alelos no cromosomales. El mating solo
puede ocurrir entre colonias de podospora con el mismo tipo de het-s (5,6)
Beta
Se trata de un prion con funcin enzimtica. La forma infecciosa se denomina beta
y es la forma activa de la proteasa vauolar beta. Esta conformacin es esencial
para activar al precursor inactivo. La presencia de la forma beta es esencial para
las clulas de levadura, en su ausencia son incapaces de esporular y mueren ms
fcilmente al ser cambiadas de medio (6,119).
BIBLIOGRAFA
http://www.uacj.mx/ICB/redcib/Documents/REB_DOC/2003/03/REB20031_EL_PLEGAMIENTO.pdf
http://vet.unicen.edu.ar/html/Areas/Virologia/Documentos/2010/PRIONES.pdf
https://es.scribd.com/doc/72067090/PRIONES
http://arxiv.org/ftp/arxiv/papers/1106/1106.3533.pdf

http://www2-ricardo.blogspot.mx/2007/03/importancia-de-los-prionesviriones-y.html