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Fundamentos de Metodologa Analtica

Ao 2012

Departamento de Qumica Orgnica


Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - UBA

GUA DE TRABAJOS PRCTICOS

LICENCIATURA EN CIENCIA Y
TECNOLOGA DE ALIMENTOS

UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES


2012

Fundamentos de Metodologa Analtica


Ao 2012

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ndice

Programa de la materia ................................................................................................ Pg.


Bibliografa................................................................................................................... Pg.
Normas de Higiene y Seguridad ................................................................................. Pg.
Listado de Materiales para el trabajo en el laboratorio .............................................. Pg.
Trabajo Prctico N 1: Calibracin ............................................................................. Pg.
Trabajo Prctico N 2: Soluciones de cidos y Bases ............................................... Pg.
Trabajo Prctico N 3: Espectrofotometra ................................................................. Pg.
Trabajo Prctico N 4: Determinacin del contenido de vitamina C en
jugos comerciales ....................................................................................................... Pg.
Trabajo Prctico N 5: Cromatografa.. Pg.

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Materia complementaria para la Licenciatura en Ciencia y Tecnologa
de los Alimentos UBA
Docentes Responsables:
Profesor: Dra Silvia Resnik
Jefes de Trabajos Prcticos: Graciela Leiva, Andrea Patriarca
Ayudante: Marianela Snchez

Contenidos Mnimos
1.- Muestreo
2.- Preparacin de muestras para el Anlisis.
3.- Mtodos Clsicos de Anlisis: Mtodos Gravimtricos
4.- Mtodos Clsicos de Anlisis: Mtodos Volumtricos
5.- Mtodos Espectroscpicos: ley de Beer, aplicaciones
6.- Calidad y confiabilidad de los resultados analticos
Para alumnos provenientes de Facultades diferentes a la Facultad de Ciencias Exactas y
Naturales
7.- Cromatografa: mtodos separativos, fundamentos, aplicaciones
8.- Cromatografa Planar (TLC)
9- Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (CLAR, HPLC)
10.- Cromatografa Gaseosa (GC)

El curso es terico-prctico, intensivo, de 36 horas de duracin.


Rgimen de aprobacin: Examen final.

PROGRAMA ANALTICO
- Muestreo: Seleccin de muestras. Muestreo propiamente dicho, diferentes mtodos de muestreo para
el anlisis de alimentos. Estadstica de muestreo.
- Soluciones: Breve Repaso de soluciones, molaridad, molalidad, normalidad, unidades de
concentracin, propiedades coligativas.
- Preparacin de muestras para el anlisis: Introduccin a mtodos separativos: extraccin con
solventes: lquido-lquido, distribucin, columnas, cromatografia. Preconcentracin, purificacin y
derivatizacin.
- Mtodos Clsicos de Anlisis: Mtodos clsicos, gravimetras, volumetras y mtodos de anlisis
cualitativo clsico. Patrones analticos. Mtodos instrumentales. Clasificacin de los mtodos
instrumentales Mtodos de separacin.
- Mtodos Gravimtricos: Breve repaso del proceso de precipitacin, solubilidad. Aplicaciones en
alimentos.
- Mtodos Volumtricos: Breve repaso de los mtodos volumtricos de anlisis. Aplicaciones en
alimentos. Ejemplos cido-base, rdox.
- Espectroscopa Ultravioleta (UV):
Prctica del uso del espectrmetro UV. Ley de Beer, desviaciones.

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- Calidad y confiabilidad de los resultados analticos: Curva de calibracin, adicin estndar, etc.
Validacin de la metodologa analtica. LOD, LOQ, sensibilidad, exactitud, precisin, robustez, Calidad
de los reactivos analticos. Materiales de referencia.
Para alumnos provenientes de Facultades diferentes a la Facultad de Ciencias Exactas y
Naturales
- Cromatografla: Fundamentos tericos de la separacin cromatogrfica. Tiempo de retencin, y factor
de retardo, factor de capacidad, factor de separacin, etc. Cromatografia de absorcin y particin; fase
normal y reversa; de intercambio inico, de par inico, de filtracin por geles.
- Cromatografa Planar (TLC): fundamentos, equipos, placas, TLC en fase normal y en fase reversa,
resolucin, cromatografa planar de alta resolucin (HPTLC); TLC con zona de concentracin,
Cromatografa planar con alta presin (OPTLC). Aplicaciones en alimentos.
- Cromatografla lquida de alta resolucin (CLAR, HPLC): Fundamentos separativo, factores que
afectan la resolucin del cromatograma. Separacines isocrticas y por gradiente. Requerimientos de
insumos de calidad cromatogrfica. Estructura bsica del cromatgrafo lquido: degasificacin, bombas,
inyectores, columnas, detectores. Modificacin de parmetros. Rango de aplicacin. Tcnicas ms
apropiadas para diferentes tipos de muestras.
- Cromatografla gaseosa (GC): Fundamentos separativos, factores que afectan la resolucin del
cromatograma. Requerimientos de insumos de calidad cromatogrfica. Estructura bsica del
cromatgrafo gaseoso: inyectores, columnas, detectores. Modificacin de parmetros. Rango de
aplicacin. Tcnicas ms apropiadas para diferentes tipos de muestras. Aplicaciones al anlisis de
Alimentos.

BIBLIOGRAFIA
El siguiente listado es solo orientativo, en l se citan algunos libros que cubren los diferentes temas que
sern tratados en la materia y que se encuentran en la biblioteca de la FCEN.
ANALITICA GENERAL (Volumetras, Gravimetras, Espectroscopa, Cromatografa)
Ayres, G.B., "Anlisis Qumico Cuantitativo; Ed. del Castillo, Madrid; 1976,
En biblioteca FCEyN:1970, N.Y.
Bard, A.J. & Rubinstein, J. (Editors). Electroanalytical Chemistry, Marcel Dekker (1996).
Bermejo, F., "Qumica Analtica General, Cuantitativa e Instrumental" Volumen 1 Paraninfo, Madrid,
1991.
Burriel Marti, F.; Lucena Conde, F.; Arribas Jimno, S. y Bemndez Mndez, J. -"Qumica Analtica
Cualitativa". Editorial Paraninfo, S.A. Madrid 2002. '" .
Charlot, G., Curso de Qumica Analtica General. Ed. Torray Masson. 1975.
Christian, G.C., Analytical Chemistry, Fifth Ed. J, Wiley and Sons Editors (1994)
Connors, K.A.,1980,"Curso de Anlisis Farmacutico" Editorial Revert. Barcelona.
Day, R.A. & Underwood, A.L., Quantitative Analysis (6th ed), Prentice-Hall, 1991.
Flaschka, H. A.; Sturrok, P.E. & Barnad, J.F., 1980, Qumica Analtica Cuantitativa, Tomos I, II, Editorial
CECSA,Mxico, D.F.. En biblioteca FCEyN: 1973.

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Harris, D.C., Quantitative Chemical Analysis, Fifth Ed. Freeman and Co Editors (1998) o Harris, D.C,
"Anlisis qumico cuantitativo", Grupo Editorial Iberoamericano, Mxico, 1992 1 edicin.
Harvey, D. C.,2002, "Qumica Analtica Moderna". Editorial Mac Graw-Hill Mxico.
Kolthoff, l. M., Sandell, E. B., Meehan, E. J. y Bruckenstein, S. -Anlisis Qumico
Cuantitativo. Editorial Nigar, S.R.L..Buenos Aires-1985. En biblioteca FCEyN: 1994 15 edicin.
Laitinen, H. A. & Barris, W. E, Anlisis Qumico (Reverte, 1983). En biblioteca FCEyN: Chemical
Anlisis: an advance text and reference, N.Y.; Mc Graw-Hill (1975).
Nordman, J., 1982, Anlisis Cualitativo y Quimica Inorganica, Editorial CECSA,
Mxico. En biblioteca FCEyN: Qumica Analtica, Edit. Limusa; Mxico, D.F.(1993).
Skoog, D.A.; West, D.M. &: Boller, F .J., Quimica Analtica,. 6a. Ed. Mc Graw & Hill Ed. (1997).
Skoog, D. & Leary, J., Analisis Instrumental 4a. Ed. Mc.Graw Hill Editors Madrid,Espaa (1994).
Skoog, D.A.; West, D.M. &: Boller,F.J., "Fundamentos de Qumica Analtica", Revert, Barcelona (1997).
Vandeginste, B. ;Massart, D.; Buydens, L.; De Jong, S. & Levi, P.. Handbook of Chemometrics and
Qualimetrics, Parts A y B, Elsevier Ed. (1998).
Willard, B. Merritt, L.. Dean J and Settle. Instrumental Methods of Analysis , F. 7th
Edition. Wadsworth Pub. Co (1988) 1991. En biblioteca FCEyN: Qumica Analtica Cuantitativa (1989)
Prentice Hall Hispanoamericana; Mxico (D.F.).

ANALISIS DE ALIMENTOS
Baltes, Wemer. Rapid Methods for Analysis of Food and Food Raw Material. Behr's Verlag GmbH.
Hamburg. 1990.
Barnes, K.W., An Introduction to food analysis Techniques. Food Technol. 49: 48 -51 (1995).
Belitz, H.D. & Grosch, W., Food Chemistry. Berlin;Springer, 1999(2 edicin,ingles) y 1997(castellano).
Eds.: de Dios Alvarado, J. & Aguilera, J.M., Mtodos para Medir Propiedades Fsicas en Industrias de
Alimentos. Editorial Acribia, Zaragoza, Espaa. 2001.
Ed.: Dickinson, New Physico-Chemical Techniques for the Characterization of Complex Food Systems.
Chapman & Hall, London, UK. 1995.
Fennema, O.R..,Food Chemistry, Ed. 3rd Edition Marcel Dekker Inc, 1996. En biblioteca FCEyN:
Qumica de los Alimentos, Edit. Acribia, Zaragoza, Espaa (1993)
Giese, J., Instruments for food chemistry. Food Technol. 50: 72-76 (1996).
Eds.: Fung, D. y .C. y Mattbews, R.F Instrumental Methods for quality assurance in Foods. Marcel
Dekker, Inc. New York, USA. 1991.
Pomeranz, Y. & Meloan, C. E.,Food Analysis. Theory and Practice. 3 edicin. Chapman y Hall, Inc.
1993.
Eds.: Stewart, K.K. & Wbitaker, J.R., Modem Methods of Food Analysis. Avi Publishing Company, Inc.
Westport, Connecticut, USA. 1984.
Wong, D.W .S., Qumica de los Almentos: Mecansmos y Teoria. Editorial Acribia. Zaragoza. 1995.

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CROMATOGRAFA
Conway, W.G., Countercurrent chromatography. Apparatus, Theory and Applications. VCH Publishers.
(1990).
Gordon, M. H.,PrincipIes and Applications of Gas Chromatography in Food Analysis. Ellis Horwood
Series in Food Science and Technology. (1990).
Jinno. K. A.,Computer-assisted Chromatography system. Heidelberg: Basel, New York (1990).
Lindsay, S., High Performance Liquid Chromatography. De. Kealey, D. John Wiley and Sons. New York.
(1987).
Quatrocchi, O.A.; Andrizzi, S.A.& Laba, R.F., Introduccin al HPLC. Aplicaciones y Prctica. Artes
Grficas Farro. (1992).
Ruzicka, J. & Hansen, E., Flow Injection Analysis, 2nd. Ed. J. Wiley & Sons (1988)
Sandra, P. & Biccbi, C., Capillary gas chromatography in essential oil analysis. Heidelberg: Basel, New
York, Huthig (1987).
Sewell, P.A. & Clarke, B., Chromatographic separations. De. Kealey. John Wiley and Sons. (1987)
Unger, K.K., Handbuch der HPLC. Teill. Verlag Gmbh (1989).
West, S.D. & Mowrey, D.H., Characterization of reversed-phase HPLC solvent selectivity for the
prediction of adjusted retention indices and resolution. Joumal of Chromatographic Science, Vol. 29
No.11, 497-502.

MUESTREO y METODOS ESTADISTICOS


Hamilton, L.F.; Ellis, D.W. & Simpson, S.G., "Clculos de Qumica Analitica" McGraw-HiIl, Mexico,1989.
Em biblioteca FCEyN: 1969(ingles);1964(castellano).
Miller, J.C. & Miller, J.N., Estadstica para Qumica Analtica (Addison-Wesley Iberoamericana,(1993)

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REGLAS BSICAS DE HIGIENE Y SEGURIDAD PARA ALUMNOS DE LABORATORIOS DE


QUMICA Y BIOLOGA - PAUTAS DE ACTUACION EN CASOS DE EMERGENCIAS
FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES - SERVICIO DE HIGIENE Y SEGURIDAD

_____________________________
Las prcticas que se realizan en los laboratorios presentan riesgos propios de cada actividad.
Las reglas bsicas aqu indicadas son un conjunto de normas destinadas a proteger la salud de
los alumnos y a evitar accidentes y contaminaciones tanto dentro del mbito de trabajo, como
hacia el exterior.
Es un elemento clave en la seguridad la informacin que permita reconocer y minimizar o evitar
los riesgos presentes en el laboratorio. Ser fundamental respetar la metodologa de cada
tcnica, y trabajar con cuidado y en forma ordenada.

MEDIDAS GENERALES
1. Se deber conocer la ubicacin de los elementos de seguridad en el lugar de trabajo, tales
como: matafuegos, salidas de emergencia, mantas ignfugas, lavaojos, gabinete para contener
derrames, accionamiento de alarmas, etc.
2. No se debe comer, beber, fumar o maquillarse en el laboratorio.
3. No se debe guardar alimentos en heladeras que contengan drogas o preparados.
4. Se debe utilizar vestimenta apropiada para realizar trabajos de laboratorio, guardapolvo
abrochado (preferentemente de algodn y de mangas largas) y zapatos cerrados. Evitar el
uso de accesorios colgantes (aros, pulseras, collares, etc.). y cabello recogido.
5. Las mesadas de trabajo, deben estar despejadas, sin libros, ni abrigos ni objetos personales.
Es imprescindible mantener el orden y la limpieza. Cada persona es responsable directa de la
zona que le ha sido asignada y de todos los lugares comunes.
6. Las manos deben lavarse cuidadosamente despus de cualquier manipulacin de laboratorio
y antes de retirarse del mismo.
7. Se deben utilizar guantes apropiados para evitar el contacto con sustancias qumica o
material biolgico. Toda persona cuyos guantes se encuentren contaminados no deber tocar
objetos, ni superficies, tales como: telfono, lapiceras, manijas de cajones o puertas,
cuadernos, etc.
8. No se permite correr en los laboratorios.
9. No se deben bloquear las rutas de escape o pasillos con bancos, sillas, equipos, mquinas u
otros elementos que entorpezcan la correcta circulacin.
10. De aviso inmediato al docente responsable si encuentra instalaciones elctricas y de gas
precarias o provisorias.
11. No utilice equipos (Ej. Rotavap, columnas de destilacin, sonicadores, hornos etc.) sin haber
recibido entrenamiento previo y sin supervisin durante su uso.
12. Toda herida o abrasin, an los pequeos cortes que puedan producirse durante el trabajo
prctico deben ser informados al Docente. Los laboratorios cuentan con un botiqun de
primeros auxilios con los elementos indispensables para atender casos de emergencia.
13. Respete las seales de advertencia. (ej.: riesgo elctrico, alta temperatura, radiaciones, etc.)
14. Todo residuo generado debe colocarse
en los recipientes destinados para tal
fin segn las indicaciones del docente
(ver Pautas para Gestin de Residuos)

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LABORATORIOS DE QUMICA
1. No se permite pipetear con la boca.
2. Siempre que sea necesario proteger los ojos y la cara de salpicaduras o impactos se
utilizarn anteojos de seguridad, viseras o pantallas faciales u otros dispositivos de
proteccin. Cuando se manipulen productos qumicos que emitan vapores o puedan provocar
proyecciones, se evitar el uso de lentes de contacto.
3. No utilice el contenido de un recipiente que no est identificado. Los envases que contengan
agentes qumicos deben adecuadamente etiquetados con la denominacin del compuesto y el
tipo de riesgo (Ej.: corrosivo, txico, inflamable, oxidante, radiactivo, explosivo o nocivo).

4. Cuando sea necesario manipular grandes cantidades de materiales inflamables (ms de 5


litros) deber tenerse a mano un extintor apropiado para ese material en cuestin.
5. Al almacenar sustancias qumicas se debe considerar las incompatibilidades que dan lugar a
reacciones peligrosas. Consultar con el Docente.
6. No almacenar en estantes sobre mesadas sustancias corrosivas y en caso de cidos o lcalis
concentrados (mayor de 2N) deben ser mantenidos en bandejas de material adecuado.
7. Las prcticas que produzcan gases, vapores, humos o partculas, y que puedan ser riesgosas
por inhalacin deben llevarse a cabo bajo campana.
8. Se debe verificar la ausencia de vapores inflamables antes de encender una fuente de
ignicin.
9. No se debe trabajar con materiales inflamables o solventes sobre llamas directas o cerca de
las mismas. Para calentamiento, slo se utilizarn resistencias elctricas o planchas
calefactoras blindadas. Se prestar especial atencin al punto de inflamacin y de
autoignicin del producto.
10. Est prohibido descartar lquidos inflamables o txicos o corrosivos por los desages de las
piletas, sanitarios o recipientes comunes para residuos. Se deben seguir las pautas para la
gestin de residuos.
11. Los cilindros de gases comprimidos y licuados deben estar en posicin vertical sujetos con
correas o cadenas a la pared en sitios de poca circulacin, de ser posible fuera del lugar de
trabajo, protegidos de la humedad y fuentes de calor.

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12. El material de vidrio roto no se depositar con los residuos comunes. Ser conveniente
envolverlo en papel y ubicarlo en cajas resistentes,
13. Todo recipiente que hubiera contenido agentes qumicos puede ser descartado junto a los
residuos comunes vaciado totalmente, enjuagado apropiadamente y sin etiquetas.
14. Est terminantemente prohibido hacer experimentos no autorizados por el Docente. No
substituya nunca un producto qumico por otro en una prctica.

LABORATORIOS DE BIOLOGIA
1. Leer Reglas Bsicas para Laboratorios de Qumica.
2. Se deben utilizar mascarillas descartables cuando exista riesgo de produccin de aerosoles
(mezcla de partculas en medio lquido) o polvos durante operaciones de pesada de
sustancias txicas o biopatgenas, apertura de recipientes con cultivos despus de agitacin,
etc.
3. Est prohibido descartar material biolgico por los desages de las piletas, sanitarios o
recientes comunes para residuos. En cada caso se debern seguir los procedimientos
establecidos para la gestin de residuos.
4. La superficie de trabajo se deber descontaminar una vez terminadas las tarea o luego de
cada derrame de material viable, utilizando productos probadamente efectivos contra los
agentes con que se trabaja.
5. El derrame o cada de muestras contaminadas, diluciones y medios sembrados o inoculados
ser informada al docente de inmediato. Se proceder a tratar el rea afectada con la
solucin desinfectante que corresponda, la cual se dejar actuar y se recoger con papel
absorbente que ser luego descartado con los residuos patognicos.
6. En caso de rotura del recipiente de vidrio que contiene microorganismos, proceder de igual
forma pero no tocar los residuos antes que el desinfectante haya actuado.
7. Cuando proceda a la limpieza de una superficie con alcohol, verifique que no haya mecheros
encendidos.
8. Consulte con el Docente si el material biolgico debe ser descontaminado previo a su
descarte en recipiente de residuos patognicos (bolsa roja).

PAUTAS PARA LA GESTIN DE RESIDUOS PELIGROSOS Y PATOGNICOS


Peligrosos (cidos, lcalis, oxidantes, corrosivos, guantes, trapos, etc.):
Los residuos lquidos se debern acumular en bidones provistos por el Servicio de Higiene y
Seguridad. Mantenerlos tapado. No mezclar sin consultar al Docente.
Los residuos slidos se debern acumular en bolsas negras dentro de cajas provistas por el
Servicio de Higiene y Seguridad. No tirar residuos domsticos.
Patognicos (tips, guantes, cajas de petri, etc.):
Los residuos biolgicos (sangre, tejidos animales o humanos y todo el material que haya estado
en contacto con ellos) se debern acumular en bolsas rojas dentro de cestos con tapa provistos
por el Servicio de Higiene y Seguridad. Quedan exceptuados los elementos corto-punzantes
(agujas, hojas de bistures), que se recogern en contenedores especiales.

ANTE CUALQUIER DUDA CONSULTE CON EL DOCENTE


La seguridad la disfrutamos todos. Actuemos responsablemente

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PAUTAS DE ACTUACIN EN CASO DE EMERGENCIAS

En caso de accidente, avisar inmediatamente al Docente.

) EMERGENCIAS MDICAS
Si ocurre una emergencia tal como cortes o abrasiones, quemaduras o ingestin accidental de
algn producto qumico, txico o peligroso, se deber proceder en la siguiente forma:
1. A los accidentados se les proveer los primeros auxilios
2. Se da aviso al Departamento de Seguridad y Control (Int. 311 Emergencias)
3. El Docente responsable del turno o una autoridad del Departamento, deber completar
el Formulario de Incidentes y enviarlo al Servicio de Higiene y Seguridad para su
conocimiento y evaluacin.

CENTROS PARA REQUERIR AYUDA MEDICA


S.A.M.E. Telfono 107
Hospital Pirovano
Av. Monroe 3555 Tel. 4542-5552 / 9279

INTOXICACIONES:
Hospital de Nios. Dr. R. Gutirrez
Snchez de Bustamante 1399. Capital Federal. Tel: 4962-6666.
Hospital de Nios. Dr. P. de Elizalde
Av. Montes de Oca 40 Tel. 4307-7491 Toxicologa 4300-2115

QUEMADURAS:
Hospital de Quemados
P.Goyena 369 Tel. 4923-4082 / 3022
OFTALMOLOGA
Hospital Santa Luca
San Juan 2021 Tel. 4941-7077
Hospital Dr. P. Lagleyze
Av. Juan B. Justo 4151 Tel. 4581-0645 / 2792
1. Quemaduras.
Las pequeas quemaduras producidas por material caliente, baos, placas o mantas calefactoras,
etc., se trataran lavando la zona afectada con agua fra durante 10-15 minutos. Las quemaduras
ms graves requieren atencin mdica inmediata. No utilices cremas y pomadas grasas en las
quemaduras graves.
2. Cortes.
Los cortes se tienen que lavar bien, con abundante agua corriente, durante 10 minutos como
mnimo. Si son pequeos y dejan de sangrar en poco tiempo, lvalos con agua y jabn y tpalos

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con una venda o apsito adecuados. Si son grandes y no paran de sangrar, requiere asistencia
mdica inmediata.
3. Derrame de productos qumicos sobre la piel.
Los productos qumicos que se hayan vertido sobre la piel han de ser lavados inmediatamente
con agua corriente abundante, como mnimo durante 15 minutos. Es necesario sacarle toda la
ropa contaminada a la persona afectada lo antes posible. El lavado es muy importante para
reducir la gravedad y la extensin de la herida. Requiere asistencia mdica.
4. Actuacin en caso de producirse corrosiones en la piel.
Por cidos. Sacar o cortar lo ms rpidamente posible la ropa. Lavar con agua corriente
abundante la zona afectada. Neutralizar la acidez con bicarbonato sdico durante 15-20 minutos.
Esperar la asistencia mdica.
Por lcalis. Lavar la zona afectada con agua corriente abundante y luego con una solucin
saturada de cido brico. Secar y esperar la asistencia mdica.
5. Fuego en el cuerpo.
Si se te incendia la ropa, pide ayuda. El afectado no correr, tiene que tirarse en el suelo y rodar
sobre s mismo para apagar las llamas. Es tu responsabilidad ayudar a alguien que se est
quemando. Cubrirlo con una manta antifuego, conducirlo hasta la ducha de seguridad, si est
cerca. No utilices nunca un extintor sobre una persona. Una vez apagado el fuego, mantener a la
persona tendida, hasta que llegue la asistencia mdica.
6. Actuacin en caso de producirse corrosiones en los ojos.
En este caso el tiempo es esencial (menos de 10 segundos). Cuanto antes se lave el ojo, menos
grave ser el dao producido. Lavar los dos ojos con agua corriente abundante durante 15
minutos como mnimo en una ducha de ojos, o con solucin fisiolgica. Es necesario mantener
los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para facilitar el lavado debajo de los prpados. Es
necesario recibir asistencia mdica, por pequea que parezca la lesin.
7. Actuacin en caso de ingestin de productos qumicos.
Antes de cualquier actuacin concreta pide asistencia mdica. Si el paciente est inconsciente,
ponerlo en posicin inclinada, con la cabeza de lado. Si est consciente, mantenerlo apoyado. No
dejarlo slo. No provocar el vmito si el producto ingerido es corrosivo.
8. Actuacin en caso de inhalacin de productos qumicos.
Identificar el vapor txico. Si se trata de un gas, utilizar el tipo adecuado de mscara para gases
durante el tiempo que dure el rescate del accidentado. No arriesgarse. Conducir inmediatamente
la persona afectada a un sitio con aire fresco. Requiere asistencia mdica lo antes posible. Ante
el primer sntoma de dificultad respiratoria, iniciar la respiracin artificial boca a boca.
) INCENDIOS
1. Fuego en el laboratorio.
Mantenga la calma.
Informe al docente responsable.
Se dar aviso inmediatamente al Dpto. de Seguridad y Control (Interno 311) informando el lugar
y las caractersticas del siniestro
2. Fuegos pequeos
Si el fuego es pequeo y localizado, y sabe utilizar un extintor, trate de apagarlo utilizando un
extintor adecuado, arena, o cubriendo el fuego con un recipiente de tamao adecuado que lo
ahogue.

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Retirar los productos qumicos inflamables que estn cerca del fuego.
No utilices nunca agua para extinguir un fuego provocado por la inflamacin de un solvente.
3. Fuegos grandes
Si el fuego es de consideracin, no se arriesgue y manteniendo la calma ponga en marcha el plan
de evacuacin. Apague los equipos elctricos y cierre las llaves de gas y ventanas.
Acate las indicaciones de los brigadistas.
Evacue la zona por la ruta asignada.
No corra, camine rpido, cerrando a su paso la mayor cantidad de puertas. No utilice
ascensores. Descienda siempre que sea posible.
No lleve consigo objetos, pueden entorpecer su salida.
Si pudo salir por ninguna causa vuelva a entrar. Deje que los equipos especializados se
encarguen.

) DERRAME MAYORES DE PRODUCTOS QUMICOS


Avise al Departamento de Seguridad y Control (int. 311 Emergencias)
Atender a cualquier persona que pueda haber sido afectada.
Notificar a las personas que se encuentren en las reas cercanas acerca del derrame. Buscar
los elementos en el Gabinete para contener derrames.
Coloque la cinta de demarcacin para advertir el peligro.
Evacuar a toda persona no esencial del rea del derrame.
Si el derrame es de material inflamable, apagar las fuentes de ignicin, y las fuentes de calor.
Evite respirar los vapores del material derramado, si es necesario utilizar una mscara
respiratoria con filtros apropiados al tipo de derrame.
Ventilar la zona.
Utilizar los elementos de proteccin personal tales como equipos de ropa resistente a cidos,
bases y solventes orgnicos y guantes.
Confinar o contener el derrame, evitando que se extienda. Para ello extender los cordones en
el contorno del derrame.
Luego absorber con los paos sobre el derrame.
Deje actuar y luego recoger con pala y colocar el residuo en la bolsa roja (patognicos) o
negra (peligrosos) y cirrela.
Si el derrame es de algn elemento muy voltil deje dentro de la campana hasta que lo retire
para su disposicin.
Disponer la bolsa con los residuos (consultar al Servicio de Higiene y Seguridad, int. 275)
Lave el rea del derrame con agua y jabn. Seque bien.
Cuidadosamente retire y limpie todos los elementos que puedan haber sido salpicados por el
derrame.
Lave los guantes, la mscara y ropa.

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Fecha: ..................................................................

Declaro haber ledo las REGLAS BSICAS DE HIGIENE Y SEGURIDAD EN LABORATORIOS DE


QUMICA Y BIOLOGA PROCEDIMIENTOS ANTE EMERGENCIAS que aparecen en la gua de
Trabajos Prcticos de la Materia ................................................................................................
Turno de Laboratorio: ........................................

Firma:...................................................................

Aclaracin:............................................................
L.U. N: ...............................................................

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Lista de materiales personales necesarios para el trabajo en el laboratorio de


Fundamentos de Metodologa Analtica:

Guardapolvos
Libreta de laboratorio
Anteojos de seguridad
Esptula metlica
Pera de goma o propipeta
Algodn
Alcohol
Marcador de vidrio
Detergente
Repasador o trapo rejilla
Pauelos de papel

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TRABAJO PRCTICO N 1
CALIBRACIN DE MATERIAL
Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de:
1. Comprender el concepto de calibracin y su importancia en el trabajo experimental en
qumica analtica.
2. Operar correctamente una balanza analtica.
3. Adquirir destrezas bsicas relacionadas con la calibracin del material de laboratorio.
4. Comprensin de la naturaleza de las medidas cuantitativas. Para ello se deben tener
dominados los conceptos de exactitud, precisin, desviacin estndar, tipos de errores,
(sistemticos, accidentales).
5. Entrenarse en la observacin y uso correcto de cifras significativas y tambin en la
aplicacin de los criterios para la exclusin de una medida cuestionable, en un conjunto
de datos experimentales.
Por calibracin podemos entender el conjunto de operaciones, que establecen, en unas
condiciones especficas, la relacin que existe entre los valores indicados por un instrumento o
sistema de medida, o los valores representados por una medida materializada, y los
correspondientes valores conocidos de una magnitud de medida.
Los equipos y/o material han de calibrarse dado que sus respuestas no son estables en el
tiempo, debido a diferentes causas: envejecimiento, deterioros, limpiezas inadecuadas,
reacciones qumicas, etc.
A) PESADO DE MATERIAL
Precauciones generales para el uso de las balanzas:
-

Debe ajustarse diariamente el mecanismo de nivelado. Esto se consigue elevando o


descendiendo los tornillos ajustables de los pies, para centrar la burbuja en un dispositivo
de nivel. Se debera comprobar la burbuja cada vez que se hace uso de la balanza y se
debera reajustar el nivel cada vez que la misma sea desplazada, aunque sea ligeramente.

Las pesadas pueden verse afectadas por vibraciones, corrientes de aire y los cambios de
temperatura. En lo posible, la ubicacin de las balanzas debera realizarse tratando de
evitar o disminuir estos efectos.

Trate siempre cuidadosamente la balanza.

Pese los reactivos sobre papel o en algn recipiente, nunca los coloque directamente sobre
el platillo. De este modo, la balanza queda protegida contra acciones corrosivas y es
posible recuperar la totalidad de la sustancia que se pesa.

No deje caer objetos pesados en el platillo.

No supere el peso mximo admitido.

Limpie el platillo y el compartimiento de pesada, antes y despus del uso.

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Limpie la superficie de la mesa de laboratorio alrededor de la balanza, antes y despus de


su uso.
Al pesar:
-

La balanza y la muestra deberan estar a temperatura ambiente, puesto que el movimiento


del aire por conveccin hace que los objetos fros aparenten ser ms pesados que los
calientes.

Evite tocar la muestra, especialmente en trabajos de alta resolucin.

La precisin y exactitud de una determinacin del peso se vera perjudicada si la muestra


se transformase durante el proceso. Un efecto habitual es que las muestras secas absorban
humedad o que muestras hmedas pierdan agua mientras estn siendo pesadas. Las
muestras que han sido secadas en estufa deberan dejarse enfriar en un desecador que
contenga gel de slice seco y ser mantenidas en l hasta inmediatamente antes de
colocarlas sobre el platillo de la balanza. Las muestras hmedas deberan conservarse en
recipientes cerrados.

Parte experimental
1. Pese el objeto seleccionado 10 veces en una balanza analtica (retirando y volviendo a
colocar el objeto sobre el platillo en cada caso).
2. Pese el mismo objeto 10 veces en una balanza granataria (retirando y volviendo a colocar
el objeto sobre el platillo en cada caso).
3. Calcule: media, mediana, desviacin estndar, desviacin estndar relativa, varianza (y
verifique la exclusin de alguna observacin).

B) MATERIAL VOLUMTRICO
El procedimiento de calibracin se basa en la determinacin del peso de un lquido
(usualmente agua destilada), de densidad y temperatura conocidas, que est contenido en un
material volumtrico (o es vertido por l). La temperatura debe controlarse porque influye
durante el proceso de calibracin de dos formas: en primer lugar, el volumen ocupado por la
masa de un lquido vara con sta y, en segundo lugar, porque el volumen del material
volumtrico es variable, debido a la tendencia del vidrio a dilatarse o a contraerse en funcin de
la temperatura.

Operaciones previas
Antes de proceder a la calibracin del material volumtrico, debemos asegurarnos de que
est completamente limpio y seco. El mtodo de limpieza tradicional consiste en utilizar
primeramente agua y a continuacin detergente, y despus se vuelve a lavar, primero con agua
de canilla y, a continuacin, con agua destilada. Para eliminar el agua, se debe enjuagar el
material volumtrico con alcohol etlico puro, y para eliminar ste, se realiza un ltimo enjuague

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con acetona pura. Los dos principales objetivos de la limpieza son, en primer lugar, obtener una
propiedad reproducible de la superficie interior del material volumtrico, de tal manera que el
agua pueda ascender y descender en una pelcula fina, regular y homognea, y en segundo lugar,
obtener condiciones de referencia en el cuello del recipiente, de tal forma que la tensin
superficial forme un menisco reproducible con un ngulo plano y una altura unificada.
Es muy importante manejar bien las tcnicas de carga y descarga de cada uno de los
elementos a calibrar. Practique varias veces antes de realizar las medidas.
Parte experimental
1. La calibracin se realizar utilizando siempre la misma balanza. El volumen de descarga
ser siempre de 10 ml, medido 5 veces (mnimo) por cada operador. Al finalizar la parte
experimental, cada elemento a calibrar contar con, al menos, diez datos.
2. Asegurarse que el material a calibrar est perfectamente limpio. De lo contrario lavar de
acuerdo con lo expuesto en operaciones previas.
3. Atemperar los aparatos volumtricos. Medir la temperatura de agua.
4. Pesar un vaso o recipiente contenedor en balanza analtica.
5. Vaciar el cuantitativamente el contenido del recipiente a calibrar dentro del contenedor y
pesarlo.
6. Calcular el volumen de agua corregido a 20 C.

Temperatura (C)
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30

Densidad del agua


Volumen de un gramo de agua (mL)
Densidad (g/mL)
A la temperatura de
Corregido a 20C
trabajo
0.9997026
1.0014
1.0015
0.9996084
1.0015
1.0016
0.9995004
1.0016
1.0017
0.9993801
1.0017
1.0018
0.9992474
1.0018
1.0019
0.9991026
1.0020
1.0020
0.9989460
1.0021
1.0021
0.9987779
1.0023
1.0023
0.9985986
1.0025
1.0025
0.9984082
1.0027
1.0027
0.9982071
1.0029
1.0029
0.9979955
1.0031
1.0031
0.9977735
1.0033
1.0033
0.9975415
1.0035
1.0035
0.9972995
1.0038
1.0038
0.9970479
1.0040
1.0040
0.9967867
1.0043
1.0042
0.9965162
1.0046
1.0045
0.9962365
1.0048
1.0047
0.9959478
1.0051
1.0050
0.9956502
1.0054
1.0053

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Anlisis de los datos


-

Evaluar la exactitud y precisin del volumen nominal de cada uno de los elementos
calibrados. Comparar con los valores de tolerancia del material. Determinar si es preciso
aplicar un factor de correccin sobre dicho volumen nominal.

Determinar si existen diferencias significativas entre los volmenes descargados por


elementos del mismo tipo (por ejemplo, pipeta aforada) pero correspondientes a grupos
diferentes.

Determinar si existen diferencias significativas entre los volmenes descargados por


material volumtrico de distinto tipo e idntico volumen nominal (por ejemplo, pipeta
graduada y aforada de 10 ml)

Discuta la precisin y exactitud del volumen nominal para cada uno de los materiales
empleados. Analice cmo afectar a las medidas que realice.

Evale la necesidad de utilizar uno u otro en funcin de la tcnica a utilizar (por ejemplo,
medicin del volumen de muestra, adicin de un reactivo en exceso, etc.).

Aparatos de medicin

Volumen

pipetas aforadas
pipetas graduadas
probetas graduadas

10 ml
10 ml
25 ml

Tolerancia Vidrios
clase A
0,02 ml
0,05 ml
0,25 ml

Tolerancia Vidrios
clase B
0,04 ml
0,10 ml
0,50 ml

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TRABAJO PRCTICO N 2
SOLUCIONES DE CIDOS Y BASES
Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de:
1. Preparar soluciones a una concentracin determinada.
2. Reconocer los indicadores adecuados para la titulacin de un cido fuerte y una base
fuerte.
3. Adquirir habilidad en el manejo de la bureta para realizar titulaciones.
A) Preparacin de una solucin de NaOH 0.1 N
1. Calcular qu volumen deber tomar de una solucin de NaOH 30% p/p, densidad 1.328
g/ml, para preparar 250 ml de NaOH 0.1 N.
2. Medir el volumen calculado y transferirlo cuantitativamente al matraz limpio y enrasar
con agua destilada.
B) Preparacin de una solucin de HCl 1.0 N
1. Calcular qu volumen deber tomar de una solucin de HCl concentrado (36.5 a 37.5 %,
densidad = 1.18 g/ml) para preparar 50 ml de una solucin 1.0 N.
2. Medir el volumen calculado y transferirlo cuantitativamente al matraz limpio y enrasar
con agua destilada.
C) Valoracin de la solucin de NaOH 0,1 N (no se realiza)
1. Secar Biftalato de Potasio p.a. en estufa a 100 -105C hasta peso constante.
2. Pese dos porciones de aproximadamente 150 mg, con aproximacin a la dcima de mg,
del Biftalato de Potasio seco en vidrios de reloj.
3. Transferir cuantitativamente a un Erlenmeyer de 125 o 250 ml, disolver con 40 - 50 ml
de agua destilada libre de CO2 y agregar 2 gotas de solucin de fenolftalena (solucin
al 0.1% en etanol).
4. Enjuague una bureta de 10 ml con porciones del NaOH 0.1 N preparado anteriormente.
5. Llene la bureta con la solucin y enrase, asegurndose que no hayan quedado burbujas.
6. Titule las soluciones de Biftalato, gota a gota y agitando, hasta aparicin de coloracin
rojiza estable.
7. Calcule los factores de normalidad del NaOH 0.1 N que prepar. Si los resultados de las
titulaciones difieren en ms del 1%, deber repetir la determinacin.

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D) Titulacin de la solucin de HCl 1.0 N


De la solucin 1.0 N de HCl es necesario realizar una dilucin 1:20 con un volumen final de
250 ml (realizar por duplicado). Se trabajara con esta solucin, pero se informara el factor
(f) de la solucin de HCl 1.0 N teniendo en cuenta experimental las diluciones
correspondientes en cada caso.
GRUPO A

Tomar 50,00 mL de la solucin de HCl 1:20 y llevar a 250 ml en matraz aforado (Sc Grupo
A). Colocar 50,0 ml de la solucin A en un erlenmeyer de 125 ml limpio y agregar 2 gotas de
indicador (fenolftalena). Titular con el NaOH 0.1 N. Realizar por duplicado.
GRUPO B

Tomar 50,00 mL de la solucin de HCl del GRUPO A y llevar a 100 ml en matraz aforado.
Luego colocar 50,0 ml en un erlenmeyer de 125 ml limpio y agregar 2 gotas de indicador
(fenolftalena) y titular con el NaOH 0.1 N. Realizar por duplicado.
GRUPO C

Tomar 20,00 mL de la solucin de HCl 1:20 y llevar a 200 ml en matraz aforado. Luego
colocar 50,0 ml en un erlenmeyer de 125 ml limpio y agregar 2 gotas de indicador (fenolftalena)
y titular con el NaOH 0.1 N. Realizar por duplicado.
GRUPO D

Tomar 100,00 mL de la solucin de de HCl 1:20 y llevar a 250 ml en matraz aforado.


Tomar 100.0 ml de NaOH 0.1 N y llevar a 200 ml en matraz aforado.
Luego colocar 50,0 ml de la solucin de HCl en un erlenmeyer de 125 ml limpio y agregar 2
gotas de indicador (fenolftalena) y titular con la solucin de NaOH diluida.
Realizar por duplicado.

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TRABAJO PRCTICO N 3
ESPECTROFOTOMETRA

Objetivos:
1. Conocer los principios de la espectrofotometra.
2. Familiarizarse con el uso de un espectrofotmetro.
3. Medir espectros de absorcin de sustancias y localizar sus mximos de absorcin.
4. Construir curvas de calibracin. Verificar el cumplimiento de la Ley de Beer.
5. Determinar la concentracin de una muestra incgnita.
6. Determinar la constante de absortividad molar () de la sustancia.

Fundamento
La Espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas para la
deteccin especfica de molculas. Se caracteriza por su precisin, sensibilidad y su aplicabilidad
a molculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomolculas, etc) y estado de agregacin
(slido, lquido, gas). Los fundamentos fsico-qumicos de la espectrofotometra son
relativamente sencillos.
La ley de absorcin, tambin llamada Ley de Beer-Lambert o simplemente Ley de Beer,
indica cuantitativamente la forma en que el grado de atenuacin depende de la concentracin de
las molculas absorbentes y de la longitud del trayecto en el que ocurre la absorcin. Cuando la
luz atraviesa un medio que contiene un analito absorbente, disminuye su intensidad como
consecuencia de la excitacin del analito. Cuanto ms largo sea el medio por el que pasa la luz
en el caso de una solucin del analito de concentracin dada, existirn ms molculas o tomos
absorbentes en el trayecto, y por tanto, mayor ser la atenuacin. Adems, para una longitud de
trayecto dada de la luz, cuanto mayor sea la concentracin de los tomos o molculas
absorbentes, tanto mayor ser la atenuacin.
Segn la Ley de Beer, la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de
la especie absorbente c y a la longitud del trayecto b del medio de absorcin:
A = abc
donde a es la constante de proporcionalidad llamada absortividad. Dado que la absorbancia es
una cantidad sin unidades la absortividad debe tener unidades que eliminen las de b y c. Cuando
la concentracin se expresa en moles por litro y b en cm, la constante de proporcionalidad se
llama absortividad molar y se simboliza como .
A = bc
-1
-1
donde tiene las unidades L mol cm .
La absortividad molar depende de variables como el disolvente, la composicin de la
solucin y temperatura, por lo cual no es aconsejable depender de valores de la literatura para
trabajos cuantitativos. As pues, se utiliza una solucin patrn del analito en el mismo disolvente
y a temperatura similar para obtener la absortividad en el momento del anlisis. Lo ms
frecuente es recurrir a una serie de soluciones patrn del analito para preparar una curva de
calibracin o de trabajo.

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SAFRANINA
Frmula: C20H19ClN4
Peso Molecular: 350,85 g/mol

El colorante safranina es un azonio compuesto de diamino-fenacina simtrico, con un


sistema cclico anexado. Se obtiene por la oxidacin conjunta de una molcula de paradiamina
con dos molculas de una amina primaria; por la condensacin de para-aminoazo compuestos
con aminas primarias, y por la accin de para-nitrosodialquilanilinas con bases secundarias como
difenilmetafenilendiamina.
Es un slido cristalino, con caracterstico brillo verde metlico. Es soluble en agua y
forman una solucin de color rojo-rosado caracterstico. Debido a su estructura qumica presenta
un mximo de absorcin en el visible (: 380-780 nm) y cumple con la Ley de Beer en un rango
de concentraciones.

Parte experimental
A) Preparacin de las soluciones estndar
Pesar con exactitud 0,0176 g de safranina, transferir cuantitativamente a un matraz aforado de
500 ml y enrasar. A esta solucin la llamaremos Solucin Madre (SM).
A partir de la SM preparar las siguientes soluciones estndar para la construccin de la curva de
calibracin:
- Solucin 1: 5,0.10-5 M
- Solucin 2: 3,75.10-5 M
- Solucin 3: 2,5.10-5 M
- Solucin 4: 1,5.10-5 M
- Solucin 5: 5.0 10-6 M
B) Determinacin espectrofotomtrica
-

Realizar un espectro de absorcin de la solucin estndar ms concentrada (contra el


blanco preparado), entre 380 y 780 nm. Establecer, a partir del espectro obtenido, la
longitud de onda correspondiente al mximo de absorcin del compuesto.
Medir la absorbancia de las soluciones estndar a la longitud de onda determinada en el
punto anterior.
Medir la absorbancia de una muestra incgnita.

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C) Tratamiento de los resultados


-

Construya una curva de calibracin, graficando los valores de absorbancia obtenidos vs.
concentracin para cada una de las soluciones preparadas.
Aplique el mtodo de regresin lineal por cuadrados mnimos a los datos obtenidos.
Determine el rango lineal de trabajo. Calcule los valores de pendiente y ordenada al
origen.
Interpole el valor de absorbancia de la muestra en la curva de calibracin obtenida y
cuantifique la concentracin de safranina en la muestra.
Calcule el coeficiente de absortividad molar () del colorante a la longitud de onda
escogida.

Bibliografa:
- Harvey, D. C., 2002, "Qumica Analtica Moderna". Editorial Mac Graw-Hill Mxico.
- Skoog, D.A.; West, D.M. &: Boller,F.J., "Fundamentos de Qumica Analtica", Revert,
Barcelona (1997).
- Skoog, D. & Leary, J., Analisis Instrumental, 4a. Ed. Mc.Graw Hill, Madrid, Espaa
(1994).

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TRABAJO PRCTICO N 4
DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE VITAMINA C EN UN JUGO EN POLVO LIGHT
COMERCIAL POR LA TCNICA DE VOLUMETRA DE OXIDO-REDUCCIN

Objetivo
Determinar el contenido de vitamina C (cido ascrbico) en un jugo en polvo light comercial.
Introduccin
La vitamina C, soluble en agua, apenas se acumula en el organismo, lo que implica que debe ser
ingerida diariamente, siendo la Cantidad Diaria Recomendada (CDR) de vitamina C de 60 mg.
En esta prctica se va a determinar el contenido de cido ascrbico en jugo en polvo mediante
una valoracin (titulacin) redox utilizando disolucin de tiosulfato de sodio como agente
valorante (titulante). El cido ascrbico es un agente reductor que reacciona rpidamente con I3de acuerdo a la siguiente reaccin:

Ecuacin 1
cido ascrbico

cido dehidroascrbico

En esta experiencia se determinar la cantidad de cido ascrbico en forma indirecta (mtodo


yodomtrico) en una tcnica que se conoce como valoracin por retroceso. En esta metodologa
se utiliza un exceso conocido de yodo para que la reaccin (Ecuacin 1) sea completa y luego
valorando dicho exceso por retroceso con solucin de tiosulfato de sodio.
Las titulaciones que involucran yodo son comnmente utilizadas en Qumica Analtica. Como el
I2 tiene muy baja solubilidad en agua es comn utilizarlo en forma de complejo I3-, que se
prepara adicionando a una cantidad conocida de KIO3 (Iodato de potasio) un pequeo exceso de
KI, en medio cido.
IO3- + 5I- + 6H+ 3I2 + 3H2O

Ecuacin 2

Se va a producir un exceso conocido de triyoduro en la reaccin entre el IO3- y I-. Parte del
triyoduro reaccionar con el cido ascrbico de acuerdo a la reaccin en la Ecuacin 1. El
exceso de triyoduro se determinar con la titulacin por retroceso con la solucin valorada de
tiosulfato de sodio (Ecuacin 3). El ion tiosulfato es un agente reductor moderadamente fuerte,
que ha sido ampliamente utilizado para determinar agentes oxidantes. En este caso, el yodo en
exceso oxida al ion tiosulfato transformndolo cuantitativamente en ion tetrationato, mientras se
reduce a yoduro.
6H+ + 2S2O32- + I3- 3 I- + S4O62- + 3H2O

Ecuacin 3

El indicador que se utiliza en las yodometras es el almidn debido a que forma un complejo de
color azul muy intenso en presencia de yodo. El almidn no es un indicador redox ya que no

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responde a cambios de potencial, sino que lo hace especficamente a la presencia de yodo. La parte
activa del almidn es la amilosa, que existe en forma de hlice dentro de la cual se acomodan las
molculas de I2 para formar el complejo. En exceso de I2 se forma un complejo irreversible, por lo
tanto no sera posible ver el punto final de la titulacin en estas condiciones. As pues, al valorar las
disoluciones de yodo con tiosulfato sdico la adicin del indicador se tiene que retrasar hasta que
la reaccin sea casi completa (que se sabe por el cambio de color de pardo oscuro a amarillo
dbil).

Procedimiento
Reactivos
H2SO4 0,1 N o HCl (c).
KI slido
KIO3 0,1 N
Na2S2O3 0,1 N
Solucin de almidn (Indicador)
Parte 1: Preparacin de la muestra
Transferir el contenido de dos sobres de jugo a un matraz 200 ml. Agregar 100 ml de agua y
agitar hasta disolucin total. Llevar a volumen mediante el agregado de agua destilada.
Homogeneizar. Es importante proteger de la luz a la solucin.
Parte 2: Determinacin del contenido de vitamina C en jugo en polvo
Realice esta determinacin por duplicado.
1) Colocar 50.00 mL de solucin de muestra en un matraz Erlenmeyer.
2) Aadir 10 mL de H2SO4 1 N o 1 mL de HCl (c).
3) Aadir 1 g de KI slido y agita la mezcla hasta su disolucin.
4) Colocar 50.00 mL de la disolucin de KIO3 en el matraz Erlenmeyer.
5) Titular desde la bureta con una solucin valorada de tiosulfato de sodio 0,1N.
6) Aadir aprox. 2 mL del indicador de almidn, cuando la solucin haya tomado una leve
coloracin amarilla.
7) Seguir adicionando solucin de tiosulfato de sodio hasta que se mantenga la desaparicin del
color azul al menos durante 15 segundos.
8) Anotar el volumen de disolucin de tiosulfato de sodio consumido.
9) Determinar el contenido de vitamina C (Masa molar 176.12 g.mol-1) en el jugo y expresarlo
como mg/sobre.
Clculo:

mg Acido Ascrbico/ sobre =

[(VI N I f I ) (VT N T f T )] 176,12 Vsm


Valc 2 ns

Donde
= Volumen de solucin de KIO3 agregado en la valoracin, en mL (= 50,00
VI
ml).
= Normalidad de la solucin de I2 utilizada en la valoracin (= 0,1).
NI
= Factor de la solucin de I2 utilizada en la valoracin.
fI
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VT
NT
fT
Vsm
Valic
ns

=
=
=
=
=
=

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Volumen de solucin de Na2S2O3 agregado en la valoracin, en mL.


Normalidad de la solucin de Na2S2O3 utilizada en la valoracin (= 0,1).
Factor de la solucin de Na2S2O3 utilizada en la valoracin.
Volumen de la solucin de muestra (= 200,0 mL).
Volumen de la alcuota tomada para su valoracin (= 50,0 mL).
Nmero de sobres de jugo disueltos en el matraz (= 2).

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TRABAJO PRCTICO N 5
CROMATOGRAFIA
Objetivos:
1. Conocer los principios de la cromatografa.
2. Familiarizarse con la cromatografa en capa delgada (TLC).
3. Determinar la concentracin de cafena en mate cocido por cromatografa en capa
delgada.

Introduccin
La cafena es un alcaloide del grupo de las xantinas, slido cristalino, blanco y de sabor amargo,
que acta como una droga psicoactiva y estimulante.

CAFENA
Frmula: C8H10N4O2
Peso Molecular: 194,19 g/mol

Las fuentes de cafena ms comnmente usadas son el caf, el t y en menor medida el cacao.
Otras fuentes de cafena usadas con menor frecuencia incluyen a las plantas de yerba mate y
guarans, las cuales a veces son utilizadas en la preparacin de infusiones y bebidas energticas.
Dos de los nombres alternativos de la cafena, matena y guaranina, son derivados de los
nombres de estas plantas.
Una dosis normal de cafena es generalmente considerada en el orden de 100 mg/da, que es
aproximadamente la cantidad que contiene una taza de caf. Sin embargo, la mayora de las
personas adultas consumen ms de 300 mg de cafena diarios. Los principales alimentos que
contribuyen a la dosis diaria de cafena en la dieta son el caf, las bebidas cola, bebidas
energizantes, el chocolate y el t, y, en nuestro pas, el mate.

Contenido de cafena en alimentos y bebidas:

Alimento
Caf instantneo preparado
Caf colado
Caf descafeinado (decaf)
T en saquitos
T negro
Mate
Cacao

Unidad
180 ml (taza)
180 ml (taza)
180 ml (taza)
180 ml (taza)
180 ml (taza)
180 ml (taza)
180 ml (taza)

Contenido de
cafena
(mg por unidad)
60 a 70
97 a 125
2a4
15 a 75
40 a 60
10 a 60
10 a 17
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Barra de chocolate
Coca Cola *
Pepsi Cola *

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Barra
360 ml (lata)
360 ml (lata)

60 a 70
65
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Se determinar el contenido de cafena en una muestra comercial de mate cocido por


cromatografa en capa delgada o capa fina (TLC, thin layer chromatography).

Parte experimental
A) Obtencin del extracto de yerba mate:
- Colocar en un erlenmeyer de 500 ml, 7 saquitos de mate cocido (aproximadamente 20 gr) y
200 ml de agua caliente, la cual se usar como solvente para obtener el extracto acuoso de
mate cocido.
- Mantener a 80-90 C durante 1 hora con agitacin magntica.
- Acidificar el extracto acuoso con HCl concentrado hasta pH 2 (visualizar con tiras de papel
pH).
- Realizar 2 extracciones, cada una con 200 ml de acetato de etilo, recuperar la fase acuosa
(Nota: no descartar la fase orgnica 1).
- Alcalinizar la fase acuosa con NaOH 45% hasta pH 13 (visualizar con tiras de papel pH).
- Realizar 2 extracciones, cada una con 200 ml de acetato de etilo, recuperar la fase orgnica 2
(Nota: no descartar la fase acuosa).
- Llevar la fase orgnica 2 a un dispositivo de destilacin (Rotavapor) y evaporar a sequedad
en un recipiente previamente tarado.
- Determinar la masa de la fase orgnica 2.
B) Preparacin del patrn de cafena:
- Preparar 5 concentraciones diferentes de patrn de cafena disolviendo 5, 10, 15, 20 y 25 mg
de cafena en 10 ml de metanol.
- Cortar una placa de TLC de slica gel de un tamao aproximado de 12 cm de largo por 10 cm
de alto, y marcar con lpiz una lnea a un centmetro del borde inferior.
- Sobre la lnea marcada con lpiz hacer marcas cada 2 cm.
- Sobre cada una de esas marcas sembrar 5 l de cada solucin patrn de cafena preparadas
(el sembrado se realiza en forma ascendente de concentracin y con una microjeringa).
- Luego de dejar secar por unos minutos las manchas sobre la placa, colocar sta en forma
inclinada dentro de una cmara de vidrio, conteniendo el solvente de desarrollo
(cloroformo:metanol 9:1).
- Dejar desarrollar la placa hasta que la fase mvil ascienda hasta 1 cm del borde.
- Retira la placa con una pinza y dejar secar por unos minutos.
- Para visualizar la cafena observar bajo luz ultravioleta de 254 nm.
- Calcular el valor de Rf para la cafena pura (patrn).
C) Determinacin de cafena en los extractos de yerba mate:
- Redisolver el extracto de mate cocido en 5 ml de acetato de etilo
- Sembrar 5 L de la solucin de extracto preparada en una placa de las mismas caractersticas
que la utilizada para el patrn.
- Luego de la visualizacin con luz ultravioleta comparar la intensidad de la mancha del
extracto con las intensidades del patrn y estimar la concentracin de cafena en el extracto.
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