PRCTICA: DEMOSTRACIN DE LA DIGESTIN Y

ABSORCIN DE LOS CARBOHIDRATOS: GLICEMIA PRE Y

POST-PRANDIAL
I. INTRODUCCION
La glucosa es una fuente importante de energa para la mayora de
las clulas del cuerpo, incluidas las del cerebro.
La glucosa en sangre, proviene de dos orgenes: de origen exgeno
de los alimentos, y de origen endgeno, que proviene del hgado por
glucogenlisis. Por otra parte, hay gasto de glucosa cuando es
removida de los tejidos perifricos (para su consumo) y por excrecin
renal por la orina, por lo tanto la concentracin de glucosa en sangre
depende del balance entre el aporte y el gasto de la misma en el
organismo.
Diversos factores que inciden sobre la absorcin, produccin
endgena de glucosa as como la utilizacin y excrecin de la misma,
contribuyen a mantener constante la concentracin de glucosa en
sangre. En el caso del hgado, el transporte de glucosa al interior de
las clulas es por difusin pasiva, siendo el hepatocito permeable
para este metabolito. En casi todos los dems tejidos la glucosa no
puede penetrar en el interior de las clulas por simple difusin, sino
que lo hace por un mecanismo de difusin controlada, en particular
en el tejido adiposo, el corazn y el msculo esqueltico.
El mecanismo por el cual ocurre este pasaje activo de la glucosa a
travs de las clulas de la mucosa intestinal no es muy conocido. Se
cree que est ntimamente ligado al transporte de sodio. Este
proceso, por ello, se llama cotransporte, y depende de su
funcionamiento de que exista una alta concentracin de sodio en
fludo extracelular. En este caso la glucosa entra en la clula,
posiblemente porque se une a la misma protena transportadora que
lleva el sodio. A su vez, el sodio, por la bomba de sodio y potasio,
volvera a salir de la clula. Este mecanismo requiere ATP como
fuente de energa. La entrada de la glucosa en estas clulas est
supeditada a que, al salir del Na+ mantenga alta concentracin en el
lquido extracelular. Este es un caso interesante en que un sistema de
transporte a travs de la membrana favorecera a otro.
El conocimiento de la glicemia es importante no slo porque permite
tener una idea integral del mecanismo de homeostasis metablica
existente, sino porque las variaciones de ella son expresiones de

diversos estados patolgicos que se deben investigar y diagnosticar

para su tratamiento.
La finalidad de la siguiente prctica es demostrar la digestin y
absorcin de la glucosa, cuantificando la glicemia pre y postprandial,
por el mtodo de Glucosa oxidasa; tanto en personas normales como
en casos patolgicos.
II. REACTIVOS A UTILIZAR
- Estndar: Solucin de glucosa 1 g/l
- GOD/POD: Solucin de glucosa oxidasa (1,000 U/ml) y Perxidasa
(120 U/ml).
- Reactivo 4- AF: Solucin de 4 aminofenazona 25 mmol/l en
Buffer Tris 0.92 mol/l.
- Reactivo Fenol: Solucin de Fenol 55 mmol/l.
- Preparacin del Reactivo de trabajo: 500 partes de agua
destilada, 50 partes de Reactivo 4- AF, 50 partes de Reactivo
Fenol y llevar a 1,000 partes con agua destilada. Agregar 3 partes
de enzimas GOD/POD previamente homogenizadas. Mezclar por
inversin sin agitar. Rotular y fechar.
III. PROCEDIMIENTO
Se tomarn dos muestras de sangre :
La primera: La persona debe mantener de 4 a 8 horas de
ayuno al momento de obtener la muestra.
La segunda: Esta muestra se tomar despus de una hora,
como mximo, despus de la ingesta alimenticia.
En esos momentos, se extraern 5 ml. de sangre de la flexura del
codo, con jeringa hipodrmica de 10 ml. y con aguja N 20.
Colocar las muestras en tubos de ensayo, se deja reposar 10
minutos, luego se centrifuga a 3000 RPM por 10 minutos. Separar el
suero.
La determinacin de la glicemia se realizar por el mtodo
Enzimtico de la glucosa oxidasa. Utilizar 4 tubos de ensayo:
B (Blanco), Dpre. (Desconocido preprandial) y Dpost.
(Desconocido post prandial), colocar:
COMPONENTES

Dpre.

Dpost.

Standard
----Muestra
(suero ----preprandial)
----Muestra
(suero 1 ml
postprandial)
Reactivo de trabajo

----10 ul
----1 ml

--------10 ul
1 ml

Incubar todos los tubos 10 minutos en bao de agua a 37 C

Leer en Espectrofotmetro a 505 nm llevando el aparato a cero

con el blanco.
Clculo de los resultados :
Glucosa (g/l) = D x f

1.00 g/l
donde
f = ------------S
y D = Dpre. y Dpost.
F= 311

IV. RESULTADOS

Las lecturas del espectrofotmetro a 505nm resultantes

fueron:

TUBO DE ENSAYO
Basal
Dpre
Dpost

LECTURA DEL
ESPECTROFOTMETR
O
0.096 nm
0.751 nm
0.990 nm

Clculo de la concentracin de glucosa

TUBO DE ENSAYO
Basal
Dpre
Dpost

GLUCOSA (g/L)
29.856
203.705
278.034

La glucosa pre-prandial hace referencia a las concentraciones de

glucosa en sangre en ayunas. La persona a quien se le extrajo la
muestra mantena entre 4- 8 horas de ayuno.
La glucemia postprandial hace referencia a las concentraciones de
glucosa en sangre despus de comer. Los niveles de glucosa empiezan
a aumentar a los 10 minutos tras el comienzo de una comida, como
resultado de la absorcin de los carbohidratos de la dieta.
En los resultados podemos observar que los valores de glucosa pre y
postprandial son mayores a los valores normales. Por lo que se puede
presumir que la muestra de sangre obtenida puede proceder de una
persona diabtica.

V. CUESTIONARIO
1. Actualmente, cul es el rango considerado normal para
la glicemia basal? Explique las variaciones en los valores,
que usted puede encontrar por ejemplo en una
intolerancia a la glucosa.
Si le hicieron un examen de glucemia en ayunas, un nivel entre
70 y 100 miligramos se considera normal.
Si le hicieron un examen de glucemia aleatorio, los resultados
normales dependen de cundo fue la ltima vez que comi. La
mayora de las veces, los niveles de glucemia estarn por debajo
de 125 mg/dL.
El trmino de intolerancia hidrocarbonada o intolerancia anormal
a la glucosa se aplica a aquellos individuos que mantienen
niveles de glucemia superiores a los aceptados como normales,
pero inferiores a los considerados diagnsticos para la diabetes.
(1)
VARIACIONES EN LOS VALORES (2)

2. Cmo esperara encontrar los valores de la glicemia

dosada en la sangre venosa y en la sangre arterial?
Fundamente las variaciones que se pueden encontrar.
La concentracin de glucosa en sangre arterial es ms elevada
que en sangre venosa debido al consumo de glucosa por parte
de las clulas. En ayunas estas diferencias son del orden de 0.10
0.25 mmol/L, pero despus de la ingestin de alimentos puede
ser de hasta 0.80 mmol/L. (3)
3. Conoce otros mtodos para determinar la glicemia?
Explique su fundamento
Clsicamente se han clasificado los mtodos de determinacin
de la glucosa en 3 apartados diferentes:
Mtodos que dependen del poder reductor de la glucosa.
Mtodos qumicos.
Mtodos enzimticos.
Actualmente, los 2 primeros se encuentran obsoletos. Los
mtodos enzimticos consiguen una gran especificidad, ya que
utilizan enzimas purificadoras que actan selectivamente sobre
la molcula de glucosa. (1)
Ejemplos de algunos mtodos:
o Mtodo de la glucosa hexocinasa
Es el mtodo ms especfico para la determinacin de
glucosa. Este procedimiento enzimtico utiliza dos enzimas
de gran especificidad: la hexocinasa y la glucosa 6-fosfato
deshidrogenasa.

El NADH formado como consecuencia de la accin de la

deshidrogenasa, se mide por el incremento de la
absorbancia a 340nm, el cual es directamente proporcional
a la concentracin de glucosa en la muestra. Este
procedimiento, denominado tcnica de la hexocinasa, se
ha utilizado para determinar glucosa en diversos lquidos
biolgicos (sangre, orina, LCR, pleurales, ascticos, etc)
mostrando una excelente correlacin con el mtodo de la
glucosa oxidasa. (1)
o Mtodo de la O toluidina
Se basa en la condensacin de azucares reductores con
orto-toluidina en un medio de cido actico glacial
producindose en cromgeno. El color formado se mide
mediante un espectrofotmetro a 630nm, siendo la
intensidad de color de la solucin directamente
proporcional a la cantidad de glucosa existente en la
misma. Se trata de un mtodo en desuso, entre otras
razones por que emplea reactivos corrosivos, no es posible
automatizarla,
la
o-toluidina
es
potencialmente
cancergena y est sujeto a muchas interferencias. (4)

4. Cul son los criterios bioqumicos, relacionados con la

glicemia, para el diagnstico de diabetes mellitus?
El diagnstico de diabetes se puede realizar de tres formas
diferentes.

Sntomas de diabetes + una determinacin de glucemia al

azar > 200 mg/dl en cualquier momento del da.

Glucemia en ayunas > 126 mg/dl. Debe ser en ayunas de

al menos 8 horas.

Glucemia mayor de 200 mg/dl a las 2 horas de una

sobrecarga oral de glucosa. (La sobrecarga oral de glucosa
debe seguir las normas de la Organizacin Mundial de la
Salud)
Para realizar el diagnstico slo se precisa uno de los puntos,
pero en ausencia de hiperglucemia inequvoca, estos criterios
deben ser confirmados repitiendo alguno de ellos otro da. (5)
5. Qu variaciones fisiolgicas de glicemia puede usted
sealar?

Las hormonas como la insulina disminuyen la hiperglicemia,

acta despus de comer; el glucagn aumenta la concentracin
de glucosa en la sangre y acta en ayuno; la adrenalina aumenta
la concentracin sangunea de glucosa. La hiperglucemia se
refiere a la cifra de glucosa en sangre mayor a 126mg. y
clnicamente se caracteriza por la trada de poliuria (orinar
muchas veces), polidipsia (sed y tomar mucho lquido) y polifagia
(comer mucho, tener hambre).
Los niveles de glucosa durante el trabajo o ejercicios fsicos
disminuye, agotando en primer lugar las reservas de glucosa que
se encuentran en los msculos y luego las reservas hepticas.
Produciendo en un primer momento una hiperglucemia, ya que
los msculos no logran consumir todo lo liberado por el hgado,
pero que despus logra regularizarse. La hipoglicemia (o
hipoglucemia) es la cifra de glucosa en sangre menor a 80mg (o
70 segn el laboratorio), pero que se manifiesta clnicamente
como temblor, sudoracin, palpitaciones o hambre, en casos
leves. En casos graves aparecen alteraciones de la
concentracin, irritabilidad, visin borrosa, letargo y coma.
En la menstruacin para algunas mujeres los cambios cclicos de
estrgenos y progesterona provocan graves alteraciones en los
niveles de glucemia antes, durante y despus de la
menstruacin. (En esa fase, para algunas mujeres los niveles de
glucemia son elevados y para otras, por el contrario, son bajos)

BIBLIOGRAFA
1. Portillo JD, Barrio MTF del, Salido FP. Aspectos bsicos de bioqumica
clnica. Ediciones Daz de Santos; 1997. 308 p.
2. Bastarrachea RA, Laviada Molina H, Vzquez Chvez C. Anlisis
crtico de los nuevos criterios que sustentan el diagnstico de prediabetes. Rev Endocrinol Nutr. 2004; 12(2):906.

3. Arderiu XF. Bioqumica clnica y patologa molecular. Reverte; 1998.

556 p.
4. Doria GAGG, Nelsy Loango Chamorro, Clara Mara Meja. Laboratorio
de Bioqumica: Una Visin Prctica. ELIZCOM S.A.S; 159 p.
5. Calagua-Quispe M, Falen-Boggio J, Del guila-Villar C, Lu-de Lama R,
Rojas-Gabulli MI. Caractersticas clnicas y bioqumicas de la
diabetes mellitus tipo 2 (DMt2) en el Instituto Nacional de Salud del
Nio. An Fac Med. 2012 Apr; 73(2):1416.

PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA

I. INTRODUCCIN
La glucosa es el azcar que el cuerpo utiliza como energa. Los
pacientes que padecen de diabetes no tratada tienen niveles altos de
azcar en la sangre. Las pruebas de tolerancia a la glucosa son una
de las herramientas empleadas para diagnosticar la diabetes.

Un nivel de glucosa en la sangre por encima de lo normal se puede

utilizar para diagnosticar diabetes tipo 2 o niveles altos de glucosa en
la sangre durante el embarazo (diabetes gestacional). Tambin se
puede medir el nivel de insulina, la hormona producida por el
pncreas, que transporta la glucosa desde la sangre hasta las clulas.
La prueba de tolerancia a la glucosa oral se utiliza para evaluar a las
mujeres embarazadas en busca de diabetes gestacional entre las
semanas 24 y 28 del embarazo. Tambin se puede utilizar cuando se
sospecha la enfermedad, aunque la glucemia en ayunas sea normal.
II. REACTIVOS A UTILIZAR
- Estndar: Solucin de glucosa 1 g/l
- GOD/POD: Solucin de glucosa oxidasa (1,000 U/ml) y Perxidasa
(120 U/ml).
- Reactivo 4- AF: Solucin de 4 aminofenazona 25 mmol/l en
Buffer Tris 0.92 mol/l.
- Reactivo Fenol: Solucin de Fenol 55 mmol/l.
- Preparacin del Reactivo de trabajo: 500 partes de agua
destilada, 50 partes de Reactivo 4- AF, 50 partes de Reactivo
Fenol y llevar a 1,000 partes con agua destilada. Agregar 3 partes
de enzimas GOD/POD previamente homogenizadas. Mezclar por
inversin sin agitar. Rotular y fechar.
III. PROCEDIMIENTO
Se tomarn dos muestras de sangre :
La primera: La persona debe mantener de 4 a 8 horas de
ayuno al momento de obtener la muestra.
La segunda: Esta muestra se tomar despus de una hora,
como mximo, despus de la ingesta alimenticia.
En esos momentos, se extraern 5 ml. de sangre de la flexura del
codo, con jeringa hipodrmica de 10 ml. y con aguja N 20.
Colocar las muestras en tubos de ensayo, se deja reposar 10
minutos, luego se centrifuga a 3000 RPM por 10 minutos. Separar el
suero.
La determinacin de la glicemia se realizar por el mtodo
Enzimtico de la glucosa oxidasa. Utilizar 4 tubos de ensayo:
COMPONENTES

Dpre.

Dpost.

Standard
----Muestra
(suero ----preprandial)
----Muestra
(suero 1 ml
postprandial)
Reactivo de trabajo

10 ul
--------1 ml

----10 ul
----1 ml

--------10 ul
1 ml

IV. RESULTADOS
Las lecturas del espectrofotmetro a 505nm resultantes
fueron:
Basal: 0,03
Blanco: 0,21
30 min: 0,44
1 hora: 0.37
2 horas: 0.36
Ahora hallaremos f:
f= 330

Para el pre-prandial:
Glucosa (g/l) = (D-B)*f = (0.21-0.03)x 330 = 59.4 mg/dl

Para el post-prandial:

Despus de 30 min
Glucosa (g/l) = (D-B)*f = (0.44-0.03)x 330 = 135.3 mg/dl

Despus de 1 hora
Glucosa (g/l) = (D-B)*f = (0.37-0.03)x 330 = 112.2 mg/dl

Despus de 2 horas

Glucosa (g/l) = (D-B)*f = (0.36-0.03)x 330 = 108.9 mg/dl

V. DISCUSIN
Los valores sanguneos normales para una prueba de tolerancia a la
glucosa oral con 75 gramos, utilizada para detectar diabetes tipo 2 en
personas que no estn embarazadas:
Ayunas: 60 a 100 mg/dL
1 hora: menos de 200 mg/dL
2 horas: menos de 140 mg/dL
Los resultados obtenidos en la prctica se encuentran dentro de los
valores sanguneos normales para la prueba.