UNIVERSIDAD AUTNOMA DE QUERTARO

Cultivo de microalgas
Reporte de servicio social
Dirigido por: Dra. Marieke Koopmans
Balderas Hernndez Diana Cecilia;Cruz Calixto Jhosafat
25/07/2014

Contenido
Introduccin ................................................................................................................ 2

I.

II. Antecedentes .............................................................................................................. 2

III.

Objetivo ................................................................................................................... 5

IV.

Metodologa ............................................................................................................. 5

a) Microalgas ............................................................................................................... 5
b) Preparacin del medio e inoculacin ....................................................................... 5
i.

Medio de 1L .......................................................................................................... 5

ii.

Medio de 10 y 20L ................................................................................................ 6

c) Densidad ptica (tcnica turbidimtrica) .................................................................. 6

d) Medida del peso seco .............................................................................................. 7
e) Conteo al microscopio ............................................................................................. 8
f)

Cosecha ................................................................................................................ 10

V. Resultados y discusiones.......................................................................................... 11
a) Observaciones ....................................................................................................... 11
b) Conteo al microscopio ........................................................................................... 12
c) Peso seco .............................................................................................................. 13
d) Cultivo en volumen de 1L ...................................................................................... 14
e) Cultivo en volumen de 10 y 20............................................................................... 16
f)

Comparacin entre los volmenes de cultivo ........................................................ 18

VI.

Conclusiones ......................................................................................................... 19

VII.

Recomendaciones ................................................................................................. 20

VIII. Bibliografa ............................................................................................................. 21

I.
Introduccin
La energa es la fuerza que dirige el crecimiento econmico y el desarrollo mundial. En
aos recientes, el rpido desarrollo de la economa mundial ha agotado las fuentes de
combustibles fsiles trayendo consigo problemas ambientales importantes, por lo tanto, el
desarrollo y la utilizacin de nuevas fuentes de energa se ha convertido en una prctica
comn en todo mundo. (Marcilla et al, 2012).
El estudio de diferentes aspectos relacionados al comportamiento de las microalgas ha
recibido un inters importante debido al amplio campo de aplicacin de estos organismos.
Generalmente, las microalgas contienen cantidades importantes de lpidos, carbohidratos,
protenas y pigmentos, entre otros componentes. Los cultivos de microalgas han sido
principalmente desarrollados como una importante fuente de productos de nutricin
acucola, suplementos alimenticios y farmacuticos; pero tambin se han sugerido como
buenos candidatos para la produccin de combustible. Varios estudios publicados
muestran la posibilidad de obtener biodiesel de alta calidad mediante esterificacin y
transesterificacin convencionales a partir de los lpidos acumulados en las clulas de las
microalgas (Valds et al, 2012).

II.
Antecedentes
El incremento en el consumo de energa ha causado varias preocupaciones acerca de la
seguridad energtica y la degradacin del medio ambiente, ms y ms atencin de parte
de las comunidades acadmicas e industriales se ha dirigido a producir energa renovable
a partir de biomasa, principalmente biodiesel (Wu et al, 2012) a partir de oleaginosas. Sin
embargo, el cultivo de estas plantas no es sustentable debido al requerimiento de grandes
superficies cultivables, consumo de agua y desplazamiento de otros cultivos destinados
al consumo como alimentos para los seres humanos (Halim et al, 2012).
Las microalgas han sido reconocidas como una prometedora fuente alternativa de lpidos
para la produccin de biodiesel. Estas son un grupo de diversos organismos fotosintticos
que pueden acumular grandes cantidades de lpidos, hasta el 50% del peso seco total en
algunas especies (Halim et al, 2012). El crecimiento de las microalgas se puede generar
en sistemas abiertos como estanques y canales artificiales o sistemas cerrados como
fotobioreactores tubulares o laminares. Siendo las microalgas una forma de vida vegetal

requiere para su crecimiento fuentes de luz, carbono y nutrientes, dichos nutrientes

pueden obtenerse de aguas de desecho mientras que el carbono lo obtienen de la
atmosfera (Demirbas y Demirbas, 2011, Chun-Yen et al, 2011).
Los recipientes de cultivo comnmente usados son de materiales no txicos como las
cajas de Petri, matraces Erlenmeyer, matraces Ferenback, o garrafas, adecuados para
cultivos de laboratorio. Para cultivos a gran escala los recipientes de plstico, madera y
concreto son los ms recomendables. En cultivos masivos la aireacin es un factor
importante para la homogenizacin de los nutrientes y para evitar la sedimentacin de las
microalgas. Algunas especies suelen acumularse en lugares donde el agua no se mezcla,
stas tambin depende de la forma del recipiente de cultivo que cuando no es adecuado
retarda el crecimiento (Torrentera et al, 1989). El crecimiento y la divisin celular son
afectados por la temperatura y por la penetracin de la luz en el cultivo. En los cultivos a
gran escala la profundidad es tan grande que la intensidad de la luz incidente no es
suficiente para la fotosntesis, hasta el fondo del tanque. La adicin de CO2 amortigua el
agua contra los cambios de pH, es recomendable la inyeccin de CO2 (0.5%) para
contribuir al proceso fotosinttico (Catal-Esteve L, 2013).
Aunque muchas variedades de microalgas tiene un alto contenido lipdico natural, como
se muestra en el cuadro II:1 junto con otros compuestos disponibles, es posible
incrementar la concentracin optimizando los factores de crecimiento, como los niveles de
nitrgeno disponibles (Fei-Fei et al, 2013), la intensidad de la luz, la temperatura, la
salinidad, la concentracin de CO2 y el procedimiento de cosechado (Elmoraghy et al,
2012). Por eso es necesario poder controlar estas variables durante el cultivo. Sin
embargo, el aumento en la acumulacin de lpidos no resulta necesariamente en el
aumento de la productividad. La acumulacin se refiere al contenido total de lpidos en
relacin al total de la biomasa mientras que la productividad se refiere al total de lpidos
producidos (Brennan y Owende, 2010; Ghasemi et al, 2012).
Cuadro II:1 Perfil de composicin de la biomasa de diferentes especies de microalgas.

Especie

Lpidos
(%)

Protena
Clorofila
Carbohidratos
Carotenoides
cruda
total
(%)
(%)
(%)
(%)

cidos
grasos
3 (%)

Fuente

Phaeodactylum

18

34.6

26.1

2.04

0.243

2.5

Nannochloropsis
ssp.

18.4

28.8

37.6

0.29

0.06

2.24

N.
oleoabundans

*35-65

32.212.3

9.4-3

Chrorella.
vulgaris

14-22

51-58

*16

RebollosoFuentes,
M. (2001)
RebollosoFuentes,
M. (2001)
*CustodioFranco,
(A. 2013)
BandSchmidt
(1999)
Becker
(2007)
*MorrisQuevedo
(1999)

Para este estudio se utilizaron nicamente tres especies de microalgas, en el cuadro II:2
se presenta la taxonoma de cada especie.
Cuadro II:2 Clasificacin taxonmica.

Especie
C. kessleri

N. oleoabundans

Phaeodactylum

Taxonoma
Reino: Plantae
Filo: Chlorophyta
Clase: Trebouxiophyceae
Orden: Chlorellales
Familia: Chlorellaceae
Gnero: Chlorella
Reino: Plantae
Filo: Chlorophyta
Clase: Chlorophyceae
Orden: Sphaeropleales
Familia: Neochloridaceae
Gnero: Neochloris
Reino: Chromista
Filo: Ochrophyta
Clase: Bacillariophyceae
Orden: Naviculales
Familia: Phaeodactylaceae

III.
Objetivo
Evaluar el crecimiento de las especies de microalgas C. kessleri, N. oleoabundans y
Phaeodactylum, cultivadas bajo condiciones controladas en un laboratorio y ambientales
dentro de un invernadero.

IV.

Metodologa

a) Microalgas
Se utilizaron cepas de Chlorella kessleri, Neochloris oleoabundans, y Phaeodactylum
provenientes de la Universidad Autnoma Metropolitana (UAM). Se cultivaron en 100ml
de agua, previamente esterilizada en una autoclave a una temperatura y presin de 121C
y 103kPa respectivamente durante 20 minutos, a una concentracin de 0.1% Bayfolan
forte, almacenndolas en una incubadora con iluminacin 12 horas al da a 120rpm. Se
realiza este mismo procedimiento dos veces al mes.
b) Preparacin del medio e inoculacin
i.

Medio de 1L
En 900 ml de agua se agregan 3 ml de cloro y se deja
en aireacin constante durante 24 horas. Despus de
transcurridas las 24 horas, se agregan 0.5g de tiosulfato
de sodio y se deja nuevamente en aireacin constante
por lo menos 4 horas. Al termino del tiempo de aireacin,
se agregan 0.9 ml de solucin nutritiva (Bayfolan forte),
inmediatamente despus se toman 100 ml de la cepa y

Ilustracin IV:1 Preparacin medio de

1L.

se agregan al agua con

aireacin constante e

iluminacin, etiquetando los nuevos cultivos con la

especie

que

contienen, fecha

de

inoculacin,

concentracin de Bayfolan forte del medio. Despus de

inocular hay que medir la densidad ptica para saber la
concentracin inicial.

Ilustracin IV:2 Preparacin medio

de 10L.

ii. Medio de 10 y 20L

En 10L de agua se agregan 30 ml de cloro y se deja en aireacin constante durante 24
horas. Despus de transcurridas las 24 horas, se agregan 5g de tiosulfato de sodio y se
deja nuevamente en aireacin al menos durante 4 horas. Al trmino del tiempo de
aireacin, se agregan 10 ml de solucin nutritiva (Bayfolan forte), inmediatamente despus
se toma 1L de la cepa y se agrega al agua con aireacin constante, etiquetando los nuevos
cultivos con la especie que contienen, fecha de inoculacin, y concentracin del medio.
Una vez que la concentracin de los 10L llegue a una densidad ptica aproximada de 1ua
(unidades de absorbancia), se agregan otros 10L que hayan sido previamente preparados
de acuerdo a la metodologa anterior para aumentar el volumen del cultivo.

Ilustracin VI:3 Cultivo en volumen

de 10L.

Ilustracin VI:4 Cultivo en volumen

de 20L

c) Densidad ptica (tcnica turbidimtrica)

Est basada en la medida de la turbidez de los medios de cultivo en los que crecen
microorganismos unicelulares. La turbidez es proporcional a la masa de las clulas en
suspensin.

Se utiliza un espectrofotmetro visible (Thermo scientific) para determinar densidad ptica

de la muestra. Se realiza la medicin a 3 longitudes de onda (530, 680 y 750 nm). Se
utilizan las lecturas a 750 nm para medir la tasa de crecimiento porque la absorbancia a
esta longitud de onda es proporcional al nmero de clulas que hay en un cultivo y es una
medida eficaz debido a que ningn pigmento absorbe a 750 nm. Las otras lecturas, son
para la absorcin de pigmentos carotenoides (530 nm) y para la absorcin de clorofila a
(680 nm).
Agitar el medio para que las muestras sean lo ms homogneas posibles, especialmente
en el medio de 10 y 20L.
Cuando las lecturas superen la unidad de absorbancia, se deben realizar las diluciones
necesarias para mantener valores menores a uno. Cuando se realice cualquier dilucin
de la muestra, esta debe leerse por duplicado.
El valor promedio de las dos lecturas obtenidas para cada dilucin se multiplicara por el
factor de dilucin y as reportar en graficas de acuerdo al valor real.
Ejemplo:

Absorbancia (750nm)

2.5
2
1.5
C. Kessleri
1

N. oleabundans
Phaeodactilum

0.5
0
0

10

15

Dias

Registrar la hora exacta de la medicin para establecer un comportamiento real del

crecimiento.
d) Medida del peso seco
Consiste en la filtracin del cultivo a travs de una membrana que retenga las clulas y su
posterior desecacin hasta peso constante.

Se coloca el papel filtro (Whatman #1) en la estufa a 70C un da antes de la medicin

(peso papel filtro). Una vez que el papel filtro este a peso constante, se saca de la estufa,
se deja enfriar en un desecador y luego se debe tomar lectura del peso. Con la ayuda de
una pipeta y agitando el medio para que las muestras sean lo ms homogneas posibles,
se lleva a cabo la filtracin de 10 ml de muestra del cultivo, por duplicado. Se seca en la
estufa a 70 C la muestra filtrada, durante un da (peso muestra seca). Al da siguiente se
pesa el papel, despus de haberlo dejado enfriar en un desecador, para establecer la
fraccin de peso que corresponde a la muestra. Al final se multiplica por un factor de 100
para obtener una concentracin de g/L.
=

( )

1000 =
10

e) Conteo al microscopio
Se efecta un conteo directo de clulas en un rea determinada para obtener el nmero
de clulas por mililitro de muestra.
Utilizando una cmara Neubauer, se toma una muestra del cultivo con ayuda de una pipeta
Pasteur y se coloca en la cmara limpia y completamente seca. Se observa en el
microscopio con el objetivo 40x. Con el nmero de clulas obtenidas, se define el nmero
de microalgas por mililitro de muestra.

El nmero de clulas es la suma de todas las clulas contadas en todos los cuadros.
Ejemplo.
Como el volumen de 1 cuadro grande es:
0,1 cm x 0,1 cm = 0,01 cm2 de superficie
0,01 cm2 x 0,1 mm (profundidad) = 0,01 cm2 x 0,01 cm = 0,0001 cm3 = 0,0001 ml
La frmula para recuento con cuadros grandes en cmara de Neubauer

En el caso de que se haga una dilucin, se tomara en cuenta ese factor para encontrar la
concentracin:

Contar las clulas en los cuadros donde se les haga ms fcil su observacin y encontrar
una cantidad de por lo menos 300 clulas.
El cuadrado grande central (que se puede ver en su totalidad con el objetivo 10X; ver
figura), est dividido en 25 cuadrados medianos (con el objetivo 40X se pueden ver los
cuadrados medianos completamente; ver figura), cada uno de ellos con 16 cuadrados
pequeos en su interior. Los cuatro cuadrados grandes de las esquinas (no se muestran
en la figura), estn formados por 16 cuadrados medianos.
El recuento se puede realizar tanto en el cuadrado grande central como en los de las
esquinas, dependiendo del tamao de las clulas en estudio.

f) Cosecha
La cosecha se realiza en tinas con capacidad suficiente para el medio de 20 L. Dejando
que el agua de evapore para obtener microalgas secas. El medio de cultivo debe estar en
un rango aproximado de 1.5ua cuando se deposite en las tinas.
Las tinas deben estar forradas con plstico grueso por el interior, para hacer ms sencilla
la recoleccin de las microalgas secas y tener la menor perdida posible. Tambin se deben
cubrir con una malla negra para evitar contaminaciones en el cultivo y aumentar la
temperatura de secado dentro de la tina.
Etiquetar la tina con la especie, el da y la absorbancia a la que inicia el secado.
Pesar la materia seca obtenida, guardar en recipientes cerrados, etiquetando con la
especie, fecha de inoculacin en medio de 20L y fecha de cosecha.

Imagen IV:5 Forrado del interior de las tinas.

V.

Imagen IV:6 Etiquetado y cobertura de las

tinas con malla negra.

Resultados y discusiones

a) Observaciones
Se observaron las caracteristicas fsicas de las especies de microalgas Chlorella kessleri,
Neochloris oleabundans y Phaeodactylum (Cuadro V.1), cultivadas en recipientes de 1L
con Bayfolan 0.1%, aereacin 24 horas al dia e iluminacion artificial.
Cuadro V:1 Observaciones e imgenes de las especies de microalgas cultivadas.

Especie
C. kessleri

Observaciones
Imagen 40x
Clulas
bien
separadas, de igual
tamao entre ellas y
pequeas
en
comparacin con otras
especies.
Tienen
movimiento
vibratorio
escaso.
Haba
pocas
agrupaciones.
Tienen
buena
distribucin
pero
comienzan
a
agruparse en pares.

N.
oleoabundans

Phaeodactylum

Habia
varias
agrupaciones
de
celulas
y
estas
variaban en tamao,
habia celulas muy
pequeas respecto a
las demas.
Existia
poco
movimiento vibratorio
o casi nulo. Tenian
tamao
variado,
grandes
y
muy
pequeas.
Tienen un tamao
pequeo
y
homogeneo
entre
ellas. No se han
agrupado mas.
Haba escasas clulas
alargadas y ovoides
con la pared celular
bien definida.
Hay gran poblacin
con respecto a las
dems especies, no
se
encuentran
aisladas pero tampoco
estn
aglutinadas
entre ellas.
Contina la presencia
de
microalgas
alargadas aunque en
menor proporcin que
las ovoides.

b) Conteo al microscopio
Se midi el crecimiento de las especies microalgales utilizando la tcnica de conteo al
microscopio, se estableci una relacin respecto a la densidad ptica a 750nm que nos
permite obtener un valor exacto de nmero de clulas por mililitro de forma rpida y
eficiente sin tener que realizar nuevamente la metodologa descrita anteriormente. En las
grficas de la figura V:1 se muestran las ecuaciones de densidad ptica de las tres
especies estudiadas, podemos observar que la especie C. kessleri muestra la mejor

correlacin entre los puntos obtenidos, a diferencia de N. oleoabundans y Phaeodactylum

cuya relacin entre la absorbancia y el conteo de clulas es muy dispersa y por lo tanto,
el clculo de clulas a partir de la ecuacin ser inexacto.

N. oleabundans

Phaeodactylum
Millones

70
60

60
50

Cells/ml

Cells/ml

50

70

40
30

40
30

70
60
50

Cells/ml

Millones

C. kessleri

Millones

Figura V:1 Variacin de la concentracin de clulas respecto a la densidad ptica de C. kessleri, N.

oleoabundans y Phaeodactylum.

40
30

20

20

20

10

10

10

0
y = 1E+07x 556363
R = 0.7988

Absorbancia (750nm)

0
y = 2E+07x - 0
1
2
819450
R = 0.7245 Absorbancia (750nm)

0
y = 3E+07x - 0
1
2
6E+06
Absorbancia (750nm)
R = 0.7059

c) Peso seco
El monitoreo del peso seco de los cultivos de microalgas nos permite obtener la cantidad
de materia seca que se puede alcanzar en una determinada fase del cultivo, a partir del
valor de densidad ptica a 750nm podremos predecir el rendimiento en la cosecha. En
figura V:2 se muestra las ecuaciones de peso seco de las tres especies estudiadas, para
comprobar su veracidad se puede comparar el rendimiento terico con el real.
Desafortunadamente C. kessleri y N. oleoabundans no alcanzaron una densidad ptica
alta debida a factores ajenos al cultivo, pero las correlaciones obtenidas por parte de las
tres especies nos permite asegurar resultados confiables.

Figura V:2 Variacin del peso seco respecto a la densidad ptica de C. kessleri, N. oleoabundans y
Phaeodactylum.

y = 0.5933x +
0.1363
R = 0.9304

C. kessleri

1.6

y = 0.4506x +
0.1681
R = 0.9901

Phaeodactylum
1.6

1.4

1.4

1.2

1.2

1.2

1
0.8
0.6

Peso seco (g/L)

1.4

Peso seco (g/L)

Peso seco (g/L)

1.6

N. oleabundans

1
0.8
0.6

1
0.8
0.6

0.4

0.4

0.4

0.2

0.2

0.2

0
0

Absorbancia (750nm)

y = 0.5661x +
0.1825
R = 0.9879

0
0

Absorbancia (750nm)

Absorbancia (750nm)

d) Cultivo en volumen de 1L
Se cultivaron en volmenes de 1L, 9 generaciones para las especies C. kessleri y N.
oleoabundans y 8 generaciones para la especie Pheodactylum, dentro de un lapso de
tiempo que comprende del 27/08/2013 al 13/06/2014. En figura V:3 se presentan todas
las generaciones cultivadas para cada especie, las generaciones estn ubicadas en orden
cronolgico comprendido en el periodo de estudio, expresado anteriormente. En
Phaeodactylum no se cultiv la generacin 6 (G6) y en las otras dos especies esta
generacin tuvo un comportamiento diferente, puesto que tiende a disminuir el peso seco
en el penltimo da de cultivo y luego vuelve a incrementar, esta diferencia pudo haber
sido producto de no tener un agitado adecuado del medio que contena a las microalgas
al momento de tomar la muestra, tal circunstancia se considera como un error debido al
operador.

Figura V:3 Peso seco respecto a los das de cultivo para las generaciones cultivadas en un volumen de 1L de
C. kessleri, N. oleoabundans y Phaeodactylum.

N. oleoabundans

Phaeodactylum

1.4

1.4

1.2

1.2

1.2

1.0

1.0

1.0

0.8
0.6
0.4
0.2

Peso seco g/L

1.4

Peso seco g/L

Peso seco g/L

C. kessleri

0.8
0.6
0.4
0.2

0.0
10

20

Dias

0.6
0.4
0.2

0.0
0

0.8

0.0
0

10
Dias

20

10

20

Dias

Con base a la grfica podemos decir que se puede obtener de 0.4 a 1.2 g de C. kessleri/L
habiendo transcurrido alrededor de 10 das, indicando que su crecimiento no es constante
entre generaciones principalmente despus de la sptima generacin. N. oleoabundans
tiene una diferencia de peso seco menor en los mismos 10 das, ayudando a establecer
que en un periodo de tiempo determinado se obtendr una cantidad definida de peso seco,
solo la ltima generacin fue la que present un comportamiento diferente. Para
Phaeodactylum el comportamiento de las generaciones es muy similar entre ellas
siguiendo casi la misma trayectoria y dando un mejor crecimiento de la especie durante
todas las inoculaciones realizadas.
Es importante destacar que, cuando es una misma generacin, las especies de microalgas
se comportan de forma similar entre ellas, es decir, que C. kessleri, N. oleoabundans y
Phaeodactylum cultivadas en volumen de 1L, son susceptibles a los mismos factores. Se
obtuvo la ecuacin exponencial de crecimiento para cada generacin que se cultiv en
volumen de 1L de cada especie, y as, se pudo conocer el incremento del peso seco por
da, en el cuadro V:2 se presenta un resumen de los datos extrados y el anlisis
estadstico de la tasa de incremento del peso seco por da para cada especie.

Cuadro V:2 Datos generales para cada especie, tomando en cuenta todas las generaciones cultivadas en
volumen de 1L.

N (nmero de
generaciones
cultivadas)
Densidad ptica
mxima (ua)
Peso seco mximo
(g/L)
Promedio de la tasa
de incremento de
peso seco (g/L/da)
Desviacin estndar
(g/L)

C. kessleri

N. oleoabundans

Phaeodactylum

1.983

2.368

2.031

1.310

1.235

1.332

0.113

0.116

0.124

0.041

0.037

0.037

Podemos observar que a pesar de que N. oleoabundans alcanz la densidad ptica ms

alta, en comparacin con las otras especies, sto no quiere decir que su peso seco sea
tambin el ms alto, por otro lado Phaeodactylum tiene la mayor tasa de incremento de
densidad ptica diaria, el peso seco obtenido es mayor, comparndolo con las dems
especies, adems de que se ve favorecido por la desviacin estndar. C. kessleri se ve
afectada por los altos valores de desviacin estndar, pero a pesar de ser el cultivo que
menor valor de densidad ptica alcanz, el peso seco que se calcul mediante el uso de
la ecuacin ocupa el segundo lugar.
e) Cultivo en volumen de 10 y 20
El cultivo en volmenes de 10 y 20L se llev a cabo dentro de un invernadero, pero la
temperatura dentro de ste era muy susceptible a las condiciones ambientales e incluso
a los cambios que haba entre el da y la noche.
Primero se inocula un medio de 10L y despus de alcanzar cierta absorbancia, se puede
realizar una dilucin a 20L para obtener mayor cantidad de microalgas con el mismo monto
de cepa. Cmo no se conoca la absorbancia adecuada para realizar la dilucin se llevaron
a cabo 2-3 generaciones de cultivo para encontrar un valor que permitiera la dilucin y as
obtener buen crecimiento en el volumen de 20L y poder cosechar de mayor materia seca.
La primera generacin (G1) se inocul el 09/09/2013 (da 0) para las tres especies en
volmenes de 10L, se realiz la dilucin a 20L solo para C. kessleri el 13/09/2013 (da 4)

y para N. oleoabundans y Phaeodactylum el 20/09/2013 (dia11). En esta generacin se

alcanzaron valores de absorbancia cercanos a 0.6ua antes de la dilucin (figura V:4) y el
comportamiento de crecimiento despus de la dilucin continu para las tres especies
logrando llegar a 0.8ua en volumen de 20L. Excepto para Phaeodactylum que no registr
buen crecimiento desde el inicio.
La segunda generacin (G2) se inocul el 03/10/2013 (da 0) solo para las especies N.
oleoabundans y Phaeodactylum, la dilucin se hizo el 15/10/2013 (da 10) a valores
cercanos a 0.8 ua., pero el crecimiento en volumen de 20L solo igualo el valor obtenido
antes de la dilucin (Figura V:4), Phaeodactylum volvi a presentar problemas de
crecimiento al inicio pero se recuper despus de la dilucin.
La tercera generacin G3 se inocul el 27/01/2014 (da 0) para todas las especies, la
dilucin se realiz el 4/02/2014 (da 8) cuando las absorbancias casi alcanzaban la unidad
(Figura V:4), aunque Phaeodactylum ya haba llegado a 1.6ua en ese momento. En el
medio de 20L se hizo notar un crecimiento continuo llegando a valores de 1.4 ua para C.
kessleri y N. oleoabundans, mientras que Phaeodactylum alcanz nuevamente valores de
1.6ua, esta generacin tuvo el mejor crecimiento y podemos realizar la dilucin desde un
valor de 1 ua y aun as obtener un buen crecimiento en medios de 20 L.
Figura V:4 Crecimiento de C. kessleri, N. oleoabundans y Phaeodactylum en un volumen de 10 y 20L.

N. oleoabundans

Phaeodactylum

1.6

1.6

1.4

1.4

1.4

1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2

Absorbancia (750nm)

1.6

Absorbancia (750nm)

Absorbancia (750nm)

C. kessleri

1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2

0
10
Dias

20

1
0.8
0.6
0.4
0.2

0.0
0

1.2

0
0

10
Dias

20

10
Dias

20

En los cultivos en volumen de 10L encontramos que se puede realizar la dilucin a 20L
con una absorbancia de 1 y cosechar en un periodo aproximado de 25 das para todas las
especies, con una absorbancia cercana a 1.5. En base a observaciones donde dejamos
que el crecimiento siguiera despus de los 25 das se notaron acumulaciones marrones y
por eso sugerimos que el cultivo no supere 30 das.
Se calcul el rendimiento terico (a partir de la ecuacin de peso seco para cada especie)
al momento de pasar la tercera generacion de microalgas cultivadas en volumen de 10 y
20L a las tinas de secado. Tras cosechar esta misma generacin de microalgas en tinas
de evaporacion se obtuvo un rendimiento real. Ambos valores se expresan en el cuadro
V:3. La diferencia de valores puede ser resultado a que en las tinas de cosecha los cultivos
siguieron creciendo, no se sabe si esto ocurrio porque se dejo de medir en ese lapso de
tiempo (alrededor de 30 dias).
Cuadro V:3 rendimiento terico y real de la tercera generacin (G3) de cultivo de microalgas en volumen de 10
y 20L.

Rendimiento
terico
Rendimiento
real

C. kessleri

N. oleoabundans

Phaeodactylum

(g de materia seca/L)

(g de materia seca/L)

(g de materia seca/L)

0.968

0.768

1.105

1.9013

1.7814

1.9570

f) Comparacin entre los volmenes de cultivo

Se realiz una comparacin entre los cultivos de 1L dentro del laboratorio y los de 10L en
el invernadero, inoculados el mismo da (09/09/2013) para observar como afectaban las
condiciones el crecimiento en los dos lugares.

Figura V:5 Crecimiento en volmenes de 1L y 10L de las tres especies inoculadas el 09/09/2013.

N. oleoabundans

Phaeodactylum

1.2

1.2

0.8
0.6
0.4
0.2

Absorbancia (750nm)

1.2

Absorbancia (750nm)

Absorbancia (750nm)

C. kessleri

0.8
0.6
0.4
0.2

0
5

10

Dias

0.6
0.4
0.2

0
0

0.8

0
0

5
Dias

10

10

Dias

En Figura V:5 se observa que si tienen el mismo comportamiento en los dos volmenes
para C. kessleri y N. oleoabundans que comenzaron en valores similares de absorbancia
pero que en Phaeodactylum esta circunstancia no favoreci a que el crecimiento se
pareciera entre los dos volmenes.
Con los resultados anteriores puede decirse que no existe una variacin entre el cultivo
en laboratorio, bajo condiciones controladas, y el de invernadero, bajo condiciones
ambientales; pero si se compara la misma generacin de volumen de 1L expuesta en la
figura V:5 con la tercera generacin de volumen de 10 y 20L no hay una comportamiento
parecido en el crecimiento, siendo mucho mayor en el invernadero, sugiriendo que las
condiciones ambientales favorables para el cultivo en general se dieron en el periodo del
27/01/2014 al 19/02/2014.

VI.

Conclusiones

Se evalu el crecimiento de tres especies de microalgas bajo las mismas condiciones de

cultivo entre ellas. A lo largo de todas las generaciones en donde se llev a cabo el conteo
de clulas en relacin a la absorbancia a 750nm, nos dimos cuenta de que es complicado
lograr obtener una correlacin cercana a la unidad, ya que esta medicin es muy
susceptible al error humano, afortunadamente, este aspecto no tuvo gran influencia sobre

la medicin del peso seco respecto a la absorbancia que si permiti obtener correlaciones
ms grandes entre los datos y nos da una medida fiable del peso seco de una muestra
microalgal.
En las generaciones del cultivo de 1L para las tres especies, se encontr que
considerando como aspectos importantes, las caractersticas de la experiencia prctica,
de tasa de incremento de peso seco diario, valores de absorbancia mximos, tiempos de
crecimiento, y el anlisis estadstico, Phaeodactylum se considera como la mejor opcin
de las tres especies estudiadas. En el cultivo en volumen de 10L se defini como 1ua el
valor adecuado para la dilucin a 20L y que a partir de este valor hacia arriba se obtendrn
buenos crecimientos en este volumen en un periodo aproximado de 25 das a partir de la
inoculacin del medio de 10L. Comparando los resultados de peso seco que se puede
obtener con la ltima absorbancia registrada al momento de la cosecha del volumen de
20L y el peso seco obtenido realmente despus del secado encontramos que se cosech
ms cantidad de materia seca de lo que se esperaba tericamente lo que significa que
puede seguir creciendo en el periodo de secado en las tinas donde no se realizaron
mediciones.
Con la comparacin entre los medios de 1 y 10L podemos decir que a pesar de que hayan
coincidido en el crecimiento durante una generacin inoculada en la misma fecha, no
sucede as con generaciones inoculadas en distintas fechas, entendiendo que cuando las
condiciones ambientales cambian el crecimiento tambin lo hace.

VII.

Recomendaciones

La inoculacin para un medio de 10L se debe hacer con 1L de microalgas que alcancen
un valor no menor 1ua, para que el crecimiento sea eficiente.

Para realizar un buen monitoreo del crecimiento es imprescindible agitar bien el medio
de cultivo para homogenizar la muestra.

S que el crecimiento no es favorable, se puede agregar la cantidad de Bayfolan forte

equivalente al 0.1% del volumen total.

Es importante tener cuidado de mantener aireacin constante en todo el cultivo.

Cuidar que no se contamine el cultivo en la fase de secado.

Cada preparacin de cultivo e inoculacin de los medios de 1, 10 y 20L debe hacerse

con las medidas de sanidad ms estrictas posibles, limpiando el rea de trabajo,
lavando los recipientes con agua y jabn y desinfectando mangueras y filtros con cloro.

Tratar de cosechar los cultivos de 20L en un periodo no mayor a 30 das o antes de

que se puedan ver aglutinaciones marrones.

VIII. Bibliografa
(s.f.). Obtenido de http://www.fao.org/docrep/field/003/ab473s/ab473s02.htm
Band-Schmidt. (1999). Efecto de la composicion bioquimica de microalgas sobre el valor
nutritivo de dos cepas de Artemia. Tesis para obtener el grado de Maestro en
Ciencias, CICIMAR .
Becker, E. W. (1994). Microalgae Biotechnology and microbiology. Cambridge University
Press, Cambridge.
Brennan, L., & Owende, P. (2010). Biofuels from microalgaeA review of technologies
for production, processing, and extractions of biofuels and co-products.
Renewable and Sustainable Energy Reviews 14, 557577 .
Catal-Esteve, L. (2013). Contribucin al estudio del crecimiento y las posibilidades del
aprovechamiento termoqumico de las microalgas Nannochloropsis gaditana y
Nannochloropsis oculata.
Chun-Yen, C., Kuei-Ling, Y., Rifka, A., Duu-Jong, L., & Jo-Shu, C. (2011). Cultivation,
photobioreactor design and harvesting of microalgae for biodiesel production: A
critical review. Bioresource Technology 102, 7181 .
Custodio-Franco, A. (2013). Biodiesel de microalgas: Avancos e desafos. Quim Nova,
437-448.
Demirbas, A., & Demirbas, M. (2011). Importance of algae oil as a source of biodiesel.
Energy Conversion and Management 52, 163170 .
Elmoraghy, M., Webster, T., & Farag, I. (2012). Microalgae Lipid Triggering by Cooling
Stressing. Journal of Energy and Power Engineering 6, 1918-1924 .
Fei-Fei, C., Pei-Na, C., Pei-Jie, C., Wen-Wei, L., Paul, K. L., & Raymond, J. Z. (2013).
Phosphorus plays an important role in enhancing biodiesel productivity of
Chlorella vulgaris under nitrogen deficiency. Bioresource Technology 134, 341
346.

Ghasemi, Y., Rasoul-Amini, S., Naseri, A., Montazeri-Najafabady, N., Mibasher, M., &
Dabbagh, F. (2012). Microalgae Biofuel Potentials (Review). Applied Biochemistry
and Microbiology 48(2), 126144.
Halim, R., Danquah, M., & Webley, P. (2012). Extraction of oil from microalgae for
biodiesel production: A review. Biotechnology Advances 30, 709732 .
Infante, C., Angulo, A., Zrate, A., Flores, J., Barrios, F., & Zapata, C. (2012). Cultivation
of Chlorella sp. microalgae in batch culture: cell growth kinetics.
Marcilla, A., Catal, L., Garca-Quesada, J., Valds, F., & Hernndez, M. (2012). A
review of thermochemical conversion of microalgae. Renewable and Sustainable
Energy Reviews.
Morris-Quevedo, H., Quintana-Cabrales, M., Almarales-Arceo, A., & Hernandez-Nazario,
L. (1999). Composicin bioqumica y evaluacin de la calidad proteica de la
biomasa autotrfica de chlorella vulgaris. Rev Cubana Aliment Nutr.
Rebolloso-Fuentes, M. (2000 ). Biomass nutrient profile of the microalga Phaeodactylum
tricornutum. Journal of food Biochemstry, 57-76.
Torrentera-Blanco, L., Tacon, A. (1989). La produccin de alimento vivo y su importancia
en acuacultura. Programa cooperativo gubernamental.
Valds, J., Hernndez, F., Catal-L, A., & Marcilla, M. (2012). Estimation of CO2
stripping/CO2 microalgae consumption ratios in a bubble column photobioreactor
using the analysis of the pH profiles. Application to Nannochloropsis oculata
microalgae culture. Renewable and sustainable, 1-6.
Wu, X., Ruan, R., Du, Z., & Liu, Y. (2012). Current Status and Prospects of Biodiesel
Production from MicroAlgae. Energies 5, 2667-2682.