Bioqumica-2 F (2010-11) -T 17-1

Tema 17: Oxidorreduccin biolgica. Potencial redox y energa libre. Cadena respiratoria: organizacin y localizacin
subcelular. Fosforilacin oxidativa: Acoplamiento energtico para la formacin de ATP. Estudio de la ATPasa. 3 horas
(30 noviem. ,2 y 3 -dic).
Objetivos del aprendizaje:
Entender que la oxidacin biolgica de sustratos transcurre por rutas catablicas que generan NADH y que
ste se oxida en la CTEM por varios transportadores red-ox situados en complejos proteicos de membrana.
2. Conocer que la Coenzima Q y el citocromo c son transportadores mviles de e- entre los complejos.
3. Entender que los H+ son traslocados a travs de la membrana mitocondrial por los complejo I, III y IV.
4. Interpretar que la reduccin de cada molcula de O2 por 2 NADH hasta 2 H2O requiere 4 e- y produce la
translocacin de 20 H+ desde la matriz mitocondrial al espacio intermembranoso.
GLOBAL: Comprender como la G de la oxidacin de la coenzima NADH se conserva como un gradiente
electroqumico de H+ en la membrana interna mitocondrial.
1.

Oxidorreduccin biolgica
Las clulas vivas requieren energa para ejercer sus funciones. Las clulas usan la energa qumica almacenada
en las molculas orgnicas (nutrientes) para generar ATP, molcula que necesitan para desarrollar trabajo til
(biosntesis, contraccin, transporte, etc)
Para generar ATP, las molculas orgnicas nutrientes (carbohidratos, cidos grasos, protenas, etc.) se degradan
por las rutas catablicas y esta degradacin oxidativa es exergnica. La oxidacin de estos nutrientes va a
generar cofactores reducidos: NADH, FADH2, etc.; y stos ceden sus equivalentes de reduccin al O2 molecular a
travs de la cadena transportadora mitocondrial, donde se va a generar la mayor parte del ATP celular.

Potencial de oxido-reduccin y energa libre.

Las reacciones bioqumicas en los organismos vivos son de transferencia de energa. Frecuentemente ocurren
acopladas unas a otras para que puedan ser favorables termodinmicamente. Acopladas son tambin las
reacciones de oxido-reduccin (redox).
La reduccin se puede definir como la ganancia de un electrn o de un equivalente de reduccin [H]; mientras
que la oxidacin es la perdida de un electrn o de un equivalente de reduccin [H]. [H] = 1 e- + 1 H+
El in ferroso (Fe+2 ) se oxida a in frrico ( Fe+3 ) por perdida de un electrn.:
Fe+2 - eFe+3
As mismo, el in frrico se reduce a in ferroso por ganancia de un electrn:
Fe+3 + eFe+2
En las reacciones bioqumicas, un metabolito reducido (AH2 ) se oxida a (A), mediante la reaccin redox con NAD+
(ox) que en el proceso se reduce a NADH + H+:
AH2 (reductor) + NAD+(oxidante)
A(oxidado) + NADH (reducido).
En el metabolismo celular se producen muchas reacciones redox donde la transferencia de electrones desde el
NADH hasta el O2 est acoplada a la sntesis de ATP en la respiracin mitocondrial.

LA ECUACIN DE NERNST
La relacin que existe entre la energa libre y la energa elctrica o red-ox es:
G = - N* F* E o
N = Nmero de e- transferidos en la reaccin de oxidorreduccin.
E = Potencial elctrico en voltios
F = una constante de proporcionalidad = 23.060 cal / voltios = 96. 487 coulomb * equiv -1
Deduccin:
E0 = R*T * ln K
Ecuacin de Nernst
N*F
N * F * E o = R * T * ln K
G o = -R * T * ln K
Sustituyendo
G = -N * F * E o
G = - N* F* E o
'
Para los sistemas biolgicos es normal expresar el potencial redox (E0 ) a pH
7,0, en el cual el potencial de electrodo de hidrgeno es de - 0,42 voltios.
Como regla general los compuestos reductores transfieren electrones a los oxidantes. Un reductor fuerte tiene un
potencial elctrico en voltios muy negativo, mientras que un oxidante lo tiene positivo.
El potencial de reduccin estndar de los sistemas
de oxidorreduccin nos permite predecir la direccin
del flujo de electrones de un sistema a otro, bajo
condiciones estndar.
NADH y FADH2
En las reacciones metablicas el poder reductor de
los nutrientes pasar a las coenzimas de oxidoreduccin (NAD+/NADH + H+ y FAD/ FADH2), que en
varios pasos ceden los e- al O2. La energa se
recupera en un gradiente de H+, que a su vez
promueve la fosforilacin del ADP a ATP (fosforilacin
oxidativa)

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Cadena respiratoria: Transporte Electrnico mitocondrial

Una clula tpica contiene aproximadamente 2 000 mitocondrias, cada una
del tamao aproximado de una bacteria. La membrana mitocondrial
interna est muy invaginada y contiene un sistema complejo de enzimas y
cofactores que producen ATP, la molcula-moneda de energa celular
usada por todas las formas de vida.

De donde viene la energa y como es canalizada hacia la

sntesis de ATP?
La fuente de la mayor parte de la energa utilizada para la sntesis del ATP
es la oxidacin del NADH, cuya oxidacin libera 218 kJ
/mol en condiciones estndar.
Para maximizar la recuperacin de esta energa libre en
forma aprovechable, la oxidacin de NADH se produce
en varias etapas que estn mediadas por una serie de
transportadores de e- situados en la membrana interna
mitocondrial.
Algunos de estos transportadores (centros red-ox) son
mviles, y otros son componentes de complejos
proteicos (I, III y IVII). La reduccin se va produciendo a
favor de potencial de red-ox E. La G desprendida
en estas reacciones red-ox se almacena en forma de
gradiente electro-qumico de H+ en la membrana
interna. Este gradiente es aprovechado por la ATP
sintasa para sintetizar ATP.

Estructura de la cadena respiratoria:

composicin y localizacin subcelular
Hay tres complejos proteicos transmembrana (I, III y IV), otro perifrico (II) y dos transportadores mviles (Co Q,
cyt c) formando parte de la cadena de transporte electrnico mitocondrial (ver figuras de arriba y abajo).

Complejo I:NADH deshidrogenasa (FMN y Fe-S)

El complejo I tiene protenas, un mononucleotido de flavina (FMN) y centros Fe-S.
El NADH transfiere 2 e- al FMN para formar FMNH2 reducido.
FMNH2 pasa sus e- a una serie de 6 7 clusters Fe-azufre y stos los pasan al
transportador mvil ubiquinona o CoQ .
Cuando la transferencia de e- es completa, CoQH2, molcula no polar, difunde
dentro de la membrana.
Durante la transferencia de e-, el
complejo I bombea 4 H+ al espacio
intermembranoso.

Complejo
II:
sucinato
deshidrogenasa
y otras
deshidrogenadas (FAD y Fe-S)
Como Complejo II hay varias flavoprotenas (FAD), que reciben edesde sustratos diversos para formar FADH2, y el FADH2
transfiere el par de electrones a la CoQ, igual que el Complejo I.
Los e- que reducen al FAD hasta FADH2 provienen de la
oxidacin del succinato, metabolito del ciclo del cido ctrico.
Tambin pueden originarse en la oxidacin de un cido graso o
del Glicerol-3-P.

Complejos II
(ver figura a la izquierda)

Ya que el potencial estandar de reduccin del FADH2 es solo

ligeramente menor que el de la CoQ, el complejo II no bombea
ningn H+ fuera de la matriz.

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Complejo III: CoQH2-Cit c reductasa (transportadores: Cyt c1, Fe-S, Cyt b y Cyt b1)
Los dos e- ,que entraron en la cadena por el C. I o
por el C. II, y que lleva la CoQH2 son transportados
hasta el Complejo III. Y ste los ha de llevar hasta el
C. IV, a travs del cyt c.
CICLO Q: Puesto que el siguiente portador mvil de
e-, el citocromo c, solo puede transportar 1 e-, uno
de los e- de la CoQH2 reducida entrar en la ruta
conocida como el ciclo Q, en el complejo III.
La CoQH2 transfiere 1 un e-, a travs de un cluster
de Fe-azufre y de un citocromo c1, a un citocromo c
situado en la cara del espacio intermembranoso del
Complejo III. En este proceso, un H+ liberado por
CoQH2 pasa hacia el espacio intermembranoso.
La transferencia del segundo e- tambin libera un
H+ al espacio intermembrana. Este e- pasa a travs
de un par de Cytos tipo b
dentro del complejo para realizar el ciclo Q.
La CoQ oxidada difunde a su lugar de unin sobre el
formando el radical complejo
III junto a la cara de la matriz, donde retorna el e- secuestrado por Cyt b, produciendo la forma radical CoQH.
Un segundo citocromo c recibe su e- desde otra molcula de CoQH2. Como antes, un e- va al citocromo c,
mientras el otro e- pasa al radical anterior CoQH, reducindolo a CoQH2
esto es el ciclo Q.

Complejo IV: Cyt c oxidasa (transportadores: 2Cu, Cyt a-Cyt a3-Cu)

El citocromo c reducido pasa sus e- al Complejo IV. Y ste pasa los e- al O2
molecular, para reducirlo a dos molculas de H2O.
La reduccin del O2 require 4 e- y por tanto son necesarios dos ciclos totales de
toda la cadena para completar la reduccin de 1 molcula de O2.
Dos e- pasan por un centro de Cu binuclear, cercano a la superficie citoslica, hasta un par de
citocromos tipo-a situados en el interior del complejo, reducindolo.
Por cada uno de los e- transferido, un H+ se transfiere desde la matriz al espacio
intermembranoso. El oxgeno diatmico se une al complejo binuclear reducido.

(La redistribucin interna de e- alrededor del complejo binuclear y una TYR esencial escinde
rpidamente el enlace O-O, generando un hidrxido de Cu, un complejo oxifrrico y un radical
tirosilo. El tercer e- del citocromo c se une a dos H+ de la matriz, convierte el hidroxido a agua
mientras se regenera la TYR. Con la adquisicin del cuarto e- y un cuarto H+ de la matriz, el
grupo oxiferrilo es reducido a hidrxido frrico en estado de reposo, y as se completa el
ciclo).

Fosforilacin oxidativa: teora quimiosmtica.

Por cada molcula de oxgeno reducido:
- Cuatro e- son
transportados a travs de la cadena desde 2
molculas de NADH
- 20 H+ se transfieren desde la matriz al espacio
intermembranoso. Adems, 4 H+ de la matriz se
usan para formar 2 H2O por cada O2.
La energa libre liberada por las reacciones redox
se almacena en el gradiente de H+ acumulado en
el espacio intermembranoso.
Los 20 H+ sern de nuevo transferidos hacia la
matriz a travs de una protena ATP-sintasa, que
conduce la sntesis de 6 molculas de ATP, un
proceso conocido como fosforilacin oxidativa.
La oxidacin de 2 molculas de FADH2 iniciada
por el complejo II tambin rinde los cuatro enecesarios para reducir el oxgeno a agua pero
bombea slo 12 H+ hacia fuera de la matriz y por
tanto rinde solo 4 molculas de ATP.

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Acoplamiento de la fosforilacin oxidativa al transporte electrnico mitocondrial:

rendimiento energtico en la formacin de ATP.
Se dan dos situaciones: 1) los e- entran a travs del complejo I, y 2) entran por el complejo II
1) 2NADH
4e-
O2
H2O
20 H+
6 ATP,
1 NADH
10 H+
3 ATP
El cambio de energa libre estandard cuando un par de electrones de NADH pasan al oxgeno molecular se puede
calcular:

Eo para NAD/NADH+H+ = -0,32V

Go = - n F Eo

Eo para 1/2 O2 + 2H+/H2O = +0,82V

Eo = 0,82 (-0,32) = 1,14 V

G o = - 52,7 Kcal * mol- = - 220,286 KJ / mol

Rendimiento < 1.- El paso de dos electrones del NADH al oxgeno va acompaado por una gran disminucin en
la energa libre, que podra hacer factible la sntesis de 7,5 moles de ATP, si se asume una energa libre de
hidrlisis para el ATP de 7,3 Kcal*mol-1 o 30,5 KJ / mol
( 52,7/7,0 =7,5 ATP) o 220,286 / 30,5 = 7,3 ATP
Sin embargo, el rendimiento de la fosforilacin oxidativa ser slo de aproximadamente un 41 %, puesto que se
sintetizan de hecho 3 ATP (aproximadamente).

2) 2 FADH2
4 e-
O2
H2O

12 H+
4 ATP

1 FADH2
2 ATP

TEORA QUIMIOSMTICA: La energa del transporte electrnico impulsa un sistema de transporte activo que
bombea protones fuera de la matriz mitocondrial, lo cual genera un gradiente de H+ con un potencial
electroqumico que posibilita la sntesis de ATP mediante la activacin de la ATP-sintasa.
Esta hiptesis se basa en:
i) la existencia de una fuerza protn-motriz con
dos componentes electro-qumico: Se genera una
diferencia de potencial (voltaje) transmembrana y
un gradiente de pH, pHmatriz > pHintermembrana
ii) un sistema de membrana interna intacta.
El
uso
experimental
de
los
agentes
desacoplantes, de los inhibidores y/o de los
ionforos fueron apoyos adicionales para
comprobar esta hiptesis formulada por P.
Mitchell en 1961.
AGENTES DESACOPLANTES.- Son aquellas sustancias que disminuyen la fuerza protn-motriz, disminuyendo el
gradiente de H+ en la membrana interna mitocondrial. Por ejemplo: Dinitrofenol y los compuestos ionforos
(permiten el paso de iones a travs de membranas)

Estudio de la ATPasa.La ATP sintasa es un complejo proteco formado por muchas subunidades organizadas en dos estructuras con
forma diferenciada: posee una zona esfrica, llamada factor F1 dirigida hacia la matriz mitocondrial, y otra parte
canal, el factor F0, integrado en la membrana interna mitocondrial.
Las subunidades que componen cada parte: F0= a b2 c12 y F1= 3 3
Mecanismo de accin
Las 3 unidades de la ATP sintasa no son equivalentes, la rotacin de las
cambia la conformacin. Segn va girando el complejo F0 por el paso de 3 H+
las unidades cambian de conformacin: L, T y O.
L: une ADP y Pi y es catalticamente inactiva
T: sintetiza ATP, es catalticamente activa
O: libera ATP

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Lanzaderas
Lanzaderas o transportadores de equivalentes de reduccin [H] = 1e- + 1 H+, desde el citosol al interior mitocondrial.
La glucolisis y otras vas metablicas oxidativas, catablicas, generan en el citosol cofactores reducidos, NADH, EFADH2, que all no pueden oxidarse a NAD+ y FAD para seguir actuando como coenzimas en las oxidaciones
metablicas de las nutrientes, catalizadas por las deshidrogenadas.
El traspaso de este poder reductor [H] desde el citosol hacia la mitocondria para convertirlo en energa, ATP, se
efecta con reacciones soportadas en dos sistemas de lanzaderas: la del glicerol-3-P y la de malato-aspartato.
1.-LANZADERA DEL GLICEROL-3-P
Se basa fundamentalmente en la enzima glicerol-P
deshidrogenasa
La glicerol-3-P deshidrogenasa es una flavo-protena
de membrana tipo complejo II
Esta protena enzimtica toma los e- del NADH
citoplasmtico, regenerando all el NAD+ necesario para
metabolismo citoslico y los pasa a la CoQ, transportador
mvil en la membrana interna mitocondrial.
La glicerol-P deshidrogenasa es una flavoprotena, su
cofactor redox es el FAD
FADH2

el

Estos 2e- en su paso por los complejos III y IV

bombearn slo 6H+ y por tanto la fuerza H+-motriz
generada servir para sintetizar 2 ATP.

2.- LANZADERA MALATO-ASPARTATO

La lanzadera malato-aspartato se basa en la funcin de varias protenas: transportadoras de membrana y
protenas enzimas solubles
Transportadores: Sistemas de transporte de
compuestos inicos a travs de la membrana
interna mitocondrial.
Enzimas: Malato deshidrogenasa, MDH y glutamato
oxalacetato transaminasa, GOT
Los NADH citoslicos ceden sus e- al oxalacetato,
que se reduce a malato y entra a la mitocondria.
Los 2e- del NADH citoslico que entran con el
malato acaban como NADH mitocondriales; que
descargan en la cadena de transporte electrnico y
bombearn protones, 10 H+ y rendirn el potencial
suficiente para sintetizar 3 ATP.
El resto de reacciones reequilibra el sistema.

REDUCCIN INCOMPLETA DEL OXGENO MOLECULAR.Si el O2 acepta menos de cuatro electrones se reducir parcialmente: a radical superxido (O2-) si slo acepta un
electrn; o a perxido de hidrgeno (H2O2) si acepta slo dos. Esto genera especies reactivas de oxgeno (ROS)
causantes del estrs oxidativo.