Micropropagacin y proyectos de produccin

Protoplastos:
Cultivo y aplicaciones

Dpto. Biologa Vegetal

FACULTAD DE AGRONOMA

Micropropagacin y proyectos de produccin

Protoplasto:
Clula vegetal desprovista de pared
celular, por proceso mecnico o
enzimtico.
Membrana plasmtica completamente
expuesta.
Estado transitorio, permite manipulacin
de esas clulas.
Mantiene potencialidades de clulas
vegetales completas.

Dpto. Biologa Vegetal

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1892

Primer aislamiento de protoplastos vivos de

cebolla por mtodos mecnicos.

1919

Primer aislamiento enzimtico, clulas de

levadura.

1960

Aislamiento de protoplastos de plantas superiores

con degradantes de pared celular.

1971

Regeneracin de plantas a partir de protoplastos

de Nicotiana tabacum.

Dpto. Biologa Vegetal

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Aplicaciones

Produccin de hbridos por fusin de protoplastos.

Manipulaciones genticas.

Estudio de procesos fisiolgicos y bioqumicos.

Dpto. Biologa Vegetal

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Micropropagacin y proyectos de produccin

Metodologa
1. Aislamiento y factores que lo afectan
2. Purificacin
3. Determinacin de viabilidad
4. Cultivo
5. Regeneracin

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Micropropagacin y proyectos de produccin

1) Factores que afectan la produccin y viabilidad de los

protoplastos

Fuente de material

Tratamientos pre-enzimticos

Tratamientos enzimticos

Osmolaridad

Dpto. Biologa Vegetal

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2) Purificacin

3) Viabilidad
Toma de oxgeno
Actividad fotosinttica
Tinciones
Dpto. Biologa Vegetal
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4) Cultivo
Medio de cultivo: MS, B5 (lquido o slido)
Osmolaridad
Densidad de plaqueo
Condiciones de almacenamiento
Material vegetal

5) Regeneracin
Organognesis/Embriognesis somtica
Eficiencia generalmente baja

Dpto. Biologa Vegetal

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Micropropagacin y proyectos de produccin

Dpto. Biologa Vegetal

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Regeneracin de plantas de arroz por cultivo de protoplastos.

Protoplastos
aislados de
hipoctilo de
arroz.

Primer divisin de
un protoplasto, a
los 4 das de
cultivo.

Grupos de
protoplastos
creciendo en
agarosa.

Bloques de
agarosa flotando
sobre medio de
cultivo.

Dpto. Biologa Vegetal

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Plntula derivada
de protoplasto, en
tubo de ensayo.

Debergh et al.

Micropropagacin y proyectos de produccin

Hibridacin somtica
Aislamiento de protoplastos

Fusin de protoplastos (fases)

Seleccin clulas hbridas

Cultivo de clulas hbridas

Regeneracin de plantas

Caracterizacin de las planas hbridas

Dpto. Biologa Vegetal
FACULTAD DE AGRONOMA

Hibridacin somtica

Dpto. Biologa Vegetal

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Micropropagacin y proyectos de produccin

Mecanismo de fusin
Tres fases:

Aglutinacin
Fusin de membranas
Redondeamiento de protoplastos fusionados

Tratamienos:

PEG
alto pH
Ca+2

Dpto. Biologa Vegetal

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Micropropagacin y proyectos de produccin

PROTOPLASTO A

PROTOPLASTO B

HIBRIDACIN
SOMTICA

AGREGACIN

FUSIN

DIVISIN CELULAR

CLULAS HBRIDAS
Dpto. Biologa Vegetal
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Hibridacin somtica en Dianthus.

D. chinensis

D. barbatus
Masahiro, 2004.
Dpto. Biologa Vegetal
FACULTAD DE AGRONOMA

Micropropagacin y proyectos de produccin

Hibridacin somtica en Dianthus.

Dpto. Biologa Vegetal

FACULTAD DE AGRONOMA

Masahiro, 2004.

Micropropagacin y proyectos de produccin

Hibridacin somtica entre

D.chinensis y D. caryophyllus.
Dpto. Biologa Vegetal
FACULTAD DE AGRONOMA

Masahiro, 2004.

Micropropagacin y proyectos de produccin

Problemas de la hibridacin somtica

La regeneracin de plantas a partir de protoplastos es
difcil, y a partir de productos de fusin an ms.

Ploida de los hbridos es impredecible.

Dificultades para recobrar la ploida normal.

Hbridos con frecuencia presentan problemas de
esterilidad.

Dpto. Biologa Vegetal

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Logros de la hibridacin somtica

Transferencia de esterilidad masculina de coliflor

(Brassica oleracea) a rbano (B. rapa) y a colza (B.
napus). Earle y Dicson, 1994).

Transferencia de resistencia a atrazina en Brassicas
(Christey et al. 1991).

Transferencia de esterilidad masculina en Nicotiana
(Zelcer et al. 1978).

Diversos hbridos somticos en especies ornamentales
y flores de corte.
Dpto. Biologa Vegetal
FACULTAD DE AGRONOMA

Lin et al, 1987

FIG. 2. Soybean protoplast cultures. A, Freshly isolated protoplasts; B, first cell divisions in
protoplast culture 4 d after isolation; C, microcalli
Dpto. Biologa
formation in 10 d old culture; D, microcalli
in 15Vegetal
d old culture; E, 25 d old culture; and F, 1
FACULTAD DE AGRONOMA
month old culture.