UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, Decana de Amrica)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL TOXICOLOGA

QUMICA ANALTICA INSTRUMENTAL

CURVA DE RINGBOWN. DETERMINACIN
DE LA ZONA DE TRABAJO. DETERMINACIN
DE LA CONCENTRACIN PTIMA
PROFESORA:
Dr. Delia Whu Whu
INTEGRANTES:
Pizarro Machaca, Manuel
Santiago

LIMA-PER
2010

OBJETIVOS

Aprender a graficar la curva de Ringbom.

Conocer la concentracin ptima de un compuesto para que

cumpla con la Ley de Lambert Beer a travs de la curva de
Ringbom.

Conocer las limitaciones de la ley de Lambert Beer.

INTRODUCCIN

En la primera prctica aprendimos la constitucin, el manejo y el

cuidado del espectrofotmetro UV-vis y la importancia que tena dicho
instrumento para el reconocimiento de una sustancia.
Para reconocer una sustancia hallamos su curva espectral la cual
despus era comparada con la curva espectral de una sustancia patrn,
otra manera es que debe de cumplir con la Ley de Lambert Beer pero
debemos de saber que esta ley tiene sus limitaciones y que una de las
limitaciones tiene que ver con la concentracin del analito.
En esta prctica se aprender a hallar la concentracin ptima para una
mejor lectura en el espectrofotmetro UV-vis y para que el analito
cumpla con la Ley de Lambert - Beer, esto lo lograremos con el uso de
la Curva de Ringbom.
La curva de Ringbom relaciona la absortancia con la concentracin del
analito. Mediremos la absorbancia de diferentes concentraciones de un
analito, hallaremos el porcentaje de transmitancia y con esto la
absortancia, luego la relacionaremos sus concentraciones y de acuerdo
a la curva reconoceremos la concentracin ptima en la cual se cumpla
con la Ley de Lambert Beer.

FUNDAMENTO TERICO

LEY DE LAMBERT Y BEER

Ocurre cuando en el caso de la radiacin monocrmatica, la
absorbancia es directamente proporcional a la longitud b de la
trayectoria a travs de un medio y la concentracin c de la especie
absorbente. sta relacin se representa con la siguiente frmula:
A= abc
a : constante de proporcionalidad llamada absortividad
b : longitud (cm)
c : concentracin (g/L)
Cuando la concentracin de la ecuacin se expresa en moles por litro y
el largo de la celda est en centmetros, la absortividad se llama
absortividad molar, y se representa con el smbolo especial . Por tanto,
cuando b est en centmetros y c en moles por litro se tiene:
A = bc
Se han encontrado pocas excepciones a la generalizacin de que la
absorbancia est relacionada en forma lineal con la longitud de la
trayectoria. Por otra parte, se ha encontrado desviaciones frecuentes de
la proporcionalidad directa entre la absorbancia medida y la
concentracin cuando b es constante. Para que no ocurran errores
durante nuestro anlisis y hacerlo demanera adecuada hacemos uso de
la curva de ringbown.

GRFICA DE RINGBOW
Cuando se realiza un anlisis espectroscpico se debe trabajar, en lo
posible, se debe trabajar, en lo posible, con concentraciones que
permitan que se cumpla la ley de Beer, con el fin de obtener una curva
de calibracin que tenga una relacin lineal.
Para obtener el intervalo ptimo de concentraciones primero se
construye la curva de Ringbom, que consiste en construir una grfica
de absorbancia (100- %T) vs. lg Concentracin. Los datos se obtienen
preparando una serie de soluciones patrn del analito, que cubran una
variacin de por lo menos dos rdenes de magnitud de concentracin
de este y se miden las transmitancias correspondientes a la longitud de
onda analtica escogida. Para la mayora de los sistemas la curva de
Ringbown corresponde a una curva en forma de S. La parte lineal de
esta grfica permite obtener el intervalo de concentraciones ptimo o el
intervalo que presentara una relacin lineal entre absorbancia y
concentracin. En esta grfica, los cruces de la parte recta (la
intermedia), con la parte baja y con la parte alta, pueden servir para
determinar un valor para los lmites de deteccin mnimo y mximo,
respectivamente.

Parte Experimental
MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales:
- Matraz Aforado (100, 50, 25 y
10ml)
- Pipeta volumtrica (15,10,5,2,1)
- Matraz simple (250, 100ml)
- Tubos de ensayo
- Vaso precipitado (250, 100 ml)
Reactivos:
- Aseptil Rojo (Azosulfamida 5%)
- Agua destilada

Espectrofotometra: Absorbancia y %T
entre una sustancia una orgnica
Tomaremos a continuacin los datos ledos en el espectrofotmetro. Lo

que buscamos es determinar la longitud ptima analtica de la

azosulfamida
Las curvas espectrales -Absorbancia vs Longitud de onda
sern
graficadas al final del presente informe.

Procedimiento

Realizamos dos tipos de anlisis:

1 Determinacin de la longitud
ptima de onda para poder
graficar las curvas espectrales
Abostancia vs Log[C] de la
Azosulfamida
2 Determinacin
de
la
concentracin ptima de la
muestra (verificar del mismo
modo la zona de trabajo).
Permite graficar la curva de
Ringbown.

Lectura del espectrofotmetro: Longitud ptima de la

onda y % Transmitancia
Longitud ptima de
Azosulfamida:
530 nm

Lectura del espectrofotmetro: % Transmitancia

1Para poder determinar la curva de ringbown. El

procedimiento a seguir fue el desarrollado en la
primera prctica:
La sustancia es colocada, junto a un patrn Agua;
en el espectrofotmetro medimos la transmitancia
conforme aumentamos la longitud de onda. El punto
en el cual la transmitancia sea la ms baja posible
ser nuestra absorbancia ms alta, es decir: La
longitud ptima de la onda nos otorga la absorbancia
ms alta posible de la sustancia problema.
2 Si deseamos graficar la curva de Ringbown (la
que nos permite formar nuestra curva de
calibracin) primero debemos realizar las disolucin.
Prepararemos soluciones de una concentracin
(C) desde 0.1 ug/ml, 0.2 ug/ml, 0.3 ug/ml, 0.4 ug/ml,
0.6 ug/ml, 0.8 ug/ml, 1 ug/ml, 2 ug/ml, 4 ug/ml, 6
ug/ml, 8 ug/ml, 10 ug/ml, 20 ug/ml, 30 ug/ml , 40
ug/ml y 50 ug/ml a partir de la solucin estndar de
azosulfamida 500 ug/ml
Con las diluciones ya hechas, procedemos a realizar
las lecturas en el espectrofotmetro. Las lecturas
sern del % Transmitancia, nuestra labor consiste en
Absortancia=100%T.
determinar la absortancia:
Para luego graficar nuestra curva Absortancia
vs Log (C).
Preparamos cada concentracin a
partir de la muestra estndar de
aseptil rojo. La forma en cmo se
procedi con las diluciones est
explicada en el presente informe.

Una vez que ya tenemos nuestras diluciones preparadas, podemos comenzar con las
lecturas de la transmitancia. La longitud de onda a utilizar ser: La longitud ptima de la
azosulfamida es 530nm .Iremos aadiendo en las cubetas del espectrofotmetro cada
dilucin unitariamente. El anlisis de la transmitancia ser llevado a cabo en la longitud
ptima. Nuestros datos sern acoplados en las posteriores tablas.
A partir de la transmitancia leda estaremos en la facultad de poder graficar la Curva de
Ringbown (Absortancia vs Log [C]).

Curva de Ringbown: Absortancia vs

Concentracin ~ Azosulfamida
En esta parte desarrollaremos la curva de Ringbown, la cual nos
permite encontrar la zona de trabajo y lo ms importante: La
concentracin ptima de la muestra.

Azosulfamida: Sustancia estudiada

1 Tabla completa: Absortancia, Log C y % Transmitancia.

g/mL

mg/mL

%T

Absortancia

0.1

100

95.8

4.2

0.2

200

95.6

4.4

0.3

100

94.0

0.4

600

93.9

6.1

0.6

800

92.6

7.4

0.8

1000

91.7

8.3

1500

90.2

9.8

2000

81.9

19.1

2500

73.7

26.3

3500

65.1

34.9

4000

54.5

45.5

10

5000

48.7

51.3

20

6000

24.3

75.7

30

8000

12.3

87.7

40

10000

6.5

93.5

50

15000

3.2

96.8

DISCUSIN DE RESULTADOS
CURVA DE RINGBOWN: AZOSULFAMIDA
Para obtener el intervalo ptimo y adecuado de concentraciones con el
menor error por lectura primero se construye la curva de Ringbown que
consiste en construir una grfica de absortancia (100%-T) vs la
concentracin.
La zona lineal corresponde al intervalo de concentraciones de mnimo
error, C/C, por lectura y el punto de inflexin corresponde al valor de:
100%-%T= 51.3; T=48.7; que corresponde al valor de mnimo error.
Para la mayora de los sistemas la curva de Ringbown corresponde a
una curva en forma de S. La parte lineal de esta grfica permite obtener
el intervalo de concentraciones ptimo o el intervalo que presentara
una relacin lineal entre absorbancia y concentracin.
En esta grfica, los cruces de la parte recta (la intermedia), con la parte
baja y con la parte alta, pueden servir para determinar un valor para los
lmites de deteccin mnimo y mximo, respectivamente.

CONCLUSIONES
-

Se determina la concentracin optima que es muy importante

para realizar un arametro en el cual encontraremos la zona de
trabajo
Se concluyo con la identifiacionde la azosullfamida a su espectro
de absorcin
Se llego a determinar la concentracin optima de la muestra
(azosulfamida) a la curva de Ringbown

CUESTIONARIO
1. Explique cules son las desviaciones que puedan presentarse en
la aplicacin de la ley de Beer.
Algunas desviaciones que podmos encontrar son las sgtes :
a. Desviaciones reales.
La concentracin debe ser inferior a 0,01 M
La absorbancia debe darse en un rango de 0,15 -0,8
b. Desviaciones instrumentales.
Radiacin no monocromtica
Radiacin parsita
Errores de lectura
c. Desviaciones qumicas.
Influencia del equilibrio (dimerizacin, acido-base, complejos)
Influencia del disolvente
Influencia de la temperatura
Impurezas de los reactivos
Interaccin entre especies absorbentes

2. Deduccin de la ley de Lambert y Beer

La deduccin de la ley de Beer se hizo sobre la base de utilizar
radiacin monocromtica, lo cual nunca se cumple y la absorbancia
medida es la relativa al intervalo de .

3. Explique grficamente que diferencia encuentra en una curva de

%T Vs concentracin y una curva de absorbancia Vs
concentracin
Tramitancia vs concentracin: al correlacionar en escalas aritmticas
el % de tramitancia vs la concentracin, se obtiene una curva
exponencial de relacin inversa como la que se muestra. Se muestra
que la pendiente cambia con la concentracin, por lo tanto, esta no
es la mejor opcin para realizar la calibracin.
Absorbancia vs concentracin: al correlacionar en escalas
aritmticas absorbancia vs concentracin, se obtiene una grfica de
relacin directa lineal, con una sola pendiente. Este tipo de escala es
la ms apropiada para realizar la calibracin espectrofotomtrica.
Existen muchas razones por las que este tipo de graficas se tornan
curvas. Cuando la pendiente tiende hacia el eje de la ordenada, se
dice que la desviacin es positiva, y cuando la pendiente se
aproxima a la abscisa, la desviacin es negativa
4. qu diferencia existe entre la fuente de radiacin de los
espectrofotmetros de la regin ultravioleta y los de la regin
visible?
La regin UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a
400 nm. Es una regin de energa muy alta. Provoca dao al ojo
humano as como quemadura comn. Los compuestos con dobles
enlaces aislados, triples enlaces, enlaces peptdicos, sistemas
aromticos, grupos carbonilos y otros heterotomos tienen su mxima
absorbancia en la regin UV, por lo que sta es muy importante para la
determinacin cualitativa y cuantitativa de compuestos orgnicos.
Diversos factores -como pH, concentracin de sal y el disolvente- que
alteran la carga de las molculas, provocan desplazamientos de los
espectros UV. La fuente de radiacin ultravioleta es una lmpara de
deuterio.
En la regin visible apreciamos el color visible de una solucin y que
corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que
absorbe. El color que absorbe es el complementario del color que
transmite. Por tanto, para realizar mediciones de absorcin es necesario
utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la solucin coloreada.
La fuente de radiacin visible suele ser una lmpara de tungsteno y no
proporciona suficiente energa por debajo de 320 nm.

5. Qu rangos de longitud de onda abarca el UV-vis, y qu tipo de

transiciones ocurren cuando se trata de analito en forma atmica?

La absorcin de radiacin UV-vis por una especie atmica se puede

considerar como un proceso en dos etapas:
1) Excitacin electrnica como se muestra en la ecuacin
M + hv M*
El producto de la reaccin entre M y el fotn hv es una especie excitada
electrnicamente simbolizada por M*
El tiempo de vida de la especie excitada es breve (10-8 a 10-9 s), producindose distintos
proceso de relajacin.
2) Relajacin en especial la conversin de esa energa de excitacin en calor
M * M + calor
La relajacin puede producirse tambin por la descomposicion de M* para dar lugar a
nuevas especies; dicho proceso se denomina reaccin fotoqumica.

BIBLIOGRAFIA

Skoog Douglas, Principios de anlisis instrumental. 6ta edicin.

2007

Qumica
analtica
instrumental
I
Precisin
en
espectrofotometra.
2007.
URL:
http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/Documento_de_A
poyo:_Precision_en_espectrofotometria_2598.pdf

Universidad Nacional de Colombia. Establecimiento de un

mtodo
espectrofotomtrico.URL:http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/
ciencias/2001184/lecciones/Cap10/01_01_01.htm