Dedicatoria

A Dios, por haberme permitido

cumplir con mi sueo de ser
profesional y haberme dado salud
plena para lograr mis objetivos

A mi madre Francisca Mendoza

Challco y A mi padre Julin Suni
Pacsi por darme el tesoro ms
valioso que puede drsele a un
hijo: la vida, por haberme
brindado
su apoyo moral
y
espiritual, por sus concejos, sus
valores,
por
la
motivacin
constante y todo su amor,
hicieron
posible mi formacin
profesional.

A mis hermanos Mara Isabel y

Romn a quienes le debo mucho,
y les doy las gracias infinitas
brindndome su apoyo moral, y
comprensin, sin pedir nada a
cambio por todo ello y ms
gracias y que siempre estarn en
mi corazn.

A mis queridas hijas Heidy y

Paola quienes son la razn y
fuerza de mi vida para seguir
superndome cada da ms, para
alcanzar mis ms preciados
ideales de superacin
y que
siempre estarn en lo ms
profundo de mi corazn.

Luis Alberto Suni

Mendoza

Agradecimiento
Primeramente doy gracias infinitas a Dios por haberme dado fuerza y
valor para terminar mis estudios de pre grado.
Es importante llegar al final he recorrido un largo camino, y para lo
cual he contado con el apoyo de muchas personas que me han
enseado tantas cosas a nivel profesional pero sobre todo
personal, por lo que quisiera

a nivel

agradecerles profundamente a todas

aquellas personas y amigos por compartir parte de sus experiencias.

Agradezco a mi alma mater, la UNIVERSIDAD NACIONAL DEL
ALTIPLANO-PUNO y a la gloriosa facultad de MEDICINA VETERINARIA Y
ZOOTECNIA, por haberme formado profesionalmente para as poder
colaborar con mi pas el Per.
A mi director de tesis Dr. Alberto Ccama Sullca por guiarme en el
desarrollo y la conclusin de mi tesis.
A mi asesor

Mg. Sc. Julio Mlaga Apaza por haber estado siempre

dispuesto a guiarme, ayudarme y por darme su tiempo para la

elaboracin de esta tesis.
Al Servicio Nacional de Sanidad Agraria de Moquegua por brindarme
todas las facilidades durante mi permanencia en Moquegua.
Al Tec. Agrop. Luis Pacsi

por su apoyo y colaboracin

en la

recoleccin de las muestras en el distrito de Moquegua.

A los productores de la cuenca lechera del distrito de Moquegua por
su apoyo incondicional a la realizacin de esta tesis.
Al personal de la biblioteca Sr Samuelito por su colaboracin con la
bibliografa

que necesit en esta labor y por el constante apoyo

incondicional y aliento durante esta jornada.

A todos y cada uno de vosotros muchas gracias.
Luis

Alberto

Suni

Mendoza
CONTENIDO
Pg
LISTA DE CUADROS.......
ABREVIATURAS UTILIZADAS .....
RESUMEN ..............
I. INTRODUCCIN ....
II. REVISIN BIBLIOGRFICA
2.1. RESEA HISTRICA ........
2.2. AGENTE ETIOLGICO .
2.2.1. Taxonoma ..........
2.2.1.1. Caractersticas generales de la familia flaviviridae
2.2.1.2. Caractersticas generales del gnero Pestivirus ...
2.2.2. Estructura del virus de la Diarrea Viral Bovina ............
2.2.2.1. Genoma. .
2.2.2.2. Protenas virales .........
2.2.3. Clasificacin
2.2.3.1. Genotipo
2.2.3.2. Biotipos .
2.3. EPIDEMIOLOGA ...
2.3.1. Prevalencia ..
2.3.2. Prevalencia de la DVB en Alpacas y Otras Especies ..
2.3.3. Fuentes de infeccin
2.3.4. Formas de transmisin.........
2.3.4.1. Transmisin horizontal
2.3.4.2. Transmisin vertical
2.4. PATOGENIA
2.4.1. Ingreso del virus a la clula
2.4.2. Replicacin viral .
2.5. CUADROS CLNICOS PRODUCIDOS POR EL VDVB
2.5.1. Inmunodepresin
2.5.2. Complejo respiratorio .......

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2.5.3. Complejo diarrea neonatal bovina

2.5.4. Infeccin subclnica ......
2.5.5. Infeccin aguda o Diarrea Viral Bovina ..
2.5.6. Infeccin aguda severa. ........
2.5.7. Sndrome hemorrgico ..
2.5.8. Trastornos reproductivos ..
2.5.9. Infeccin en hembras gestantes. ...........
2.5.10. Infecciones persistentes. .........
2.5.11. Enfermedad de las mucosas (EM). .
2.6. LESIONES PRODUCIDAS POR LA INFECCIN CON EL VDVB. ..
2.6.1. Lesiones Macroscpicas. ..
2.6.1. Lesiones Microscpicas ........
2.6.3. Lesiones macro y microscpicas en fetos. ...........
2.7. RESPUESTA INMUNE ...
2.8. DIAGNSTICO. ..
2.8.1. Aislamiento viral en cultivo celular. .

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34

2.8.2. Deteccin de antgenos virales.

2.8.2.1. Inmunofluorescencia. .......
2.8.2.2. Inmunoperoxidasa.
2.8.2.3. ELISA de captura de antgenos.
2.8.3. Deteccin de anticuerpos. ........
2.8.3.1. Neutralizacin viral (VN).
2.8.3.2. Inmunoabsorvancia Ligada a Enzimas (ELISA). .
2.8.4. Deteccin del cido nucleico viral. ...
2.9. PREVENCIN Y CONTROL. .
2.9.1. Vacunas Inactivadas. .
2.9.2. Vacunas Virus vivo modificadas (VLM). .
2.9.3. Vacunas Recombinantes. ..
III. MATERIALES Y MTODOS. .
3.1. LUGAR DE ESTUDIO.

3.2. MATERIALES. ....

3.2.1. Animales
3.2.2. Equipos y materiales.
3.3. MTODOS. ..
3.3.1. Tamao Muestral. .....
3.3.2. Obtencin de las muestras.
3.3.3. Deteccin de Anticuerpos contra VDVB. .
3.3.3.1. Descripcin y principios de la Tcnica- SVANOVIR
BVDV-Ab ELISA................................................................
3.3.3.2. Protocolo del ensayo.
3.3.3.3. Criterio de validacin. .......
3.3.3.4. Clculos.
3.3.3.5. Interpretacin de los resultados. .
3.4. ANLISIS DE DATOS. ...
3.4.2. Anlisis estadstico. ...
IV. RESULTADOS Y DISCUSIN. ....
5.1 prevalencia. ..............

35
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51

5.2 prevalencia segn edad.

........
5.3 prevalencia segn sexo. ........
5.4 prevalencia segn estado reproductivo. ...........
5.4 prevalencia segn antecedente de aborto.
V. CONCLUSIONES. ....
VI. RECOMENDACIONES. ..
VII. BIBLIOGRAFA CITADA.
VIII. ANEXOS. ...

LISTA DE CUADROS

Cuadro 1: vDVB, biotipos y enfermedad. Modificado de Deregt y Loewen.

1
2

Cuadro 2. Prevalencia de la DVB por la prueba de ELISA en bovinos a nivel

nacional
1
....
5
Cuadro 3. Contenido del kit ELISA-SVANOVA (manual de kits ELISA
SVANOVIR
para
DVB)... 4

4
Cuadro 4. Prevalencia general de la diarrea viral bovina en la cuenca lechera del
distrito de Moquegua-2014.

5
1

Cuadro 5. Animales con anticuerpos contra el virus de la diarrea viral segn edad
5
en la cuenca lechera del distrito de Moquegua-2014 .........
4
Cuadro 6. Seroprevalencia del virus de la diarrea viral bovina segn sexo en la
cuenca lechera del distrito de Moquegua-2014.......
5
5

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61
75

Cuadro 7. Seroprevalencia del virus de la diarrea viral bovina segn Estado

reproductivo (preadas y no preadas) en la cuenca lechera del distrito de
Moquegua5
2014.
6
Cuadro 8.Seroprevalencia del virus de la diarrea viral bovina segn los
antecedentes de abortos en la cuenca lechera del distrito de Moquegua2014............. 5
....
7

Acs
asp
ARN
BRSV
BDv
BEI
Cys
CP
CSFv
DVB
DO
DOcorr
ELISA
EM
GAGs
gp
H2O2
ICTV
IBR
IF
IHQ
kDa
lys

ABREVIATURAS UTILIZADAS
Anticuerpos
Asparragina
cido Ribonucleico
Virus Sincitial Respiratorio Bovino
Virus de la Enfermedad de la frontera
Etilamina Binaria
Cistena
Citopatognico
Virus de la Peste porcina Clsica
Diarrea Viral Bovina
Densidad Optica
Densidad ptica corregida
Enzyme Linked Immunosorbent Assay (Ensayo Inmuno absorvente Ligado
a Enzimas)
Enfermedad de las Mucosas
Glicosaminoglicanos
Glicoprotena
Agua oxigenada
Comit Internacional en Taxonoma de virus
Rinotraquetis Infecciosa Bovina
Inmunofluorescencia
Inmunohistoqumica
Kilodalton
Lisina

NCP
nm
ORF
HRP
PBS
PCR
PI
P I3
PP
RT-PCR
ser
SFB
UTR
vDVB
vDVB1
vDVB2
vDVB3
VN
VLM
l

No citopatognico
Nanmetros
Marco de apertura de lectura (open reading frame)
Peroxidasa de Rbano Picante
Buffer fosfato salino
Reaccin en cadena de la polimerasa
Persistentemente infectados
Parainfluenza 3
Valores Porcentuales Positivos
Retrotranscripcin y reaccin en cadena de la polimerasa
Serina
Suero Fetal Bovino
Regin no codificante (untranslated region)
Virus de la Diarrea Viral Bovina
Virus de la Diarrea Viral Bovina Genotipo I
Virus de la Diarrea Viral Bovina Genotipo II
Virus de la Diarrea Viral Bovina Genotipo III
Neutralizacin de Virus
Virus Vivo Modificado
Microlitro

RESUMEN
El presente trabajo de investigacin se realiz en la cuenca lechera del distrito de
Moquegua que est situado en el sur del Per, sus coordenadas geogrficas se sitan
entre 17 11 27" Latitud sur y 70 55 54" Longitud oeste, realizado durante el mes de
Julio del 2014

con el objetivo de evaluar la prevalencia de diarrea viral bovina,

considerando los siguientes factores: edad (menores de 2 aos y Mayores de 2 aos),

sexo (machos y hembras), estado reproductivo (gestantes, vacas) y vacas con
antecedentes de aborto. Los datos fueron procesados mediante la prueba estadstica de
Chi-cuadrado. La seroprevalencia del virus de la diarrea viral bovina en la cuenca
lechera del distrito de Moquegua evaluadas mediante la prueba de ELISA indirecta fue
de 29.63% (24/81). El factor edad de los bovinos menores de 2 aos y mayores a 2 aos
9.68% (3/31) y 42% (21/50) respectivamente
(P0.01). El factor sexo fue de

mostrando diferencia estadstica

25% (1/4) y 29.87% (23/77) no existe diferencia

estadstica (P0.05). El factor estado reproductivo en gestantes fue de 33.33% (11/33),

y en vacas vacas 45.45% (10/22) tambin no existe diferencia estadstica significativa
(P0.05),

con respecto a las vacas con antecedentes de aborto las que abortaron

tuvieron una seroprevalencia de 66.67% (4/6) y las que no abortaron de 39.53%(17/43)

tampoco existe diferencia significativa (P0.05). Concluyendo que en el distrito de

Moquegua existe la presencia de actividad viral.

Palabras clave: Diarrea viral bovina (DVB), seroprevalencia, Prueba de ELISA.

I. INTRODUCCIN
El desarrollo de la ganadera lechera muestra un gran potencial de desarrollo en la
costa debido a la disponibilidad de subproductos agrcolas y agroindustriales, como es
el caso del distrito de Moquegua, adems del creciente inters en el desarrollo de la
ganadera lechera de la sierra con recursos forrajeros como en muchos valles
interandinos

y mesetas que cuentan con una gran extensin de pastos naturales y

cultivados (Portal Agrario, MINAG. 2008).

El impacto econmico de la enfermedad se compone de prdidas productivas y gastos
provenientes del tratamiento y prevencin. Las prdidas productivas dependen del
tamao de la poblacin, la magnitud de la infeccin y el curso de las diferentes
manifestaciones de la enfermedad, e incluyen disminucin en la produccin lctea,
reduccin en la tasa de concepcin, trastornos reproductivos, Infecciones fetales
causales de abortos, defectos congnitos, retardo en el crecimiento, otras enfermedades
y muerte entre los animales al adquirir la infeccin aguda. Sumado a esto, la infeccin
fetal produciendo terneros persistentemente infectados (PI), los que son ms pequeos,
dbiles y tienen una mayor susceptibilidad a otras enfermedades y eventualmente
pueden morir por la enfermedad de las mucosas (Houe, 2003).
El Servicio Nacional de Sanidad Agraria (SENASA) en el informe final del trabajo
Caracterizacin de la diarrea Viral Bovina, Neosporosis y Rinotraqueitis Infecciosa
Bovina en el Per 2011, en un trabajo realizado a nivel nacional y en todos los
departamentos, para Moquegua dieron resultados negativos para la diarrea viral bovina
mediante la prueba de ELISA (SENASA, 2011).
En este contexto fue necesario realizar el presente estudio con una muestra
representativa segn las recomendaciones estadsticas para que tenga un valor
cientfico, debido

a que no existe informacin sobre la situacin actual de esta

enfermedad en el distrito de Moquegua, teniendo como objetivos Determinar la

seroprevalencia del vDVB en bovinos en el distrito de Moquegua y la deteccin de
anticuerpos y/o seroprevalencia segn edad (Menores de dos aos y mayores a dos
aos), sexo (machos y hembras), estado reproductivo (hembras preadas y no preadas)
y vacas con antecedentes de aborto (vacas que abortaron y vacas que no abortaron).

II. REVISIN BIBLIOGRAFICA

2.1. RESEA HISTORICA
En 1946, Olafson et al. en Estados Unidos describen un brote de una enfermedad
transmisible, caracterizada por diarrea severa, depresin, anorexia y ulceracin de la
mucosa oral. Esta nueva afeccin estaba asociada con signos respiratorios, leucopenia,
disminucin en la produccin lctea,

incremento en la tasa de abortos, y era

reproducible por inoculacin de sangre y extractos de bazo de animales enfermos.

Como no fueron halladas bacterias en el inculo, se asumi que el agente infeccioso
era viral. Esta enfermedad reproducible, con signos y lesiones variables en cuanto a
severidad, comenz a llamarse Diarrea viral de los bovinos (Olafson et al., 1946).
En 1953, Ramsey y Chivers describieron una enfermedad que creyeron diferente a la
Diarrea Viral, porque era ms espordica y ms difcil de reproducir, ya que los
animales inoculados con sangre o extractos de rganos de animales enfermos slo
desarrollaban una pirexia transitoria. La enfermedad recibi el nombre de Enfermedad
de las Mucosas, a raz de las erosiones y lceras observadas en el tracto digestivo
(Ramsey y Chivers, 1953).
Si bien las lesiones macroscpicas de la Diarrea Viral y la Enfermedad de las Mucosas
se consideraban indistinguibles, haba aparentemente sustanciales diferencias en la
enfermedad clnica. La Diarrea Viral Bovina era considerada enzotica con brotes
espordicos de alta morbilidad pero baja mortalidad. Por el contrario, la Enfermedad de
las Mucosas afectaba animales jvenes con baja morbilidad pero mortalidad cercana al
100%. Haba muy poca evidencia que la enfermedad de las mucosas era contagiosa y
los intentos de transmitir la enfermedad experimentalmente haban fallado. Cuando los
investigadores trataron de reproducir la enfermedad de las mucosas con virus
3

citopticos aislados, la enfermedad resultante recordaba una diarrea viral bovina leve.
Esta observacin, tanto como la similitud en la distribucin y la apariencia
microscpica de las lesiones, contribuyeron a especular, sin conviccin cientfica, que
la diarrea viral y la enfermedad mucosa eran la misma enfermedad con algunas
variaciones (Jubb y Kennedy, 1963).
Se descubri que muchos terneros nacidos de madres infectadas durante la preez
temprana, antes del desarrollo del sistema inmunolgico fetal, eran persistentemente
infectados (PI) y no desarrollaban anticuerpos contra el vDVB (Braun et al., 1973).
Mc Clurkin et al. (1984). informaron que estos terneros PI eran inmunocompetentes,
capaces de desarrollar

anticuerpos neutralizantes contra otros agentes infecciosos,

como IBR ( virus de la Rinotraquetis infecciosa bovina) y PI3 (Parainfluenza-3),

y anticuerpos aglutinantes contra Pasteurella hemoltica (Mc Clurkin et al. 1984).
Brownlie et al. (1987) pudieron discernir la patogenia de la enfermedad de las mucosas
cuando reprodujeron experimentalmente esta enfermedad en un animal PI, inoculado
con una cepa citoptica del vDVB; se estableci entonces que la enfermedad de las
mucosas slo ocurra en animales PI superinfectados con una cepa citoptica
antignicamente similar a la cepa no citoptica que causaba la infeccin persistente.
2.2. AGENTE ETIOLOGICO
2.2.1 Taxonoma
El virus de la diarrea viral bovina (vDVB), es un miembro del gnero pestivirus de la
familia, Flaviviridae agente causal de la enfermedad de la diarrea viral bovina (Houe,
2003).
2.2.1.1 Caractersticas generales de la familia flaviviridae
La familia comprende tres gneros, cuyos miembros tienen genomas y propiedades
4

fsico-qumicas similares, pero son biolgicamente muy diferentes. El gnero Flavivirus

contiene ms de 70 virus, 10 de los cuales son de importancia veterinaria, incluyendo
los virus de Louping ll (Encefalomielitis ovina), Encefalitis Japonesa, Wesselsbron y
del Oeste del Nilo. Cerca de 30 miembros de ste gnero tienen potencial zoontico
y pueden ser patgenos para el hombre, transmitidos por artrpodos.

Estas

enfermedades varan en su signologa, desde fiebre y erupciones cutneas, hasta

fiebres hemorrgicas, encefalitis y hepatitis que comprometen la vida. El gnero
Pestivirus contiene tres virus, que son de importancia veterinaria: el virus de la diarrea
viral bovina, el virus de la Enfermedad de la Frontera de las ovejas (BDv) y el virus de
la Peste Porcina clsica (CSFv). El gnero Hepacivirus contiene solamente
patgenos humanos, los virus de la hepatitis C y G (Murphy et al., 1999).
2.2.1.2 Caractersticas generales del gnero Pestivirus
Los pestivirus infectan naturalmente slo a los ungulados del Orden Artiodctila.
Los anlisis de secuenciacin genmica muestran que los tres virus que se encuentran
en el gnero Pestivirus se relacionan estrechamente. Experimentalmente, comparten el
espectro de hospedadores: el virus de la DVB puede infectar cerdos, ovejas y cabras, as
como otros ungulados, y stos animales pueden servir como reservorios; y el virus de la
Peste porcina puede ser transmitida por bovinos (Murphy et al., 1999). El virus de la
Enfermedad de la Frontera y el vDVB han
cruzada entre

mostrado experimentalmente infeccin

terneros y ovejas y sta transmisin probablemente ocurre en

condiciones naturales (Baker, 1987). Este cruce de especies tambin permite la

diversificacin caracterstica del virus, ya sea por adaptacin al nuevo hospedador o
por evolucin divergente. Sin embargo, el virus DVB aislado de cerdos y ovejas tiene
caractersticas biolgicas y antignicas similares a los aislados de bovino (Paton, 1995).
Si bien son posibles todos estos cruces de especies, en la naturaleza los virus son
5

bastante especficos (Murphy et al., 1999).

Los pestivirus no dependen de vectores artrpodos para su transmisin. Los virus de
la Enfermedad de la Frontera de los ovinos y de la Diarrea Viral Bovina tienen una
gran variacin antignica, a diferencia del virus de la Peste Porcina (Baker, 1987).
Los pestivirus son poco estables en el medio ambiente, por lo que es improbable que
persista en la atmsfera ms all de 14 das, teniendo en cuenta los estudios hechos con
el virus de la

peste porcina. Son susceptibles a la accin del calor, detergentes y

desinfectantes como clorhexidina,

iodforos,

fenlicos,

aldehdos e hipoclorito

(Rumenapf et al.; 1991). En cambio, y a diferencia de los flavivirus que son

rpidamente inactivados a pH cido, los pestivirus pueden sobrevivir a rangos
relativamente amplios de pH (Krey et al., 2005; Lindenbach et al., 2007).
2.2.2. Estructura del virus de la Diarrea Viral Bovina
Son virus envueltos, esfricos y miden de 40 a 60 nm de dimetro. Se componen de una
cadena simple de ARN compactado por una cpside proteica, rodeada por una
membrana fosfolipdica con tres glicoprotenas de origen viral ancladas a ella
(Nettlenton y Entrican, 1995).
2.2.2.1 Genoma
La informacin gentica del virus de DVB est codificada en una cadena simple de
ARN de polaridad positiva, no segmentado, de aproximadamente 12,5 kilobases de
longitud. Ha sido determinada la secuencia completa del virus, en el extremo 5 est
ausente el capuchn o cap y el extremo 3 no est poliadenilado (Brock et al., 1992).
Las protenas no estructurales son siete u ocho y se codifican por las zonas del ARN
ms prximas al extremo 3` (Murphy et al., 1999; Vadillo et al., 2002). El orden de las
protenas maduras en la poliprotena de vDVB es: NH2-N

pro

rns
-C-E -E1-E2-p7-NS2-3

(NS2-NS3)-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-COOH (Lackner et al., 2004).

6

2.2.2.2. Protenas virales

El primer evento de la biosntesis del virus es la traduccin del cdigo gentico en una
poliprotena que es cortada durante y luego de la traduccin de la misma para dar lugar
a las diferentes protenas estructurales y no estructurales del virus (Purchio et al.,1984).
Protenas Estructurales
-Protena C. Es una pequea protena de 14 kDa, muy conservada entre los miembros
de la familia Flaviviridae, rica en aminocidos bsicos, con un 21% de lys. Es la
protena ms abundante, altamente inmunognica e induce la produccin de anticuerpos
neutralizantes (Donis et al., 1988).
- Protena E
kDa. Es

rns
. Antiguamente conocida como E0 gp 44/48, por su peso de 44 a 48

secretada

por

las

clulas

infectadas

por

exocitosis, cumpliendo

funciones de ribonucleasa en el espacio extracelular, pero la mayor parte de la protena

sintetizada es retenida dentro de la clula y unida a la envoltura viral, ya que se asocia a
la membrana celular a travs de su extremo carboxilo, quedando como protena unida a
la membrana (Fetzer et al., 2005). Es responsable en parte de la induccin de los
anticuerpos neutralizantes (Paton, 1995; Vadillo,et al., 2002).
-Protena E1. Es una glicoprotena integral de la membrana que contiene 2 a 3
lugares de glicosilacin N-ligados, y forma un heterodmero unido por puentes disulfuro
(Weiland et al., 1990).
-Protena E2. (gp 53), es una glicoprotena integral de la membrana de la envoltura es
una regin hipervariable y altamente mutable. Es el sitio donde ocurren las mutaciones
y cambios antignicos que dan lugar a la aparicin de cepas variantes del vDVB
(Xue et

al., 1990). Es esencial para la infectividad del virus, al igual que para

determinar el tropismo del virus en cultivos celulares (Liang et al., 2003). Esta
glicoprotena contiene los epitopes que inducen la produccin de anticuerpos
7

neutralizantes luego de una infeccin o vacunacin (Donis et al., 1988).

Protenas No Estructurales
Las protenas no estructurales son consideradas componentes de la membrana
asociadas al complejo de replicacin viral.
-Protena p7. Es un pequeo polipptido hidrofbico, de 6 a 7 kDa, que est codificada
por una secuencia del genoma ubicada entre las secuencias de E2 y NS2-3. El clivaje
entre E2 y p7 es realizada por una peptidasa seal de la clula hospedadora. Este
clivaje a veces se produce en forma incompleta, resultando en protenas E2-p7, E2 y
p7. La protena p7 es requerida para la produccin de virus infecciosos, ya que se
realizaron estudios experimentales y cuando no se produce el clivaje entre E2 y p7 no
se obtienen partculas virales infectantes, sin embargo se produce la replicacin del
ARN viral (Harada et al., 2000).
-Protena NS2-3. (p 125), es la protena constituda por NS2 y NS3 unidas, y cuyo
clivaje determina la citopatogenicidad del vDVB. Es esencial para la replicacin del
genoma viral, participa en el ensamblaje de las partculas virales y es requerida para la
produccin de partculas virales infecciosas (Agapov et al., 2004). Es la ms
conservada en todos los pestivirus. Los animales infectados o vacunados con virus
modificado desarrollan una fuerte respuesta humoral contra esta protena responsable de
las reacciones cruzadas con los virus de la Peste porcina y el virus de la Enfermedad de
la frontera de las ovejas (Potgieter, 1995).
-Protena NS2. Es una cistena proteasa, muy conservada, que es responsable, en
determinados casos, del procesamiento de NS2-3. La incorporacin de un nico
aminocido dentro de NS2 de vDVB identificada como CP7, es determinante para
inducir el procesamiento eficiente de la NS2-3, y la expresin continuada de NS3,
que se asocia con la cepa citoptica del virus; por lo tanto esta protena es un factor

clave en el control de la patogenicidad del vDVB (Meyers et al., 2002).

-Protena NS3 (p80). Que surge a partir de NS2-3, es expresado en niveles altos en
todas las cepas citopticas de vDVB. Es esencial para la viabilidad del virus, ya que
interviene en su replicacin (Grassmann et al., 1999). Esta ltima protena es la
responsable de los cortes que se realizan desde ella hacia adelante en la poliprotena,
incluido su propio carboxilo terminal, entre NS3 y NS4A, NS4A y B, NS4B y
NS5A, y NS5A y B, pero no del corte en NS2-3 (Xu et al., 1997), -Protena NS4A. Es
similar en tamao y composicin a NS4B (Xu et al., 1997).
-Protena NS5B, Investigaciones recientes demuestran que esta protena tambin es
necesaria para el ensamblaje y la liberacin de las partculas virales de la clula
hospedadora (Ansari et al., 2004).
- Protena p20/ Npro. Que a diferencia de las otras protenas no estructurales, es la
nica protena codificada en la primera porcin del marco de lectura, en el extremo 5
(Potgieter, 1995).
2.2.2.3. Variabilidad
A travs de los aos diferentes autores han investigado la diversidad gentica,
antignica y patolgica del vDVB (Kreutz et al., 2000). Esta variabilidad, que afecta la
virulencia, puede ser producida por mutaciones, que pueden ser puntuales (cambio o
delecin de un solo nucletido), o delecin de una seccin del genoma,
recombinaciones y duplicaciones (Goens, 2002).
Las mutaciones de punto son muy comunes en los virus ARN, debido a que las
polimerasas virales carecen de actividad exonucleasa que pueda corregir las bases mal
incorporadas. El virus DVB sobrevive de sta manera, originando cepas mutantes que
escapan a la respuesta inmunolgica del hospedador. Se han observado deleciones de
3102 nucletidos en un par de vDVB aislados de un animal con enfermedad de las
9

mucosas (Donis, 1995).

Nagai et al. (2003) encontraron recombinaciones en otras regiones del genoma
viral,

que codifican las protenas estructurales, especficamente entre N

pro

y la

protena C. La inoculacin experimental de un infectado persistente con una cepa

citoptica heterloga a la cepa no citoptica persistente, desencaden la produccin de
un virus quimrico, originado por recombinacin, insercin de genes celulares y
pro
duplicacin del RNA viral (codificante de N
y C). Este virus origin la enfermedad
de las mucosas en el animal persistentemente infectado, porque por recombinacin se
origin la cepa citoptica homloga a la cepa no citoptica que posea el infectado
persistente (Nagai et al., 2003)
2.2.3. Clasificacin
Teniendo en cuenta la variabilidad gentica y antignica, y su estrecha relacin con
otros miembros del gnero pestivirus, la clasificacin del vDVB ha sido difcil y ha ido
cambiando a medida que las nuevas investigaciones aportaban nuevos conocimientos
sobre el virus y sus variantes. El anlisis molecular de ciertas regiones del genoma y la
utilizacin de anticuerpos monoclonales permiti dividir a los vDVB en genotipos. Por
el efecto que produce el virus en cultivos celulares se los subdividi en dos biotipos,
citoptico y no citoptico (Ridpath et al, 2000).
2.2.3.1. Genotipo
Por estudios de secuenciacin, el vDVB ha sido dividido en dos genotipos: el 1 y el 2,
caracterizados por secuencias diferentes en el cido nucleco principalmente en la
regin 5 UTR y en las secuencias codificantes para Npro y E2 (Vilcek et al., 2005).
Los genotipos presentan una homologa aproximadamente de 60%, las diferencias se
encuentran restringidas a tres zonas hipervariables, dos de las cuales estn en la regin

10

gp53/E2 y la otra en la regin 5 sin traducir UTR (Ridpath et al., 2000

Los dos biotipos se encuentran presentes en los dos genotipos (Bolin y Grooms, 2004).
El vDVB1 causa fiebre, diarrea, neumona, lesiones en mucosas y leucopenia. El
vDVB2 se ha asociado con el sndrome hemorrgico caracterizado por la presentacin
de fiebre alta, leucopenia, trombocitopenia, diarrea y muerte en terneros

adultos

(Kelling, 2004).
Estudios de RT- PCR, amplificando las diferentes regiones del vDVB han permitido
identificar tambin algunos subgenotipos. Estos, presentan una homologa entre el 80 al
85%. En la actualidad se han determinado 11 subgenotipos de vDVB1 (a-j) y 2
subgenotipos del vDVB2 (a y b), aunque estos no han sido reconocidos por el
Comit Internacional en Taxonoma de virus ICTV. La reaccin cruzada entre uno y
otro genotipo es muy baja lo que dificulta las metodologas diagnsticas y la generacin
de vacunas, a diferencia de los subgenotipos del mismo genotipo que presentan mayor
reactividad (Ridpath, 2005).
Recientemente,

algunos

aislamientos

partir

de

suero

fetal

bovino SFB

contaminado y de un bfalo PI en Brasil y de jirafas en Kenia ha llevado sugerir

la presencia de un tercer genotipo vDVB3 (Ridpath, 2009). Estos nuevos aislamientos
son muy similares a los genotipo 1 y 2 del vDVB de acuerdo a su homologa con las
regiones del genoma: 5UTR, Npro y E2 (Liu, et al, 2009).
2.2.3.2. Biotipos
El vDVB presenta dos biotipos diferenciados por sus efectos en cultivo celular:
biotipo citopatognico (CP) y biotipo no citopatognico (NCP) (Brownlie, 1990). El
biotipo o cepa citoptica provoca importantes lesiones en clulas de cultivos celulares,
desde vacuolizacin hasta muerte celular. El biotipo o cepa no citoptica no causa
cambios microscpicos visibles en el cultivo celular y la clula infectada parece normal.

11

Existe amplia evidencia de que el biotipo NCP puede ser patognico en vivo, es el
que predomina en la naturaleza, es aislado de la mayora de las formas clnicas y es el
nico capaz de originar inmunotolerancia e infeccin persistente en animales
clnicamente normales (Paton, 1995). A pesar de que el biotipo CP del virus es
capaz de atravesar la placenta e infectar al feto, no establece infeccin persistente,
y por eso, no tiene la habilidad de perpetuarse en un hato (Brownlie et al., 1989).
CUADRO 1: vDVB, biotipos y enfermedad. Modificado de Deregt y Loewen, 1995.
Biotipos no citopticos y citopticos de vDVB en la enfermedad leve, severa y en la
a
NCP
+

Enfermedad
DVB leve

Infeccin persistente
Enfermedad mucosa
f
Trombocitopenia
f
DVB severa

infeccin persistente
b
Signos observados
CP
+
Fiebre, diarrea, recuperacin

Enfermedad mucosa, familias de PI

Enfermedad fatal, aguda o crnica

Hemorragias, muerte o recuperacin

Sndrome similar a enf. Mucosa, muerte o

recuperacin.

a
b

: NCP: no citoptico
: CP: citoptico

: Tanto el biotipo citoptico como el no citoptico pueden causar enfermedad leve

d
: PI: persistentemente infectado, debido a una infeccin congnita
e
: Ambos biotipos estn asociados con esta enfermedad. Solo los PI son susceptibles
f
: Biotipos no citopticos virulentos de vDVB son responsables de esta enfermedad.

Los dos biotipos del vDVB no son distinguibles serolgicamente (Radostits y

Littlejohns, 1988). Sin embargo, a nivel molecular, se ha descubierto que en clulas
infectadas, el biotipo CP produce una protena adicional no expresada en clulas
infectadas con el biotipo NCP (Deregt et al., 1990). Esta protena es la llamada NS3 o
p80, aunque no se haya probado, est relacionada con la citopatogenicidad del biotipo
CP en cultivos celulares (Deregt y Loewen, 1995). Tanto la p125 (NS2-3) como la
p80 (NS3) son

proteasas virales. Una posible explicacin del dao celular

que

produce este biotipo en cultivos celulares, es que la p80 rompe y destruye protenas

12

celulares importantes, mientras que la p125 no lo hace (Collett et al., 1991).

2.3. EPIDEMIOLOGA
2.3.1. Prevalencia
En Europa las investigaciones realizadas han demostrado el impacto econmico que
causa el vDVB lo cual, a llevado a numerosos pases europeos a iniciar programas, de
erradicacin, la isla de Shetland fue la primera regin libre del vDVB (Wilke et al.,
2003), ante a esta problemtica se realizaron estudios en Suecia en donde se evaluaron
un total de 711 vaquillonas seleccionadas para inseminacin artifiacial (IA), lo que
mostro

1.7 % de animales virmicos; 1.3% de animales PI y 41 % de animales

seropositivos (Houe, 1995), en contraste con Suiza, que al estudiar 2892 bovinos, se
obtuvo un 83.7 % de prevalencia (Braun et al., 1999). As mismo los suecos iniciaron
su plan de erradicacin en el ao 1993 y demostraron que esta es posible an sin
vacunacin. Aunque la participacin en el programa es voluntaria y los productores
pagan los costos del muestreo y las pruebas, el 100% de los productores lecheros
(11735 hatos), y ms del 99% de los productores de carne (13834 hatos) se encontraban
afiliados en el ao 2001. Ese ao se declararon libres de vDVB el 92.5% de los hatos
lecheros y el 88% de los hatos de carne en tanto que nmero de hatos positivos
continua en disminucin (Wilke et al., 2003).
Estudios realizados en Inglaterra y Gales se evaluaron 1593 bovinos de un total de 133
hatos

en donde se mostr

que el 62.5% de animales presentaron

anticuerpos

neutralizantes contra el vDVB, la prevalencia entre regiones vara entre 43% 79%.
Otros estudios

en ese pas mostraron 1.8% de animales virmicos de entre 3151

animales y a la prevalencia de un total de 18759 muestras fue 64.9% (Houe, 1995).

En los Estados Unidos de Amrica se evaluaron 3157 animales de 66 hatos as,

13

aproximadamente el 50% de los hatos tenan historia de infeccin por vDVB mostraron
1.7% de animales PI, un 89% de animales seropositivos (Houe, 1995).
En argentina los datos de seroprevalencia son variables, en 1997 confirmaron que la
situacin es similar al resto del mundo, con 70 % de seroprevalencia y una prevalencia
de bovinos PI del 1%.(Muoz et al., 1996).
En chile estudios serolgicos denotan una amplia difusin del virus con prevalencia de
69.2% en las regiones IX y X del pas (Reinhardt et al., 1990).
En el Per estudios realizados ponen en manifiesto la alta prevalencia del vDVB
distribuido en bovinos y otras especies, causando manifestaciones clnicas asociadas a
trastornos

respiratorios

principalmente

reproductivos.

Estudios

serolgicos

realizados en la cuenca lechera de Arequipa, indican que el vDVB tiene una

prevalencia de entre 50 a 80% en bovinos (Rivera, 2001), en Majes (Arequipa) un
47.2% de bovinos positivos a anticuerpos contra el VDVB de 286 muestras de suero
sanguneo (Juan et al., 2007). En tanto que en el valle de Lima se encontr una
prevalencia del 56% en bovinos de crianza intensiva (Aguilar et al., 2006). En el
Valle del Mantaro se determin una prevalencia de ms del 70% de infeccin del vDVB
(Contreras et al., 2000), mientras que en Ayacucho se determin una prevalencia de
85% (Rivera, 2001), y en Puno una prevalencia de 47% encontrndose 176 positivos de
377 muestras de una poblacin total de 91 710 bovinos (Quispe, 2008), as mismo en la
microcuenca de Ccaipa, provincia de Espinar, Cusco se encontr una prevalencia de
56.2% encontrndose 228 bovinos positivos a la prueba de neutralizacin viral de 406
muestras de una poblacin de 1805 bovinos de tres comunidades (Crdenas, 2009).
En el Per se realiz un estudio en todo el territorio en el ao 2011 a cargo de la
Subdireccin de Anlisis de Riesgo y Vigilancia Epidemiolgica (SARVE) de la
Direccin de Sanidad Animal (DSA) del SENASA cuyas prevalencias para la DVB son

14

como se muestra en el cuadro 2

Cuadro 2 Prevalencia de la DVB por la prueba de ELISA en bovinos a nivel nacional

Departamento
Amazonas
Ancash
Apurmac
Arequipa
Ayacucho
Cajamarca
Cuzco
Huancavelica
Hunuco
Ica
Junn
La Libertad
Lambayeque
Lima-Callao
Loreto
Madre de Dios
Moquegua
Pasco
Piura
Puno
San Martin
Tacna
Tumbes
Ucayali
Total
SENASA (2011)

Animales
Positivos

Total
180
240
289
184
353
592
420
171
210
51
171
178
137
198
53
81
51
97
172
464
117
53
50
68
4580

2
13
6
0
11
11
1
7
2
0
4
7
15
2
0
1
0
0
14
13
1
3
0
2
115

Prevalencia
(%IC)
1.11 1.53
5.42 2.86
2.08 1.64
---3.12 1.81
1.86 1.09
0.24 0.47
4.09 2.97
0.95 1.31
----2.34 2.27
3.93 2.86
10.95 5.23
1.01 1.39
---1.23 2.40
--------8.14 4.09
2.80 1.50
0.85 1.67
5.66 6.22
----2.94 4.02
2.51 0.45

2.3.2. Prevalencia de la DVB en Alpacas y Otras Especies

Una de las caractersticas de los pestivirus es su habilidad de cruzar la barrera de la
especie. El vDVB ha sido detectado serolgicamente y por aislamiento viral en otros
ungulados domsticos y silvestres como ovinos, porcinos, alpacas, llamas, alces,
ciervos, venados y jirafas. Al parecer, la seroprevalencia en animales silvestres es baja,
indicando que son susceptibles, pero no constituyen una fuente de virus para rumiantes

15

domsticos (Nielsen et al., 2000). La seroprevalencia en alpacas de crianza mixta y en

hatos criados con tecnologa adecuada en el sur del Per se encuentra entre 11 y 20%
(Rivera et al., 1987; Cabello et al., 2006), mientras que no hubo evidencia de infeccin
por el vDVB en hatos con tecnologa moderna, sugiriendo que el bovino es la principal
fuente de contagio para ellos. A la fecha, no se ha detectado animales PI en el pas
(Rivera H., comunicacin personal), ni se ha establecido una evidente asociacin con
problemas reproductivos, respiratorios o gastroentricos, mientras que en pases como
Chile, EEU y Canad, no solo se reportan animales seropositivos, sino tambin signos
clnicos de DVB y hasta animales PI (Belknap et al., 2000). La presencia de anticuerpos
en los camlidos indica que son susceptibles a la infeccin por el vDVB. La ausencia
clnica de la DVB en alpacas y llamas del Per, podra deberse a la presencia de cepas
de baja virulencia circulando entre la poblacin de rumiantes domsticos en las zonas
alto andinas; pues en crianzas mixtas, se ha observado prevalencias superiores al 70%
en bovinos y no ms del 20% en alpacas del mismo rebao (Manchego et al., 1998;
lvarez et al., 2002). Si una alpaca se infecta con el vDVB durante el primer tercio de la
gestacin, el virus podra infectar al feto y nacer un animal PI, pero las posibilidades de
supervivencia podran ser mnimas por las pobres condiciones de manejo, siendo esa
una de las razones de la no deteccin de animales PI en el sur del pas. Por otro lado, en
pases con alta densidad de poblacin bovina y con un sistema de manejo diferente al
del Per y donde el vDVB de diverso grado de virulencia es endmico, el desafo para
las alpacas sera muy grande, desarrollando la enfermedad y ocurriendo el nacimiento
de alpacas PI, como est ocurriendo en EEUU y Canad. Los resultados de la
caracterizacin molecular de esas cepas del vDVB aisladas de alpacas enfermas o PI
indican que son de origen bovino (Carman et al., 2005, Celedn et al., 2006).

16

2.3.3. Fuentes de infeccin

Los bovinos persistentemente infectados constituyen la principal fuente de infeccin y
reservorio del virus, ya que eliminan grandes cantidades de virus a travs de sus
secreciones, en forma constante y durante toda la vida (Morn et al., 2006).
Actualmente todos los programas de control de la enfermedad estn dirigidos a
eliminar estos animales del rodeo (Jayashi et al.; 2005). Los animales que cursan una
infeccin aguda tambin son fuente de infeccin, aunque en forma menos eficiente, ya
que eliminan virus en pequeas cantidades y por un perodo corto durante la infeccin
(Brownlie et al., 1987).
Tambin se ha demostrado la transmisin entre pequeos rumiantes y bovinos, en
ambas direcciones (Paton, 1995).
2.3.4. Formas de transmisin
La transmisin puede ser vertical u horizontal, por contacto directo o indirecto. La
transmisin del vDVB despus del parto puede ocurrir directamente por contacto fsico
entre animales susceptibles y animales portadores del virus, por exposiciones venreas,
y por exposiciones indirectas con secreciones o excreciones que contengan el virus
(Rush et al., 2001).
La principal forma de introducir el virus a un rebao susceptible es a travs de la
adquisicin de bovinos PI o hembras que transportan fetos PI. Cuando un animal
PI es introducido a un rebao, la transmisin a animales susceptibles

ocurre

rpidamente a la mayora de los animales del rebao. Por el contrario, cuando la

infeccin se inicia por un bovino con infeccin aguda o por alguna otra va que inicie
una infeccin aguda, la transmisin es de corta duracin y solo incluye un pequeo
porcentaje del rebao antes que la transmisin cese (Houe, 1999).
Los factores que influyen en la eficiencia de transmisin del vDVB dentro de un rebao

17

no son conocidos, pero posiblemente se relacionen al manejo y al medio ambiente, que

favorece o impide la transmisin, incluyendo la proporcin de animales susceptibles
con animales inmunocompetentes, la proporcin de animales portadores del virus, la
densidad del rebao, y la virulencia o infectividad de las cepas del vDVB en el rebao
(Rush et al., 2001).
2.3.4.1. Transmisin horizontal
El contacto directo con animales PI, especialmente contacto nariz-nariz, es el modo
ms eficiente de transmisin en condiciones naturales, si un animal PI se
introduce directamente en un hato lechero, la mayora de los animales se infectarn
dentro de unos meses. El contacto directo con animales que cursan una infeccin aguda
tambin puede transmitir el virus (Houe, 1999).
El semen de toros PI o con infeccin aguda es una importante va de transmisin
horizontal. Por tal motivo en los centros de inseminacin se debe recurrir al aislamiento
viral y a un perodo de cuarentena que supere la fase aguda de la infeccin.
Sin embargo, un toro con infeccin aguda puede escapar al aislamiento viral en sangre,
superar el perodo de cuarentena y seguir siendo una amenaza. El virus puede
eliminarse en semen por un corto perodo ms all del ltimo da de viremia y se han
detectado toros fuertemente seropositivos no virmicos que eliminan persistentemente
el virus por semen (Fray et al., 2000).
El

virus tambin es un contaminante frecuente del suero fetal bovino, un componente

normalmente usado en los cultivos celulares, por sta razn los productos biolgicos
pueden estar contaminados (Zbal et al., 2000). Tambin se ha comprobado la
transmisin del virus a travs del uso de vacunas a virus vivo modificado o vacunas
contaminadas (Niskanen y Lindberg, 2003).
As mismo se ha demostrado de forma experimental la transmisin por va area a

18

corta distancia entre bovinos persistentemente infectados a bovinos centinelas.

Aunque la transmisin aergena no es la principal ruta de transmisin, puede tener
consecuencias graves cuando cepas de alta virulencia afectan a poblaciones susceptibles
y con alta densidad animal (Mars et al., 1999).
La transmisin horizontal indirecta ha sido demostrada experimentalmente y depende
del tiempo de exposicin, temperatura y dosis infectante La transmisin
realizarse a

puede

travs del uso de agujas hipodrmicas, mochetas, guantes de

palpacin rectal (Niskanen y Lindberg, 2003) y la accin de insectos hematfagos,

minutos despus de haber estado en contacto con animales PI. Sin embargo, su
importancia prctica an no est clarificada, ya que es un virus que se inactiva
fcilmente por calor, desecacin, luz ultravioleta, detergentes y solventes orgnicos
(Tremblay, 1996).
2.3.4.2. Transmisin vertical
La transmisin vertical ocurre en hembras susceptibles infectadas durante la preez.
Una caracterstica de los pestivirus de rumiantes, que incluyen el vDVB en bovinos y el
virus de la enfermedad de la frontera de las ovejas, es la habilidad de estos virus de
atravesar la placenta en animales seronegativos e infectar al feto. Para el feto, el efecto
de la infeccin depende del estado de la gestacin en la cual la hembra es infectada y
de la cepa del virus. En bovinos, la infeccin del feto con una cepa NCP desde los 30 a
40 das de la gestacin, y hasta alrededor de los 120 das, momento en el cual el feto
adquiere competencia inmunolgica, resultar en un ternero infectado persistente,
especficamente inmunotolerante para el vDVB que ha infectado al feto. Estos animales
son susceptibles a una superinfeccin con el biotipo CP del virus, con lo que se puede
producir la enfermedad de las mucosas, que es siempre fatal. Los terneros PI con el
biotipo NCP de vDVB pueden ser dbiles al nacimiento, pero frecuentemente son

19

clnicamente normales. La infeccin con DVB puede tambin resultar en muerte fetal,
reabsorcin,

aborto,

momificacin

malformaciones

congnitas

(Moennig y

Liess, 1995). A pesar de la elevada tasa de mortalidad de los animales PI en el primer

ao de vida (ms del 50%), muchos alcanzan la madurez sexual y se reproducen. Las
cras de stos animales tambin sern PI (Baker, 1987).
La transmisin vertical tambin ocurre luego de la transferencia embrionaria, si el
receptor es PI y si el donante tambin lo es, y no se efecta un correcto lavado del
embrin (Houe, 1999).
2.4. PATOGENIA
2.4.1. Ingreso del virus a la clula
El virus presenta tropismo por las clulas mitticamente activas como las clulas
epiteliales, los linfocitos y los mononucleares. Se han establecido diferencias en el
tropismo celular dependiendo del biotipo actuante. De esta manera, se ha observado que
los biotipos no citopticos prefieren leucocitos, rganos linfoides y clulas del tracto
respiratorio mientras que los biotipos citopticos se restringen ms al tracto digestivo
(Hamers et al., 2001). En el proceso de adhesin y penetracin de virus a la clula estn
involucradas las protenas de la envoltura viral (Erns, E1 y E2) (Lazar et al., 2003).
Luego de adherirse y penetrar en la clula husped, el virus ingresa al
citoplasma por un proceso de endocitosis mediado por pH cido y libera su
genoma. Al liberarse el RNA viral en el citoplasma acta como un RNAm, este entra
en contacto con los ribosomas en la subunidad 40S mediante un dominio especfico en
el extremo 5UTR para iniciar la traduccin. El RNA viral es traducido en una
poliprotena que es posteriormente clivada por enzimas virales y celulares en los
diversos polipptidos (protenas estructurales y no estructurales) (Agapov et al., 2004).

20

2.4.2. Replicacin viral

La replicacin del genoma viral se da por la RNA polimerasa dependiente del RNA
viral, la cual produce bandas complementarias al genoma pero de sentido negativo,
posteriormente, la polimerasa viral usa esta planilla negativa para sintetizar nuevas
molculas de RNA positivo las cuales son encapsidadas para formar nuevos viriones.
Cada clula infectada libera entre 100 a 1000 viriones que alcanzan el medio
extracelular mediante exocitosis (Hamers et al., 2001).
2.5. CUADROS CLNICOS PRODUCIDOS POR EL vDVB
El vDVB puede dar origen a diversas manifestaciones clnicas y lesiones como
resultado de la interaccin de factores tales como: el agente, el husped y

el

medioambiente adems cuadros clnicos que van desde infecciones subclnicas a una
grave, una forma altamente mortfera denominada enfermedad de las mucosas (EM)
(Baker, 1995). El grado de viremia inducida durante la infeccin por vDVB se asocia
con la gravedad de la enfermedad clnica. Los aislamientos del vDVB que inducen un
alto grado de viremia pueden ser capaz de inducir signos clnicos de la
enfermedad (Walz et al., 2001).
Dentro de las principales caractersticas, producto de una infeccin con el
vDVB, se puede mencionar:
2.5.1. Inmunodepresin
Si bien el virus afecta primariamente el sistema digestivo, tambin posee una gran
afinidad por el tejido linforeticular. Se ha comprobado la actividad inmunosupresora del
virus, que puede potenciar la patogenicidad de microorganismos co-infectantes como
PI3, IBR, Coronavirus, Rotavirus, Pasteurella, Salmonella, Coccidios, etc. Ms del 85%
de los animales infectados pueden tambin ser bacterimicos. Los mecanismos por los
21

cuales el virus produce inmunosupresin se han investigado recientemente e incluyen:

la supresin de la produccin de interfern, disminucin de la respuesta de linfocitos
perifricos a una variedad de mitgenos, disminucin del nmero absoluto del linfocitos
B y T circulantes y del porcentaje de linfocitos T, alteracin de la produccin de
anticuerpos humorales, disminucin de la quimiotaxis de monocitos, alteracin de la
funcin de polimorfonucleares, trabajos realizados con tcnicas inmunohistoqumicas
en mdula sea de bovinos experimentalmente infectados, han localizado
viral en megacariocitos

antgeno

y clulas mieloides. Tambin las vacunas de DVB a virus

vivo modificado han demostrado ser inmunosupresivas. Mientras el uso de stas

vacunas en un rebao no estresado y bien alimentado slo provoca bajo riesgo, el uso
concomitante en condiciones como destete, transporte y otras condiciones estresantes
puede provocar enfermos (Baker, 1987).
2.5.2. Complejo respiratorio
El vDVB conlleva a una inmunodepresin sistmica y pulmonar, aumentando la
patogenicidad de los dems agentes respiratorios (Brodersen y Kelling, 1998).
Adems, se ha demostrado que ciertas cepas de la diarrea viral bovina actan como
agentes primarios de neumonas (Hamers et al., 2000).
Existe evidencia epidemiolgica y experimental de que el vDVB est directamente
asociado con el Complejo Respiratorio Bovino (CRB); interactuando con patgenos
como Parainfluenza bovina tipo 3 (PI-3), Rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR),
Coronavirus, rotavirus, Pasteurella spp, Salmonella spp, etc. Tambin se ha comprobado
que existe sinergismo con otros patgenos respiratorios, tanto el biotipo CP como el
NCP causaron enfermedad respiratoria cuando eran seguidos de la inoculacin con
Pasteurella, pero el biotipo CP fue asociado con enfermedad ms severa (Potgieter et
al., 1985).

22

2.5.3. Complejo diarrea neonatal bovina.

Cuando fracasa la transferencia pasiva de anticuerpos, el virus participa en el complejo
diarrea neonatal de los terneros. Infecciones concurrentes con enteropatgenos resultan
en manifestaciones clnicas ms severas, debido al efecto inmunodepresivo del vDVB o
simplemente a una sumatoria de efectos (De Verdier, 2000).
Los fetos pueden infectarse en el ltimo trimestre de la gestacin o pueden hacerlo en
el perodo neonatal, y desarrollan una enteritis severa que algunas veces es fatal
(Baker, 1987).
Esta

enteritis

ha

sido

inducida experimentalmente en terneros calostrados y no

calostrados, sugiriendo que el virus podra tener un importante rol en la diarrea neonatal
de los terneros en combinacin con otros patgenos entricos. En terneros que
calostraron ms tiempo (4 a 6 meses), la infeccin resulta en una enfermedad clnica
leve con rpida recuperacin. La inmunidad pasiva humoral en terneros aparece
como

protectora despus de la infeccin. La administracin de corticoides

terneros sin anticuerpos calostrales ha provocado viremias fatales, mientras que no

produjo enfermedad en animales con altos niveles de anticuerpos calostrales (Shope et
al., 1976). Los anticuerpos derivados de la inmunidad pasiva declinan hasta niveles
indetectables entre los 105 a 230 das, pero con altas concentraciones iniciales pueden
persistir ms de un ao. Al disminuir los anticuerpos pasivos, los ttulos se incrementan
luego de la exposicin natural y la infeccin (Baker, 1987).
2.5.4. Infeccin subclnica
La mayor parte de las infecciones son subclnicas o de carcter moderado,
ocasionalmente se presenta fiebre, descarga oculonasal, leucopenia transitoria, elevada
morbilidad y baja mortalidad. En este tipo de infecciones, se desarrollan anticuerpos
neutralizantes 14 a 28 das postinfeccin y consecuentemente la proteccin contra

23

reinfecciones por cepas homlogas del virus probablemente sea de por vida (Kelling,
1996).
2.5.5. Infeccin aguda o Diarrea Viral Bovina
Este cuadro, dio nombre al virus, se refiere a la infeccin aguda que ocurre en bovinos
seronegativos e inmunocompetentes, entre los 6 meses a dos aos de edad. Tras un
perodo de 5 a 7 das, se puede observar leve depresin, inapetencia, descarga
oculonasal y ocasionalmente lesiones orales caracterizadas por erosiones o ulceraciones
poco profundas. Los animales pueden tener diarrea. La morbilidad es elevada, pero
la mortalidad es baja. En vacas lactantes la produccin de leche puede disminuir. El
virus puede ser eliminado en bajas concentraciones por el ganado infectado y puede
hacerse aislamiento viral de las secreciones o excreciones corporales. Los anticuerpos
neutralizantes son detectados en el suero 3 a 4 semanas despus de la infeccin y
probablemente persistan por aos, la eliminacin del virus en el semen de toros con
infeccin aguda se extiende ms all del perodo de viremia, como consecuencia de la
replicacin local en vesculas seminales y prstata (Baker, 1987).
2.5.6. Infeccin aguda severa
Hasta hace poco se prestaba poca atencin a las infecciones agudas, porque se
consideraban leves, subclnicas y de muy baja mortalidad (Radostits y Littlejohns,
1988). Sin embargo, cada vez son ms frecuentes los informes de infeccin aguda
severa de alta virulencia en animales jvenes y adultos, que provoca elevada
morbilidad y mortalidad, causada principalmente no exclusivamente, por el genotipo II
del vDVB. Los signos clnicos son generalmente severos, con diarrea, abortos, muertes
sbitas o neumonas. Las lesiones son similares a la enfermedad de las mucosas. Sin
embargo, se diferencia de sta ltima porque slo se asla el biotipo NCP del vDVB
(Ridpath et al., 2006).
24

2.5.7. Sndrome hemorrgico

Este cuadro tambin est asociado con el biotipo no citoptico de vDVB y ha sido
estudiado por muchos investigadores (Rebhun et al., 1989; Corapi et al., 1989; Flores
et al., 2000; Ridpath et al., 2006). Se observan hemorragias petequiales y equimticas
en mltiples sistemas orgnicos, diarrea sanguinolenta, epistaxis, sangrado en sitios de
inyeccin, anemia, leucopenia, trombocitopenia y muerte (Corapi et al., 1989). Despus
de la infeccin con estas cepas virulentas, se ha observado asociacin del virus con
linfocitos y plaquetas. En las plaquetas fue hallado el virus, pero no fueron encontradas
inmunoglobulinas unidas a la superficie, y en la mdula sea se han hallado
megacariocitos hiperplsicos y no infectados. Se ha sugerido entonces que la
trombocitopenia inducida por la infeccin con el vDVB virulento es debido a un efecto
directo del virus sobre las plaquetas, resultando en su reclutamiento o destruccin, ms
que por la disminucin en su produccin. Tambin se ha postulado que las mismas
pueden actuar como transportadoras del virus. (Corapi et al., 1990). Otros autores, sin
embargo, han encontrado signos de necrosis en la mdula sea, con prdida de la
arquitectura, cariorrexis y fagocitosis de restos celulares (Ellis et al., 1998).
2.5.8. Trastornos reproductivos
El mayor impacto econmico de la infeccin con el vDVB es el ocasionado por los
trastornos reproductivos (Moennig y Liess, 1995).
Se han encontrado antgenos de vDVB en las clulas del estroma ovrico y en los
oocitos en todos los estados de maduracin de los folculos ovricos y una disminucin
significativa en los niveles de estradiol plasmtico acompaando a la infeccin aguda
(Fray et al., 2000). El vDVB en hembras es el agente causal de ooforitis intersticial
no purulenta, con necrosis de clulas de la granulosa y de oocitos produciendo de esta
manera una disfuncin ovrica (Grooms, 1998).

25

En los machos, el semen de toros persistentemente infectados contiene virus

que

puede infectar a animales susceptibles. El semen de toros inmunocompetentes que

cursan una infeccin aguda puede ser transitoriamente infectante. La calidad del semen
puede ser afectada por el virus

y se caracteriza por motilidad disminuda

anormalidades morfolgicas de los espermatozoides. Las vacas seronegativas

inseminadas con

semen infectado generalmente fallan en la concepcin hasta que

desarrollan respuesta inmune activa contra el virus (Mc Clurkin et al., 1979).
2.5.9. Infeccin en hembras gestantes
Si el vDVB infecta una vaca o vaquillona preada y no inmune, el virus es capaz de
atravesar la barrera placentaria e invadir al feto, lo cual ocurre con gran eficiencia
(Moennig y Liess, 1995). El principal determinante de la respuesta fetal a la infeccin
es la edad del feto al momento de la infeccin y el biotipo del virus infectante
(Vanroose et al., 1998). La infeccin congnita puede resultar en amplio espectro de
anormalidades, como reabsorcin embrionaria, aborto, momificacin, malformaciones
congnitas, nacimiento de terneros de bajo peso y tamao, nacimiento de terneros
persistentemente infectados con el vDVB, y nacimiento de terneros normales
(Radostits y Littlejohns, 1988).
0 a los 45 das (etapa embrionaria), la infeccin de una hembra susceptible prxima al
momento del servicio o la inseminacin ocasiona muerte embrionaria y repeticiones de
servicios, hasta que desarrolla respuesta inmune, los hallazgos ms notables en stos
hatos pueden ser el aumento de servicios por concepcin, y en el intervalo partoconcepcin (Muoz-Zanzi et al., 2004).

Adems, la replicacin del virus en clulas

del oviducto puede alterar la secrecin de factores embriotrpicos que permiten el

desarrollo embrionario (Vanroose et al., 2000). Vanroose et al. (1998) concluyeron que
los embriones bovinos son susceptibles a la infeccin con vDVB cuando la zona
26

pelcida es removida, cerca del da 8 o 9. No obstante, el vDVB es capaz de

infectar a los ovocitos cuando ellos maduran dentro de los folculos ovricos, antes
que se forme la zona pelcida o bien a travs de las prolongaciones que emiten las
clulas del cmulo, que penetran la zona pelcida y entran en ntimo contacto con el
oolema (Fray et al., 2000). Fray et al.(1998), encontraron que la protena no estructural
NS3 fue localizada dentro del 18,7% de los ovocitos, lo que demuestra que las clulas
germinales bovinas pueden soportar la replicacin viral, y que la zona pelcida intacta
no es garanta de que el embrin est libre de vDVB. Por ende, la infeccin con el
vDVB puede realizarse a travs de la lnea germinal (Fray et al., 2000).
Por otro lado, el virus no parece inhibir la concepcin en bovinos seronegativos o
seropositivos cuando se inocula por va oral o intranasal, o se infunde dentro del tero
de una vaca seropositiva en pocas antes del servicio (Whitmore et al., 1981).
A partir del da 45, cuando culmina la etapa embrionaria, y hasta el da 125, cuando
el feto adquiere competencia inmunolgica, la infeccin por el vDVB NCP puede
provocar el

desarrollo de un bovino PI, ya que el sistema inmune inmaduro no

reconoce como extrao al virus NCP, y el animal ser inmunotolerante a ese virus (Mc
Clurkin et al., 1984). La inmunotolerancia es altamente especfica, por lo que el animal
puede generar una respuesta inmune frente a superinfecciones con vDVB
antignicamente diferentes (Brownlie, 1990). No existe evidencia que el biotipo CP
del vDVB puede ocasionar infecciones persistentes, estos PI pueden nacer normales y
vigorosos, y son los que eliminan continuamente virus por todas las secreciones,
mantenindolo dentro del ambiente (Baker, 1987). Durante este perodo tambin se
puede producir muerte fetal, seguida de aborto o momificacin, y un pequeo
porcentaje de teratognesis (Moennig y Liess, 1995). La expulsin del feto puede
ocurrir muchos meses despus de la infeccin (Baker, 1987).

27

A partir del da 125 de gestacin, en que el feto comienza a tener competencia

inmunolgica y hasta el da 175, en que se producen los estados finales de la
organognesis del sistema nervioso, la infeccin por el vDVB produce el mayor
porcentaje de alteraciones del desarrollo. Tambin en esta etapa pueden producirse
abortos, pero en menor porcentaje a los que se producen en las etapas tempranas de la
gestacin. Las malformaciones observadas, de distintos tipos y grados, incluyen:
microencefalia,

hipoplasia

cerebelar,

hidrocefalia,

hipomielognesis,

cataratas,

degeneracin retiniana, neuritis del nervio ptico, microftalmia, aplasia e hipoplasia del
timo, hipotricosis, alopecia, braquignatismo, retardo en el crecimiento, hipoplasia
pulmonar y deformidades esquelticas (Baker, 1987). Estas malformaciones pueden
producirse por dao celular directo del virus a las clulas madre (Dufell y Harkness,
1985), o la destruccin de las clulas infectadas por el sistema inmune fetal.
Adems el virus puede ocasionar dao de glndulas endocrinas, provocando
alteraciones en el metabolismo hormonal de los fetos (Moennig y Liess, 1995).
A partir de los 175 das de gestacin, el feto se encuentra en un perodo de crecimiento
general, es inmunolgicamente competente, y si se infecta en este perodo, nace un
ternero seropositivo normal o dbil. Los abortos son ocasionales (Moennig y Liess,
1995). Para detectar esta respuesta, el suero debe ser tomado antes de la ingestin de
calostro (Baker, 1987).
2.5.10. Infecciones persistentes
Los animales PI resultan por la infeccin fetal con vDVB biotipo NCP durante el
primer trimestre de gestacin dado que el sistema inmune fetal no reconoce el VDVB
como agente infeccioso o forneo (Fray et al., 1998).
Un animal PI es aqul en el cual es posible aislar el virus de la sangre o tejidos en dos
oportunidades con un intervalo de tiempo no menor a dos semanas. La viremia en

28

estos animales es de por vida y no son capaces de producir anticuerpos contra la cepa
que les origin inmunotolerancia. Los animales con infecciones persistentes por
lo general se muestran pequeos al nacimiento, con escaso desarrollo y ganancia de
peso, dbiles y con cuadros recurrentes de enfermedad respiratoria y digestiva. Sin
embargo, otros son clnicamente normales, siendo indispensable el laboratorio para su
diagnstico (Kelling, 1996).
2.5.11. Enfermedad de las mucosas (EM)
La EM se genera cuando animales PI con una cepa NCP son superinfectados con una
cepa CP homloga, de origen exgeno o generada de cambios genticos o
recombinacin de ARN de las cepas NCP residentes, siendo posible el aislamiento de
ambos biotipos antignicamente similares. Es decir el biotipo CP surge

de

mutaciones del biotipo NCP, aunque no se descartan fuentes externas (Grooms,

1998). Es un sndrome inevitablemente fatal y espordico, con signos clnicos severos
de fiebre, depresin, lesiones orales erosivas, hipersalivacin y diarrea acuosa
profusa (Radostits y Littlejohns, 1988).
Debido a la similitud de la cepa superinfectante con el biotipo NCP persistente, el
sistema inmune no la reconoce como extraa, y debido a esto no puede proteger al
animal de la enfermedad severa (Brownlie, 1990). La infeccin con el virus CP causa
las lesiones observadas en bovinos con EM. La muerte se produce dentro de los 10 das
del comienzo de los signos clnicos, sin embargo, los animales con EM crnica pueden
sobrevivir por ms de 18 meses, con diarrea continua o intermitente y emaciacin
progresiva (Baker, 1987).
2.6. LESIONES PRODUCIDAS POR LA INFECCIN CON EL vDVB
2.6.1. Lesiones Macroscpicas
29

Las lesiones observadas ms frecuentemente son las del tracto digestivo superior o
las intestinales, aunque varan considerablemente, sobre todo en la enfermedad aguda.
En la enfermedad crnica con frecuencia se presenta un panorama patolgico ms
amplio y con lesiones ms constantes, aunque a veces resulta oscurecido en parte por la
curacin o la evolucin de las lesiones (Liebler-Tenorio al., 2000; Brown et al.,
2007).
En el morro, las narinas, el borde anterior del labio inferior y su unin cutnea
pueden observarse costras, erosiones y lceras planas. Se ha visto prdida de epitelio en
gran parte de la cavidad oral, sobre todo el paladar, la punta de las papilas bucales y las
encas. Muchas de estas lesiones son lceras que dejan expuesta la lmina propia
intensamente hipermica, especialmente en las papilas y la faringe. Pueden observarse
lesiones en todas las superficies de la lengua, sobre todo en la parte anterior del dorso,
donde muchas veces el epitelio degenerado se encuentra adherido, desarrollando grietas
o lceras. Otros sitios de la cavidad oral afectados pueden ser el rodete coronario y la
parte interna de las mejillas (Brown et al., 2007).
Se pueden encontrar lesiones en rumen, retculo y omaso, pero no en el surco esofgico.
Estas son parecidas a las lesiones del tracto superior, observndose mejor en los pilares
y en porciones de la mucosa que no tengan papilas y sean lisas. En el abomaso, los
cambios se presentan regularmente, con ulceraciones que varian desde muy
pequeas hasta medir 1 cm o ms de dimetro (Brown et al., 2007).
La mucosa del intestino delgado puede observarse frecuentemente normal en la
mayor parte de su longitud, aunque se ha encontrado hiperemia difusa y cilindros
fibrinosos en la luz. La pared puede estar muy engrosada por el edema en la submucosa
y la subserosa. A veces, estas placas semejan lceras. Los ndulos linfticos
mesentricos por lo general no se presentan agrandados. En el intestino grueso, las

30

lesiones son muy variables. La mucosa se puede hallar congestiva, con un diseo
atigrado, siguiendo los pliegues En casos ms crnicos se han observado lesiones
fibrinosas o fibrinonecrticas y ulceracin focal o extensa a cualquier nivel, sobre
todo en ciego y recto (Brown et al., 2007).
Puede observarse coronitis extendida completamente alrededor de la banda
coronaria, con separacin de la unin piel-cuerno y un crecimiento excesivo del cuerno,
as como dermatitis desde la corona hacia arriba por la cuartilla. Tambin se ha
encontrado dermatitis exudativa generalizada, con lesiones ms costrosas desde la nariz,
orejas y prpados hasta la cruz. En muchos animales las lesiones costrosas son ms
severas en axilas, ingle y perin (Oden et al., 2003).
Si bien el virus afecta primariamente al tubo digestivo, tambin presenta una gran
afinidad por el tejido linforreticular, ocasionando focos de necrosis en los linfondulos
del bazo y destruccin de las placas de Peyer del intestino delgado y atrofia del tejido
linftico en general (Liebler-Tenorio et al., 2000).
En las fases tempranas de la enfermedad de las mucosas, se hallaron erosiones leves a
moderadas en la cavidad oral, esfago y abomaso, Placas de Peyer cubiertas de fibrina y
reduccin del tamao del timo (Liebler-Tenorio et al., 1997). Otros autores han
descripto ulceraciones del espacio interdigital y la banda coronaria, petequias en el
epicardio y en la submucosa del abomaso, enfisema intersticial en los lbulos
pulmonares, adherencias fibrinosas entre la pleura y el pericardio y hemorragias
mltiples en la corteza de los linfondulos pre-escapulares y poplteos (Oden et
al.,2003).
Las lesiones macroscpicas encontradas en animales infectados con el genotipo II
del vDVB fueron congestin generalizada de las mucosas, ulceraciones profundas y
extensas en la lengua, paladar y esfago, congestin en la mucosa ruminal y omasal,
31

con mltiples focos blanco-amarillentos difusamente distribuidos en la mucosa del

omaso. Tambin se hallaron reas diseminadas de congestin y ulceracin en el
intestino delgado, cubiertas con fibrina y hemorragias petequiales en el epicardio y
miocardio. Otros autores han descripto neumona (Flores et al., 2000). Ellis et al.
(1998) tambin han encontrado lesiones importantes de neumona afectando hasta el
25% de los pulmones, y en contraste, lesiones mnimas en el tracto gastrointestinal.
En los brotes de enteritis aguda ocasionados por el genotipo II del vDVB, descriptos por
Oden et al. (2003), el abomaso, el intestino delgado y el ciego se hallaron llenos de
un contenido pastoso y hemorrgico. La mucosa del abomaso present erosiones ovales
mltiples, y la superficie de corte de las paredes de los rganos se observ
edematosa. La mucosa del ileon present cogulos de sangre, de 4 a 7 cm. de dimetro,
adheridos a las placas de Peyer. Secciones extensas de la mucosa del intestino delgado
presentaba una coloracin rojo-oscura. El hgado y la grasa perirrenal se encontraron
ictricos. Tambin se encontraron hemorragias de 4 a 5 cm en el endocardio de los
ventrculos izquierdo y derecho del corazn y la superficie de corte de los ganglios
linfticos se present hemorrgica (Oden et al. 2003).
2.6.1. Lesiones Microscpicas
Las lesiones ms importantes fueron halladas en el tracto gastrointestinal y en los
rganos linfticos, por la afinidad que tiene el virus por los tejidos epitelial y linfoide
(Baker, 1987). Brown et al. (2007) observaron que las lesiones del aparato digestivo
anterior comienzan con necrosis del epitelio. Las clulas profundas del epitelio, se
presentaron tumefactas, con ncleos picnticos individualmente o en grupos. Estos
focos se fueron agrandandando progresivamente y formando grandes reas de necrosis
que se extendieron hasta la capa basal, la apariencia macro y microscpica de las
placas de Peyer ha aportado evidencia til para el diagnstico. En los casos crnicos de
32

enfermedad de las mucosas, las placas de Peyer mostraron una prdida total de la
arquitectura (Brown et al., 2007).
En los infectados persistentes, se describieron lesiones microscpicas en rin y
cerebro. Estos antgenos tambin fueron encontrados en las neuronas, sobre todo de la
corteza cerebral. Los cambios neuronales probablemente se produjeron por la accin
directa del virus (Cutlip et al., 1980).
2.6.3. Lesiones macro y microscpicas en fetos
Las inoculaciones experimentales en hembras gestantes han permitido observar en los
fetos lesiones del desarrollo, tales como: hipoplasia tmica, causada por necrosis y
deplecin linfocitaria, lesiones en cerebelo y piel (Baker, 1987).
Oden et al. (2003) Ha descripto un caso inusual de malformacin congnita en un
ternero nacido despus de una gestacin prolongada, que muri a los 15 minutos de
nacido, con una serie de anomalas: presencia de los dos globos oculares dentro de una
sola cavidad orbitaria, hemisferios cerebrales y nervios pticos fusionados, hidrocefalia,
ausencia de glndula hipfisis y alopecia generalizada (Oden et al., 2003).
2.7. RESPUESTA INMUNE
La respuesta inmune contra un agente infeccioso es clasificada como celular o humoral,
y la inmunidad puede ser adquirida activamente por infeccin o pasivamente por
transferencia de anticuerpos (Acs) calostrales. La inmunidad celular, medida por la
proliferacin de clulas mononucleares en sangre perifrica despus de la exposicin in
vitro al vDVB, ha sido demostrada en vacas seropositivas, pero no en terneros que
fueron pasivamente inmunizados con Acs calostrales. Sin embargo, muchos estudios
de deteccin de respuesta inmune contra DVB, se han concentrado en la deteccin de
anticuerpos especficos para el virus. Estos pueden ser detectados en el suero desde tres

33

semanas despus de una infeccin aguda hasta por aos

inmunocompetentes.

Los

anticuerpos

especficos

contra

en

animales

vDVB pueden

ser

clasificados en 2 grupos funcionales: los anticuerpos contra las glicoprotenas

(primariamente E2 o gp 53), que pueden bloquear la infectividad o neutralizar el
virus y tienen reaccin cruzada entre diferentes cepas de vDVB, y los anticuerpos
contra la protena no estructural altamente inmunognica NS2-3 (p125), que no
neutralizan el virus, pero que est antignicamente conservada entre todas las especies
de pestivirus (Sandvik, 1999).
La seronegatividad con el aislamiento de la no citoptica es una buena confirmacin de
infeccin persistente. Desafortunadamente, esto no ocurre siempre, porque los PI
pueden ser seropositivos. Esto se produce cuando el PI es infectado con una cepa
antignicamente distinta al biotipo no citoptico persistente, generando una respuesta
inmune con produccin de anticuerpos. Otra causa de seropositividad en el PI puede ser
la ingestin de calostro (Baker, 1987).
2.8. DIAGNSTICO
Al igual que la mayora de microorganismos. Los virus pueden ser detectados de forma
directa o indirecta. Las pruebas directas, son las que evidencian al virus o algunos de los
antgenos virales; mientras que las pruebas indirectas, son las que se utilizan con ms
frecuencia y bsicamente demuestran un contacto del husped con el agente viral
mediante la determinacin de anticuerpos especficos contra el virus (Lrtora, 2003).
Estas pruebas son las siguientes:
2.8.1. Aislamiento viral en cultivo celular
Los virus son microorganismos intracelulares y para evidenciarlos, se deben utilizar
sistemas basados en lneas celulares que permitan su desarrollo. La invasin viral se
34

evidencia a travs de un cambio celular o efecto citoptico y mediante pruebas

complementarias. El aislamiento viral es el mtodo de referencia, es 100% especfico y
altamente sensible. Sin embargo, es un mtodo costoso, laborioso y sin capacidad de
diferenciar animales PI de animales con infecciones agudas (Dubovi, 1996).
2.8.2. Deteccin de antgenos virales
Dentro de las tcnicas directas es posible incluir:
2.8.2.1. Inmunofluorescencia IF
Esta prueba se utiliza para detectar la presencia de antgenos virales en tejido fresco o
frotis, mediante la utilizacin de anticuerpos contra vDVB marcados con un
fluorocromo (conjugado), los que con ayuda de un microscopio de fluorescencia,
evidencian la presencia de antgenos virales. Esta prueba tiene una sensibilidad de 77%
y una especificidad de 83% (Lrtora, 2003).
2.8.2.2. Inmunoperoxidasa
Prueba inmunohistoqumica IHQ, rpida, usada para la deteccin de antgeno de vDVB
en muestras de tejidos frescos o fijados en formalina. En esta prueba se utiliza un
anticuerpo monoclonal o policlonal marcado a una enzima que es la peroxidasa.
Adems esta prueba permite apreciar la arquitectura del tejido y con esto las lesiones
histolgicas que puedan estar presentes. Esta prueba tiene una sensibilidad y
especificidad de 97% (Lrtora, 2003).
2.8.2.3. ELISA de captura de antgenos
La

prueba

de

ELISA de

captura

utiliza

anticuerpos

monoclonales

para

capturar antgenos del vDVB en muestras de sangre. Es un mtodo rpido, y es

considerado el mtodo de preferencia para la deteccin a gran escala de animales PI
(Dubovi, 1996).
Los anticuerpos monoclonales, usados en esta prueba, reconocen la protena p125, por

35

lo que pueden detectarse las diferentes cepas del vDVB, Estos anticuerpos estn
adheridos a la placa de ELISA para la captura del antgeno viral presente en las
muestras de sangre o suero y un segundo anticuerpo monoclonal conjugado con
peroxidasa revela la unin Antgeno-Anticuerpo. Para determinar el resultado es
necesario observar la presencia de color, la cual indica la positividad de la muestra. Este
mtodo puede llegar a alcanzar una sensibilidad y especificidad de 97 y 99
respectivamente (Shannon et al., 1991).
2.8.3. Deteccin de anticuerpos
Se pueden detectar anticuerpos contra el VDVB en suero mediante pruebas estndar de
neutralizacin de virus (VN) o mediante la prueba de ELISA (Edwards, 1990).
Dichas pruebas son las ms utilizadas en la deteccin de anticuerpos contra el vDVB,
cuya utilidad est basada en la deteccin de infecciones de DVB en hatos o
poblaciones, ya que ttulos altos de anticuerpos o densidades pticas elevadas (ELISA),
indican una infeccin activa dentro de un hato (Niskanen, 1993).
2.8.3.1. Neutralizacin viral (VN)
Es uno de los mtodos serolgicos ms sensibles y especficos para la deteccin de
anticuerpos contra el vDVB, el fundamento de esta prueba radica en la capacidad de
los anticuerpos para neutralizar la infectividad o citopatogenicidad del virus
homlogo (Rivera, et al., 1993).
Esta prueba se lleva a cabo haciendo diluciones del suero y enfrentndolos a una
cantidad constante de virus. Para esta prueba es necesario utilizar muestras de suero y/o
fluido torxico fetal. Se utilizan microplacas de 96 hoyos y requiere de una cepa
citoptica (CP) del vDVB que debe ser conservada en el laboratorio debidamente
titulada en cultivo celular secundario libre de vDVB endgeno y la lectura se realiza
tres o cuatro das posterior a su procesamiento (Niskanen, 1993).
36

2.8.3.2. Inmunoabsorvancia Ligada a Enzimas (ELISA)

La prueba de ELISA indirecta tiene un principio semejante al de la ELISA directa, slo
que en este caso, el antgeno contra la DVB est unido a una fase slida que puede ser
un tubo, microplaca, luego se aade el suero problema que posee los anticuerpos y
despus se adiciona el conjugado constituido por un anti-anti-cuerpo IgG i IgM unido
a una enzima, posteriormente se adiciona el sustrato especfico para la enzima., que
lo va a modificar y produce un compuesto coloreado, cuya intensidad es proporcional
a la concentracin de anticuerpo presente en el suero (Conroy et al., 1991).
2.8.4. Deteccin del cido nucleico viral
Un mtodo rpido y sensible, es la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), capaz de
detectar diversos vDVB y permite investigar un gran nmero de muestras en corto
tiempo. Gracias a su elevada sensibilidad es posible detectar el virus en pool de
muestras de sangre y leche de tanque sin embargo por este motivo puede dar origen a
resultados falsos positivos (Nettlenton y Entrican, 1995).
2.9. PREVENCIN Y CONTROL
La utilizacin de pruebas diagnsticas en los programas de control permiten la
vigilancia o monitoreo de la prevalencia a nivel del hato as como tambin a nivel
regional; establecen el estatus del hato frente a la enfermedad, e identifican
animales PI para su posterior eliminacin (Sandvik , 2004).
Los estudios epidemiolgicos son importantes como base para la seleccin de una
estrategia de control. Debido a la variacin en la epidemiologa entre las diferentes
zonas geogrficas, la evaluacin de una estrategia de control en una zona, de
preferencia deben basarse en estudios epidemiolgicos de la misma zona (Houe, 1995).
A partir de la dcada del 60, el control de la DVB estaba focalizado en prevenir la
37

ocurrencia clnica de la enfermedad mediante la vacunacin. En adelante, se fabricaron

ms de 150 vacunas comerciales a virus modificado o a virus inactivado; sin embargo,
su uso masivo en algunos pases por ms de cuatro dcadas, no ha logrado la reduccin
de la prevalencia e incidencia de la DVB (Sandvik, 2004). Van Oirschot et al. (1999)
considera la necesidad de estudios adicionales sobre la eficacia y seguridad de las
vacunas, sobre todo, considerando la diversidad antignica de las cepas del vDVB de
campo.
El propsito de la vacunacin para el control de la DVB ha cambiado. En la actualidad,
estas vacunas deben ser usadas como una medida adicional de bioseguridad en vez del
concepto clsico de control (Lindberg et al., 2006). Adems, el principal objetivo de la
vacunacin es prevenir el pasaje del virus al feto para evitar las fallas reproductivas
causadas por el virus. A la fecha, se tiene suficientes datos de la biologa del virus,
patogenia, y epidemiologa de la enfermedad, as como las tcnicas diagnsticas
necesarias para considerar la erradicacin de la DVB basadas en la bioseguridad,
eliminacin de animales PI y vigilancia, como lo demuestran los resultados de los
exitosos programas de control que estn efectundose en muchos pases europeos
(Lindberg et al., 2006).
En el Per no existe un programa de control de la DVB. Algunos ganaderos de las
principales cuencas lecheras utilizan la vacunacin. Las vacunas autorizadas
oficialmente son de tipo inactivado y su uso es voluntario y profilctico. Las vacunas
pueden ser tiles solo cuando se aplica en forma estratgica y sistemtica, es decir,
como una medida de bioseguridad y conjuntamente con la deteccin de animales PI y
vigilancia permanente. Estudios preliminares de control sin vacunacin pero con
deteccin y eliminacin de los animales PI y maximizando las medidas de bioseguridad
y vigilancia en dos hatos de crianza intensiva en Arequipa evidencian buenos resultados

38

(Ziga et al., 2006).

Algunos pases han instaurado programas de erradicacin de la enfermedad, basados en
el control sistemtico sin vacunacin y control sistemtico con vacunacin:(Moennig et
al., 2006).
a) CONTROL SISTEMTICO SIN VACUNACIN:
Consiste en la identificacin y eliminacin de animales PI, as como el monitoreo
continuo del hato, mediante las pruebas diagnsticas para confirmar el estatus libre del
hato o detectar nuevas. En este programa tambin se implementan medidas de
bioseguridad como control en el desplazamiento de animales entre fincas, realizacin
de cuarentenas para animales nuevos que ingresen a las fincas, uso de semen
certificado libre de la enfermedad, control en el ingreso del personal al hato, entre
otras (Moennig et al., 2006). Este esquema se comenz a implementar desde la dcada
de los noventa en los pases de la regin escandinava (Dinamarca, Finlandia, Noruega,
Suecia)

donde en su mayora hay declaracin de erradicacin de la enfermedad

(Valle, et al, 2005). Las pruebas diagnsticas realizadas con esta estrategia de control se
basan en serologas al azar o muestras del tanque de la leche para medir los ttulos de
anticuerpos, as como tambin la realizacin de RT-PCR (Moennig et al., 2006).
b) CONTROL SISTMATICO CON VACUNACIN:
Consiste en la implementacin de esquemas de vacunacin. Este programa se ha
desarrollado en pases donde el control mediante la eliminacin de PI y la
implementacin de medidas de bioseguridad no han sido suficientes, como es el caso
de Alemania (Moennig et al., 2006). Al usar vacunas se espera que se reduzcan los
signos clnicos asociados con la infeccin con el vDVB

y que provean un

mejoramiento reproductivo al reducir las tasas de abortos, muertes embrionarias y el

nacimiento de terneros PI. Para un control eficiente de la enfermedad es importante que

39

la vacunacin confiera altos niveles de proteccin para la madre y para el feto; as

mismo, que la vacuna proteja contra los dos genotipos de VBVB (Kelling, 2004). Entre
los protocolos vacnales empleados se ha sugerido una primo vacunacin con una
vacuna inactivada y 4 semanas despus una revacunacin con una vacuna a virus
modificado; esto con el fin de generar una eficiente inmunidad humoral y celular, as
como tambin desarrollar proteccin fetal. En algunos pases, no se lleva a cabo la
deteccin de animales PI, no se implementan medidas de

bioseguridad y se pueden o

no implementar programas vacunales desconociendo el estatus del hato frente a la

infeccin viral. Este panorama se ha denominado por algunos autores como control no
sistemtico y puede ser un reflejo de la situacin ganadera peruana (Moennig et al.,
2006). Entre las vacunas disponibles en el mercado nacional e internacional se
encuentran las vacunas inactivadas y las de virus
mayora,

vivo modificado (VLM). En su

estas vacunas vienen en presentacin polivalente junto con otros antgenos

virales tales como: IBR (Rinotraqueitis Bovina Infecciosa), PI-3 (Parainfluenza

Bovina), vBRS (Virus Sincitial Respiratorio Bovino); as como algunos antgenos
bacterianos (Pasteurella, Moraxella, entre otros) Actualmente se vienen desarrollando
vacunas con vectores recombinantes basadas en

DNA plasmdico o vectores virales,

las cuales todava estn en etapa de experimentacin (Oirschot et al., 1999).

2.9.1. Vacunas Inactivadas
Son vacunas en las que los virus pierden su capacidad infectiva y replicativa mediante
la inactivacin con qumicos como la Etilamina Binaria (BEI), la Beta propiolactona,
entre otros. Este tipo de vacunas se deben administrar con adyuvantes para
alcanzar una mejor respuesta inmune (Oirschot et al., 1999). Son vacunas muy seguras
y se pueden administrar en cualquier momento de la gestacin; pero requieren de un
refuerzo cada 6 meses para mantener los niveles de anticuerpos vacnales (Makoschey

40

et al., 2001). Estas vacunas no inducen inmunidad celular y pueden retener una
infectividad residual si la inactivacin no fue realizada correctamente. As mismo,
pueden inducir reacciones inflamatorias localizadas, y adicionalmente requieren altos
costos en su produccin (Oirschot et al., 1999).
2.9.2. Vacunas Virus vivo modificadas (VLM)
Estas vacunas contienen cepas atenuadas del vDVB capaces de replicarse en el
husped. La atenuacin se realiza mediante consecutivos pasajes en cultivos
celulares (Oirschot, et al., 1999). La induccin de la respuesta inmune es rpida
pudindose detectar anticuerpos dentro de las 4 semanas pos vacnales y mantenindose
altos por ms de un ao. Entre las desventajas en el empleo de estas vacunas estn la
presentacin de efectos colaterales por la capacidad de atravesar la barrera placentaria e
infectar el feto, as como la generacin de inmunosupresin predisponiendo al animal a
infecciones con otros patgenos. La VLM han mostrado seguridad cuando se administra
al ganado 4 semanas pre-inseminacin (Moenning et al., 2006). Muchas de las vacunas
VLM e inactivadas que se encuentran comercialmente contienen el genotipo 1 y no
proveen proteccin cruzada contra el genotipo 2, esto indica que la exposicin a uno
de estos genotipos no asegura la proteccin cruzada. Para mayor proteccin, algunas
casas comerciales han introducido los dos genotipos en sus vacunas (Ridpath, 2005).
2.9.3. Vacunas Recombinantes
Con el advenimiento de la terapia gnica se ha venido trabajando en el tratamiento de
desrdenes genticos, en la terapia contra el cncer y en el desarrollo de vacunas (Polo
y Dubensky 2002). En este ltimo se han realizado algunos avances en enfermedades
importantes en la salud pblica como el Virus de Inmunodeficiencia humana (VIH),
Hepatitis, malaria; y enfermedades animales como vDVB, IBR, entre otras (Souza et
al, 2005). Entre las metodologas ms desarrolladas se encuentran la utilizacin de

41

DNA plasmdico y vacunas a vectores virales. El empleo de estas metodologas se

fundamenta en el uso de un vector que permite la eficiente expresin y presentacin de
antgenos que van a generar una potente inmunidad humoral y celular (Liu y Murwe
2003).

III. MATERIALES Y MTODOS

3.1. LUGAR DE ESTUDIO
El presente trabajo de investigacin se realiz en la cuenca lechera del distrito de
Moquegua perteneciente a la regin del mismo nombre que est situado en el sur
del Per, sus coordenadas geogrficas se sitan entre 171127 Latitud sur

705554 Longitud oeste. Limita por el norte con la provincia de Sanchez cerro, por el
sur con Tacna, por el este con los distritos de Samegua y torata y por el oeste con la
provincia de Ilo. Su superficie territorial es de 3982.74 KM2; abarca zonas de la costa
con una altitud de 1410 m. un clima templado y seco, con escasas lluvias, con un
intenso sol y una temperatura promedio de 20,5C, una mxima de 33C y una mnima
de

9C.

(http://www.enperu.org//moquegua-informacion-util-clima-sitios-turisticos-

ubicacion-geo grfica-viaj es. Html).

Los trabajos de laboratorio se realizaron en el laboratorio de Microbiologa Veterinaria
de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional del
altiplano, ubicado en la ciudad de puno a una altitud de 3825m.
3.2. MATERIALES
3.2.1. Animales
Se consideraron 81 bovinos de la raza Holstein, pertenecientes a 32 productores, los

42

que fueron agrupados por: edad, sexo, estado reproductivo, y vacas con antecedentes de
aborto, tal como se muestra en el cuadro siguiente
Edad

Tota

Sexo

Total

E. Reproductivo

Hembra
Macho
Total

77
4
81

Preadas
vacas
Total

< 2 aos
> 2 aos
Total

31
50
81

Tota

Ant. Aborto

Total

aborto
No aborto
Total

6
43
49

33
22
55

3.2.2. Equipos y materiales

Para el trabajo de recoleccin de muestras se utilizaron lo siguiente:
-

Tubos al vaco (sistema vacutainer).

Agujas

vacutainer.

Holder

Viales.

cooler
Para el trabajo de laboratorio se emplearon los siguientes equipos y materiales:

Microplacas estriles de 96 hoyos

Micropipetas de precisin 0-100 y 100-1000 L

Tips descartables

Pipetas Pasteur.

Agua destilada o desionizada

Papel de aluminio o adhesivos para cubrir las microplacas

EQUIPOS
43

Incubadora de 37 C.

Refrigeradora.

Lector de microplacas provisto de un filtro de 450 nm.

3.2.3. Reactivos
Nombre y aplicacin SVANOVIR BVDV-ELISA es un inmunoensayo (ELISA) para
la deteccin de anticuerpos contra vDVB en suero bovino, plasma y leche; muestras
individuales, mezcla de suero o leche y tanque de leche.

Tabla 3. Contenido del kit ELISA-SVANOVA

Contenido

N
de
artculo

Microplacas
Microplacas (96 pocillos) recubiertas con antgeno VDVB no 10 (Placas)
infeccioso (selladas y almacenadas en seco). Columnas impares
recubiertas con antgeno viral y columnas pares con antgeno control.
Conjugado
Listo para usar, (peroxidasa de rbano conjugado con anticuerpos 1 x 120 ml
monoclonales anti-IgG bovino).
Solucin PBS-Tween
20x concentrado
Tampn para dilucin de muestra

2 x 125 ml

Listo para usar

Solucin de substrato

1 x 120 ml

(Tetrametilbenzidina

en

tampn

de

substrato

con

H2O2) 1 x 100 ml

ALMACENAR EN OBSCURO
Solucin frenadora

1 x 50 ml

Contiene cido sulfrico (2M) - CORROSIVO

A. Suero control positivo

1 x 0,7 ml

- Contiene conservante
B. Suero control negativo

1 x 0,7 ml

- Contiene conservante
44

Manual de kits ELISA SVANOVIR para DVB disponible en el Laboratorio de la

FMVZ-puno.
Precauciones de uso.
1. Leer con atencin y seguir todas las instrucciones.
2. Conservar el kit y todos los reactivos de 2-8C.
3. Antes de su uso, debe dejarse que los reactivos alcancen temperatura ambiente de 1825C.
4. Manipular todos los reactivos observando las Buenas Prcticas de Laboratorio.
5. No mezclar componentes o manuales de instrucciones de kits de distintos lotes.
6. No contaminar los componentes del kit.
7. No utilizar el kit pasada la fecha de caducidad.
8. No comer, beber o fumar cuando se manipulen las muestras o los reactivos del kit.
9. Utilizar puntas de pipetas distintas para cada muestra.
10. No usar la pipeta con la boca.
11. Incluir controles positivos y negativos de suero en cada serie de placas o tiras.
12. Para la preparacin de los reactivos, utilizar nicamente agua destilada, deionisada o
cualquier otra agua altamente purificada.
13. Cuando prepare la solucin tampn etc. medir el volumen requerido.
14. La solucin frenadora contiene cido sulfrico que es muy corrosivo.
15. Los materiales biolgicos no utilizados deben desecharse siguiendo las normativas
45

locales, regionales o nacionales.

3.2.4. Preparacin de reactivos.
Tampn PBS-Tween:
Diluir la solucin PBS-Tween 20x en una proporcin de 1/20 en agua destilada.
Preparar 500 ml por placa aadiendo 25 ml de solucin PBS-Tween a 475 ml de agua
destilada y mezclar muy bien.
Nota: comprobar que no se ha producido precipitacin de cristales en la botella.
3.3. MTODOS
3.3.1. Tamao Muestral
El mtodo de seleccin del tamao muestral, fue determinado mediante el mtodo
no paramtrico de muestreo simple al azar, considerando una prevalencia referencial de
5.66% (SENASA, 2011) con un nivel de confianza del 95% y 5% de error admisible
(Daniel, 1996).

2
Nz pq

2
2
e (N-1) + z pq
Donde:
n: Tamao de muestra mnimo
N: Tamao de la poblacin (4898)
z: Nivel de confianza (95%)1.96
p: Prevalencia referencial (5.66%)
q: 1-p
46

e: Precisin (5%)
Aplicando la frmula result un tamao muestral de 81 animales.
3.3.2. Obtencin de las muestras
Las muestras fueron colectadas por puncin directa de la vena coccgea en tubos
al vaco sin anticoagulante (vacutainer) a 81 bovinos; Con el fin de favorecer la
formacin de cogulo y suero sanguneo los tubos fueron colocados en posicin
inclinada a 37 durante veinte minutos, posteriormente los sueros sanguneos se
aislaron en viales y conservados a -20C hasta el momento del trabajo en laboratorio.
El muestreo se realiz en el mes de julio del 2014.
Previo y durante la coleccin se registr la identificacin del animal, sexo y categora.
As mismo, en una hoja de encuesta diseada previamente se colect datos de abortos,
infertilidad, problemas respiratorios y otros que el criador proporcion.
Las muestras colectadas se transportaron al laboratorio de Microbiologa Veterinaria de
la Universidad Nacional del Altiplano ubicado en la ciudad de Puno a una altitud de
3825 m.
3.3.3. Deteccin de Anticuerpos contra vDVB
La deteccin de los anticuerpos contra el vDVB se realiz mediante la prueba ELISA
indirecta, utilizando placas descartables de 96 hoyos, segn la tcnica descrita por la
(FAO, 2006), y el protocolo disponible en el laboratorio de microbiologa de la FMVZ
de la UNA-Puno.
3.3.3.1 Descripcin y principios de la Tcnica- SVANOVIR BVDV-Ab ELISA
El procedimiento de este kit se basa en un ELISA indirecto en donde las muestras se
exponen a un antgeno inactivado de vDVB inmovilizado en pocillos de microplacas Si
las muestras contienen anticuerpos contra vDVB, estos reaccionarn con el antgeno
47

inmovilizado en la microplaca. El conjugado de HRP (peroxidasa de rbano picante)

agregado posteriormente, formar un complejo con los anticuerpos contra vDVB. Los
reactivos en exceso se lavan antes de agregarse la solucin substrato. El resultado
positivo se indica con la aparicin de un color azulado. La reaccin se detiene con la
adicin de la solucin frenadora y el color cambiar a amarillo. El resultado se lee por
medio de un fotmetro de microplacas, en el que se mide la densidad ptica (DO) a
450nm.
3.3.3.2 Protocolo del ensayo.
Se Utiliz el siguiente protocolo disponible en el laboratorio de la FMVZ-UNA-PUNO.

1. Aadir las muestras. Los sueros controles negativo y positivo incluidos en el kit, se
utilizan tanto para muestra de suero como de leche.
A. Aadir 90 l de Solucin para dilucin de muestras a cada pocillo que use para las
muestras de suero y controles.
B. Aadir 10 l de suero control positivo (Reactivo A) y 10 l de suero control negativo
(Reactivo B) respectivamente a los pocillos recubiertos con antgeno vDVB y a los
pocillos correspondientes con antgeno control. Para confirmacin, se recomienda correr
los controles de suero por duplicado.
C. Aadir 10 l de la muestra de suero a un pocillo recubierto con antgeno vDVB y a
los pocillos correspondientes con antgeno control. Las muestras pueden ser procesadas
individualmente o en duplicado. Sin embargo para propsito de confirmacin se
recomienda correr las muestras en duplicado.
Continuar con el paso No 3.
2. Agitar la placa en agitador por unos segundos. Sellar la microplaca e incubar a 37C
por 1 hora o durante la noche (16-20 horas) a 2-8C.

48

3. Enjuagar las placas 3 veces con solucin PBS-Tween: en cada ciclo de enjuague,
rellene los pocillos, vace la placa y golpela sobre una superficie cubierta con material
absorbente para eliminar todo resto de lquido.
4. Aadir 100 l del conjugado HRP a cada pocillo e incubar a 37C por 1 hora.
5. Repetir el paso No 4.
6. Aadir 100 l de de la solucin substrato a cada pocillo e incubar por 10 minutos a
temperatura ambiente (18-25C).
7. Interrumpir la reaccin aadiendo 50 ul de solucin frenadora a cada pocillo y
mezclar bien. Aadir la solucin frenadora en el mismo orden en que llen con solucin
de substrato en el paso No 7.
8. Medir la densidad ptica (DO) de las muestras y controles a 450 nm con un lector de
Elisa para microplacas (aire como blanco). Medir la densidad ptica (DO) dentro de 15
minutos despus de haber agregado la solucin.
3.3.3.3 Criterio de validacin
Los valores de control deben clasificarse dentro de los siguientes lmites:
DO(corr)

Control positivo > 0,5

PP

Control negativo, incubacin corta < 5

En el caso de que cualquiera de estos criterios no se cumpla, la prueba no es vlida. Para

las pruebas no vlidas, probablemente la tcnica no sea la indicada y la prueba debe
repetirse. Para confirmar los resultados de la prueba, deben interpretarse por igual y por
separado los valores duplicados de PP positivos y negativos. En caso de discrepancia, se
recomienda repetir la prueba.
3.3.3.4. Clculos.
Los clculos de resultados se realizan en dos pasos:
1. Valores de Densidad Optica Corregidos (DO(corr))

49

DO(corr) = DO vDVB DO Control

2. Valores positivos porcentuales (PP)
Todos los valores de DO corregidos de las muestras y controles negativos se relacionan
con el valor de DO corregido del control positivo.

PP =

DO(corr) Muestra o Control negativo

-------------------------------------------- X100
DO(corr) Control positivo

3.3.3.5 Interpretacin de los resultados

Muestra

PP

Interpretacin

Suero

< 10
10

Negativo
Positivo

3.4. ANLISIS DE DATOS

3.4.1 Frmula de prevalencia
La seroprevalencia fue determinada por la siguiente frmula descrita por (Thursfield,
1990) Y expresada en porcentaje:

% PREVALENCIA = Nmero de muestras positivas

Total de muestras

x 100

3.4.2- Anlisis estadstico

Los datos cualitativos fueron procesados mediante la prueba de Chi - cuadrado
considerando los factores como edad, sexo, estado reproductivo y vacas con
antecedentes de aborto; cuya frmula es el siguiente (Thursfield, 1990).

50

C=2

( AxB )( BxC)N /2 [ N ]
( A+ D ) (C + D)(A +C)(B+ D)
X

IV RESULTADOS Y DISCUSIN
4.1.

PREVALENCIA
CUADRO 4. Seroprevalencia de la diarrea viral bovina en la cuenca lechera del distrito
de Moquegua -2014
Vacunos evaluados

81

Vacunos con anticuerpos contra el vDVB Prueba ELISA

Nmero positivos

24

29.63

El cuadro 4, muestra la prevalencia del vDVB de 29.63% (24/81) en el distrito de

Moquegua , estos animales muestreados con apariencia clnica normal presentaron
anticuerpos contra el vDVB mediante la prueba de ELISA indirecta, lo que podra
indicar que dichos animales tuvieron contacto con el agente viral en campo en algn
momento de su vida, ya que una vez que ingresa el virus, los anticuerpos pueden ser
detectados en el suero desde tres semanas despus de una infeccin aguda hasta por
51

aos en animales inmunocompetentes (Sandvik, 1999) , descartando de esta manera el

ingreso del virus a travs de la vacunacin, ya que los productores del distrito de
Moquegua no usan la vacuna contra el vDVB.
La seroprevalencia del vDVB encontrada en el presente estudio en Moquegua, es muy
superior

a lo obtenido en el 2011 por

la Subdireccin de Anlisis de Riesgo y

Vigilancia Epidemiolgica (SARVE) de la Direccin de Sanidad Animal (DSA) del

SENASA, no obteniendo ningn animal positivo a la prueba de ELISA de un total de 51
muestras en el departamento de Moquegua. As mismo la prevalencia que obtuvimos en
el distrito de Moquegua es superior en comparacin con otros departamentos a nivel
nacional, 6 de ellos (Arequipa, Ica, Loreto, Pasco Tumbes y Moquegua) dieron
resultados negativos a la prueba de ELISA. Y los departamentos restantes tienen una
prevalencia de 0.24% (Cusco) y 10.95% (Lambayeque). Esta ltima prevalencia es la
mayor a nivel nacional, y le siguen Piura (8.14%), Tacna (5.66%), Ancash (5.42%), y
Huancavelica (4.09%)

observndose en la tabla No 2 con el total de animales

muestreados a nivel nacional y por departamentos (SENASA, 2011).

De la misma manera los datos obtenidos de 29.63 % de seroprevalencia es inferior con
relacin a otros estudios puntuales realizados en las principales cuencas lecheras del
pas mostrndonos prevalencias superiores a los que obtuvimos, tal es el caso de la
cuenca lechera de Arequipa, indicando que el vDVB tiene una prevalencia de entre 50
a 80% en bovinos (Rivera, 2001) en

Majes un 47.2% de bovinos

positivos a

anticuerpos contra el vDVB de 286 muestras de suero sanguneo (Juan et al., 2007). En
tanto que en el valle de Lima se encontr una prevalencia del 56% en bovinos de
crianza intensiva (Aguilar et al., 2006). En el Valle del Mantaro se determin una
prevalencia de ms del 70% de infeccin del vDVB (Contreras et al., 2000), mientras
que en Ayacucho se determin una prevalencia de 85% (Rivera, 2001) y en Puno una

52

prevalencia de 47% encontrndose 176 vacunos positivos de 377 muestras de una

poblacin total de 91710 bovinos (Quispe, 2008), as mismo en la microcuenca de
Ccaipa, provincia de Espinar, Cusco se encontr una prevalencia alta de 56.2%
encontrndose 228 bovinos positivos a la prueba de neutralizacin viral de 406 bovinos
de una poblacin de 1805 vacunos de tres comunidades indicando que esto se debe al
gran nmero de ferias ganaderas que existen en la zona, los que facilitan la transmisin
del virus (Crdenas, 2009).
La seroprevalencia hallada en el estudio realizado como se puede apreciar es inferior,
comparada a los resultados encontrados en estudios realizados en las principales
cuencas lecheras del pas, de amrica y otros pases, lo que evidencia que el virus est
ampliamente difundido en el mundo y el pas, siendo un factor importante para esta
elevada prevalencia

la presencia de los bovinos persistentemente infectados

constituyendo la principal fuente de infeccin y reservorio del virus, eliminando

grandes cantidades de virus a travs de sus secreciones, en forma constante y durante
toda la vida (Morn et al., 2006).
Sin embargo en el presente estudio no se identific terneros persistentemente infectados
debido a que los productores se deshacen de los terneros (machos), disminuyendo la
probabilidad que estos lleguen a ser toros persistentemente infectados y que diseminen
la enfermedad. Adems por lo general los PI son pequeos al nacimiento, con escaso
desarrollo y ganancia de peso, dbiles y con cuadros recurrentes de enfermedad
respiratoria y digestiva (Kelling, 1996). La disminuida presencia de animales
persistentemente infectados

explicara la baja prevalencia y difusin de esta

enfermedad en el distrito de Moquegua.

Otro factor que explicara la menor seroprevalencia en los hatos muestreados en el
distrito de Moquegua es que estn conformados por pocos animales con un promedio

53

de 10 animales, evitando de esta manera el hacinamiento.

El manejo, el medio

ambiente, la proporcin de animales susceptibles, la proporcin de animales

portadores del virus, la densidad del rebao (hacinamiento), y la virulencia de las
cepas del vDVB en el rebao evitan o favorecen la transmisin (Rush et al., 2001). As
mismo el medio ambiente especficamente el clima del distrito de Moquegua est
caracterizado por un ambiente seco y radiante sol durante todo el da, desactivndose el
vDVB fcilmente por calor, desecacin, luz ultravioleta (Tremblay, 1996).
El resultado negativo encontrado por el SENASA se debera a que evaluaron pocos
animales, 51 vacunos de toda la regin y trabajaron con 5 hatos, en comparacin con
nuestro estudio con 81 bovinos de 32 hatos. Adems que este virus es de rpida
diseminacin y es transmitido rpidamente en ferias ganaderas con la adquisicin de
reproductores con DVB de lugares con presencia de esta enfermedad (Rivera, 2001).
4.2.

SEGN EDAD
CUADRO 5: Seroprevalencia del virus de la diarrea viral segn edad en la cuenca
lechera del distrito de Moquegua 2014.

Edad

Edad

Nmero de
animales

meses

N. Animales con anticuerpos

Contra el v DVB prueba ELISA
No positivos
%

Menores a 2 aos

24

31

9.68

Mayores a 2 aos

24

50

21

42.00

81

24

29.63

Total
Chi-calculado = 8.10

Chi-tabular 0.01, 1= 6.63

P 0.01

Los resultados observados en el cuadro No 5, los animales menores a 2 aos y

mayores a 2 aos mostraron 9.68% y 42 %, respectivamente, mostrando que la mayor
proporcin de animales prevalentes pertenece al grupo de animales mayores a dos aos,
el que

tiene similitud con la investigacin realizada en el Valle de Lima

determinndose que el virus fue ms prevalente en los animales mayores a 2 aos,

54

donde se examinaron a hembras mayores a 6 meses de doce rebaos lecheros (Aguilar

et al., 2006). Esto tambin es similar a lo obtenido en otro estudio realizado por
Rivera en el ao 2001 en el Valle del Mantaro Per donde tuvo mayor prevalencia
en el grupo de vacas (94,2%) seguido por vaquillas (46,3%) y terneras mayores a
6 meses (35,3%) observndose claramente la mayor prevalencia en animales mayores.
En la provincia de Melgar-Puno, se ha reportado que la prevalencia en animales
mayores a 2 aos es de 53.6% y en los animales menores de 2 aos era de 36.6%
atribuyendo esta diferencia a continuas reinfecciones de los vacunos y a los anticuerpos
inducidos por el virus de campo (Quispe, 2008).
En Argentina se estudiaron tres categoras de animales de 6 a 12 meses, 1- 2 aos y
mayores a 2 aos encontrndose en la regin del sudeste de Buenos Aires en 2936
muestras se obtuvieron menores prevalencias en el grupo de 6 a 12 meses con
41,9% que en los animales mayores a 2 aos con 90,7%(Oden et al., 2003).
Estos datos son similares a los obtenidos en el presente estudio, donde las
prevalencias aumentaron segn la edad, las mismas al ser analizadas con la prueba chicuadrada reflejaron diferencias significativas (P0.01), indicndonos que los animales
mayores de 2 aos muestran la mayor prevalencia con infeccin del vBVD en
comparacin a los bovinos menores de 2 aos,
Esta superioridad puede deberse por el mayor tiempo de exposicin de los animales
mayores, con una mayor oportunidad de infeccin al vDVB, ya que animales que se
infectan naturalmente con la enfermedad producen anticuerpos por varios aos y a
veces de por vida(Rivera, 2001)
4.3.

SEGN SEXO
CUADRO 6: Seroprevalencia del virus de la diarrea viral bovina segn sexo en la
cuenca lechera del distrito de Moquegua 2014.

55

Nmero de
Sexo
animales

Nmero de animales con anticuerpos

Contra el v DVB
No de positivos
% Positivos

Hembra

77

Macho

23

25.00

Total

81

1
24

29.63

Chi-calculado = 0.13

29.87

Chi-tabular 0.05, 1= 3.84

P0.05

Los datos obtenidos en el presente estudio de 29.87% para hembras y 25% para machos
tienen similitud a lo encontrado en Melgar Puno con una seroprevalencia en machos de
29.5% de (13/44) y en hembras 48.9% (163/333), atribuyendo esta diferencia a que los
machos en los hatos son pocos y que reciben un trato diferencial con respecto al resto
del hato, por lo que estn menos expuestos al agente viral por permanecer aislados del
rebao y de otras especies, sabiendo que una de las caractersticas de los pestivirus es
su habilidad de cruzar la barrera de la especie, el vDVB ha sido detectado
serolgicamente y por aislamiento viral en otros ungulados domsticos y silvestres
como ovinos, porcinos, alpacas, llamas, alces, ciervos, venados y jirafas (Nielsen et al.,
2000). A diferencia de las hembras, que tienen la funcin de reproducirse, pasando en
su vida por cambios fisiolgicos y hormonales que los hacen ms vulnerables y ms
predispuestas a infectarse,

por encontrarse en mayor contacto con el agente viral

(Quispe, 2008). Adems esto podra deberse a que en la mayora de los predios visitados
existen muy pocos toros, utilizando la inseminacin artificial como mtodo de servicio,
el motivo de no contar con machos reproductores, es el costo de mantenimiento de estos
animales y por tener pocas vacas en el hato entre 6-12 animales por productor.
El chi calculado para la seropositividad y el sexo fue de 0.13, valor inferior respecto al
Chi tabular (P0.05), por lo que no existe diferencia estadstica significativa.

56

4.4.

SEGN ESTADO REPRODUCTIVO

Estado
reproductivo

Nmero de animales con anticuerpos

Nmero de

Contra el v DVB
No de positivos
% Positivos

animales

PREADAS

33

11

33.33

NO PREADAS

22

10

45.45

NO APLICA*
26
3
11.53
Total
81
24
29.63
CUADRO 7: Seroprevalencia del virus de la diarrea viral bovina segn Estado
reproductivo (preadas y no preadas) en la cuenca lechera del distrito de Moquegua
-2014.
*por ser toro, torete, ternera y vaquilla.

Chi-calculado = 0.39

Chi-tabular 0.05, 1= 3.84

P0.05

En el cuadro podemos observar la seropositividad para las vacas preadas y para las
vacas vacas, 33.33% y 45.45% respectivamente, mostrando un porcentaje ligeramente
mayor de seropositividad para las vacas vacas.
A la prueba de Chi cuadrada para determinar la existencia

de una diferencia

estadstica significativa entre la seropositividad y el estado reproductivo, dio un valor

de 0.39 valor inferior al Chi tabular (P0.05) mostrando que no existe diferencia
estadstica significativa. No obstante la ligera diferencia que se observa podra deberse
a que el vDVB en hembras es el agente causal de ooforitis intersticial no purulenta,
con necrosis de clulas de la granulosa y de oocitos produciendo de esta manera una
disfuncin ovrica, por lo que las vacas seropositivas pueden estar vacas (Grooms,
1998). Adems la replicacin del virus en clulas del oviducto puede alterar la secrecin
de factores embriotrpicos que permiten el normal desarrollo embrionario, ocasionando
muerte embrionaria y repeticiones de servicios, los hallazgos ms notables en stos
hatos pueden ser el aumento de servicios por concepcin, y en el intervalo partoconcepcin (Vanroose et al., 2000)
4.5.

SEGN ANTECEDENTES DE ABORTO.

57

CUADRO 08: Seroprevalencia del virus de la diarrea viral bovina segn los
antecedentes de abortos en la cuenca lechera del distrito de Moquegua 2014.
Antecedentes de

Nmero de

Nmero de animales con anticuerpos

aborto
animales

No de positivos

Contra el v DVB
% Positivos

ABORT

66.67

NO ABORT

43

17

39.53

NO APLICA*
Total

32
81

3
24

9.38
29.63

Chi-calculado = 0.67
Chi-tabular 0.05, 1= 3.84
*por ser toro, torete, ternera, vaquilla y vaquillona.

P0.05

En cuanto a las vacas con antecedentes de abortos, se obtuvo 66.67% para las vacas que
han presentado aborto y 39.53% para las vacas que no han abortado, observndose una
seroprevalencia superior para las vacas que han presentado aborto. En Melgar-Puno se
report un

34.3% de bovinos hembras seropositivos

con antecedentes de aborto

(Quispe, 2008), y en LABVETSUR Arequipa encontraron una prevalencia de 35% en

vacas con antecedentes de aborto (Manrique y Teran, 2002), mencionando que el aborto
en los bovinos tiene diversas etiologas y no necesariamente en todos los casos estara
implicado el vDVB (Quispe, 2008). Sin embargo cuando se aplica la prueba de Chi
cuadrado calculado obtuvimos 0.67, siendo este valor menor que Chi tabular (P0.05)
demostrando que no existe diferencia estadstica significativa entre la seropositividad y
los antecedentes de aborto. La aparente superioridad encontrada en el presente estudio
se debera a que el vDVB cuando infecta a una vaca o vaquillona preada y no inmune,
el virus es capaz de atravesar la barrera placentaria e invadir al feto, lo cual ocurre con
gran eficiencia causando la muerte del feto (Moennig y Liess, 1995).

58

V. CONCLUSIONES

La seroprevalencia de diarrea

viral bovina fue 29.63%, (24/81) evaluados

mediante el Ensayo inmunoabsorvente ligado a enzimas , reflejando la existencia de

la difusin y transmisin del virus en la cuenca lechera del distrito de Moquegua.

La seroprevalencia de diarrea viral bovina en animales menores a 2 aos fue menor

comparado a los mayores de 2 aos (P0.01).

La seroprevalencia de diarrea viral bovina en animales machos

hembras

mostraron similaridad (P0.05). La seropositividad al vDVB no est asociada al

sexo de los bovinos.

La seroprevalencia de diarrea viral bovina en vacas gestantes y en vacas vacas no

mostraron diferencias (P0.05).

La seroprevalencia para vacas con antecedentes de aborto y sin antecedentes,
igualmente no se encontraron diferencias estadsticas (P0.05).

59

VI. RECOMENDACIONES

Realizar capacitaciones, sensibilizando a los productores sobre las cuantiosas

prdidas econmicas que causa la enfermedad en la reproduccin del ganado

vacuno.
Evitar la

infectados con el vDVB evitando de esta manera la difusin del virus en el hato.
Implementar medidas de bioseguridad para evitar la difusin de la enfermedad

adquisicin de reproductores o animales PI provenientes de hatos

(control de personas, movimiento de animales entre hatos, el uso de semen

certificado).

60

VII. BIBLIOGRAFA CITADA

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VIII ANEXOS
ANEXO 1. Prueba de Chi-cuadrado entre la variable edad y la seropositividad de los
animales.
Tabla de contingencia
Edad

Resultado vDVB
Negativo

Positivo

Total

< 2 aos

28

31

Recuento

90.32%

9.68%

100.0%

%> de
2 edad
aos

29

21

50

58.00%

42.00%

100.0%

Recuento

57

24

81

70.37%

29.63%

100.0%

Recuento% de edad
Total

Ji-calculado = 8.10

Ji-tabular 0.01, 1= 6.63

P 0.01

ANEXO 2. Prueba de Chi-cuadrado entre la variable sexo y la seropositividad de los

animales.
Tabla de contingencia
Sexo

Hem bra
% de Sexo

Resultado vDVB
Recuento

Negativo
54

positivo
23

70.13%

29.87%

75

Total
77
100.0%

Macho

Recuento

% de Sexo

75.00%

25.00%

100.0%

57

24

81

Total Recuento
%
Ji-calculado = 0.13

70.37%
29.63%
100.0%
Ji-tabular 0.05, 1= 3.84
P0.05

ANEXO 3. Prueba de Chi-cuadrado entre la variable estado reproductivo y la

seropositividad de los animales.
Tabla de contingencia
Estado Reproductivo

Preadas

Resultado vDVB

Recuento

% de Preadas

positivo
11

33

66.67%

33.33%

100.0%

12

10

22

54.55%

45.45%

100.0%

34

21

55

61.82%

38.18%

100.0%

No preadas Recuento
% de no preadas
Total

Recuento

%
Ji-calculado = 0.39

Total

Negativo
22

Ji-tabular 0.05, 1= 3.84

P0.05

ANEXO 4. Prueba de Chi-cuadrado entre la variable antecedentes de aborto y la

seropositividad de los animales.
Tabla de contingencia
Antecedentes de aborto

Resultado .vDVB
Negativo
Positivo

76

Abort

Recuento

33.33%

66.67%

100.0%

26

17

43

% no abortonas

60.47%

39.53%

100.0%

Total Recuento

28

21

49

% de abortonas
No abort

Recuento

%
Ji-calculado = 0.67

57.14%
42.86%
Ji-tabular 0.05, 1= 3.84

100.0%
P0.05

ANEXO 5. Ficha individual por bovino aplicada a los productores del distrito de
Moquegua
FICHA INDIVIDUAL POR BOVINO
Nombre del propietario
Nombre establo N. total de bovinos del establo: .No muestra.
Identificacin del bovino: Raza Sexo. edad.N. del animal No Arete..
Clase de animal a la que pertenece
Ternera
( )
Vaquilla
( )
Vaca 1er parto
( )
Vaca 2do parto
( )
Vaca 3-5 partos
( )
Torete
( )
Toro
( )
Estado Reproductivo:
preada ( ) Vacia ( )
Este animal presento diarrea:
Si ( ) No ( ) No sabe ( ) Observ
Naci en el establo:
Si ( ) No ( ) No sabe ( ) Observ
Recibi vacunacin:
Si ( ) No ( ) No sabe ( ) Observ
Contra que enfermedad se vacun
Diarrea viral
( )
Rinotraqueitis
( )
Neosporosis
( )
Brucelosis
( ) ..
Leptospirosis
( ) ..
77

Tubo la vaca algn aborto:

Si ( )

No ( )

No sabe ( ) Observ

Presenta repeticiones de celo despus de ser empadrada: Si ( ) No ( ) No sabe ( )

Tipo de Servicio ltimo: monta natural ( ) inseminacin artificial ( ) Fecha
Procedencia del toro en I.A. Regional ( ) Nacional ( ) Importado ( )Nombre ..
Presento diarrea de enero a la fecha Si ( ) No ( ) No sabe ( )
Desparasita a sus animales

Si ( ) No ( ) No sabe ( )

Fecha .
Fecha .

...
Firma y DNI

78