MATERIAL:

- Microscopio
- Algodn
- Alcohol
- Aceite de Inmersin
- Vaselina
- Portaobjetos (plano)
- Cubreobjetos
- Vaso de precipitados
- Agitador
- Asa bacteriolgica
- Palillo de madera
- Mechero de Bunsen
- Agua destilada
- Glucosa
- Levadura
PROCEDIMIENTO:
Tcnica de la Gota Pendiente
1. Se prepara la muestra en el vaso de precipitados:
levadura al 5%, e igual manera, la glucosa al 5%, en
donde la levadura inactivada, pasa a ser activada con la
glucosa, y funcionar como nutriente.
Nota: La muestra tiene un color translucido.
2. Aforar a 100 ml. con agua destilada, y se agita.
3. Se colocan unos puntos de vaselina en los bordes del
portaobjetos, en forma de cruz, de derecha a izquierda y
arriba hacia abajo, a un mismo tamao del cubreobjetos.
4. Se enciende el mechero de Bunsen.
5. Despus de terminada la reaccin de fermentacin, se
toma un asa bacteriolgica que previamente debe ser
esterilizada con fuego del mechero, se espera que se
enfre retirndolo a 1 cm. y posteriormente, se introduce
al fondo de la muestra, hasta que toque la parte lquida.

6. La gota de muestra se lleva al portaobjetos, y con

cuidado, se centra el cubre objetos por encima, que ser
sellado con las los puntos de vaselina ya agregados.
7. Se vuelve a esterilizar el asa bacteriolgica.
8. Una vez que haya quedado fijo, se voltea para que la
gota quede pendiente, y listo para usarse se procede a
su observacin.
9. Con el objetivo de 10x se alcanza a ver un poco los
pequeos crculos.
10.
Posteriormente, se agrega una gota de aceite de
inmersin, y se cambia a la lente de inmersin.
Nota: Se debe hacer correctamente, para evitar tronar el
cubreobjetos. Si est bien enfocado, no hay necesidad de
utilizar el anillo macromtrico, que se utiliza para
enfocar, solamente el micromtrico, para dar nitidez.
Como la muestra es translucida, se va a batallar un poco,
pero se tiene que centrar y concentrarse muy bien en lo
que se est viendo, y no confundir las levaduras con
burbujas de aire.

Para ver la estructura interna de las levaduras:

Preparacin de Frotis (fija y teida)
1. Se toma un asa bacteriolgica y se esteriliza al rojo vivo,
se deja enfriar retirndolo a 1 cm. de la flama y
posteriormente se introduce en la espuma, hasta el
fondo de la muestra en la parte lquida.
2. La gota atrapada se lleva al portaobjetos, se centra y se
extiende con la misma asa bacteriolgica.
3. Se vuelve a esterilizar el asa y se pone en su lugar.
4. El portaobjetos se toma de un extremo y se pasa por la
flama del mechero, para que con la accin del calor se
fije al vidrio; se va a secar la parte lquida y se va a
quedar fija.
5. Posteriormente, en las varillas de vidrio que se
encuentran en los vertederos, se coloca el portaobjetos y
se agregan unas gotas de colorante (violeta), solamente
en el lugar donde se vea la muestra.
6. Se deja intacto por 2 minutos aproximadamente.
Nota: Con este tiempo es suficiente para que la anilina
(colorante) atraviese la estructura de las levaduras y
queden teidas.
7. Una vez que hayan pasado los 2 minutos, se abre la llave
del agua, se toma de un extremo el portaobjetos y se va
a enjuagar, por los dos lados, y entre mayor colorante se
tumbe, ser mejor.
8. Se pone a secar a temperatura ambiental, y una vez
seco, se puede proceder a observar en el microscopio, se
enfoca con el objetivo de 10x, despus se agrega una
gota de aceite de inmersin, y se pasa al objetivo de
100x.

Nota: Con la tincin, se logra ver muy a fondo la

estructura interna de las levaduras ms claramente, que
estn en etapa de reproduccin.

RESULTADOS:
Morfologa:
Son muy
parecidas
a
bacterias
macroscpicamente pero son ms cremosas y los colores que
presentan son blancos, beige o un poco ms oscuros. En esta
ocasin presentan una forma esfrica y son de color blanco.
Movilidad: Lenta.
Estructura interna:
Pared celular: Las levaduras presentan partes de una clula
completa: pared celular y protoplasma; ste ltimo contienen
la membrana fundamental (plasmalema), el citoplasma y el
ncleo. La pared celular o cpsula en muy delgada o gruesa
seg la edad de la clula y especie de levadura; est formada
principalmente de polisacridos constituidos por mananas, glucanas y algo de quitina.
Membrana fundamental: Tiene estructura, constitucin y
funciones semejantes a las de otras clulas y en los
fenmenos de plasmosis se contrae junto con el
citoplasma. Juega un papel importante en la regulacin del
flujo de todos los materiales tanto hacia el interior como hacia
el exterior de la clula.
El citoplasma: En l se encuentran diversas estructuras
metaplasmticas
(mitocondrias,
vacuolas
y
retculo
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endoplasmtico), as como granulaciones para plasmticas

(glucgeno y glbulos metacromticos).
El ncleo: Est rodeado por una doble membrana. En su
interior se alberga un rea densa, en forma de media luna, a
la que se denomina nuclolo. Los cromosomas no son
distinguibles, pero hay pruebas genticas que indican la
existencia de al menos 17 pares y varios fragmentos en las
clulas diploides. El ncleo siempre est muy cercano a la
zona donde est la gema (clula con otra al lado o encima).
La estructura del ncleo de las levaduras puede variar segn
el grupo taxonmico al que pertenecen
Reproduccin: Gemacin.

Proceso asexual, en el cual la clula progenitora reparte sus

constituyentes celulares con una clula hija (sin divisin del
ncleo); las dos clulas son iguales en su madurez.

Tcnica de la Gota Pendiente

fija y teida

Preparacin