MATIAS NAVARRETE

Biologa
Profesor Eduardo
Cepeda
III Medio Electivo

UN MEDIO DE CULTIVO
IDEAL
Esterilizado Perfecto

Biologa
III Medio Electivo

Objetivo:
Este proyecto lo he realizado para poder lograr distintos objetivos. Uno de ellos y
el principal es el determinar el procedimiento ms adecuado y efectivo al momento
de crear un ambiente esterilizado para cultivar bacterias.
Otros objetivos, por el cual he realizado este experimento son: lograr una
manipulacin adecuada al momento de manejar objetos esterilizados. Tambin
aprender a mantener un ambiente limpio para trabajar el medio de cultivo y
experimentar distintos procedimientos para cultivar bacterias.

Introduccin:
Las bacterias son microorganismos constituidos por una sola clula. Es seguro
que nadie las ve, las huele o las siente pero estn escondidas en todos lados 1.
En la cita anterior nos podemos dar cuenta de que las bacterias son clulas
invisibles y peligrosas al mismo tiempo. Existen diferentes mtodos con los cuales
podemos ver y darnos cuenta de qu bacterias son las que nos rodean. Uno de
los mtodos es el cultivo de bacterias. Tenemos una variedad de medios de cultivo
en donde las podemos cultivar. Una forma casera es hacer una mezcla entre caldo
Maggie y gelatina, la cual no fue eficiente, ya que se contaminaba el medio de
cultivo. Otros medios de cultivo se pueden hacer con reactivos qumicos como el
medio Luria-Bertani (LB) o el medio Terrific Broth (TB).
Adems de necesitar un medio de cultivo ideal, las bacterias necesitan
caractersticas adecuadas para poder desarrollarse. Una de ellas es el ambiente,
ya que las bacterias con cierta temperatura se desarrollan con mayor facilidad 2.
Existe una variedad de medios que sirven para el cultivo de bacterias, y por ese
mismo motivo es que tuve que investigar y encontrar el ms adecuado para mi
proyecto.
El medio de cultivo que escog es el medio Luria-Bertani (LB), que segn lo
investigado es una sustancia ideal para el cultivo de cepas de E.coli 3.

1 http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/BacteriasDesarrollo.htm
2 http://facultad.bayamon.inter.edu/yserrano/crecimiento%20microbiano.htm
3 http://www.rubilabor.com/productos-y-servicios/categoria/promociones-yofertas/24/medio-de-cultivo-lb-luria-bertani/175/

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Eduardo Cepeda

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Las cepas de E.coli compone el 80 % de la flora intestinal, su funcin es de

proteger a la flora intestinal de cualquier bacteria patgena (causante de
enfermedades) y participa en la produccin de vitamina K. La gran mayora de las
cepas E.coli son inofensivas pero estas cepas tambin tienen algunas que pueden
ser patgenas, las cuales pueden causar enfermedades en el hombre tales como,
gastroenteritis infantil, entero agregativas, enterotoxignicas, patgenas extra
intestinales, entre otras4.
Este tipo de patologas pueden ser transmitidas de muchas maneras tales como,
la carne vacuna cruda o insuficientemente cocida, carne contaminada por contacto
con materias fecales, frutas y verduras frescas lavadas con agua contaminada,
zumos de fruta no pasteurizados, leche cruda y la ms comn y habitual es la de
llevarse las manos sucias a la boca.
Para realizar esta investigacin realic tres procedimientos con el objetivo de
poder lograr un ambiente de cultivo esterilizado. Ocupando diversas estrategias
para mantener el lugar de trabajo en perfectas condiciones: limpio y desinfectado.
Este informe detalla, analiza y explica los procedimientos usados para lograr los
objetivos planteados. El cmo y por qu se realizaron los cambios y distintos
procedimientos para el logro de los objetivos.

4 http://salud.kioskea.net/faq/6720-e-coli-escherichia-coli-cepas-patogenassintomas-y-diagnostico

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Procedimiento Experimental:
Para que este experimento fuese efectuado de manera correcta, consider:

3 La Capsulas de Petri
Olla a presin
Peptona trpsica de casena
Extracto de levadura
NaCl
LB agar
Alcohol
Paraflin
Papel craft
Agua oxigenada
Matraz
Vaso de precipitados

Los pasos a seguir son:

Para comenzar tuve que tomar ciertas precauciones. Como este proyecto
est enfocado en un ambiente esterilizado, siempre hay que mantener un
ambiente limpio y desinfectado. Para poder lograrlo necesite alcohol junto
con la toalla nova para limpiar la mesa en donde manipul las cpsulas de
Petri ya esterilizadas. Un detalle muy importante que tuve que tener en
cuenta, es que en la mesa de trabajo tena que haber un mechero, el cul
debe permanecer encendido en todo momento para evitar que se generen
bacterias en el aire. Nunca olvid lavarme las manos y siempre tuve la
precaucin de no contaminrmelas.

En una primera accin tuve que usar delantal blanco, mesa de trabajo
limpia y desinfectada con alcohol y manos esterilizadas. Luego prosegu
con la limpieza de las cpsulas de Petri. En primer lugar las limpi con agua
y jabn para eliminar las mugres que podran tener. Luego, con la ayuda de
un vaso precipitado con agua oxigenada, enjuague cada una de las placas,
para as eliminar cualquier resto de suciedad. Cuando las cpsulas estaban
limpias las puse en una bandeja con toalla nova y las dej secar. Cuando
ya estaban secas las envolv todas juntas con papel craft y amarr este
papel con scotch.

El tiempo es algo muy importante en este proyecto por ese mismo motivo
tuve que aprovecharlo y organizarlo muy bien.

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Mientras que las cpsulas se estaban secando, empec a trabajar en el

medio de cultivo, para as ganar tiempo. La mezcla la realic en el matraz.
Como en mi proyecto quiero hacer tres placas, necesit 200ml de la
mezcla. Comenc pesando cada reactivo, para luego ponerlos en el matraz.
Necesitamos:

NaCl 2g
Peptona trpsica de casena 2g
Extracto de levadura 1g
LB agar 3g

Cuando cada reactivo ya estaba pesado y depositado en el matraz, proced

a colocar 200ml de agua oxigenada y revolv hasta que todo se haya
disuelto. Para terminar tap el matraz con un pedazo de papel craft y lo
asegur con lana.

Cuando tuve la mezcla y las cpsulas listas, las auto-clav. Primero

coloqu agua en una olla, pero muy poca, slo la necesaria para generar
suficiente vapor. En el interior de la olla coloqu un pote de plstico y sobre
l puse las placas envueltas en papel, esta forma las placas no tocaron el
agua pero recibieron el vapor del agua. Tambin puse el matraz sobre el
pote con la mezcla. Esto lo dej por 20 minutos para que el auto- clavado
fuese exitoso.

Llegu al momento ms importante, en donde no deba cometer ningn

error. Cuando ya pasaron los 20 minutos, proced a sacar las capsulas y el
medio de cultivo de la olla, teniendo siempre la precaucin de lo caliente
que estaban todos los materiales. Muy importante fue que mis manos
estuvieses siempre desinfectadas con alcohol. Prosegu sacando el papel
craft que utilic para envolver las cpsulas y coloque cada cpsula junto
con el medio de cultivo que estaba en el matraz sobre la mesa previamente
desinfectada y con el mechero prendido. Esper a que todo se enfriara.

Cuando las cpsulas y el matraz estaban a una temperatura manipulable,

comenc a colocar el medio de cultivo al interior de las cpsulas,
directamente del matraz. Luego las tap dejando un pequeo espacio con
el objetivo que saliera el vapor generado por la mezcla. Dej que las
sustancias se solidificaran en ese mismo lugar.

Cuando el medio de cultivo ya estaba solidificado, cerr totalmente las

placas. Luego us parafix para sellar las placas. Cort tres pedazos de
parafix y procede a cerrar las cpsulas. Siempre tuve en cuenta tener mis
bellas manos desinfectadas.

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Una vez que las placas estaban listas, las coloqu en una incubadora a
una temperatura de 20 grado. Esta es la temperatura ideal para el
desarrollo de bacterias.

Esper 24 horas para observar las placas y ver los resultados.

Registro de Datos:
Procedimiento Nro. 1:
-Temperatura ambiental: 20 grados aprox.
Cpsulas

Control 1

Infectada 1

Infectada 2

Da 1
Temperatura
Ambiental

Da 2
Temperatura
Ambiental

Se pueden ver
pequeas
manchas blancas
que son bacterias,
por la mitad y el
contorno
Se ven muchas
manchas blancas
(bacterias)
y
tambin hongos.

Da 3

Ya
no
son
pequeas
manchas blancas
sino
que
ya
crecieron y han
salido hongos.
Adems de seguir
viendo
las
manchas blancas
han
aparecido
manchas rojas y
hongos
Al igual que la Se ven los mismos
infectada uno se cambios que en la
ven
manchas infectada
uno,
blancas y hongos.
manchas blancas,
hongos y manchas
rojas.

Limpio las placas

eliminando
el
medio de cultivo,
inicio un nuevo
procedimiento
Limpio las placas
eliminando
el
medio de cultivo,
inicio un nuevo
procedimiento
Limpio las placas
eliminando
el
medio de cultivo,
inicio un nuevo
procedimiento

Observacin:
Comenc mi experimento con el objetivo de comparar placas infectadas y placas
totalmente esterilizadas, lo que no result y me llev a reenfocar mi proyecto, con
el objetivo de lograr una esterilizacin perfecta.

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Procedimiento Nro. 2:
-Temperatura Ambiental: 10 grados aprox.
Cpsulas

Control 1
(Procedimiento
normal)

Control 2
(Procedimiento
nuevo)

Infectada 1

Da 1
Temperatura
Ambiental

Da 2
Temperatura
20 grados

Da 3
Temperatura
20 grados

No se ve ninguna
bacteria
en
la
cpsula.
Est limpia

Han salido entre 5

a
6
manchas
blancas
por
el
entorno
de
la
cpsula
Al igual que el
control 1 se ven
manchas alrededor
de la cpsula pero
no en el centro
Se ven machas
blancas y hongos
por toda la cpsula
en el centro y en el
contorno de la
capsula

Las
manchas
blancas se han
esparcido en la
placa y ya estn en
todos lados.
Tambin
ha
aumentado
la
cantidad
de
manchas blancas y
salen hongos
Han
aparecido
manchas rojas y la
cantidad
de
hongos y manchas
blancas
han
aumentado

No se ven seales
de bacterias en la
cpsula

Tampoco se ven
manchas lo que
me lleva a pensar
que
hay
otra
variable influyendo

Observacin:
En el da 1 las tres placas estn completamente limpias, incluso la que estaba
infectada, esto me llevo a deducir que la temperatura estaba influyendo en el
crecimiento de bacteria por lo que tuve que poner las cpsulas en una incubadora.
En el da 2 se ven en el control 1 y 2 manchas blancas en el contorno de la
cpsula (teniendo en cuenta de que el control 2 tiene un procedimiento distinto).
Lo que me lleva a concluir que el procedimiento no es el errneo sino la
manipulacin que le estoy dando.

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Procedimiento Nro. 3:
-Temperatura ambiental: 10 grados aprox.
Capsulas

Control 1

Control 2

Control 3

Da 1
Temperatura
20 grados

Da 2
Temperatura
20 grados

No
se
ven Apareci
una
manchas blancas, pequea mancha
est limpio
en al contorno de
la cpsula
Al igual que en el Solo se ve una
control 1 no hay pequea mancha
bacterias
pero en el centro
de la cpsula
No hay seales de Al igual que las
bacterias ni de ltimas
dos
hongos
cpsulas solo hay
una
pequea
manchas.

Observaciones:
El experimento sale tal como lo esperaba, las placas no se contaminan y he
encontrado el procedimiento, los pasos y las precauciones adecuadas para lograr
una esterilizacin correcta.

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Anlisis:
En un principio, la primera idea que tuve para este proyecto fue comparar dos
jabones, uno anti-bacterial y un jabn comn y corriente. Para esto utilic caldo
Maggie y gelatina, para crear un medio de cultivo en donde pude cultivar las
bacterias. Realic este procedimiento dos veces, los cuales no me resultaron, ya
que el medio de cultivo no era el indicado, esto fue porque los materiales estaban
contaminados y adems porque la manipulacin que le estaba dando no era la
indicada.
Este error me llev a reenfocar mi proyecto, buscando un nuevo objetivo.
Determinar el procedimiento ms adecuado y efectivo al momento de crear un
ambiente esterilizado para cultivar bacterias. As comenc a realizar un
procedimiento nuevo, para el cual ocupe un nuevo mtodo de cultivo, llamado
medio Luria-Bertani (LB)5.
En el procedimiento nro. 1, utilic tres distintas cpsulas: control 1, infectada 1 y
infectada 2 (vase en registro de datos). El procedimiento normal constaba de
colocar las placas y el medio de cultivo al interior de la olla a presin y autoclavarlas, para luego sacarlas y colocarlas en una mesa desinfectada e introducir
en cada cpsula el medio de cultivo para despus trabajarlas segn sus
caractersticas.
Durante los tres das que las placas fueron evaluadas. El control 1, cpsula que no
fue contaminada, se contamin. Se podan ver bacterias tanto como en centro y
en el contorno de la cpsula. En la infectada 1 y 2, las cpsulas se vieron ms
infectadas que el control 1. Se vean hongos y bacterias por todos lados. Pero esto
no era el resultado que esperaba, sino que el control 1 estuviera completamente
limpio.
Al analizar el error que tuve en el procedimiento, me di cuenta que existan dos
variables que podan estar influyendo en el resultado de este mismo. La primera
variable podra ser el procedimiento que utilic, tal vez no era el adecuado o no
5 http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/1805/4.MATERIAL_METODOS.pdf?
sequence=5

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estaba cumpliendo la funcin de auto-clavar. O simplemente la manipulacin que

le di a las cpsulas no fue la adecuada, no tome las precauciones de limpieza, no
me lave las manos o no desinfecte la mesa de una manera correcta.
A consecuencia de esto, pens en un nuevo procedimiento, con la esperanza de
lograr mi objetivo, pero al mismo tiempo me enfoqu en la segunda variable: la
manipulacin de las placas. Para as dar origen al procedimiento nro. 2, en donde
utilic tres placas: control 1 (procedimiento normal), control 2 (procedimiento
nuevo), infectada 1.
El procedimiento que ocupe para el control 2, fue el de alterar los pasos del
procedimiento 1. En el procedimiento nuevo coloque el medio de cultivo en el
control 2 y la coloque en el interior de la olla, para que al momento de sacarla al
exterior no tuviera que abrirla y arriesgarme a que se contaminara.
Al pasar un da y revisar cada placa, me di cuenta que, tanto como el control 1,
control 2 e incluso en la infectada 1, no exista ninguna seal de bacterias. Esto
me hizo reflexionar y empec a analizar que pudo causar esto. Compare el
procedimiento 1 con el procedimiento 2 y descubr que la nica diferencia era el
cambio de temperatura ambiental. En el procedimiento 1 la temperatura era de 20
grados aproximadamente y en el procedimiento 2 la temperatura ambiental cambi
a casi 10 grados aproximadamente. Como bien sabemos las bacterias son
microorganismos y estos se reproducen mejor y ms rpido a temperaturas cerca
de los 37 grados y si la temperatura llega a disminuir el crecimiento tambin
disminuye.6
Gracias a esta informacin, encontr el por qu las bacterias no se desarrollaban,
lo que me llev a poner cada cpsula en una incubadora, en donde el ambiente se
mantendra a una temperatura de 20 grados aproximadamente.
Al pasar el da 2 al interior de la incubadora y ver los resultados, encontr que en
la placa infectada 1, las bateras haban crecido notablemente. Esto me llevo a
confirmar que la temperatura si fue un factor que impidi el crecimiento. Por otro
lado, en los controles 1 y 2, si se encontraron bacterias, pero en esta ocasin eran
menos que en el procedimiento 1. Tanto en el control 1 y 2 la poca cantidad de
bacterias (entre 5 a 6), solo se encontraban por alrededor y no en el centro de la
cpsula.
Si nos enfocamos en el control 1 del procedimiento 2 (procedimiento normal), solo
se encontraron bacterias en el contorno de la placa. Si analizamos el control 2 del
procedimiento 2 (procedimiento nuevo), las bacterias al igual que el control 1 solo
se encontraron en el contorno de la placa. Si analizamos este resultado, podemos
darnos cuenta que tanto el procedimiento normal y el nuevo, son eficientes y que
la variable que deca: el procedimiento que utilic no es el adecuado, es
6 http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/BacteriasDesarrollo.htm

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incorrecta. Pero si analizamos bien los lugares en donde las bacterias se

desarrollaron, podemos ver que solo fueron en el contorno de la cpsula y que el
centro est completamente limpio.
Si volvemos a analizar la segunda variable, la manipulacin que se le da a las
placas no es la adecuada y lo relacionamos con el actual resultado, podemos
llegar a inferir y confirmar que esto es cierto, debido a que como ya reiter en el
control 1 y 2 del procedimiento 2, las bacterias se encuentran en el contorno, sea
que esa bacteria ingreso por la orilla o los pequeos espacios que quedan al tapar
la cpsula, por un tema de manipulacin poco higinica.
Esto me lleva a replantearme y crear un tercer procedimiento, el procedimiento
nro. 3, en donde utilic 3 cpsulas, control 1, control 2 y control 3, todas con el
protocolo normal, para as poder obtener un resultado ms exacto.
Despus de analizar cada error que encontramos en los resultados del
procedimiento 1 y 2, comenz chequeando la temperatura ambiental y en el
momento que hice el procedimiento 3 era de 10 grados aproximadamente por lo
que tuve que colocar las cpsulas en la incubadora. Adems tuve extrema
precaucin con mis manos y con todo lo que rodeaba a la cpsula para as no
contaminarlas.
Al ver las placas el da 1 pude notar que tanto en el control 1, 2 y 3 no haba seal
de bacterias, pero para poder tener un resultado ms exacto espere un da ms. Al
segundo da, en cada placa se vea un pequeo punto blanco en el contorno de la
cpsula, pero en general estaba muy limpia, a pesar de esa pequea bacteria,
todo lo dems estaba libre de contaminacin.
Finalmente el objetivo lo haba logrado, encontr el procedimiento correcto y la
forma correcta de manipular cada placa, logrando un resultado perfecto para
poder as tener un ambiente totalmente esterilizado.

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Conclusin:
A pesar de todo lo experimentado, los errores y los logros, pude llegar a mi
objetivo principal, el cual era determinar el procedimiento ms adecuado y efectivo
al momento de crear un ambiente esterilizado para cultivar bacterias.
No fue fcil encontrar el procedimiento, adems de tener que pasar por una ardua
investigacin e invertir tiempo experimentando, tambin tuve que relacionar y
entender distintos factores que pudieran estar influenciando mis resultados, tales
como la temperatura, los materiales a usar y la higiene.
En este proyecto no fue fcil llegar al camino correcto, ya que tuve que hacer
varias investigaciones. Muchas veces uno descubre cosas por ensayo y error y
gracias a ellos uno puede corregir lo que hizo, para as lograr el objetivo propuesto
con xito. Me cuesta creer que en un comienzo el objetivo de mi proyecto era
totalmente distinto al actual y con el transcurso de los resultados y errores, este
objetivo se modific.
Gracias a esto aprend una variedad de cosas, ahora s cmo lograr una
manipulacin adecuada frente a objetos esterilizados, s que precauciones hay
que tomar y lo precavido que hay que ser. Adems aprend cmo mantener un
ambiente desinfectado y que hay cosas tan simples como el fuego y el alcohol que
pueden mantener un ambiente limpio e higinico. Tambin pude experimentar con
distintos reactivos qumicos. Aprend de diferentes medios como el medio LuriaBertani (LB) o el medio Terrific Broth (TB) y adems pude conocer diferentes
procesos de esterilizacin y diferentes procedimientos que me llevaron a encontrar
el adecuado para mi objetivo.
Principalmente mi proyecto estaba enfocado en las bacterias, por lo cual tuve que
investigar sobre ellas. En un principio no conoca lo que eran las cepas E.coli, y
gracias a todo lo que investigu, ahora conozco con claridad lo que son. Pero no
simplemente aprend informacin de conceptos o definiciones, sino que tambin
gan la experiencia de cultivar la perseverancia frente a un objetivo. Estuve cerca
de dos meses en este proyecto, casi durmiendo en el laboratorio, estando ah
todas las maanas, incluso postergando mis recreos.

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Cada vez que pienso o veo a doctores operando pienso en el trabajo que deben
realizar para mantener un ambiente limpio. Deben tener todas sus manos
desinfectadas e incluso el ambiente y sus materiales. Tal vez yo no me podra
llegar a comparar con ellos, pero ahora entiendo y comprendo lo complicado que
debe ser lograr un ambiente esterilizado, relacionndolo con lo complejo que fue
mantener mi mesa e implementos desinfectados.
Seguramente mis compaeros y otras personas, que estn en los dems
electivos, no entienden cmo puedo estar en biologa. Muchas veces se preguntan
el por qu elegir el electivo ms difcil, hasta yo mismo he dudado en cambiarme.
Pero siempre reflexiono que cuando algo es fcil de hacer y no me toma mucho
trabajo realizarlo, yo no aprendo realmente y no le tomo el real valor que debera.
A veces observo que si algo es difcil y cuesta llegar a tu objetivo, muchas
personas se pierde en el camino, pero siempre estn los que perseveran y lo
logran. Al final del camino uno se da cuenta de todo lo aprendido y toda la
experiencia ganada, la cual va a formar una parte muy importante en los distintos
proyectos de mi vida.
Como ya reiter este proyecto no fue fcil, tuve que pasar por muchos desafos,
invert mucho tiempo en l, pero al final de todo me siento contento con el
resultado. Gracias al profesor de ciencias, aprend muchas cosas tericas pero lo
ms importante es que me motiv a conocer y valorar la perseverancia, el cmo
organizar mi tiempo, agradecer los desafos y me mostr la disponibilidad y
voluntad que tiene l para acompaarnos en nuestros aprendizajes.
Este trabajo tambin me ha hecho reflexionar sobre mi vocacin, estaba muy
motivado con la informtica, la arquitectura, la mecnica y ahora gracias a este
proyecto la biologa es parte tambin de mis futuras inquietudes vocacionales.
Estoy muy confundido. Gracias profe.

Matas Navarrete Colegio Santa Cruz

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