CNCER DE MAMA:

CL ASIFICACIN
MOLECUL AR
J UA N E S T E B A N B A R R I O S
ME LI SSA BUI T RAGO
E DWA R C A S T I L L O
N ATA L I A F I G U E R O A
J O S I G N A C I O PA L E N C I A
A L B E RTO I S A AC S U R E Z
A N GI E VA LE N C I A

OBJETIVOS
Identificar las clasificaciones usadas para los
diferentes tipos de cncer de mama y sus
diferencias.
Determinar cuales son las ventajas de la nueva
clasificacin frente a las usadas anteriormente.
Analizar las principales alteraciones genticas y
moleculares en el cncer de mama.

CONTENIDOS
Qu se pensaba y aceptaba?
Clasificacin, progresin
Estudios que empezaron a hacer (inmunohistoquimica,
genmica)
Qu encontraron?
Nuevas propuestas

ANTES DE TODO

CLASIFICACIN HISTOLGICA
INICIAL

MODELO CLSICO
Modelo lineal basado en las diferencias histolgicas y
ciertas alteraciones moleculares a nivel del epitelio
mamario que determinan la progresin desde las fases pre
malignas tempranas:
Hiperplasia Ductal Atpica
Carcinoma Ductal in-situ

Alteraciones moleculares adicionales llevaran finalmente al

desarrollo del Carcinoma Ductal Invasivo.

MODELO CLSICO
a)
b)
c)
d)
e)

Carcinoma ductal infiltrante

Carcinoma lobulillar
Carcinoma tubular
Carcinoma mucinoso
Carcinoma micropapilar
invasivo
f) Carcinoma lobulillar
pleomrfico
g) Carcinoma medular
h) Carcinoma metaplsico
i) Carcinoma adenoice
quistico

PROGRESIN TUMORAL
Carcinoma ductal invasivo

Carcinoma lobulillar invasivo

Bombonatti et Sgroi. J. Pathology, 2011; 223(2): 307317.

 Tumores de seno son diversos en su historia natural y su respuesta al

tratamiento, que a su vez poseen una respectiva expresin gnica.
Con sistemas de transduccin que modifica la identidad celular
Se hace una caracterizacin de genes en 65 especmenes de 42
individuos usando estudios con microarrays de DNA con 8102 genes,
que fueron pareados. s (36 infiltrating ductal carcinomas, 2 lobular
carcinomas, 1 ductal carcinoma in situ, 1 fibroadenoma and 3 normal
breast samples)

DATOS DEL ARTICULO

Se utilizo marcadores con fluorescencia (Cy5 y Cy3) cDNA que
fueron preparados a partir de mRNA de cada muestra experimental.
20 de los 40 fueron emparejados dos veces.
Despus de la ciruga cada paciente fue tratado por 16 semanas con
dorubicina. Luego se resecaba todo el tumor.
Tumores primarios de 2 pacientes se emparejaron con ndulos
linfticos con metstasis del mismo paciente.
Se caracterizaron 17 lneas.
Se analizaron 84 cDNA en total.
Un mtodo de agrupacin jerrquica se utiliz para agrupar los genes
en base a la similitud en el patrn con el que su expresin vari sobre
todas las muestras.
Se enfocaron en 1753 genes de los 8102.

CONCEPTOS CLAVE QUE SE

VE EN LOS TUMORES
Los tumores muestran una gran variacin en sus patrones
de expresin gnica.
Variacin es multidimensional; es decir, muchos conjuntos
diferentes de genes muestran principalmente patrones
independientes de variacin.
Estos patrones tienen una orden generalizada de
relaciones entre los genes, entre los tumores y las
conexiones entre especificas de genes y tumores.

DENDOGRAMA

Define el concepto de subtipo intrnseco o

taxonoma molecular como patrones de expresin
gnica que puede ser tiles para definir
taxonmicamente ciertas morfologas de los tumores
de seno. Siendo til para la aplicacin de tratamientos
ms eficientes.

IDENTIFICACIN DE LOS
SUBTIPOS INTRNSECOS
Pereu y T. Sorlie en el 2000, estudian 65 tejidos con cncer de seno de 42 pacientes, adems
de 19 lneas celulares analizadas por microarrays, donde crean varios clsteres.
Pereu y T. Sorlie en el 2001 usan adicionalmente otros 78 tejidos.Nuevos grupos

En 2003, repiten el proceso con 3 sets de genes independientes de

Noruega/Stanford, vant Veer y West data, que les permiten confirmar ciertos
subtipos.
2007, J.I. Herschkowitz y C.M. Perou, adicionan subtipo claudin-low.
Se plantea el paradigma de firmas genticas.

IMPORTANCIA DE LA
TIPIFICACIN HISTOLGICA
Relacin de la patologa con la taxonoma
morfolgica y la posterior clasificacin con la
inmunohistoqumica.
B. Weigelt y J.S. Reis-Filho et al correlacionan el
subtipo intrnseco con la histologa.

DIFERENCIAS ENTRE
CARCINOMA DUCTAL Y
LOBULAR
Vas de mltiples pasos diferentes entre los carcinomas de
alto y baja grado de diferenciacin.
Prdida de la heterocigosidad (LOH) de 16 q en
carcinoma lobular y ductal in situ (DCIS).
16 q en carcinoma tubular y tbulo-lobular.
16q y los mecanismos de prdida de la funcin, la
metilacin del promotor, y / o mutacin del gen ( parcial o
total ) puede variar entre los diferentes subtipos
histolgicos.

CORRESPONDENCIA ENTRE EL
ANLISIS DE MICROARRAYS Y
SUBTIPO INMUNOHISTOQUMICO.

Revisin de las clasificaciones moleculares de

los subtipos de cncer de seno in situ y los
invasivos.

CLASIFICACIN
HISTOPATOLGICA
Cncer de seno in situ vs invasivo.
Cncer invasivo ms comn el carcinoma ductal invasivo
NST. (40%-75%)
Tipos especiales poseen firma gentica
comportamiento clnico y morfologa especial.

propia,

Sistema de clasificacin Bloom y Richardson. Que permite

caracterizar histolgicamente los tumores.
Pronstico por medio de la clasificacin.

BIOMARCADORES
Generalidades de los biomarcadores
Biomarcadores de rutina son: ER, PR y HER2.
ER ha sido utilizado desde mediados de la dcada de 1970,
tanto para predecir la capacidad de respuesta de el tumor
a la terapia endocrina y como factor pronstico para
recurrencia temprana y el resultado a largo plazo.
ER alfa vs ER beta.
PR o receptor de progesterona y su relacin con ER.
HER2 y su utilidad.
ER, PR y HER 2 negativo?
Otros biomarcadores ER beta, Ki-67 y AR

CLASIFICACIN MOLECULAR
Anlisis de prdida de heterocigosidad y CGH

CLASIFICACIN
MOLECULAR.
Perfiles de expresin gentica
Inmunohistoqumica
Genmica
Clasificacin integral
Mutational signatures
Tipos especiales

PEROU Y COLS.

ER +

Luminal A
Luminal B

ER -

Basales
HER2

Subtipo apocrino
molecular: AR+, ER-

Luminal A

Luminal B

Alta expresin genes

ER, PR
Baja expresin de
genes asociados a
proliferacin.
Carecen de
expresin her-2

Baja expresin de ER
Alta expresin de
genes asociados a
proliferacin
Sobreexpresin de
her-2

HER2

Basales

Tumores alto grado

No expresin genes
ER, PR
Expresa genes propios
Alta expresin her-2

Tumores alto grado

No expresin genes
ER, PR
Expresin
citoqueratina
Carecen de expresin
de her-2

ES TUDIOS
INICIALES

MODELO DE MLTIPLES VAS

SUBTIPOS INTRNSECOS
Luminal Carcinomas tubular, mucinoso
(diferenciacin neuroendocrina) y
neuroendocrino. Carcinoma micropapilar y
lobular invasivo.
Subtipo basal-like Carcinoma medular,
adenoide y qustico. Carcinoma de mama
metaplsico (Claudina baja).
Subtipo apocrino Carcinoma apocrino y
carcinoma lobular pleomorfico.

TAXONOMA MOLECULAR

TAXONOMA MOLECULAR

TAXONOMA MOLECULAR

NUEVOS
ES TUDIOS

CLASIFICACIN GENTICA
DEL CNCER
Tumores en un mismo
tejido difieren en
alteraciones cromosmicas
Similitudes genmicas entre
tumores en diferentes
tejidos.
Dos grandes subgrupos.

 Clase M (Mutaciones)
Clase C (Copias)
Mutacin TP53

Siempre una pero no la otra

Formacin de hiprbola

CLASE M
KIRC, GBM, LAML, COADREAD,
UCEC
Dos grandes subgrupos
PI3K y AKT
APC, TP53 y KRAS

Aminocidos mutado recurrentes

ARID1A
CTCF
M15-M17: Mutaciones puntuales

CLASE C
OV, BRCA, LUCS, HNCS, UCEC-Seroso
Cromosoma 8
Caractersticas
Inactivacin de TP53
Amplificacin del MYC
Alteracin del ciclo celular

GENMICA Y
TRANSCRIPTMICA DEL
CNCER DE SENO
La variacin del genoma afecta la arquitectura de la expresin
tumoral.
Se habla de variantes en cis cuando la variacin en un locus
acta sobre la expresin del mismo y trans cuando acta sobre
otras regiones del genoma.

Se encontraron dos variantes de la lnea germinal y aberraciones

somticas que influyen en la arquitectura de expresin tumoral:
CNAs (Aberraciones en
nmero
de
copias
somticas) se asociaron
con el mayor nmero de
perfiles de expresin de
las variables hereditarias
de cncer de seno, pero
fueron
renombrados
como SNP para explicar
la mayor proporcin de
variacin en la expresin
en las bases de todo el
genoma, la contribucin
de las CNV fue ms
moderada.

 Las asociaciones cis tienden a ser ms fuertes.

El 20% de las expresiones de CNAs exhiben una
asociacin en cis

Los locus que transaccionales modulan un mayor

nmero de molculas de ARN mensajero.

ABERRACIONES
TRANSACCIONALES
Se han detectado asociaciones positivas y negativas
as como numerosos focos de aberracin
transaccionales en los locus de los cromosomas 1q,
7p, 8, 11q, 14q, 16, 17q y 20q.
El locus del receptor de clulas T (TCR) en los
cromosomas 7 (TRG) y 14 (TRA) representan dos
puntos de acceso que modulan 381 y 153 mRNAs
nicos, respectivamente, as como 19 genes regulados
dualmente.

ABERRACIONES
TRANSACCIONALES
mRNAs
afines
Activacin y proliferacin de
clulas T, presentacin de clulas
dendrticas y activacin de
leucocitos.
induccin de una respuesta
inmune adaptativa asociada con
linfocitos infiltrantes de tumor

NUEVA
P ROP UES TA

FUNDAMENTO
El cncer puede desarrollarse a partir de:
Variantes heredadas: SNPs y CNVs.
Modificaciones genticas somticas adquiridas:
mutaciones puntuales y CNAs.
Las CNAs representaron la mayor variabilidad en
expresin, sobretodo en posicin cis.

Formulacin de una visin integrada de

clasificacin en la que se estudi la genmica y
transcriptmica de 2000 tumores de seno,
conocida como METABRIC.

METABRIC
MOLECULAR TAXONOMY OF
BREAST CANCER INTERNATIONAL
CONSORTIUM

El anlisis de los clusters

de nmero de copias
articuladas y de los datos
de expresin de los
genes asociados a cis
revelaron 10 nuevos
subgrupos moleculares:

QU SE HIZO?
Evaluaron el acercamiento en
983 muestras independientes,
para las que el nmero
combinado
de
copias
y
clasificacin por expresin de
genes
IntClust
estaba
disponible.
Luego, compilaron un grupo de
datos consolidados externo,
compuesto de 7,544 tumores
ms.

INTCLUST 1
Tumores positivos para ER, principalmente clasificados en el
subtipo intrnseco Luminal B.
Pronstico intermedio.
Alta proporcin de mayor proliferacin.
Inestabilidad genmica relativamente alta.
Mayor prevalencia de mutaciones en GATA3.
Amplificacin del locus 17q23 asociada a la sobreexpresin de
genes adyacentes en cis.

INTCLUST 2
Tumores positivos para ER, e incluye los el tipo tanto
Luminal A como Luminal B.
Tienen el peor pronstico de todos los tumores ER+
(sobrevida a 10 aos del 50%)

Caracterstica molecular comn: amplificacin

del locus 11q13/14.

INTCLUST 3
Tumores de tipo Luminal A, mas tumores de subtipos
histopatolgicos de buen pronstico como el
carcinoma invasivo lobular y carcinomas tubulares.
Dan el mejor pronstico (sobrevida a 10 aos del 90%).
Se puede potencialmente tratar con quimioterapia simtrica.
Baja inestabilidad gentica, prevalencia muy baja de
mutaciones en TP53 y escasas alteraciones que actan en
cis.

INTCLUST 4
Es nico. Incorpora tumores ER+ y ER-, 26% de los
tumores triple negativos y una mezcla de subtipos
intrnsecos, incluyendo los casos basal-like.
Desenlace favorable (Sobrevida a 10 aos en 80%).
Subtipo ms grande (17% del total).
Muy poca inestabilidad gentica. Patrn de elevada
infiltracin a ganglios.
Se ha observado la presencia de linfocitos T maduros en el
tumor.

INTCLUST 5
Tumores con ERBB2 amplificado, conformados por Los HER2 +
ER(-)(58%) y los Luminales ER(+)(42%).
Previa a la disponibilidad general de Trastuzumab, este grupo
posea la peor sobrevida a 10 aos (48%).
Edad temprana (comn para cncer HER2 positivo), con
tumores de alto grado y afectacin de ganglios linfticos
regionales.
Agrupa a todas las personas que podran beneficiarse por la
terapia dirigida relacionada a HER2 como un solo subtipo.

INTCLUST 6
Tumores ER(+), abarca casos tipo Luminal A y B.
Pronstico intermedio. Sobrevida a los 10 aos de 60%
Amplificacin del locus 8p12 y alta inestabilidad gentica.
Regin comnmente amplificada en cnceres de tipo
ER(+).

INTCLUST 7
Principalmente tumores Luminales A ER(+).
Buen pronstico. Sobrevida a 10 aos en 80%.
La mayora son tumores de bajo grado y bien
diferenciados que presentan positividad tanto para ER
como para PR.
Ganancia especfica en 16p, y prdida en 16q y alta
frecuencia en amplificacin de 8q.

INTCLUST 8
Tumores ER(+) predominantemente del subtipo intrnseco
luminal A.
Similitudes con IntClust 7.
De bajo grado y bien diferenciados. Buen pronstico con
sobrevida a 10 aos en 80%.
Ganancia de 1q con prdida de 16q.
Se identifican bien en los carcinomas ductales invasivos de bajo
grado.

INTCLUST 9
Incluye una gran cantidad de casos ER(+) del
subgrupo Luminal B.
Pronstico intermedio, Sobrevida a los 10 aos en
un 60%.
Alteraciones que actan en cis en 8q y
amplificacin de 20q. Alta frecuencia de delecin de
PPP2R2A en el cromosoma 8, con IntClust 1 y 6.

INTCLUST 10
Integra tumores triple negativos del subtipo ncleo basal-like.
Mal pronstico antes de los 5 aos. Despus de los 5 aos
mantiene un pronstico relativamente bueno.
Edades jvenes, tumores de alto grado y pobremente
diferenciados.
Alteraciones en el nmero de copias que implican la prdida
de 5q y ganancias en 8q, 10p y 12p.

PERFILES DE EXPRESIN DE GENES

Los subtipos Intclust son

reproducibles entre estudios.

entidades

Para comparar tambin clasificaron tumores

en los subtipos intrnsecos usando los
clasificadores PAM50 y SCMGENE.

PATRONES DE SOBREVIDA
REPRODUCIBLES
Predicciones fueron mejores en cncer de seno ER postivos,
particularmente durante los 5 aos posteriores, comparados
con enfermedad por ER negativos.
Intclust se desempea tan bien como la clasificacin basada en
transcriptoma en la prediccin de sobrevida sin recada.

QUIMIOSENSIBILIDAD
Respuesta patolgica completa: tumor que, luego de
la ciruga, no hay clulas tumorales residuales durante
examinacin patolgica. Es predictor poderoso de
sobrevida a largo plazo.

QUIMIOSENSIBILIDAD
Las ms altas tasas de RCP en la subtipificacin IntClust
fueron encontradas en el subtipo 10, con un 37%.
(31% del basallike de PAM50, y ER-/HER2- 27% en
SCMGENE).
Las tasas ms bajas fueron en intclust 2 con 0%
(6% en el luminal A y ER+/HER2- un 8%).

CONDUCTORES GENMICOS
Estimaron la variacin en expresin de genes dentro
de cada subtipo molecular, tanto para genes dentro
de regiones de amplificacin, como para genes dentro
de regiones de delecin.
El promedio, tanto en amplificaciones como en
deleciones es un valor positivo (0,05 y 0,03).

Imagen tomada de Ali et al. Genome Biology 2014.

RESULTADOS
Los subtipos IntClust son reproducibles en un largo
meta anlisis, muestran validez clnica y capturan de
la mejor manera variaciones en los conductores
genmicos. IntClust es una clasificacin de cncer
de seno basada en conductores y es probable que
se vuelva cada vez ms relevante a medida que ms
terapias dirigidas biolgicamente estn disponibles.

PERSPECTIVAS
La clasificacin de Perou dio las bases para realizar un anlisis ms
completo de los subtipos de cncer de mama, haciendo una
integracin entre factores moleculares, genticos, inmunolgicos e
histolgicos
Los nuevos estudios realizados han permitido correlacionar diferentes
tipos de cncer para general estratgias teraputicas multiorgnicas
Cada vez existe una mayor tendencia realizar tamizajes de tumores
pequeos para analizar su tipo histolgico y realizar una integracin
con marcadores moleculares.

PERSPECTIVAS
Los 10 IntClust demuestran la clara heterogeneidad presente en
tumores clasificados de acuerdo a la expresin de ER, PR, y
HER2 y dividen en grupos separados a todos los tumores
previamente clasificados en grupos intrnsecos.
La clasificacin no se
neoadjuvante.

ve

afectada por

quimioterapia

Es posible asignar de manera confiable subtipos intclust

basndose solo en material de biopsia.
En general, se encontraron proporciones similares de todos los
10 subtipos comparando con el estudio METABRIC, as como la
composicin relativa de cada subtipo segn subtipos
intrnsecos.

MUCHAS
GRACIAS