INVERTASA DE LEVADURA

INTRODUCCIN
En esta prctica vamos a ver la accin de la invertasa y calcularemos entre otras
cosas la velocidad de la reaccin que cataliza. La actividad enzimtica se pone de
manifiesto incubando el sustrato juntamente con la enzima y posteriormente
paramos la reaccin y medimos colorimticamente la reduccin del cido 3,5dinitrosaliclico que es lo que nos va a determinar la velocidad de la reaccin. Se
basa en que la sacarosa no contiene tomo de carbono anomrico libre y por lo
tanto no es un azcar reductor.
La enzima invertasa cataliza la hidrlisis de la sacarosa a glucosa y fructosa,
frecuentemente a esta reaccin se denomina inversin. La invertasa se puede
conseguir de clulas de levadura que se rompen por auto lisis, centrifugando y
tomando el sobrenadante.

Objetivo del practico.

En el presente trabajo prctico se realizar la extraccin de la invertasa de
levadura y, posteriormente, se
verificar su accin sobre una solucin de sacarosa. La misma se comprobar
mediante el test de Fehling, el cual
permite detectar la presencia de los productos de la hidrlisis de este disacrido
(glucosa y fructosa)

Materiales

12 tubos de ensayo
Levadura
Reactivo A y B de Fehiling
Gradilla
Micropipetas
Almidon
Hidrxido de sodio
Sulfato de cobre

METODO EXPERIMENTAL

OBTENCION DE ENZIMA:

Colocar 7,5 g de levadura en un mortero y homogeneizar en 15 ml de bicarbonato

de sodio e incubarlo durante 20 minutos.
Filtrar el contenido de la enzima conocida como extracto enzimtico (EE), tomar
una alcuota de 2 ml del extracto y hervir.

PROCESO ENZIMATICO:

TUBO
1
2
3
4
5
6
7
8

Agregar a cada tubo de ensayo lo siguiente y dejar reaccionar durante 15 minutos

a temperatura ambiente.
SACAROSA
0,02 M
2
2
2
2
2
2
2
2

NaOH 0,5%
0
0
0
0
0.25
1
0
0

CuSO4
0.25%
0
0
0
0
0
0
0.25
1

EXTRACTO
CRUDO
0
0.5
1
0
1
1
1
1

EXTRACTO
HERVIDO
0
0
0
1
0
0
0
0

TUBO
9
10

SUCRALOSA 0.5%
2
2

EXTRACTO CRUDO
0
1

TUBO
11
12

ALMIDON 1%
2
2

EXTRACTO CRUDO
0
1

DETECCION DE LOS PRODUCTOS DE LA CATALISIS:

Agregar 1 ml de reactivo A de Fehing y 1 ml de reactivo B de Fehing a cada tubo y
calentar durante 1 minuto y dejarlos enfriar en la gradilla.

RESULTADOS

TUBO 1: Sacarosa + Reactivo A y B de Fehling

TUBO 2: Sacarosa + EE + Reactivo A y B de Fehling
TUBO 3: Sacarosa + EE + Reactivo A y B de Fehling
TUBO 4: Sacarosa + EEH + Reactivo A y B de Fehling
TUBO 5: Sacarosa + NaOH + EE + Reactivo A y B de Fehling
TUBO 6: Sacarosa + NaOH + EE + Reactivo A y B de Fehling
TUBO 7: Sacarosa + CuSO4 + EE + Reactivo A y B de Fehling
TUBO 8: Sacarosa + CuSO4 + EE + Reactivo A y B de Fehling
TUBO 9: Sucralosa + Reactivo A y B de Fehling
TUBO 10: Sucralosa + EE + Reactivo A y B de Fehling
TUBO 11: Almidn + Reactivo A y B de Fehling
TUBO 12: Almidn + EE + Reactivo A y B de Fehling

CONCLUSION

CUESTIONARIO

1.- Qu es el reactivo de Fehiling y que es lo que reconoce?

El reactivo de Fehling es una disolucin que se utiliza como reactivo para la
determinacin de azcares reductores. Sirve para reconocer la presencia de
glucosa o fructosa.

2.-Por qu la reaccin de Fehiling es negativa con sacarosa y positiva con

los productos de la hidrlisis por invertasa?
Porque el reactivo de Fehling no reconoce a la sacarosa como tal, sino que la
reconoce hidrolizada por la invertasa, es decir reconoce a los subproductos de
esta por separados, Estos son la glucosa y la fructosa.

3.-En el protocolo experimental realizado cual es e lrol NaOH agregado a

algunos de los tubos?
a.- es e sustrato sobr el que actua la enzima
b.- acelera la reaccin entre la enzima y el sustrato
c.- desnaturaliza la enzima por alterar su sitio activo
d.- bloquea el sitio activo de la enzima

4.-Cul es el objeto de realizar el primer tubo de la serie el cual contiene

solo sacarosa?
El fin de preparar el 1 tubo, que contiene solo sacarosa, se utiliza como muestra
blanca ya que permite identificar la actividad enzimtica, en los otros tubos, debido
a que el reactivo de Fehling solo reconoce a los subproductos de esta molcula,
entonces la reaccin dar negativo por no contener enzimas.

5.- Cul es la estructura de la sucralosa y que esperabas que ocurra con la

invertasa?
La sucralosa en su estructura posee: 12 tomos de carbono 7 tomos de
oxigeno- 3 tomos de cloro 11 tomos de hidrogeno. Lo que esperbamos que
ocurra con la invertasa es que se hidrolizara.