Reconocimiento y separacin de alcaloides presentes en la hojas de

borrachero (Brugmansia arborea) usando cromatografa de capa fina (TLC)

MARIANA CORTS ESCARRAGA, LUZ ESTEFANIA GUZMAN
Programa de Biologa, Facultad de Ciencias, Universidad del Tolima

Los mtodos de separacin nos permiten aislar o simplificar los componentes de

una mezcla de inters. Para realizar esta separacin se aprovechan las
propiedades fsicas y qumicas de los constituyentes, se han desarrollado un gran
nmero de mtodos para realizar tales separaciones: La infusin es la extraccin
de una mezcla o solucin soluble en agua a una temperatura mayor a la ambiente
y menor o igual a la del hervor; La filtracin es la separacin de partculas solidas
contenidas en un fluido, pasndolas a travs de un medio filtrante (papel filtro por
ejemplo) sobre el que se depositan los slidos. Por ltimo est la cromatografa
que es una tcnica de separacin que permite determinar los componentes de una
matriz mediante la distribucin de los analitos entre un medio quieto (fase
estacionaria) y uno que se mueve (fase mvil). ( Florez, M., 2011)
La extraccin de alcaloides es posible en parte gracias a la Cromatografa de capa
fina, la cual est conformada por tres partes; la placa que puede ser de vidrio,
aluminio u otro material inerte evitando que este influya o interacte con la fase
estacionaria. La fase estacionaria es un slido que puede ser slica gel (silanol) o
alumina, estos poseen una alta polaridad por lo que tratarn de retener los
analitos. la fase mvil es lquida, por lo general menos polar que la fase
estacionaria. De esta forma, los analitos menos polares estarn ms atrados por
la fase mvil que por la estacionaria, debido a la afinidad de las polaridades.
(Martinez,A., 2008) La relacin entre la distancia que recorri el analito y la que
recorri el disolvente desde el punto de inicio u origen se conoce como Rf (rate
factor) (Figura 1.)

Rf =

Distancia recorrida por el compuesto

Distancia recorrida por el disolvente

Figura 1. Factor de retencin, cromatografa de capa fina.

La importancia de aplicar estas tcnicas para la obtencin de alcaloides permite

describir y conocer nuevos compuestos que en ocasiones dan paso a la creacin
de medicamentos tiles para una gran variedad de afecciones. Esto teniendo en
cuenta que un gran nmero de medicamentos existentes hoy en da han sido
extrados de plantas que poseen algn tipo de alcaloide (Flores, 2011) siendo el
reconocimiento de ellos fundamental en la creacin de nuevas alternativas
teraputicas debido a su alta actividad biolgica.
Es sabido que las Solanaceae poseen tipos de alcaloides representativos de esta
familia tales como los derivados de ortinina y lisina. Principalmente los alcaloides
tropnicos. (Azcon Bieto y Talon 1993)
Dentro de estos se pueden encontrar la hiosciamina, la atropina, la escopolamina
o hioscina, los cuales tambin pertenecen a la categora de alcaloides de plantas
midriticas de esta familia, es decir, especies capaces de dilatar la pupila y que
tambin poseen propiedades parasimpatolticas.
OBJETIVOS

Reconocer y aplicar procedimientos que permitan la separacin de alcaloides

de Brugmansia arborea
Investigar los diferentes tipos alcaloides presentes en Brugmansia arborea por
medio de pruebas qumicas de coloracin y cromatografia de capa fina.
Aprender cmo elegir los eluentes correctamente teniendo en cuenta
caracteristicas del analito como la polaridad y la fuerza de elucin.

MATERIALES
Muestra

Hojas de Brugmansia arborea

Descripcin
A las Brugmansia se las conoce como borracheros, denominacin relacionada con
los usos de la planta que, en general, se asocian con su alto contenido de
alcaloides y, en particular, de escopolamina. Es frecuente la intoxicacin inducida
con fines delictivos, cuando se utiliza con depresores del sistema nervioso central
en una mezcla conocida como burundanga (lvarez, 2008).
Es una de las especies ms comunes en Colombia, su su rango altitudinal se sita
entre 1.600 y 3.000 msnm. Respecto a su nomenclatura, Brugmansia arborea (L.)
Lagerh es el nombre aceptado para nuestro borrachero, sinnimo de Datura
arborea L.
Esta planta se distingue por sus flores blancas grandes, de hasta 20 cm de largo,
con prolongaciones caudiculares en la corola de hasta 5 cm y fruto ovalado.
(Figura 2.)

Figura 2. Brugmansia arborea (L.) Lagerh.

Fase estacionaria (FE). Se trabaj con Silica gel sobre una placa de vidrio,
la cual no interviene de ninguna manera con la (FE)

Fase mvil (FM). Teniendo en cuenta los datos calculados sobre la

polaridad de la mezcla para la fase mvil se tuvieron en cuenta dos
opciones, para la capa etrea se us Benceno:Acetona (7:3) y para la capa
acuosa alcalina Cloroformo-Metanol (9:1).

Reactivos

Reactivo de Dragendorff, est compuesto por tetrayodo bismuto de

potasio y puede indicar la presencia del alcaloide con la formacin de un
precipitado naranja rojizo cuando se le adiciona a la solucin cida que
contiene los alcaloides.
Reactivo de Mayer: (mercurio tetrayoduro de potasio) Los alcaloides se
detectan como un precipitado blanco o de color crema soluble en acido
actico y etanol.
Reactivo de Erhlich: (p-dimetilamino benzaldehdo) En presencia de
alcaloides, se forma una coloracin naranja. (Arango, G., 2008; Navarro,
2002)
Reactivo de Tanred: en presencia de alcaloides forma un precipitado
amarillo lechoso.
Reactivo de Wagner: solucin de yodo - yoduro de potasio. Con la mayoria
de alcaloides forma un precipidato color caf
Reactivo de Mecke:
Reactivo de Valser:

Equipo: Cmara ultravioleta de 356 nm

PROCEDIMIENTO
Las determinaciones se hicieron a partir de hojas de Brugmansia arborea, secadas
en horno a 40C, trituradas antes de someterse a los procesos de separacin que
se explicarn a continuacin. (Figura 3)

8)Reactivo de Tanred,
Dragendorff, Mayer,
Wagner,Mecke, Erlich, y
de Valser

9) ensayo
cromatogrfico, ensayo
1: FE: Silica gel. FM:
Cloroformo-Metanol
ensayo 2: FE: Slica gel
FM: Benceno-Acetona

2) Colocar la muestra en
un erlenmeyer, aadir
EtOH y calentar al bao
mara mientras se agita.

7)Realizar las pruebas

cualitativas con cada
uno de los reactivos

10) Observacin de la
placa (ojo humano), UV y
posterior a la aspersin
con Reactivo de
Dragendorff y
calentamiento en estufa
a 105C

3)Filtrar (papel filtro),

apartar el marco y
agregar NaOH al
extracto etanlico y
luego ter de petrleo

6)A la capa etrea

agregar tambin HCl
hasta alcanzar pH cido

4)La mezcla formar dos

capas, una etrea y otra
acuosa alcalina,
separarlas por medio del
embudo de decantacin

5)A la capa acuosa

alcalina agregar HCl
hasta alcanzar un pH
cido

1) Secar el material
vegetal y triturar

Figura 3. Esquema de separacin

CALCULOS Y OBSERVACIONES
Determinacin de la polaridad de la mezcla y la Fuerza de elucin.
XA =

nx =

nA
n A +n B
Wx
f

Wx = (Vx) (x)
tot = (A . XA) + (B . XB)
Tabla 1. Caractersticas de los componentes de la mezcla de solvente
Solvente
Volumen
Densidad ()
W(g)
N (moles)
3
CHCl3
9
1.48 gr/cm
13.32
0.11
MeOH
1
0.7918 gr/cm3
0.7918
0.024
3
CHCl3
8
1.48 gr/cm
11.84
0.10
AcOEt
2
0.897 gr/m3
1.794
0.020
3
AcOEt
100
0.897 gr/m
89.7
1.01
MeOH
13.5
0.7918 gr/cm3
10.2934
0.322
3
H2O
10
1 gr/cm
10
0.55
3
Benceno
7
0.8765 gr/cm
6.1355
0.078
Acetona
3
0.791 gr/cm3
2.373
0.040
Tabla 2. Propiedades de la mezcla del solvente
Solvente
Polaridad
CHCl3-MeOH (9:1)
1.322

Benceno:Acetona (7:3)

0.807

Fuerza de Elucin
0.49
0.40

RESULTADOS
Pruebas cualitativas con reactivos cromognicos
Tabla 3. (-) ausencia del alcaloide, (+) poca presencia del alcaloide, (++)
moderada presencia del alcaloide, (+++) elevada presencia del alcaloide.
Tubo
1 - Tanred
2 - Dragendorff
3 - Mayer
5 - Erlich
6 - Mecke
7 - Valser

Capa etrea
+++
++
-

Capa acuosa alcalina

+++
++
+
+

Ensayo cromatogrfico
Tabla 4. Respuesta de las diferentes capas a cada una de las fases mviles
aplicadas.

Fase mvil A
(CHCl3-MeOH ) (9:1)
Fase mvil D
(Benceno:Acetona) (7:3)

Capa acuosa alcalina

Capa etrica

Separacin de algunos
analitos
Retencin de los analitos
en la fase estacionaria

Retencin de los analitos

en la fase estacionaria
Retencin de los analitos
en la fase estacionaria

Cromatografia de capa fina

2
1.5
1
0.5
0
Distancia recorrida

Fase mvil / capa

Grfica 1. Resultado de la distancia recorrida por el analito de acuerdo a la capa y

la fase mvil utilizada en cada uno de los casos.
Al realizar la cromatografa utilizando dos fases mviles (CHCl 3-MeOH 9:1 y
Benceno:Acetona 7:3) se obtuvo que la muestra corri con la fase mvil
Cloroformo-metanol, la cual tiene una polaridad mayor con respecto a la otra fase.
(Tabla 4)
Factor de retencin
Los datos tenidos en cuenta para la determinacin del factor de retencin fueron
los de la capa acuosa alcalina sometidos a la fase mvil a) Cloroformo-metanol
(9:1) ya que bajo estas condiciones se dio la separacin de los analitos

Rf =

Distancia recorrida por el compuesto

Distancia recorrida por el disolvente

Despus de obtener los resultados de la cromatografa se logr observar la

presencia de dos analitos a los cuales se les determin el valor del factor de
retencin correspondiente:
Teniendo en cuenta que la distancia recorrida por el solvente (frente del solvente)
fue de 2.4 cm.
Distancia recorrida por el analito No. 1 = 1.2 cm

Rf1 = 1.2 cm / 2.4 cm = 0.5

Distancia recorrida por el analito No. 2 = 1.7 cm

Rf2 = 1.7 cm / 2.4 = 0.7
Siendo as, el analito No.2 fue el que tuvo mayor afinidad por la fase mvil al
contrario de lo sucedido con el analito No.1 que present una mayor afinidad por
la fase estacionaria. (Grfica 1)

ANLISIS DE RESULTADOS

Reconocimiento de alcaloides por medio de pruebas cualitativas con

reactivos cromognicos.

Las tcnicas de reconocimiento de alcaloides se basan en la capacidad que

tengan estos para combinarse con yodo y metales pesados como el bismuto,
mercurio, tugsteno, entre otros. De esta manera la formacin de precipitados y/o
cambios de color indican la presencia o ausencia del alcaloide en la muestra.
(Arango, G., 2008)
Segn lo anterior y teniendo en cuenta el resultado de estas pruebas (Tabla 3.)
podemos afirmar que hay presencia de alcaloides ms no qu tipos de alcaloides,
pues estos reactivos slo evidencian la presencia o ausencia de estos.
Aunque estas pruebas no permitan la identificacin de un alcaloide especifico,
soportndonos en la literatura podemos inferir a qu tipo de alcaloide hace
referencia la prueba.
Ensayo cromatogrfico (Cromatografia de capa delgada)
Teniendo en cuenta la coloracin azul que se visualiza al someter la placa a la
camara UV de 365 nm y los datos reportados por algunos autores se puede
especular que los alcaloides que se encuentran presentes posiblemente sean del
grupo de la atropina, hioscina y hiosciamina. Estos pertenecen a los derivados del

ncleo tropnico de los cuales se ha reportado que el mayor contenido se

encuentra en las flores, seguido por el contenido de las hojas. (Arteaga, L. 1993;
Arango, G., 2008; Flores, M., 2011)
Es importante aclarar que dependiendo del tipo del mtodo de revelacin se
pueden apreciar la presencia de ciertos alcaloides. Por ejemplo, si se observan los
analitos a simple vista, ya que este no es un mtodo selectivo todos los
compuestos se manifestaran. Por otro lado, si se utiliza la radiacin UV dejar al
descubierto slo algunos alcaloides, aquellos que refracten a estas longitudes de
onda, en este caso 365 nm. Finalmente la utilizacin del revelador qumico
(Reactivo de Dragendorff) ser el ms la selectivo permitiendo ver slo algunos
compuestos, en los cuales la respuesta de la reaccin sea significativa.
Se pudo evidenciar la afinidad del analito por la fase mvil (cloroformometanol(9:1)) (Tabla 4, grfica 1) la cual posee mediana polaridad pues tiene un
valor de 1.32, (Tabla 2.) esto indica que el analito debe presentar una polaridad
media tambin y de ah se deriva su afinidad por la fase mvil. Por otro lado, el
valor de la fuerza de elucin de la fase mvil juega un papel importante en la
cromatografa ya que indica la capacidad que tiene el solvente de eluir al analito,
favoreciendo de esta manera la separacin de los alcaloides presentes en las
hojas del borrachero (Brugmansia arborea).
CONCLUSIONES

Mediante la cromatografa se puede reconocer la presencia de diferentes

analitos en este caso, alcaloides como hioscina, hiosciamina y tropina en el
extracto de hojas de Brugmansia arborea

Se evidenci una mejor separacin en la fase acuosa alcalina en

comparacin con la fase etrea al ser sometidas al eluente (cloroformometanol 9:1)

El xito de la separacin de los analitos de una mezcla se deriva en gran

parte de la buena eleccin de las fases, mvil y estacionaria.

la polaridad y la Fuerza de elucin son parmetros indispensables al

momento de escoger la fase mvil.

La realizacin de repeticiones en la prueba garantiza un mayor grado de

certeza y credibilidad en los resultados obtenidos.

REFERENCIAS
1. Arango, G - Alcaloides y compuestos nitrogenados (2008). Facultad de
qumica farmacutica, Universidad de Antioquia.

2. lvarez Meja, Luis Miguel. (2008). Borrachero, Cacao sabanero o

floripondio (Brugmansia spp.) un grupo de plantas por redescubrir en la
biodiversidad Lationamericana, 77-93
3. Martinez, A., Valencia, G., Jimenez, N., Mesa, M., Galeano, E., (2008),
Manual de practicas de laboratorio de farmacognosia y fitoquimica,
Departamento de farmacia, Facultad de quimica farmacetica, Universidad
de Antioquia, Pp: 15-19
4. Florez, M - Compilacin bibliogrfica Brugmansia spp. (2011), Facultad de
ciencias quimicas, Universidad Veracruzana., Pp: 27-32
5. Navarro, G., Fabiola, R., (2002), Comprobacin del efecto cicatrizante de
Peperomia scutellaefolia R. et. P., aspectos etnofarmacolgicos, botnicos y
estudio qumico. Programa Cybertesis PER, Universidad Nacional Mayor
de San Marcos.
6. Arteaga, L., (1993), Brugmansia una especie promisoria para la produccin
de alacloides del tropano, Revista colombiana de ciencias quimicofarmacuticas, Universidad Nacional de Colombia. Pp: 37 - 38