CROMATOGRAFA EN CAPA FINA Y EN

COLUMNA.
MECANISMOS CROMATOGRFICOS.
a) ADSORCIN: Gases o lquidos contenidos en la fase mvil son retenidos
por una adsorcin selectiva en la superficie del slido que constituye la
fase estacionaria. Este mecanismo controla la cromatografa gas-slido y
lquido-slido. La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la
superficie del material por la accin de fuerzas electrostticas.
b) REPARTO: Los componentes de la fase mvil son retenidos por la fase
estacionaria lquida en funcin de su solubilidad en ella. Si las dos son
lquidas se tiene un proceso de extraccin en continuo.
c) INTERCAMBIO INICO: La fase estacionaria constituida por un slido
intercambiando iones contenidos en la fase mvil lquida. El intercambio
de iones slido-solucin esta regulado por la afinidad qumica de los
iones con ambas fases y por sus respectivas concentraciones.
d) TAMAO MOLECULAR: Especies neutras de lato peso molecular pueden
ser separadas en virtud de su tamao donde la fase estacionaria es un
gel hidroflico altamente poroso que retiene las molculas de menor
tamao al de los poros. Las molculas de mayor tamao son retardadas
en su paso por pequeas fuerzas de adsorcin de la superficie externa
del gel que luego son excluidas de la fase estacionaria.
FASES MVILES Y ESTACIONARIAS.

Los mtodos cromatogrficos se utilizan con frecuencia en el laboratorio de

qumica orgnica con el propsito de separar mezclas de compuestos sintticos
o naturales y para la purificacin de diversas especies orgnicas, ya que de
esta manera se fraccionan los componentes de la mezcla. Tambin se puede
lograr la identificacin tentativa de compuestos mediante la comparacin de
stos con otros que se creen idnticos.
El trmino cromatografa (del griego chroma = color y graphos = escritura),
aunque implica color ha sido utilizado indistintamente para procesos en donde
se emplean materias coloridas e incoloras. En general, el mtodo presenta una
fase estacionaria, comnmente slida, la cual absorbe o adsorbe la mezcla por
separar y una fase mvil (lquido gas), que pasa sobre la fase estacionaria y
compite con ella por los constituyentes de la mezcla, presentando stos una
migracin selectiva a travs del sistema de dos fases.

As, la mayor o menor permanencia de los componentes de la mezcla sobre a

fase estacionaria al emplear diferentes fases mviles es la base del sistema
cromatogrfico; por otra parte, la tcnica seala la manera en que se desplaza
la muestra a travs de la fase estacionaria y tambin la fuerza con la que el
disolvente se adsorbe en dicha fase.
Cromatografa de reparto: Involucra una fase mvil, que puede ser un
lquido; se puede tratar el caso de cromatografa lquido-lquido (CLL), la
cual se lleva a cabo en celulosa y gel de slice hmeda. En el gel slice el
agua presente acta como soporte de la fase estacionaria, por lo que se
emplea para separar mezclas hidrosolubles. La separacin se efecta al
repartirse la sustancia entre la humedad del soporte y el eluyente que
fluye a su vez sobre ella. Tambin existe el caso cromatogrfico con gas;
gas-lquido (CGL) la cual involucra una fase estacionaria que presenta
una estructura anloga a la de las sustancias que componen la mezcla.
Para ello se crea una pelcula muy fina que hace la funcin de fase
estacionaria, la cual debe poseer baja volatilidad sobre el soporte slido,
por lo que aumenta as la superficie interfacial entre el gas y el lquido.
Cromatografa de intercambio inico: Involucra grupos funcionales
comunes de los intercambiadores inicos: grupos catinicos (como
SO3H, -CO2H. OH, -SH, -PO3H2, -NR3+) o grupos aninicos (como
NH2, -NHR, -NR2). Estos grupos funcionales se unen al covalentemente
a la fase estacionaria slida, lo cual es, por lo comn, una resina
constituida por grupos reactivos asociados a iones lbiles capaces de
intercambiarse con otros iones presentes en el medio que los rodea.
Consecuentemente, los iones de soluto, de carga opuesta a los de la
fase estacionaria, son atrados por esta ltima mediante una fuerza
electrosttica. La fase mvil es un lquido, con lo que el equilibrio de los
iones de soluto entre el disolvente y los sitios fijos (positivos o
negativos) cargados de la fase estacionaria fundamente este mtodo
cromatogrfico.
Cromatografa de adsorcin: Ideada por Tswett y reimplantada por
Kkuhn y Lederer en 1931. La separacin de los componentes de una
mezcla, se logra por las diferencias de equilibrio adsorcin-desorcion,
que los compuestos presentan sobre el slido estacionario. La adsorcin
es la capacidad de un sistema para detener o concentrar selectivamente
sobre su superficie gases o lquidos arrastrados por la fase mvil. As, en
un sentido cromatogrfico, el trmino adsorcin se refiere al resultado
de las fuerzas intermoleculares entre la superficie del slido y las
moleculas del soluto, ello como consecuencia de su interaccin debida a
una o mas de las siguientes causas:
a) Fuerzas de London (fuerza de atraccin neta dbil) entre todas las
superficies y molculas adsorbidas.

b) Fuerzas electrostticas entre las superficies polares y cualquier

molcula adsorbida o entre superficies no polares y molculas
polares adsorbidas.
c) Fuerzas de transferencia de carga entre donadores electrnicos
fuertes y aceptores.
d) Formacin de enlaces de hidrgeno.
Al respecto, es conveniente mencionar que estas fuerzas que conducen
a la adsorcin fsica son ms dbiles que las que se encuentran en las
especies inicas o covalentes. En cualquier fenmeno de adsorcin
influyen tres variables: adsorbente, eluyente y solutos. La polaridad, as
como, la acidez o basicidad de los tres elementos anteriores, es
importante, pues influyen en el comportamiento de una sustancia de
disolucin y en el poder adsorbente de la fase estacionaria.
Es decir, el poder adsorbente de una sustancia est en funcin del
disolvente, as como del tamao de la partcula adsorbente ya que
cuanto menor sea sta, mayor ser el grado de separacin de la mezcla;
sin embargo, disminuir la velocidad con la que el disolvente o la
disolucin pasar a travs de la fase estacionaria. Por otra parte, para
aumentar sta rapidez se puede aplicar presin reducida (parte inferior)
o presin (por la parte superior) en el caso de que necesariamente se
tenga que utilizar un polvo muy fino como adsorbente para el caso de la
cromatografa en columna.
Cromatografa n capa fina o delgada. Esta tcnica se designa con las
siglas CCF (TLC, del inlges thin layer chromatography), y comenz a
utilizarse normalmente en 1960. Se trata de una cromatografa de
adsorcin y consiste en recubrir una placa usualmente de vidrio, con una
capa uniforme de una suspensin adsorbente adecuado en polvo (fase
estacionaria) se coloca cerca del origen de la placa de una muestra de
una disolucin del compuesto orgnico (o mezcla) en estudio, se deja
que un disolvente adecuado (fase mvil) ascienda por la capa del
adsorbente por capilaridad y el (los) compuesto (s) se localiza (n) en la
placa, directamente en el caso de los compuestos coloridos o con ayuda
de un revelador cuando los compuestos son incoloros. Los compuestos
ascienden con velocidades distintas por la capa de adsorbente en
relacin al eluyente, ocasionando la separacin de los componentes de
una mezcla.
Cromatografa en columna (CC). Se lleva a cabo la separacin de
mezclas que tienen lugar en la columna que se encuentra empacada con
un adsorbente adecuado (fase estacionaria). Se coloca la mezcla en la
columna y se hace pasar por ella un disolvente o mezcla de ellos
(eluyente) o fase mvil; las sustancias son arrastradas por el eluyente a
diferente velocidad; ste continuo fluir se le llama desarrollo de la
columna. Las sustancias que tienen los mas altos coeficientes de

distribucin se trasladan mas rpidamente hacia abajo en la columna y

viceversa, con lo que se logra la separacin de los compuestos los
cuales son eluidos con diferentes tiempos por la columna. Si las
sustancias a separar son compuestos coloridos, se puede ver como se
desplazan sucesivamente en bandas separndose unas de otras al salir
de la columna para su identificacin, sin embargo, en la mayora de las
separaciones cormatograficas los compuestos a separar son incoloros y
en estos casos, el fluido que abandona se recoge fraccionadamente. Los
principales factores que influyen en la eleccin del adsorbente son :
a) Debe ser insoluble en el disolvente que se va a utilizar para
la separacin.
b) No debe de reaccionar con las sustancias que se van a
separar.
c) No debe de actuar como catalizador de su descomposicin,
transposicin, polimerizacin, isomerizacin, etc.
d) Necesita presentar una composicin uniforme, debiendo ser
incoloro si se emplea para compuestos coloridos.