Se prepar la modificacin del polmero (N-acilacin de quitosano)

de acuerdo con un mtodo desarrollado en nuestro laboratorio. Una cantidad

de 5 g
de quitosano se disolvi en 600 ml de cido actico acuoso (0,12 M, pH
4), respectivamente, a temperatura ambiente. La mezcla se agit
durante la noche para asegurar una solubilidad completa. A continuacin, el pH
de las soluciones
se ajust a 7,5 por adicin lenta de NaOH 0,1 M y los volmenes
se ajust a aproximadamente 800 ml. Las reacciones de acilacin se llevaron a
cabo
mediante la adicin de cloruro de palmitoilo (d = 0,907 g / ml) a la solucin de
polmero en una
proporcin de 1: 2 (w / w), manteniendo el pH a 7,5 con NaOH 0,5 M, y
la temperatura a 55 C. Despus de 1 h, la mezcla de reaccin se neutraliz
(PH 6,8-7,0) y se precipit con acetona. El precipitado, se recogi por
filtracin, se lav a 50 C con un exceso de metanol y se decant.
El lavado se repiti dos veces para eliminar los cidos grasos libres. Por ltimo,
la
producto modificado se sec con acetona pura para obtener el
correspondiente polvo de polmero funcionalizado (quitosano N-acilado)
(Han et al., 2008)

Soluciones CHI se obtuvieron disolviendo el polmero (20 mg /

ml) en cido actico (1 ml / 100 ml) durante 24 h a temperatura ambiente con
agitacin (120 rpm) (Snchez-Gonzlez et al., 2011). Serie sucesiva
diluciones (1: 1) se realizaron en caldo Sabouraud (Himedia,
India) para obtener soluciones de diferentes concentraciones (10, 5, 2,5, 1,25,

0,06 mg / ml). Soluciones VO se obtienen por disolucin del

sustancia (80 ml / ml) en caldo Sabouraud conteniendo bacteriolgica
agar [0,15 g / 100 ml (HiMedia, India)] como un agente estabilizante (Bennis
, 2004, con diluciones sucesivas (1 et al): 1) en el mismo caldo a.
obtener soluciones de diferentes concentraciones (40, 20, 10, 5, 2,5, 1,25,
0,06 ml / ml).
Para la aplicacin combinada de CHI y OV, CHI (10 o 5 mg /
ml) se diluy inicialmente en cido actico (1 ml / 100 ml) con constante
agitacin (120 rpm) durante 6 h a temperatura ambiente. Entonces, diferente
OV
Se aadieron concentraciones (5, 2,5, 1,25 ml / ml), seguido de agitacin
durante otras 18 h a temperatura ambiente. Para ensayar la aplicacin
de la solucin formada por la combinacin de CHI y OV como revestimiento en
frutas,
se aadi glicerol (2 ml / 100 ml) como un plastificante como era OV
incorporado en la solucin de recubrimiento (Ojagh et al., 2010)

METODOLOGIA CAPITULO II

HUMEDAD.
El contenido de humedad segn lo establece la AOAC para frutas secas
22.008, 22.013.
ACIDEZ TITULABLE
Se titul un volumen conocido de jugo de fruta con una solucin de
hidrxido de sodio (NaOH), usando fenolftalena como indicador, segn
lo establecido por la AOAC 22.060.
ACIDEZ IONICA pH
La acidez inica fue determinada por triplicado segn lo establecido por
COVENIN 1315
BRIX SST
Este mtodo se realiz utilizando un refractmetro porttil segn lo
establecido en AOAC 22.024/31.011.
ACIDO ASCORBICO
La determinacin del cido ascrbico se realiz empleando el mtodo
establecido por AOAC 43.060. El mtodo se basa en la oxidacin del
cido ascrbico con el colorante, 2,6-dicloroindofenol, el cual es
transformado cuantitativamente a cido dehidroascrbico.
POLIFENOLES
Se determinar de acuerdo a la metodologa reportada por Arnous y col., (2001).
En un tubo Eppendorf de 1,5 mL, se aade 0,79 mL de agua destilada, 0,01 mL de

muestra apropiadamente diluida y 0,05 mL de reactivo de Folin-Ciocalteu.

Despus de un (1) minuto se adiciona 0,15 mL de solucin de carbonato de sodio
al 20% m/v, se mezcla y almacena protegido de la luz por ciento veinte (120)
minutos. La absorbancia es medida a 750 nm y la concentracin total de
polifenoles se calcula utilizando una curva de calibracin con cido glico como
estndar (50-500 mg L-1). Los resultados se expresaran en mg/L de equivalentes
de cido glico (GAE, por sus siglas en ingls: Galic Acid Equivalents).
Evaluacin de la Actividad Antioxidante

La actividad antioxidante de las muestras ser evaluada por el mtodo ABTS

reportado por Miller y col., (1996) y Rice-Evans y col., (1996), basado en la
oxidacin de la sal diamnica ABTS y posterior remocin del radical ABTS + por
parte de los compuestos antioxidantes presentes en la muestra.
Generacin del Radical ABTS+ y Evaluacin de la Actividad Antioxidante Total
La metodologa propuesta para la obtencin del radical se basa en la reaccin de
una solucin de ABTS 7 mM con persulfato potsico 2,5 mM, ambos reactivos en
proporcin 1:1. La mezcla se deja en reposo, tapada con papel aluminio y a
temperatura ambiente ( 25 C) durante un tiempo mnimo de diecisis (16) horas
antes de comenzar las evaluaciones. Una vez formado el radical ABTS + se diluir
correctamente con etanol hasta obtener una absorbancia de 0,6 ( 0,02) a 750 nm
(longitud mxima de absorcin); esto se lograr mezclando aproximadamente 160
L de la solucin de ABTS+ y 3000 L de etanol puro. El radical generado ser
estable por un perodo mximo de 18 horas, luego de este tiempo la absorbancia
decae progresivamente y el radical no puede emplearse para anlisis. Los
extractos obtenidos sern diluidos empleando metanol (Rivero-Prez y col., 2007;
Troconoso y col., 2004; Marquina y col., 2008; Kuskoski y col., 2005).
Al radical ABTS+ generado se le determinar la absorbancia (abs) a 750 nm (Abs
cromforo radical, t 0 min), se le aadieron 40 L de los extractos diluidos y se
medir nuevamente la absorbancia a 750 nm transcurridos cinco (5) minutos (Abs
cromforo radical + antioxidante, t 5 min).
La actividad antioxidante total (TAA, por sus siglas en ingls: Total Antioxidant
Activity) de la muestra se determin de acuerdo a la ecuacin:
TAA = (Abs cromforo radical) t0 min - (Abs cromforo radical + antioxidante) t 5 min
En esta investigacin se usar cido ascrbico como patrn de referencia, el cual
ser ensayado en las mismas condiciones que las muestras y los resultados se
expresarn en actividad antioxidante equivalente en cido ascrbico (VCEAA)