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ESTRUCTURA
CROMOSOMAS Y GENOMAS
S: cubierta de
polisacridos
PRESENTE
R: cubierta de
polisacridos
AUSENTE
Cepa S letal
P32
S35
DNA:
P32
protenas:
S35
DESOXIRIBONUCLETIDOS
Nuclesido
Nucletido
Reglas de Chargaff
La cantidad de adenina es la misma que la de timina: A=T
La cantidad de guanina equivale a la de citosina: G=C
La cantidad de bases pricas es la misma que las bases pirimdicas:
A+G=T+C
Pero la cantidad de A+T G+C
Surco
menor
Surco
menor
Surco
mayor
Surco
mayor
5 GATC... 3
5 fosfato
Enlace fosfodiester
ADN
3 hidroxilo
Complementariedad:
Cadenas anti-paralelas
Extremo 5: PO4
Extremo 3: OH
Secuencias unicas
(genes); secuencias
repetidas (no codificantes)
Circular
Superenrollado
Bacteria
Virus (algunos)
Plsmidos
Mitocondria
Cloroplastos
Lineal
Nuclear de Eucariontes
Virus (algunos)
Superenrollado
ADN de bacteria
(4.2 x 106 pb)
1 cromosoma
DNA circular doble cadena
sin envoltura de membrana
Bacteria
DNA superenrollado
Protenas que
unen al DNA
Bacteria
en divisin
Bacteria
Topoisomerasas
Enzimas que regulan la tensin en la molcula de ADN
Tipo I:
Tipo II:
Girasa
% GC
Tm
Purificacin de ADN
2. Romper clulas
1. Concentrar clulas
Source
Lysis Methods
Lysozyme - degrades
polysaccharide cell walls
SDS - detergent for cell
Bacteria
membranes
Freeze/Thaw several times
French Press
Osmotic
Organelles Sonication
Detergent
Osmotic
Animal Cells Sonication
Detergent
Plant Cells
4. Precipitar ADN
Etanol
Isopropanol
Butanol
3. Eliminar protenas
Quality
Contains protein
contamination
no contamination
DNA may contain RNA
Phenol contamination
NA Concentration at
1 A260
50 g/ml
37 g/ml
40 g/ml
Bromuro de etidio:
Agente intercalante entre las bases nitrogenadas que fluoresce a la luz UV
Bibliografa:
Alberts Molecular Biology of the Cell 4 o 5 Ed. (2002, 2008)
Lehninger Principles of Biochemistry 3, 4 o 5 Ed. (2000, 2004, 2008)
Lodish Molecular Cell Biology 4, 5 o 6 Ed. (1999, 2003, 2007)