Informe Proyecto de Grado

EVALUACIN DEL CRECIMIENTO DEL HONGO Psilocybe cubensis EN
MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS
MARIA PAULINA COGOLLO ZULETA

MARISOL VALENCIA QUERUBIN
UNIVERSIDAD EAFIT
ESCUELA DE INGENIERIA
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA DE PROCESOS
MEDELLIN
2010
EVALUACIN DEL CRECIMIENTO DEL HONGO Psilocybe cubensis EN

MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS
MARIA PAULINA COGOLLO ZULETA

MARISOL VALENCIA QUERUBN
Trabajo De Grado Para Optar Por El Ttulo De Ingeniera De Procesos
ASESOR
JOS RODRIGO MORENO SUREZ
UNIVERSIDAD EAFIT
ESCUELA DE INGENIERIA
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA DE PROCESOS
MEDELLIN
2010
Nota de aceptacin
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Jurado
---------------------------------------------------Jurado
---------------------------------------------------Jurado
Medelln, 18 de Enero de 2010
Mara Paulina
A mi familia por brindarme su amor y apoyo en todo momento y por darme tantas
oportunidades que me han hecho crecer como persona
A Marisol mi mejor amiga por su amistad y por la firmeza y lucha en la realizacin
de este proyecto
iv
Marisol
A mi familia por su amor y su apoyo incondicional durante mi carrera
A mi to Walter por su ejemplo de disciplina y perseverancia, a quien le agradezco
lo que soy hoy como persona
A mi novio por darme fuerzas y apoyarme siempre cuando senta que todo en el
proyecto estaba fallando
A Paulina a quien considero mi hermana y mi amiga. Sin ti este proyecto de grado
no sera realidad
Agradecimientos
Deseamos expresar los ms sinceros agradecimientos a las personas que

contribuyeron significativamente a la realizacin de este proyecto
Alex A. Sez, Qumico, Universidad
Biotecnologa, Universidad Nacional.
de
Antioquia.
Magister
en
Byron Durn, Ingeniero Ambiental, Universidad Catlica de Oriente.
Jorge Surez, Gerente y propietario Comercializadora de ChampionesSanta Elena.

Personal colaborador de los laboratorios de Ingeniera de Procesos, dgar
Arbelez y Jhon Estrada.
vi
CONTENIDO
LISTA DE TABLAS ........................................................................................................ ix
LISTA DE FIGURAS ....................................................................................................... x
LISTA DE GRFICOS ................................................................................................... xi
LISTA DE ANEXOS ...................................................................................................... xii
RESUMEN ..................................................................................................................... xiii
INTRODUCCIN........................................................................................................... 15
1.
2.
OBJETIVOS ........................................................................................................... 17
1.1.
OBJETIVO GENERAL ................................................................................ 17
1.2.
OBJETIVOS ESPECIFICOS ..................................................................... 17
MARCO REFERENCIAL ...................................................................................... 18

2.1.
GENERALIDADES DE LOS HONGOS ................................................... 18
2.2.
DESCRIPCIN DEL HONGO P. cubensis ............................................. 19
2.2.1.
Sombrero o pleo .................................................................................. 19
2.2.2.
Lamelas ................................................................................................. 19
2.2.3.
Estpite o tallo ....................................................................................... 20
2.2.4.
Caractersticas microscpicas ........................................................... 21
2.2.5.
Hbito, hbitat y distribucin .............................................................. 21
2.3.
AGENTES CONTAMINANTES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO
DEL P. cubensis ........................................................................................................ 21
2.4.
ALCALOIDES PRESENTES EN DIFERENTES ESPECIES DE
Psilocybe..................................................................................................................... 22
2.5.
TRIPTAMINA ............................................................................................... 27
2.6.
ESTNDAR INTERNO ............................................................................... 28
2.7.
LA PSILOCIBINA Y LA LEY ...................................................................... 29
2.8.
PRODUCCIN Y CULTIVO ...................................................................... 30
2.8.1.
Cultivo en sustratos esterilizados ...................................................... 31
Etapas del cultivo .................................................................................................. 31

Cultivo sustrato de trigo ........................................................................................ 32
Cultivo compost de champin ........................................................................... 32
Parmetros de crecimiento .................................................................................. 33
vii
Estrategias bsicas para la formacin de hongos ........................................... 35
3.
2.9.
APLICACIONES Y USOS DE LA Psilocibina ......................................... 36
2.10.
ESTADO DEL ARTE................................................................................... 37
METODOLOGIA .................................................................................................... 41
3.1.
PROPAGACIN DE LA CEPA ................................................................. 41
3.2.
OBTENCIN DEL MICELIO DE SIEMBRA (SEMILLA DEL HONGO)

.41
3.3.
OBTENCIN DE LOS CUERPOS FRUCTIFEROS .............................. 44
3.3.1.
Siembra en sustrato de trigo .............................................................. 44
3.3.2.
Siembra en compost de champin ................................................. 44
3.4.
DISEO DE EXPERIMENTOS Y ANLISIS ESTADSTICO .............. 47
Variables de respuesta ......................................................................................... 50
4.
3.5.
RECOLECCIN DE CUERPOS FRUCTIFEROS ................................. 51
3.6.
EXTRACCIN DE LA PSILOCIBINA....................................................... 52
3.7.
EVALUACIN DE LA PRESENCIA DE PSILOCIBINA ........................ 53
RESULTADOS Y ANLISIS ................................................................................ 54

4.1.
SUSTRATO DE TRIGO ............................................................................. 54
4.2.
COMPOST DE CHAMPIN ................................................................... 55
4.2.1.
Crecimiento de cuerpos fructferos en el tiempo ............................ 55
4.2.2.
Variables cuantitativas evaluadas en la produccin de cuerpos
fructferos ................................................................................................................ 57
4.2.3. ANLISIS ESTADSTICO PARA LOS TRATAMIENTOS ................... 59
4.2.3.1. Tamao de pleo .................................................................................. 59
4.2.3.2. Precocidad de colonizacin ................................................................ 60
4.2.3.3. Rendimiento .......................................................................................... 61
4.2.3.4. Eficiencia biolgica .............................................................................. 63
4.3.
ESTUDIO CUALITATIVO DE LA PRESENCIA DE PSILOCIBINA ..... 63
4.4.
ESTUDIO CUANTITATIVO DE LA PRESENCIA DE PSILOCIBINA .. 63
CONCLUSIONES .......................................................................................................... 68
RECOMENDACIONES ................................................................................................ 70
BIBLIOGRAFIA .............................................................................................................. 71
ANEXOS ......................................................................................................................... 76
viii
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Determinacin sistemtica del P. cubensis ................................................... 22

Tabla 2. Escala de potencia silomtrica, comparativo de algunos hongos del
gnero Psilocybe . ............................................................................................................. 25
Tabla 3 Composicin qumica sustrato de trigo .......................................................... 32
Tabla 4. Composicin qumica compost de champin ............................................. 33
Tabla 5. Parmetros de crecimiento .............................................................................. 35
Tabla 6. Diseo de experimentos para obtencin de cuerpos fructferos ................ 45
Tabla 7. Nuevo diseo de experimentos para obtencin de cuerpos fructferos .... 48
Tabla 8. Velocidad de crecimiento en los tratamientos............................................... 57
Tabla 9. Eficiencia biolgica, Rendimiento y Precocidad de colonizacin para los
tratamientos con cosecha ................................................................................................ 58
Tabla 10. Promedio de los tratamientos para las variables de respuesta ............... 59
Tabla 11. reas y tiempos de retencin obtenidos de los cromatogramas por
tratamiento .......................................................................................................................... 65
Tabla 12. Concentracin de Psilocibina (%) ................................................................ 66
Tabla 13. Anlisis de varianza para el tamao de pleo por tartamiento ................. 76
Tabla 14. Anlisis de varianza para la precocidad de colonizacin por tratamiento
.............................................................................................................................................. 77
Tabla 15. Anlisis de varianza para el rendimiento por tratamiento ......................... 80
Tabla 16. Anlisis de varianza para Eficiencia biolgica por tratamiento ................ 80
Tabla 17. Anlisis de varianza para la cantidad de alcaloide Psilocibina ................ 86
ix
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Pleo de P. Cubensis ....................................................................................... 19

Figura 2. Lamelas y esporada de P. cubensis ............................................................ 20
Figura 3. Tallo del hongo P. cubensis ............................................................................ 20
Figura 4. Caractersticas de P. cubensis esporas, cistidios y basidios .................... 21
Figura 5. Estructura qumica de la Psilocibina ............................................................. 23
Figura 6. Estructura qumica de la Serotonina ............................................................. 23
Figura 7. Porcentajes de alcaloide en diferentes especies Psilocybe ...................... 26
Figura 8. Combinacin mxima de los porcentajes de Psilocibina, Psilocina y
Baeocystina en diferentes especies de Psilocybe ....................................................... 27
Figura 9. Estructura molecular de la triptamina ............................................................ 28
Figura 10. Descomposicin de Psilocibina en el cuerpo humano ............................. 39
Figura 11. HPLC-ECD Determinacin de Psilocina..................................................... 39
Figura 12. Cepa P. cubensis ........................................................................................... 41
Figura 13. Preparacin medio lquido extracto de malta e inoculacin de pellets .. 42
Figura 14. Obtencin de pellets ...................................................................................... 42
Figura 15. Preparacin de semilla .................................................................................. 43
Figura 16. Colonizacin de semilla................................................................................. 43
Figura 17. Siembra en compost de champin ............................................................ 45
Figura 18. Diseo de experimentos sin cobertura ....................................................... 46
Figura 19. Sustrato de trigo y compost de champin con cobertura ...................... 47
Figura 20. Contaminacin bacteriana en sustrato de trigo y compost de champin
.............................................................................................................................................. 47
Figura 21. Tratamientos contaminados com Penicillium en sustrato de trigo ......... 48
Figura 22. Adicin de cobertura en tratamientos de compost de champin ......... 49
Figura 23. Aparicin de capforos .................................................................................. 49
Figura 24. Recoleccin de cuerpos fructferos en compost de champin ............. 51
Figura 25. Cromatografa de extraccin de la Psilocibina de P. cubensis ............... 52
Figura 26. Presencia de Psilocibina en cuerpos fructferos ....................................... 53
Figura 27. Estructura qumica de la cafena ................................................................. 64
Figura 28. Muestra analizada mediante el reactivo de dragendorff .......................... 82
Figura 29. Muestra analizada mediante la cromatografa de capa fina y el reactivo
de Dragendorff ................................................................................................................... 82
Figura 30. Cromatografa de extraccin del hongo P. cubensis de hongos
recolectados en campo abierto ....................................................................................... 83
Figura 31. Estndar interno de la cafena ..................................................................... 84
Figura 32. Cromatograma tratamiento testigo .............................................................. 84
Figura 33. Cromatograma tratamiento 0.1 g de triptamina......................................... 85
LISTA DE GRFICOS
Grfico 1. Crecimiento de estpite en el tiempo ........................................................... 55

Grfico 2. Crecimiento de pleo en el tiempo ................................................................ 56
Grfico 3. Tiempo promedio de precocidad de colonizacin para los tratamientos 61
Grfico 4. Rendimiento promedio para los tratamientos............................................. 62
Grfico 5. Concentracin de Psilocibina (ppm) ............................................................ 67
Grfico 6. LSD para tamao de pleo por tratamiento................................................. 76
Grfico 7. LSD para la precocidad de colonizacin por tratamiento ......................... 77
Grfico 8. Rendimiento en tratamiento de testigo ........................................................ 78
Grfico 9. Rendimiento en tratamiento de 0,1 g de triptamina .................................. 78
Grfico 10. Rendimiento en tratamiento de 0,2 g de triptamina ................................ 79
Grfico 11. Rendimiento en tratamiento de 0,4 g de triptamina ................................ 79
Grfico 12. LSD para el rendimiento por tratamiento .................................................. 80
Grfico 13. LSD para Eficiencia biolgica por tratamiento ......................................... 81
Grafico 14. Box and Whisker plot para la cantidad de alcaloide Psilocibina ........... 87
xi
LISTA DE ANEXOS
Anexo 1.Tabla ANOVA para tamao de pleo por tratamiento .................................. 76

Anexo 2. Intervalos LSD para tamao de pleo por tratamiento ................................ 76
Anexo 3. Tabla ANOVA para precocidad de colonizacin por tratamiento. ............ 77
Anexo 4. Intervalo LSD para precocidad de colonizacin por tratamiento .............. 77
Anexo 5. Grfico de rendimiento en tratamiento de testigo ....................................... 78
Anexo 6. Grfico de rendimiento en tratamiento de 0,1 g de triptamina .................. 78
Anexo 9. Tabla ANOVA para el rendimiento por tratamiento ................................... 80
Anexo 10. Intervalo LSD para el rendimiento por tratamiento ................................... 80
Anexo 11. Tabla ANOVA para Eficiencia biolgica por tratamiento ......................... 80
Anexo 12. Intervalo LSD para Eficiencia biolgica por tratamiento .......................... 81
Anexo 13. Prueba de reactivo dragendorff ................................................................... 81
Anexo 14. Prueba de reactivo de dragendorff en presencia de cromatografa de
capa fina ............................................................................................................................. 82
Anexo 15. Identificacin de la presencia de Psilocibina por medio de HPLC ......... 83
Anexo 16. Cromatograma estndar interno (Cafena) ................................................ 84
Anexo 17. Cromatograma tratamiento testigo .............................................................. 84
Anexo 18. Cromatograma tratamiento 0.1 g de triptamina......................................... 85
Anexo 21. Tabal ANOVA para la cantidad de alcaloide Psilocibina ......................... 86
Anexo 22. Grfico Box and Whisker plot para la cantidad de alcaloide Psilocibina87
xii
RESUMEN
El hongo Psilocybe cubensis cobra significativa importancia a nivel de
investigacin clnica y psiquitrica, gracias a la presencia en sus tejidos de un
alcaloide llamado Psilocibina. Este alcaloide es derivado de la triptamina y posee
una estructura qumica similar a la de los neurotransmisores llamados serotonina
(5 hidroxitriptamina), melatonina y otros neurorreguladores. La serotonina es una
hormona la cual se forma endgenamente a partir del aminocido triptofano y es la
responsable de la regulacin del apetito mediante la saciedad, equilibrar el deseo
sexual, controlar la temperatura corporal, la actividad motora y las funciones
perceptivas y cognitivas (Brailosky, 2002).
En la actualidad el uso de la Psilocibina est prohibido en la mayora de los
pases, debido a sus efectos alucingenos y psicoactivos; sin embargo, en los
Estados Unidos la FDA aprob varios estudios sobre el uso de la Psilocibina.
MAPS (Multidiciplinary Association for Psychedelic Studies) ha publicado
diferentes estudios con dosis de Psilocibina realizados en pacientes que presentan
desordenes obsesivo-compulsivos, pacientes terminales de cncer, con autismo
infantil, entre otros (Hanes, 1996). Por esta razn surgi la idea de realizar la
extraccin de este alcaloide mediante el cultivo del hongo en medios slidos,
evaluando diferentes dosis de un precursor qumico (triptamina).
Se evaluaron dos medios de cultivo slidos (sustrato de trigo y compost de
champin) con el motivo de identificar cul de estos era el ms propicio para el
crecimiento del P. cubensis y la produccin de Psilocibina, utilizando diferentes
concentraciones de precursor qumico (triptamina) para analizar la incidencia de
este en la produccin del alcaloide. En el sustrato de trigo no se obtuvieron los
resultados esperados, debido a que todos los tratamientos presentaron
contaminacin con otros microorganismos que impidieron la propagacin del
micelio del P. cubensis y la produccin de los cuerpos fructferos. El compost de
champin present un adecuado crecimiento micelial y desarrollo de cuerpos
fructferos en la mayora de los tratamientos experimentales.
La precocidad de colonizacin fue similar en todos los tratamientos, teniendo en
cuenta que no todas las rplicas de los tratamientos presentaron primordios,
mostrando aparicin de los primeros carpforos alrededor de los 40 das. El mayor
rendimiento obtenido en los tratamientos fue de 0.11 g de hongos frescos
xiii
cosechados /cm2 de rea ocupada por el sustrato hmedo con 0.1 g de triptamina
(rplica 1), 0.11 y 0.16 g de hongos frescos cosechados /cm2 de rea ocupada por
el sustrato hmedo con 0.2 g de triptamina (rplica 1 y rplica 3 respectivamente),
debido a que estos presentaron mayor cantidad de cuerpos fructferos que los
dems tratamientos; igualmente los mejores resultados en cuanto a la eficiencia
biolgica (variable base para establecer el rendimiento), fueron los tratamientos
con 0.1 y 0.2 g de triptamina.
La resolucin de los picos obtenidos por HPLC del extracto del P. cubensis fue
mayor a medida que la concentracin de la triptamina aumentaba en los
tratamientos. Testigo, 0.1, 0.2 y 0.4 g con reas de 497.30, 550.20, 1316.70 y
1381.00 mm2 respectivamente; as mismo los tiempos de retencin arrojados por
el HPLC mostraron la presencia de la Psilocibina en un rango de 4 a 6 min para
cada uno de los ensayos, lo que permite evidenciar que no existen diferencias
significativas entre la similitud de los picos y las cantidades de triptamina utilizada.
El precursor qumico utilizado en el proyecto arroj los resultados esperados en
cuanto a la cantidad de alcaloide obtenido, porque al momento de realizar la
cuantificacin por medio de la ayuda de un estndar interno (cafena) se encontr
que a mayor cantidad de precursor qumico utilizado mayor cantidad de alcaloide
obtenido. En el tratamiento con 0.4 g de triptamina se obtuvo un porcentaje de
Psilocibina de 0.0922 %, mientras que el porcentaje obtenido en el extracto del
testigo para este alcaloide fue de 0.0353 %.
Palabras claves:
Psilocybe cubensis, Psilocibina, triptamina, cafena, serotonina, sustrato de trigo,
compost de champin, estndar interno, precursor qumico, HPLC.
xiv
INTRODUCCIN
Los hongos del gnero Psilocybe, el cual incluye la especie P. cubensis se ha
incrementado considerablemente en los ltimos aos, debido a su fcil cultivo y
manejo en medios slidos como el estircol de bovinos, caballos y elefantes.
Estos hongos crecen fcilmente en temporadas de primavera y verano, donde la
mayora de las especies se desarrollan en gran proporcin, dos meses antes de
llegar el verano o perodo caliente y durante el periodo de lluvia, entre febrero y
noviembre (Gottlieb, 1997).
El uso de los hongos alucingenos como lo es el P. cubensis, se remota a los
indgenas de Sudamrica, pero tambin a culturas de otros lugares como Argelia,
India y Europa medieval. En cualquier caso el inters por estos hongos responda
nicamente a inquietudes religiosas, culturales o curativas (Griffiths et al., 2008).
El empleo de este tipo de hongos resurgi en 1957 con la publicacin de un
artculo titulado en busca del hongo mgico por R. Gordon Wasson en la revista
Life y con el cultivo en el laboratorio del hongo Psilocybe mexicana por parte del
microbilogo francs Roger Hiem. Poco despus, se aislaron alcaloides indlicos
responsables de la actividad psicoactiva de los hongos. Algunos investigadores
utilizaron la Psilocibina con fines teraputicos en la dcada de los sesenta, pero
las investigaciones cesaron ante la situacin legal de estas sustancias y slo en
contadas ocasiones, como es el caso de Suiza en los aos 90, se autoriz su uso
(Gottlieb, 1997).
El gnero Psilocybe contiene en sus tejidos tres tipos de alcaloides (Psilocibina,
Psilocina, Baeocystina) donde el ms importante es la Psilocibina, derivado de la
triptamina y muy similar al neurotransmisor Serotonina (Brailosky, 2002). La
Psilocibina ha tomado gran importancia debido a las investigaciones realizadas en
el mbito medicinal y psiquitrico, en tratamientos de enfermedades en pacientes
con desordenes del comportamiento y en pacientes terminales de cncer (Hanes,
1996), haciendo de ste alcaloide un medicamento seguro y confiable ya que su
uso no es perjudicial para la salud y no genera dependencia alguna (Lee et al.,
2004).
Para el desarrollo del proyecto se utilizaron medios de cultivos slidos como el
sustrato de trigo y el compost de champin, con el fin de evaluar el crecimiento
15
del P. cubensis y la produccin de Psilocibina en presencia de un precursor

qumico (Triptamina), y finalmente la extraccin de este alcaloide. Estos medios de
cultivo son generalmente subproductos agrcolas que presentan un alto contenido
de nutrientes y los cuerpos fructferos de los hongos que se producen son mucho
ms resistentes y tienen mejor adaptabilidad al medio donde crecen (Doelle y
Mitchell, 1992).
16
1. OBJETIVOS
1.1.
OBJETIVO GENERAL
Evaluar a escala de laboratorio el crecimiento del hongo Psilocybe cubensis,

mediante el uso de dos medios de cultivo slidos enriquecidos con el precursor
qumico triptamina.
1.2.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Para que se cumpla el objetivo general, se plantean los siguientes objetivos

especficos:
Identificar el medio de cultivo ms propicio para el crecimiento y
propagacin del P. cubensis y la produccin de Psilocibina.
Evaluar la eficiencia biolgica, el rendimiento y la precocidad de
colonizacin del hongo Psilocybe cubensis en dos medios de cultivo
slidos.
Evaluar el efecto del precursor qumico (triptamina) sobre la produccin de
Psilocibina por medio de la tcnica de HPLC.
17
2. MARCO REFERENCIAL
2.1.
GENERALIDADES DE LOS HONGOS
Los hongos pertenecen al reino Fungi en el cual se hallan una gran cantidad de
organismos eucariotas, descomponedores y hetertrofos. Poseen caractersticas
muy particulares que los hacen diferentes de las plantas porque carecen de
clorofila. La forma en la que se alimentan es por absorcin y pueden reproducirse
tanto sexual y asexualmente (Miles y Chang, 1999).
Los hongos se originan a partir de esporas, clulas especializadas que cumplen la
misma funcin de las semillas en las plantas. Cuando las esporas encuentran las
condiciones adecuadas de humedad, temperatura, luz y nutrientes, entre otras,
germinan y producen hifas, estructuras filamentosas que constituyen la unidad
estructural fundamental de la mayora de los hongos (Miles y Chang, 1999). Las
hifas se ramifican y forman una masa algodonosa llamada micelio, el cual se
extienden sobre el medio o superficie (materia orgnica, madera, entre otros) y
produce los cuerpos fructferos. En realidad, el verdadero cuerpo del hongo lo
constituye el micelio, y los cuerpos fructferos son el equivalente de los frutos en
un rbol. Los cuerpos fructferos son las estructuras que se observan a simple
vista sobre un sustrato, medio o superficie y su funcin es producir esporas que
son dispersadas por el agua, el viento, insectos y otros factores y finalmente
mueren. Los cuerpos fructferos son estacionales y aparecen solo en ciertas
pocas del ao, pero el micelio permanece sobre el sustrato, incluso durante
cientos de aos (Miles y Chang, 1999).
Los hongos constituyen uno de los grupos de organismos ms importantes para la
vida del hombre, debido a que son los responsables de gran parte de la
descomposicin de la materia orgnica, aumentando la disponibilidad de
nutrientes en el suelo; pueden ser comestibles, venenosos o psicotrpicos;
muchos son patgenos; otros, producen ciertas sustancias benficas o intervienen
en procesos de elaboracin de algunos comestibles (Miles y Chang, 1999).
18
2.2.
DESCRIPCIN DEL HONGO P. cubensis
2.2.1. Sombrero o pleo

El sombrerillo mide entre 1.5-8 cm de dimetro; es campanulado al principio y
posteriormente convexo, a veces plano-depreso; superficie lisa a fibrilosa o
finamente escamosa, las fibrillas y escamas de color amarillo opaco en el disco y
blanco amarillento hacia el margen. Himenforo formado por lamelas pardogrisceo a negruzcas, prximas, con el margen blancuzco (figura 1) (Chacon et
al., 2005). Las esporas son caf prpura, cuando se lesiona o se manipula el
hongo adopta un color azul-negro (Stamets, 1996).
El contenido de Psilocibina en el hongo P. cubensis, es mucho mayor en la parte
del sombrerillo, en un rango de 0.44-1.35%, mientras que en el tallo el contenido
de Psilocibina se encuentra en un rango de 0.05-1.27% (Wurst et al., 1984).
Figura 1. Pleo de P. Cubensis

2.2.2. Lamelas
Se encuentran unidas al sombrerillo, estn cercanas unas a otras y son
ligeramente largas en el centro (figura 2). Su color se torna gris plido en los
cuerpos fructferos jvenes, transformndose en un profundo prpura oscuro en la
etapa de madurez del hongo (Stamets, 1996).
19
Figura 2. Lamelas y esporada de P. cubensis
2.2.3. Estpite o tallo

Puede alcanzar una altura de 40-150 mm de largo por 5-15 mm de ancho (figura
3). Se tornar blancuzco y cambia a un color amarillento y puede presentar un color
azulado cuando es maltratado con fuerza. La superficie es lisa y estriada en su
cspide o cima. Presenta un anillo en la parte superior (apical) del estpite, de
consistencia membranosa y color amarillo claro. (figura 2) (Stamets, 1996).
Figura 3. Tallo del hongo P. cubensis
20
2.2.4. Caractersticas microscpicas

El hongo presenta esporas prpuras oscuras y tiene en su estructura clulas
frtiles (basidios) en donde ocurre la produccin de esporas (figura 4) (Stamets,
1996).
Figura 4. Caractersticas de P. cubensis esporas, cistidios y basidios (Kasuya

y Guzmn, 2004)
Las esporas del P.cubensis, son caf oscuras, miden alrededor de 10,2-16,5 m x
5,9-10 m, presenta poros apicales y una superficie lisa. Los cistidios son
amarillos y de paredes gruesas, hyaline y subcapitate. Los basidios presentan una
descripcin microscpica hyaline 4-esporas (Kasuya y Guzmn, 2004).
2.2.5. Hbito, hbitat y distribucin

El hongo P. cubensis es estercolero (crecen sobre el estircol de bovinos, caballos
y elefantes) y gregario; se encuentra en el Sureste de los Estados Unidos, Mxico,
Cuba, Centro Amrica, Sur Amrica, Este de Asia (India, Tailandia, Vietnam y
Camboya), Colombia, Australia y se desarrollan muy fcilmente en primavera y
verano, en donde las mayora de las especies proliferan en gran proporcin dos
meses antes de llegar el verano o perodo caliente y durante el perodo de lluvia
entre Febrero y Noviembre (Gottlieb, 1997).
2.3.
AGENTES CONTAMINANTES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO

DEL P. cubensis
Los tipos de agentes contaminantes que pueden afectar el crecimiento del P.

cubensis se pueden clasificar en 3 grupos:
21
Grupo A: Rpido crecimiento de color azul-marrn con un olor medicinal

producido por esporas del hongo de los gneros Penicillium o Aspergillus (figura
21). Este grupo constituye la causa mayoritaria de contaminacin dentro de los
procesos biotecnolgicos de cultivos. Existe otro moho que suele frecuentar y
atacar al P. cubensis, el cual es de aspecto negro-verde olivceo del gnero
Rhizopus (Garca, 1991).
Grupo B: Aparicin de un exudado de color amarillento (figura 20) con un aspecto
aceitoso que se destaca por su fuerte olor ftido. Se trata de una contaminacin
bacteriana producida por una inadecuada limpieza en los instrumentos utilizados
en el proceso. Aparece rpidamente, haciendo intil el medio de cultivo para
cualquier desarrollo micelial (Garca, 1991).
Grupo C: existen otros procesos infecciosos que pueden afectar el cultivo. La
etiologa de esta contaminacin se busca esta vez en moscas y caros que
pululan y colonizan los medios de cultivo para alimentarse o para la puesta de
huevos (Garca, 1991).
2.4.
ALCALOIDES PRESENTES EN DIFERENTES ESPECIES DE

Psilocybe
P. cubensis es el nombre de una especie de hongos del gnero Psilocybe

llamados as debido a las propiedades entegenas que son el resultado de las
diferentes sustancias qumicas que poseen, principalmente la Psilocibina. El P.
cubensis es conocido tambin como golden tops, cubies, san Isidro y hongos
kentesh (Stamets, 1996).
La determinacin sistemtica de la especie es la siguiente:
Tabla 1. Determinacin sistemtica del P. cubensis (Paris y Hurabielle, 1981)
Reino
Phyllum
Clase
Orden
Fungi
Basidiomycota
Hymenomycetes
Agaricales
22
Familia
Gnero
Especie
Strophariaceae
Psilocybe
Psilocybe cubensis
Los principios activos del P. cubensis son derivados de la triptamina. El ms

importante de stos es la Psilocibina 4-fosforilhidroxi N,N dimetiltriptamina (figura
5) (Stamets, 2000).
Figura 5. Estructura qumica de la Psilocibina (Tllez, 2005).

La Psilocibina es un alcaloide que posee una estructura qumica similar a la de los
neurotransmisores llamados serotonina (5-hidroxitriptamina), melatonina y otros
neurorreguladores (figuras 5 y 6) (Stamets, 1996).
Figura 6. Estructura qumica de la Serotonina (Tllez, 2005).

La serotonina es una hormona que se forma endgenamente a partir del
aminocido triptofano por hidroxilacin seguida de carboxilacin. Las neuronas
que contienen serotonina se encuentran localizadas en los nucleos de raf, en la
lnea media del tallo enceflico, hipotlamo, neocorteza, mdula espinal y sistema
lmbico. La serotinina es la responsable de la percepcin sensorial y participa en el
control de los estados del sueo y vigilia, el inicio del reposo nocturno, el nimo,
23
las emociones, el control de la temperatura, la dieta, la conducta sexual y la

conducta suicida (Brailosky, 2002).
Los hongos del gnero Psilocybe por medio de sus principios activos como la
Psilocibina ejercen las siguientes acciones moleculares en el sistema nervioso
central:
Agonista competitivo con el neurotransmisor serotonina por los receptores
serotoninrgicos 5HT, especialmente por los receptores excitatorios 5HT 2 y
5HT3, que se encuentran localizados en la sinapsis cerebral (hipotlamo,
sistema lmbico, cerebelo y retina) (Ganong, 1994).
Los estmulos de los receptores 5HT2 y 5HT3 producen aumento de los
segundos mensajeros trifostato de inocitol (IP3) y diacilgliceriol (DAG), que
producen un aumento en la conductancia en la membrana celular para el
Sodio y una disminucin en la conductancia para el Potasio. Estas
acciones hacen que las clulas de los tejidos donde se encuentran
localizados estos neuroreceptores se tornen ms excitables (Goodman,
1996).
Antagonismo competitivo con el neurotransmisor serotonina por los
receptores serotoninrgicos 5HT, especialmente por aquellos receptores
localizados en el msculo liso (Ganong, 1994).
Las especies de hongo Psilocybe, han sido analizadas a travs de los aos debido
a sus efectos psicoactivos. La variacin de los rangos de Psilocibina, Psilocina y
Baeocystina presentes en cada una de las diferentes especies se aprecia en la
tabla 2.
24
Tabla 2. Escala de potencia silomtrica, comparativo de algunos hongos del

gnero Psilocybe (Stamets, 1996).
ESPECIES
%
%
%
PSILOCIBINA PSILOCINA BAEOCYSTINA
REFERENCIA
P. azurescens
1.78
0.38
0.35
P. bohmica
1.34
0.11
0.02
P.
semilanseata
0.98
0.02
0.36
P. baeocystis
0.85
0.59
0.10
P. cyanescens
0.85
0.36
0.03
P. tampanensis
0.68
0.32
n/a
P. cubensis
0.63
0.60
0.025
0.61
0.27
0.05
0.60
0.10
n/a
Heim y Hofmann 1958
0.36
0.12
0.02
Beug y Bigwood 1982;

Repke et al. 1980
0.21
0.04
n/a
Stamets et al. 1980
0.16
n/a
0.005
Stijve y Kuyper 1985
P. weilii (nom.
prov.)
P.
hoogshagenii
P. stuntzii
P.
cyanofibrillosa
P. liniformans
Stamets y Gartz 1995

Gartz y Muller 1989;
Gartz (1994)
Gartz 1994
Repke et al. 1977; Beug
y Bigwood 1982
Stijve y Kuyper 1985;
Repke et al. 1977
Gartz 1994
Gartz 1994; Stijve y de
Meijer 1993
Adems de estos, se encuentran presentes otra ndole de alcaloides como:

Baeocystina, Norbaeocystina y/o Aeruginacina (Gartz, 1989), citado por Stamets,
(1996). En general la Baeocystina se encuentra en menor concentracin en
comparacin con la Psilocibina y la Psilocina (Stamets, 1996).
Los porcentajes de los alcaloides mostrados en la tabla 2, se basan en porcentaje
peso seco. Un gramo de hongo seco contiene 1% de Psilocibina, lo que equivale a
10 mg del alcaloide (Stamets, 1996). Se excluye la potencia del hongo con la
adicin del precursor qumico (Triptamina) en el sustrato, tal y como lo
experiment Gartz (1989).
25
Figura 7. Porcentajes de alcaloide en diferentes especies Psilocybe (Stamets,

1996).
26
Figura 8. Combinacin mxima de los porcentajes de Psilocibina, Psilocina y

Baeocystina en diferentes especies de Psilocybe (Stamets, 1996).
2.5.
TRIPTAMINA
Es una monoamina alcaloidal (figura 9), se basa en la estructura del anillo indol y
est relacionada qumicamente con el triptofano. La triptamina se encuentra en
pequeas cantidades en el cerebro de los mamferos y se cree que desempea el
papel de un neurotransmisor. Es tambin la columna vertebral de un grupo de
compuestos conocidos colectivamente como triptaminas. Este grupo incluye a
muchos compuestos activos como los neurotransmisores y las drogas psicodlicas
(Wang et al., 2007).
Los derivados de la triptamina ms conocidos son la serotonina y la melatonina.
Alcaloides derivados de la triptamina se encuentran en hongos, plantas y animales
y son utilizados habitualmente por los seres humanos por sus efectos
27
psicotrpicos. Algunos ejemplos destacados son: la Psilocibina de los hongos

mgicos y la Dimetiltriptamina (DMT) en las plantas como chacruna, a menudo
utilizada en infusiones ayahuasca. Muchas triptaminas sintticas tambin se han
elaborado, tales como el sumatriptan en drogas para la migraa y sus familiares
(Jones, 1986).
Figura 9. Estructura molecular de la triptamina (Jones, 1986).
Gartz (1989) determin que los niveles de la Psilocibina naturalmente son

aproximados al 0.1% a partir de una mezcla esterilizada de estircol de vaca y
arroz (2:1), pero esta cantidad de alcaloide podra aumentarse hasta 3,3% con la
adicin de 25 mg de triptamina por cada 10 g de sustrato (Stamets, 2000).
2.6.
ESTNDAR INTERNO
El mtodo del estndar interno debe su nombre a la forma como se preparan las
muestras al ser analizadas. Es una sustancia que se aade a todas las muestras
en cantidad conocida y suficiente para poder ser determinada sin problema (SI y
analito). Su adicin no debe causar ningn tipo de interferencia en el anlisis y
debe proporcionar una seal analtica similar al analito en el anlisis pero
distinguible del mismo. El estndar interno no debe estar presente en la matrz en
estudio (Castillo, 2003).
Los mtodos basados en la adicin de un estndar interno generalmente se
utilizan cuando el analista est interesado en la concentracin de uno o algunos
28
de los componentes y el mtodo de anlisis es susceptible a errores tanto

sistemticos como al azar. El mtodo est basado cuando las seales del analito y
el estndar interno responden proporcionalmente a las fluctuaciones del mtodo y
del instrumental empleado, entonces la razn de estas seales es independiente a
tales fluctuaciones; de esta forma el mtodo compensa por errores provenientes
de la manipulacin de la muestra por analizar (Castillo, 2003).
Existen muchos mtodos analticos que requieren adicionar un estndar interno
para poder ser cuantificados debido a que los errores pueden llegar a ser grandes.
Agregando un estndar interno la exactitud y precisin del mtodo resulta ser el
adecuado (Castillo, 2003).
2.7.
LA PSILOCIBINA Y LA LEY
La Psilocibina y la Psilocina estn controladas en virtud del Convenio de las

Naciones Unidas sobre Sustancias Sicotrpicas de 1971 y figuran en el titulo 21
seccin 1(c) del cdigo de los Estados Unidos de la edicin de 1970, aunque la
clasificacin de los hongos que las contienen no siempre est clara. Seis estados
miembros de la UE han fortalecido su legislacin sobre estos productos desde
2001, en respuesta a la inquietud suscitada por la prevalencia de su uso:
Dinamarca (2001), Pases Bajos (2002), Alemania, Estonia, Reino Unido (2005) e
Irlanda (2006) (Guzmn et al., 2000).
La legislacin contra el uso de hongos alucingenos plantea varios problemas a
los legisladores. Ante todo, no debe penalizarse injustificadamente a las personas
en cuyas tierras crecen los hongos de forma natural. Una solucin consiste en
especificar que los hongos son ilegales si se manipulan o se preparan segn la
legislacin irlandesa y britnica, lo que denota intencin de utilizarlos. As mismo,
el tribunal supremo neerlands ha declarado que deben estar bajo control cuando
se sequen o procesen. Al aumentar el nmero de establecimientos especializados
en drogas naturales que se valan de este resquicio legal para vender hongos
frescos, en el Reino Unido se sostuvo en el 2004 que incluso el envasado es una
forma de preparacin, pero finalmente en el 2005 se modific la legislacin
britnica con el fin de hacerla aplicable a los hongos alucingenos, sin mencin de
su estado (Guzmn et al., 2000).
29
La legislacin antidroga de Grecia, Italia, Chipre y Lituania incluye una clusula

general que prohbe el cultivo de plantas de las que se pueden extraer sustancias
narcticas. Sin embargo, es discutible si un hongo es estrictamente una planta;
por ello, en el 2005 se modific la legislacin Alemana para adoptar el trmino
sustancias orgnicas en lugar del anteriormente utilizando plantas y animales, con
el fin de no dejar ningn resquicio para los hongos. Los cambios de la legislacin
han influido sobre la oferta y el volumen global de ventas de hongos alucingenos
a travs de Internet (Guzmn et al., 2000).
En Colombia existe la ley 30 de 1986 por la cual se adopta el Estatuto Nacional de
Estupefacientes (ENE), el cual dicta que las sustancias psicotrpicas se deben
cultivar, transportar, comercializar y consumir de acuerdo a las normas que expida
el ministerio de salud. Dichas sustancias se limitaran nicamente a fines mdicos
y cientficos, conforme la reglamentacin que para el efecto expida el ministerio de
salud. En esta ley no se especifica cules son las sustancias psicotrpicas lo que
no indica que el alcaloide Psilocibina sea una sustancia ilegal (ENE, 1986).
2.8.
PRODUCCIN Y CULTIVO
El cultivo de setas es una tcnica relativamente moderna que iniciaron los

franceses en el siglo XVII y que rpidamente se propag por Europa. En Amrica
se mejor sustancialmente el mtodo dando inicio a lo que hoy se conoce por
fungicultura. Lgicamente el inters principal fue el culinario, de ah que el primer
hongo cultivado fuese el champin (Agaricus bisporus). La tcnica bsica se ha
ido adaptando a los requerimientos propios de cada tipo de seta. En los aos
setenta aparecieron diferentes mtodos para el cultivo de hongos psilocbicos que
provocaron la independencia del consumidor frente al mercado negro. La tcnica
se le conoca como "San Antonio" y resultaba un poco laboriosa y requera
conocimientos y experiencias de laboratorio (Martnez, et al., 1991).
De todas las especies de setas psilocibnicas el P. cubensis es sin duda la ms
conocida. La principal razn es su facilidad de cultivo en sustrato de arroz integral,
trigo y vermiculita (material con aspecto de trocitos de corcho, utilizado en
jardinera e hidropona que se caracteriza por absorber mucha cantidad de agua).
Desde hace un par de dcadas en Estados Unidos, Holanda y ms recientemente
en Espaa, el cultivo domstico de esta seta no cesa de crecer (Flegg, 1987).
30
2.8.1. Cultivo en sustratos esterilizados

Etapas del cultivo
Preparacin del sustrato: Verificar que los sustratos slidos se encuentren
en buen estado para el cultivo donde crecern los hongos.
Desinfeccin, pasteurizacin o esterilizacin: El sustrato una vez preparado
debe esterilizarse para garantizar la no contaminacin del sustrato por otros
microorganismos. Generalmente se realizan tratamientos trmicos.
Semilla o inculo: Se produce en medio lquido (extracto malta), hasta
obtener formacin de pellets.
Micelio: Se inoculan los pellets obtenidos en el medio lquido en sustrato de
trigo.
Siembra: En esta etapa se mezcla el sustrato con el micelio y el precursor
qumico.
Incubacin: El sustrato sembrado es colocado en bolsas de polipropileno y
en cajas plsticas a una humedad relativa superior al 85%, una temperatura
de 18C y luz difusa (penumbra), hasta observar la formacin completa de
los cuerpos fructferos.
Produccin: Durante esta etapa se debe regar y cosechar los hongos. Estos
generalmente se producen en oleadas, de tal modo que, al cabo de una
semana se cosecha todo lo producido por bolsa y cajas y comienzan a
desarrollarse tardando nuevamente una semana en llegar al estado adulto
(Stamets, 2000).
Los sustratos en fase slida son aquellos donde se da el crecimiento microbiano y
la generacin de productos ocurre en la superficie de sustratos slidos como:
crecimiento en suelos, cultivos de superficie, formacin de ensilados o compost,
cultivo de hongos, crecimiento en afrecho celulsico, tcnicas de alimentos
fermentados como el pan, el queso madurado con hongos, encurtidos y embutidos
(Hesseline, 1983).
Las ventajas de utilizar sustratos slidos son:
Los medios de cultivo slido son simples, generalmente subproductos
agrcolas que presentan un alto contenido de nutrientes.
31
La baja actividad del agua es de gran ayuda para evitar las

contaminaciones, especialmente de bacterias y levaduras.
Pueden emplearse, frecuentemente conidios como inculo en los procesos
de crecimiento de hongos, lo cual disminuye los costos y las
manipulaciones en la preparacin del inculo.
Los cuerpos fructferos de los hongos que se producen son mucho ms
resistentes y tienen mejor adaptabilidad a las condiciones en las que se
aplican (Doelle y Mitchell, 1992).
Cultivo sustrato de trigo

Presenta ventajas considerables con relacin a otros derivados agrcolas, como su
fcil almacenamiento sin que se presente descomposicin o fermentacin del
mismo y una menor contaminacin a causa de mohos o bacterias debido a la
composicin qumica nica de la paja de trigo (Savoie et al., 2000) (tabla 3).
Tabla 3 Composicin qumica sustrato de trigo (Savoie et al., 2000).
Composicin
Sustrato de trigo
Protena (%)
7.9
Carbono (%)
52.5
C/N (%)
41.0
Lignina (%)
8.6
Celulosa (%)
35.2
Cultivo compost de champin

Posee una alta relacin C/N la cual hace que la descomposicin de dicho sustrato
sea lenta, mejorando las condiciones qumicas y biolgicas de ste (Savoie et al.,
2000), permitiendo que el hongo P. cubensis tenga una fuente de nutrientes
adecuada para su ptimo crecimiento (tabla 4).
32
Tabla 4. Composicin qumica compost de champin (Stofella y Kahn, 2005).

Composicin
pH
Conductividad Elctrica (S.cm-1)
C/N (%)
Materia Seca
Nitrgeno Ntrico
Nitrgeno Amoniacal
Nitrgeno Total Disponible
Fsforo
Potasio
Calcio
Magnesio
Sodio
Cloro
Zinc
Cobre
Compost de champin
8.2-7.3
2380-14210
15:1-9.1
55.3-53.1
5.8
2.8
9-4
11.2-2.9
18.2-3-3
83.4-27
3.8-2.3
4.1-1.4
7.5-1.5
0.97-0.44
0.37
Parmetros de crecimiento
En el nivel de desarrollo en cuanto al crecimiento del hongo, se encuentran las
siguientes etapas y parmetros de crecimiento:
Cultivo en cajas y bolsas
Se lleva a cabo segn los estndares de preparacin establecidos previamente.
En el cultivo en cajas se utiliza una capa de cobertura con un espesor de 2.54 - 5
cm (Stamets y Chilton, 1983).
pH inicial: 6.8 - 7.2
Humedad Relativa: > 90%
Temperatura del sustrato: 29 a 30 C
Duracin: 5 a 10 das
CO2 : 5000 a 10000 ppm
Requerimiento de luz: deber ser en total oscuridad
33
Intercambio de aire fresco: 0 volumen/hora

Formacin de micelio
Esta etapa se da cuando se ha colonizado todo el sustrato, se caracteriza por un
color blanco y una textura algodonosa, presentando un color azul cuando la
formacin del micelio se ha completado, evidenciando de esta forma, la presencia
del alcaloide Psilocibina (Stamets y Chilton, 1983).
Humedad Relativa: 90%
Temperatura: 29 a 30C
Duracin: 10 a 14 das
CO2 : 5000 a 10000 ppm
Requerimiento de luz: n/a
Intercambio de aire fresco: 0 volumen/hora
Formacin de primordios (Stamets y Chilton, 1983).
Humedad Relativa: 95 a 100%
Temperatura: 23 a 25 C
Duracin: 6 a 10 das
CO2 : 5000 ppm
Requerimiento de luz: natural difusa o exposicin de 12 a 16 horas/da
con luz fluorescente
Intercambio de aire fresco: 1-3volumen/hora
Formacin de cuerpos fructferos (Stamets y Chilton, 1983).
Se da entre la 4a y 5a semana de cultivo.
Humedad Relativa: 85 a 92%
Temperatura: 23 a 25 C
Duracin: 5 das
CO2 : < 5000 ppm
Requerimiento de luz: natural indirecta
Intercambio de aire fresco: 1-3volumen/hora
Contenido de Humedad del Hongo: 92% de agua y 8% de materia seca
Contenido Nutricional del Hongo: sin establecer.
En la siguiente tabla se resumen todos los parmetros de crecimiento:
34
Tabla 5. Parmetros de crecimiento (Stamets y Chilton, 1983).

Etapa
Formacin
del Micelio
Duracin
10 a 14
das
Formacin
de
6 a 10 das
Primordios
Formacin
de
Cuerpos
Fructferos
Etapa de
Cosecha
5 das
Humedad
90%
95 a 100%
85 a 92%
Temperatura
CO2
Luz
29 a 30C
5000 a 1000
ppm
Intercambio de
aire fresco: 0
volumen/ hora
n/a
23 a 25C
5000 ppm
Intercambio de
Natural
aire fresco: 1-3
difusa o
volumen/ hora.
exposicin
Recuerde que
de 12 a 16
el aire debe
horas/da con
estar libre de
luz
contaminantes,
fluorescente
tales como el
polvo
23 a 25C
<5000 ppm
Intercambio de
aire fresco: 1-3
volumen/ hora
Natural
indirecta
Cuando el sombrero se vuelve convexo y poco despus se da una ruptura

parcial del velo
Estrategias bsicas para la formacin de hongos

Muchos de los factores ambientales proveen condiciones ideales para el
desarrollo y crecimiento del hongo. Usualmente una pequea variacin en la
temperatura junto con la adicin de agua produce un incremento en la humedad,
35
favoreciendo el ptimo desarrollo del hongo. El agua es esencial para la absorcin

de nutrientes que necesita el micelio (Stamets y Chilton, 1983).
Los niveles altos de humedad son necesarios durante la etapa de fructificacin
para reducir evaporacin del sustrato, de tal modo que se promueva la formacin
de los primordios. El mejor crecimiento de los carpforos puede correlacionarse
con la alta humedad atmosfrica y el crecimiento micelial cambia
considerablemente con el contenido de agua del sustrato (Shoji, 1998).
2.9.
APLICACIONES Y USOS DE LA Psilocibina
Algunas de las principales aplicaciones y usos de la Psilocibina se han dado en los

Estados Unidos, donde la FDA aprob a partir del 2001 varios estudios sobre su
uso.
En el campo de la medicina se presentan varios usos, muchos de ellos publicados
por MAPS (Multidiciplinary Association for Psychedelic Studies es una revista que
ha publicado diferentes estudios acerca del uso y los beneficios de Psilocibina),
los cuales describen tratamientos realizados a pacientes con cncer, adems
han publicado estudios en efectos de la cognicin para mejorar los conocimientos
adquiridos a partir de la percepcin, estimulando el desarrollo de la creatividad. Y
estudios sobre tratamientos psicofarmacolgicos en el control de prisioneros de la
crcel Concord en Massachusetts para evitar la reincidencia de ellos (Perrine,
1999)
Otro uso de la Psilocibina se realiz por parte del psiquiatra Charles Grob quien
lider un proyecto en el Harbor-UCLA Medical Center, donde suministraba a
pacientes enfermos terminales de cncer distintas dosis de Psilocibina, Grob
observ que los pacientes redujeron su ansiedad, mejorando el nimo y logrando
en ellos una mayor aceptacin de su situacin mdica (Moreno y Delgado, 1997).
En el campo de la psiquiatra, el uso de la Psilocibina se remonta al ao de 1962
en una institucin psiquitrica en Long Beach, California. Se us Psilocibina para
tratar nios afectados con esquizofrenia y autismo infantil, los resultados en los
pacientes fueron de mejor comportamiento y aceptacin social (Gary, 1997).
36
2.10. ESTADO DEL ARTE

Las especies de hongos del gnero Psilocybe originarios de Nepal, no han sido
muy estudiadas; sin embargo las dems especies de la regin se han venido
estudiado desde comienzos del siglo XVIII (Berkeley, 1854). El estudio realizado
de las diferentes especies de Psilocybe fueron exploradas en diferentes
localidades:
Koradi ubicada en el norte cerca al Tibet, la cual presenta una regin de
zona templada.
Kathmand ubicada en el centro del pas y Dhulikhel ubicada al este de
Kathmand, presentan clima hmedo subtropical.
Royal Chitwan Nacional Park en el sur cerca de la India, presenta un clima

tropical considerado evergreen forest.
De las localidades mencionadas, solamente se encontr el gnero Psilocybe en
Dhulikhel y Chitwan Park, donde se realizaron diferentes estudios a las especies
Psilocibicas. Se estudi la longitud, el ancho y espesor de las esporas y la
actividad psicotrpica de los hongos (figura 4).
Las
especies
Psilocibicas
estudiadas
fueron:
Psilocybe
percevali,
P. pseudobullacea y P. cubensis. Los resultados arrojados por la investigacin
certifican que el P. cubensis posee actividad alucingena y efectos psicoactivos
(Kasuya y Guzmn, 2004).
El incremento de la popularidad de los hongos mgicos, se debe al fcil acceso
que hay para adquirir hongos con propiedades psicoactivas en el mercado negro,
a los kits de cultivo que se encuentran va internet y a las tiendas de recreacin
ubicadas en Europa. La Psilocibina se ha convertido en una herramienta
importante para estudios neurobiolgicos de los estados de alteracin de la
conciencia. Un incremento en el nmero de publicaciones cientficas han renacido
de la investigacin con Psilocibina debido a sus modelos sicticos ya que
37
algunos estudios han investigado las propiedades farmacocinticas de la

Psilocibina en humanos (Hasler y Bourquin, 2002).
El estudio clnico reportado en el artculo Renal excretion profiles of Psilocin
following oral administration of Psilocybin: a controlled study in man, fue aprobado
por el comit del hospital universitario de psiquiatra en Zrich, la administracin
de la Psilocibina fue controlada y autorizada por la oficina federal Suiza de salud
pblica y las personas seleccionadas fueron sometidas a estudios psiquitricos
para asegurar que no tuvieran registro de parientes con desordenes psiquitricos
o adicciones a las drogas (Hasler y Bourquin, 2002). En el proceso de desarrollo,
los mdicos suministraron Psilocibina por va oral en dosis de 21225 g/Kg de
peso corporal. La investigacin observ que el cuerpo posee la capacidad de
degradar la Psilocibina a Psilocina, sta se reduce a un aldehdo el cual se
descompone formando 2 metabolitos debido a una de-aminacin (4-hydroxyindol3-yl-acetic acid) y una oxidacin (4-hydroxytryptophol) (figura 10). (Hasler y
Bourquin, 2002).
38
Figura 10. Descomposicin de Psilocibina en el cuerpo humano (Hasler y

Bourquin, 2002).
El anlisis para definir los efectos que posee la Psilocibina en los humanos, se
realiz por medio de la recoleccin de la orina de los voluntarios; donde por medio
de un estudio HPLC (figura 11) se cuantific la cantidad de Psilocina presente en
las excreciones urinarias (Hasler y Bourquin, 2002).
Figura 11. HPLC-ECD Determinacin de Psilocina (Hasler y Bourquin, 2002).

Este estudio permiti conocer que a dosis entre 10 a 18 mg de Psilocibina, se
induce a estados alterados de conciencia. Luego de 60 minutos de haberse
suministrado la droga, los voluntarios experimentaron cambios en la percepcin
sensorial afectando el humor, alteraciones en la percepcin del tiempo y el
espacio, ilusiones visuales y alucinaciones. Las dosis de Psilocibina utilizadas en
el estudio fueron toleradas por los voluntarios, los cuales presentaron pocas
reacciones adversas tales como nauseas y mareos lo que lleva a concluir que la
Psilocibina es totalmente segura para usos experimentales en individuos
saludables (Hasler y Bourquin, 2002).
39
El artculo The effects of consciousness-expanding drugs on prisoner

rehabilitation describe como desde 1960 se realizaron estudios acerca del uso de
Hongos Mgicos para el tratamiento de enfermedades psiquitricas y
psicolgicas. Uno de los proyectos y el ms importante fue realizado por
estudiantes de la Universidad de Harvard, el cual inici en el Instituto Correccional
Concord Massachusetts donde se pretenda realizar una investigacin detallada
acerca de los efectos de la conciencia con el uso de dosis de Psilocibina en
prisioneros (Leary, 1969).
En Marzo de 1961 se di inicio al estudio de los efectos de la Psilocibina en
prisioneros de la correccional de Concord, ste estaba conformado por seis
prisioneros voluntarios y dos estudiantes de la Universidad de Harvard. A todos los
participantes se les suministr 20 mg del hongo mgico, incluyendo a los
estudiantes de Harvard ya que uno de los requisitos para llevar a cabo el estudio
fue que personal de la universidad participara en el desarrollo del proyecto para
asegurar que el uso de la Psilocibina era totalmente seguro y no era perjudicial
para la salud. Los participantes reportaron experimentar un incremento de los
sentidos, en la vista y el odo. (Leary, 1969).
Despus de seis meses de tratamiento los prisioneros cambiaron de actitud
presentando un decrecimiento en la conducta hostil, cinismo, delincuencia e
irresponsabilidad, tomando adems un comportamiento mucho ms maduro y
social. El proyecto tuvo una duracin de dos aos, en donde participaron 168
personas de las cuales 131 eran reclusos y 37 personal de la Universidad de
Harvard; los cuales luego del suministro de la droga no presentaron ningn
episodio de violencia ni efectos negativos en la salud fsica o mental lo cual
confirma que los efectos de la Psilocibina en bajas concentraciones tiene efectos
positivos y satisfactorios (Leary, 1969).
40
3. METODOLOGIA
3.1.
PROPAGACIN DE LA CEPA
Se realiz la inoculacin de la cepa proporcionada por el cepario de la Universidad

Catlica de Oriente ubicado en el Laboratorio de Micologia, en agar extracto malta
(MEA). La cepa se aisl en la cmara de flujo laminar en donde se inocul una
muestra de 1x1cm del micelio del hongo en cajas Petri con 20ml de MEA
obtenindose la rplica de la cepa del P. cubensis (figura 12).
El crecimiento radial micelial de la cepa en las cajas Petri present colonizacin
total alrededor de 15 das. Estas se mantuvieron en incubadora a una temperatura
de 27C.
Figura 12. Cepa P. cubensis
3.2.
OBTENCIN DEL MICELIO DE SIEMBRA (SEMILLA DEL HONGO)
Para la obtencin del micelio de siembra se inocularon pellets que se produjeron a

partir de medio lquido (extracto de malta), este medio lquido se prepar con 100
ml de agua destilada y 2 g de extracto de malta en 6 erlenmeyer en los cuales se
inocularon con 5 cuadros de 1x1 cm de la cepa obtenida previamente, en cada
erlenmeyer (figura 13).
41
Figura 13. Preparacin medio lquido extracto de malta e inoculacin de

pellets
Los erlenmeyers se mantuvieron en el sheaker por 10 das a 27C y 150 rpm
hasta observar la formacin de abundantes pellets (figura 14).
Figura 14. Obtencin de pellets

Posterior a la obtencin de los pellets, se procedi a la inoculacin de stos en
trigo, el cual fue previamente esterilizado y se utiliz en proporciones de 600 g en
400 ml de agua en bolsas de polipropileno, las bolsas con el trigo se llevaron al
autoclave a 121C y 15 psi por dos horas, con una humedad del 50%, en base
hmeda (figura 15).
42
Figura 15. Preparacin de semilla

El da posterior a la esterilizacin, se inocularon las bolsas con trigo con los pellets
que fueron obtenidos en el medio lquido. Este procedimiento se realiz en la
cmara de flujo laminar con los debidos cuidados de esterilizacin; las bolsas se
mantuvieron en la incubadora a una temperatura de 27C, hasta observar en ellas
la colonizacin total del sustrato de trigo por el micelio del hongo; este proceso
tuvo una duracin aproximada de 12 das (figura 16).
Figura 16. Colonizacin de semilla
43
3.3.
OBTENCIN DE LOS CUERPOS FRUCTIFEROS
Se utiliz triptamina como precursor qumico en el desarrollo del proyecto ya que

esta sustancia es la nica que se encontr reportada en la literatura por Gartz
(1989), debido que al utilizar 25 mg de triptamina en 10 g de sustrato se
incrementa en un 3,3% la cantidad de alcaloide presente en el hongo (Psilocibina).
Los medios de cultivo que se utilizaron se dispusieron en bolsas de polipropileno y
cajas plsticas respectivamente. Esto se debe a que el compost de champin
tiene un comportamiento ms eficiente en bolsas, el cual ha sido demostrado
experimentalmente y es la forma ms comn en la que se utiliza comercialmente
dicho sustrato. Por su parte el sustrato de trigo se dispuso en cajas, ya que debe
tener una cobertura; la cobertura le garantiza una alta humedad al sustrato, lo cual
permite la formacin de los cuerpos fructferos del hongo (Steineck, 1987).
3.3.1. Siembra en sustrato de trigo

Para la obtencin de los cuerpos fructferos, se esterilizaron 12 bolsas de
polipropileno con 300 g de trigo en 200 ml de agua cada una por dos horas en
autoclave. En el trigo esterilizado se inocularon 50 g de semilla, la cual
previamente se mezcl con el precursor qumico, esta mezcla fue sembrada en las
cajas plsticas (25 cm de largo, 19 cm de ancho y 11 cm de profundidad) las
cuales se limpiaron con perxido, para disminuir los riesgos de contaminacin en
el rea de siembra. Todo el procedimiento se realiz en la cmara de flujo laminar
de la Universidad Catlica de Oriente.
3.3.2. Siembra en compost de champin

El compost de champin no fue sometido a ningn tipo de esterilizacin, debido a
que este se encontraba pasteurizado. La siembra se realiz en bolsas de
polipropileno (40 cm de largo por 30 cm de ancho) con 500 g de sustrato el cual
presentaba una humedad de 65%. De igual forma que el experimento en trigo el
precursor qumico fue mezclado con la semilla y posteriormente inoculado en el
sustrato. Las bolsas fueron cerradas con aros de PVC, servilletas y resortes, lo
cual permite la liberacin del CO2 presente en el compost de champin, debido a
que este puede inhibir la colonizacin de la semilla en el sustrato (figura 17).
44
Figura 17. Siembra en compost de champin
El compost de champin est compuesto por: bagazo de caa, tamo de arroz

(cascarilla) y pollinaza.
A partir de un diseo de experimentos de dos factores (sustratos slidos y
precursor qumico), con dos niveles para el primer factor y 4 niveles para el
segundo factor, se encuentra un total de 8 tratamientos (tabla 6) los cuales se
realizaron por triplicado para un total de 24 tratamientos.
Tabla 6. Diseo de experimentos para obtencin de cuerpos fructferos
Tratamiento
1
2
3
4
Sustrato trigo
500 g
500 g
500 g
500 g
Factor
Compost champin
500 g
500 g
500 g
500 g
Triptamina
0g
1.0 g
2.0 g
3.0 g
Posterior a la siembra en los sustratos slidos realizada a partir del diseo de

experimentos, los tratamientos fueron llevados al cuarto de incubacin de la UCO,
donde la humedad relativa es alrededor de 75% y una temperatura promedio de
45
17C. La colonizacin completa del sustrato tard un mes, la cual comparada con
la literatura fue lenta (figura 18).
Figura 18. Diseo de experimentos sin cobertura

Transcurrido el mes se procedi a colocar la cobertura (compuesta de tierra y
Carbonato de Calcio) que ayuda al desarrollo del hongo y la aparicin de los
primeros carpforos, debido a que sta protege el micelio de la desecacin,
proporciona una reserva de agua para el desarrollo de los primordios y favorece el
crecimiento de la microflora especial que estimula el proceso de fructificacin
(Pacioni, 1990). La cobertura se utiliz con un espesor de 1cm (figura 19) en
ambos sustratos. Los tratamientos fueron regados da por medio con abundante
agua para mantener la cobertura hmeda. Transcurridos 15 das no se observ la
aparicin de carpforos debido a que todos los tratamientos includos los testigos
presentaron contaminacin total y aparicin de insectos en ambos sustratos (figura
20).
46
Figura 19. Sustrato de trigo y compost de champin con cobertura
Figura 20. Contaminacin bacteriana en sustrato de trigo y compost de

champin
3.4.
DISEO DE EXPERIMENTOS Y ANLISIS ESTADSTICO
Debido a la contaminacin presente en los sustratos slidos, se realizaron

nuevamente los ensayos con una variacin en el diseo de experimentos respecto
a la cantidad de triptamina utilizada (0.1, 0.2 y 0.4 g) que equivale a porcentajes
de concentraciones de 0.03%, 0.06% y 0.13% respectivamente, puesto que en el
diseo de experimentos anterior se comprob que la cantidad de triptamina
utilizada en los tratamientos actu como inhibidor de crecimiento del micelio por lo
cual no se obtuvieron cuerpos fructferos, teniendo en cuenta adems la
contaminacin presente en los sustratos.
El nuevo diseo de experimentos de 2 factores (sustratos slidos y precursor
qumico), con 2 niveles para el primer factor y 4 niveles para el segundo factor, se
47
encuentra un total de 8 tratamientos (tabla 7) los cuales tambin se realizaron por

triplicado.
Tabla 7. Nuevo diseo de experimentos para obtencin de cuerpos
fructferos
Tratamiento
1
2
3
4
Factor
Sustrato trigo Compost champin Triptamina
300 g
300 g
0g
300 g
300 g
0.1 g
300 g
300 g
0.2 g
300 g
300 g
0.4 g
Los tratamientos se prepararon con la misma cantidad de semilla (50 g lo que

equivale a una tasa de inoculacin del 10%). La adicin del precursor qumico se
realiz directamente en los sustratos slidos porque en los tratamientos anteriores
se not un retraso en la propagacin del micelio del hongo en los sustratos debido
a la mezcla de la semilla con el precursor. Se utilizaron 300 g de sustrato ya que
se disminuy la concentracin del precursor (Triptamina) y por ello se requiri una
menor cantidad de este.
En el nuevo diseo de experimentos ambos sustratos se sembraron en cajas. En
el compost de champin se observ una colonizacin completa transcurrido un
mes, mientras que en el sustrato de trigo se present contaminacin aparente del
hongo Penicillium, dicha contaminacin pudo haber sido causada por la edad del
micelio de siembra (aproximadamente 2 meses de almacenamiento) (figura 21).
Figura 21. Tratamientos contaminados con Penicillium en sustrato de trigo

48
La inoculacin de la semilla en el compost de champin se realiz en el

laboratorio de micologa de la UCO libre de viento y rodeado de mecheros para
evitar la presencia de microorganismos en el ambiente. Se observ la colonizacin
completa del micelio en el sustrato transcurrido un mes y se procedi a colocar la
cobertura en los tratamientos. Esta se prepar en un recipiente con poca cantidad
de agua y se adicion una pequea capa (2 mm de espesor) que cubriera
solamente la superficie de los tratamientos (figura 22).
Figura 22. Adicin de cobertura en tratamientos de compost de champin

Los tratamientos se regaron diariamente con poca agua, manteniendo la humedad
del sustrato. La aparicin del primer carpforo se present a los 13 das luego de
la adicin de la cobertura (figura 23).
Figura 23. Aparicin de capforos

49
El anlisis estadstico se realiz por medio del Software Statgraphics plus 5.1
basado en un anlisis de varianza (ANOVA). Fue necesario realizar un ajuste en el
software al momento de ingresar los factores del diseo debido a la contaminacin
masiva del sustrato de trigo se cambi la clase factorial de mltiple nivel por la
categora de factorial simple. Este modelo se denomina anlisis de Varianza de
clasificacin en un sentido porque solo se investiga un factor. Adems se requiere
que el experimento se realice en orden aleatorio, de manera que el medio
ambiente en el que se usan los tratamientos (llamados a menudo unidades
experimentales) sea lo ms uniforme posible. Por lo tanto, este diseo
experimental es completamente aleatorizado (Montgomery, 1991).
Variables de respuesta
Las variables cuantitativas determinadas fueron:
Eficiencia biolgica (EB): Esta unidad de medida da una informacin
precisa cuando se tiene el sustrato ya esterilizado en los bloques
respectivos. Igualmente constituye la base para establecer el rendimiento
(Leatham y Stalham, 1987).
EFICIENCIA
BIOLGICA
de hongos fres cos cos echados

100
g de sustrato hmedo
Rendimiento: Da idea del rea que se necesita para mantener una

cantidad determinada y constante de produccin. Esta medida permite
establecer los clculos tericos para una produccin a escala (Leatham y
Stalham, 1987).
RENDIMIENT O
g hongos
rea ocupada por el
fres cos
sustrato humedo cm 2
Precocidad de colonizacin: Es el tiempo transcurrido entre el da de la

inoculacin de la semilla en el sustrato y el da en que aparecen los
primeros carpforos (primordios) (Leatham y Stalham, 1987).
50
Cuantificacin del alcaloide: Da idea de la cantidad de alcaloide

presentes en las muestras obtenidas en la extraccin realizada en el
ultrasonido y evaluadas en el HPLC (Dellacassa, 2002).
CONCENTRACIN
ALCALOIDE
rea Alcaloide
Concentracin SI
rea SI
Donde SI es estndar interno
3.5.
RECOLECCIN DE CUERPOS FRUCTIFEROS
La recoleccin de los cuerpos fructferos se realiz pasados 7 das de la primera

aparicin de los primordios en el compost de champin. Los hongos se
colectaron mediante un corte transversal cerca de la base inferior del mismo
(figura 24), sin que las hifas del hongo se vean afectadas, en caso que se desee
obtener segundas cosechas. Los especmenes colectados se dejaron secar por 4
das al aire libre y en oscuridad permanente, debido a que la luz del sol puede
llegar a oxidar la Psilocibina presente en el hongo (Anastos et al., 2005).
Figura 24. Recoleccin de cuerpos fructferos en compost de champin
51
3.6.
EXTRACCIN DE LA PSILOCIBINA
La tcnica que se utiliz para extraer la Psilocibina, se encuentra reportada en el

artculo Hongos Alucingenos en el Mercado Alemn. Simples Instrucciones para
la Examinacin e Identificacin de la revista Forensic Science International por
Musshoff, F. Madea, B. Beike , J. 2000. El cual describe un mtodo poco
tradicional en el que utilizan el ultrasonido como mtodo de extraccin.
El mtodo propuesto consiste en triturar 100 mg de hongo seco y adicionarle 9 ml
de metanol. La mezcla es llevada al ultrasonido por 120 minutos a una
temperatura mxima de 50C, luego la mezcla es filtrada y el clarificado es llevado
al HPLC para la respectiva identificacin y cuantificacin de Psilocibina presente
en la muestra. La columna utilizada es LiChrospher 60RP-select B (250X4mm,
5m), el solvente A consiste en 20 mM de KH2PO4 y el solvente B es acetonitrilo.
(Musshoff, F. et al., 2000).
Para la extraccin realizada se utilizaron 2,8 g de hongo seco en 50 ml de
metanol, debido a que en ensayos previos se comprob que con la cantidad
reportada en el artculo, el metanol se evaporaba completamente sin obtener
ningn resultado en la extraccin del alcaloide de inters (figura 25).
Figura 25. Cromatografa de extraccin de la Psilocibina de P. cubensis

(Musshoff, F. et al., 2000).
52
3.7.
EVALUACIN DE LA PRESENCIA DE PSILOCIBINA
El mtodo que se utiliz para realizar la evaluacin cualitativa de la presencia de

Psilocibina fue la cromatografa de capa fina, utilizando como agente revelador el
reactivo de Dragendorff, la cual da positiva a la presencia del alcaloide mostrando
una coloracin naranja-marrn.
Figura 26. Presencia de Psilocibina en cuerpos fructferos

Otro mtodo para determinar la presencia de Psilocibina es directamente sobre el
hongo; se hace una presin fuerte en el pie o estpite (magulladura) revelando una
coloracin azul tpica de la presencia de Psilocibina en el hongo (figura 26).
53
4. RESULTADOS Y ANLISIS
4.1.
SUSTRATO DE TRIGO
El micelio del hongo fue colonizando el sustrato correctamente durante la primera

semana despus de haberlo inoculado y posteriormente se observ contaminacin
en todos los tratamientos, la cual fue progresiva en el tiempo. Por esta razn se
descart el sustrato, puesto que no se observ posibilidad alguna de propagacin
del micelio debido a su alta cantidad de contaminantes (figura 21).
Todos los grupos de contaminacin descritos en el marco terico se presentaron
en el desarrollo del diseo de experimentos, por tal motivo no se obtuvieron
cuerpos fructferos y ningn tipo de resultado positivo en la utilizacin del sustrato
de trigo. A pesar de los problemas presentados el sustrato result siendo el
adecuado para la obtencin del micelio ya que hubo una colonizacin completa en
dicho procedimiento y sin rasgos de contaminacin.
Aunque la literatura reporta que el sustrato de trigo es adecuado para obtener
cuerpos fructferos de P. cubensis por su alto contenido de nutrientes y su bajo
riesgo de contaminacin, en este caso el resultado fue contrario a lo esperado. La
contaminacin pudo deberse a una inadecuada esterilizacin del sustrato y de los
materiales utilizados para la siembra o a microorganismos presentes en la cmara
de flujo laminar debido a un bajo mantenimiento de sta puesto que los ensayos
se realizaron varias veces presentando todos los mismos agentes de
contaminacin.
La contaminacin del sustrato no permiti obtener los suficientes resultados para
determinar las variables de respuesta (eficiencia biolgica, rendimiento,
precocidad de colonizacin y cantidad de alcaloide), que solo se pueden medir
despus de la cosecha, compararlas estadsticamente y determinar el mejor
tratamiento.
54
4.2.
COMPOST DE CHAMPIN
El compost de champin, previamente desinfectado por pasteurizacin, produjo

carpforos en la mayora de los tratamientos, excepto 2 rplicas de testigos (0 g
de triptamina) y en una rplica con 0.4 g de triptamina; por tal razn se puede
afirmar que ste sustrato es adecuado para obtener cuerpos fructferos del hongo
P. cubensis (tabla 9).
4.2.1. Crecimiento de cuerpos fructferos en el tiempo

Aparte de realizar los anlisis estadsticos a cada una de las variables de
respuesta evaluadas, se efectu un estudio adicional para observar la incidencia
que tiene el precursor qumico en el crecimiento del estpite y el pleo. Para esto
se escogi de cada tratamiento un hongo al azar, al cual se le realizaron
mediciones de estpite y pleo con el fin de observar el crecimiento durante 7 das,
tiempo en el cual el hongo presenta la mayor cantidad de alcaloide y se encuentra
en etapa de adultez (grficos 1 y 2).
Crecimiento de Estpite vs Tiempo

18
16
14
Estpite (mm)
12
Estpite testigo
10
Estpite 0.1 g
Estpite 0,2 g
Estpite 0,4 g
4
2
0
1
Grfico 1. Crecimiento de estpite en el tiempo

En el grfico 1 se observa el comportamiento del crecimiento del estpite de los
hongos seleccionados de cada tratamiento, en el tiempo. Se aprecia que la
55
pendiente del hongo del estpite, del tratamiento 0.4 g de triptamina es menor,
mientras que las dems pendientes tienen un comportamiento muy similar. La
causa de este retraso, comparado con los dems tratamientos, puede deberse a la
cantidad de triptamina utilizada, pues se ha observado a lo largo de la
investigacin que a mayor cantidad de triptamina, el crecimiento es mucho ms
lento.
Diametro pleo (mm)
Crecimiento de Sombrerillo vs Tiempo

9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
Pleo Testigo
Pleo 0,1 g
Pleo 0,2 g
Pleo 0,4 g
Tiempo (Das)
Grfico 2. Crecimiento de pleo en el tiempo

En el grfico 2 las pendientes muestran un comportamiento diferente comparado
con el grfico 1. El comportamiento de las pendientes muestran el resultado y el
crecimiento del pleo de los hongos elegidos en los diferentes tratamientos, as
mismo se puede observar que los tratamientos de 0.2 y 0.4 g de triptamina
presentan un menor crecimiento en el tiempo comparado con los hongos de los
tratamientos de testigo y 0.1 g de triptamina; esto es causado por la cantidad de
precursor qumico utilizado en cada uno de los tratamientos.
Para poder determinar el mejor tratamiento en el crecimiento del hongo se calcul
la velocidad de crecimiento en el estpite y en el pleo (mm/da), teniendo en
cuenta que los datos tomados corresponden a la fase exponencial o de
crecimiento (tabla 8).
56
Tabla 8. Velocidad de crecimiento en los tratamientos
Pendiente=Velocidad Pendiente=Velocidad
Tratamiento
de crecimiento
de crecimiento pleo
estpite (mm/da)
(mm/da)
Testigo
2.453
0.964
0.1 g
2.014
1.11
0.2 g
1.814
0.867
0.4 g
1.175
0.982
La tabla 8 corresponde a las pendientes (velocidad de crecimiento) mostradas en

los grficos 1 y 2. Se observa que el mejor tratamiento es el hongo analizado del
testigo debido a su mayor crecimiento (durante 7 das) en estpite 2.543 mm/da y
en el pleo 0.964 mm/da. Lo cual nos da una idea de que a mayor cantidad de
precursor qumico utilizado, menor es la velocidad de crecimiento de los cuerpos
fructferos puesto que la energa se utiliza para producir mayor cantidad de
metabolito secundario (Psilocibina).
4.2.2. Variables cuantitativas evaluadas en la produccin de cuerpos

fructferos
Se obtuvo cosecha en todos los tratamientos ms no en todas las rplicas de los
tratamientos, arrojando las variables de respuestas mostradas en la tabla 9.
57
Tabla 9. Eficiencia biolgica, Rendimiento y Precocidad de colonizacin para

los tratamientos con cosecha
Variables
Testigo
0.1 g de Triptamina
de
Rplica 1 Rplica 2 Rplica 3 Rplica 1 Rplica 2 Rplica3
Respuesta
Eficiencia
Biolgica
0
7.24
0
8.17
3.33
2.00
(%)
Rendimiento
(g/cm2)
0.10
0.11
0.05
0.03
Precocidad
de
0
40
0
37
39
41
Colonizacin
(das)
Tamao de
0
7.7
0
8.4
6.9
8
pleo (mm)
Variables
0.2 g de Triptamina
0.4 g de Triptamina
de
Respuesta Rplica 1 Rplica 2 Rplica 3 Rplica 1 Rplica 2 Rplica 3
Eficiencia
Biolgica
8.00
5.00
11.67
3.67
3.67
0
(%)
Rendimiento
0.11
0.07
0.16
0.05
0.05
0
(g/cm2)
Precocidad
de
40
40
40
39
40
0
Colonizacin
(das)
Tamao de
6.3
7.1
5.9
7.2
6.1
0
pleo (mm)
58
Tabla 10. Promedio de los tratamientos para las variables de respuesta
Variables
de
Respuesta
Eficiencia
Biolgica
(%)
Rendimiento
(g/cm2)
Precocidad
de
Colonizacin
(das)
Testigo
0.1 g de
0.2 g de
0.4 g de
triptamina triptamina triptamina
7.24
4.50
8.22
2.44
0.10
0.06
0.12
0.03
30.00
39.00
40.00
26.33
El promedio realizado a los diferentes tratamientos con respecto a las variables de

respuesta (tabla 10), muestra que el tratamiento con 0.2 g de triptamina present
mayor eficiencia biolgica y rendimiento comparados con los dems tratamientos.
Esto puede deberse a que todas las rplicas del tratamiento con 0.2 g de
triptamina presentaron cuerpos fructferos. Tambin la variacin de los resultados
obtenidos en los promedios pueden ser causados por el comportamiento de cada
rplica ya que no todas presentaron aparicin de carpforos ni la misma cantidad
de cuerpos fructferos por rea de sustrato en el mismo perodo de tiempo.
4.2.3. ANLISIS ESTADSTICO PARA LOS TRATAMIENTOS
4.2.3.1. Tamao de pleo

El anlisis de varianza obtenido para el tamao de pleo (anexo 1), arroja un valor
de F (1.74) y P (0.2355) lo que indica que no existen diferencias significativas
(p>0.05), es decir, los tratamientos no influyen en el tamao del pleo para las
diferentes concentraciones de triptamina utilizadas.
Los tamaos de pleo reportados por Musshoff, F. et al., (2000) estn entre 4-15
cm., Kasuya y Guzmn (2004) obtuvieron carpforos con pleos de 4-8 cm y los
59
reportados por Tsujikawa et al., (2003) fueron de 2,6-11,5 cm. Estos valores
ubican los tratamientos reportados, dentro del rango de tamao de pleo
especificados en la literatura.
Por su parte, el anlisis de varianza arrojado por el software para la precocidad de
colonizacin (anexo 3), igual que en el tamao del pleo indica que no existen
diferencias significativas (p>0.05) es decir, que los tratamientos no influyen en el
tamao del pleo ni la precocidad de colonizacin.
Los valores P para el tamao del pleo (0.2355) y la precocidad de colonizacin
(0.2279) son el resultado de la similitud de los datos para los tratamientos
evidenciados en los intervalos LSD (anexos 2 y 4).
4.2.3.2. Precocidad de colonizacin

Los resultados evidenciados en el anexo 4 para la precocidad de colonizacin
muestran que los tratamientos presentaron aparicin de los primeros carpforos
en tiempos muy similares. El grfico 7 muestra una similitud en los tratamientos de
0.1 y 0.2 g de triptamina debido a que se presentaron carpforos en todas las
rplicas realizadas mientras que los tratamientos testigo y 0.4 g de triptamina no
presentaron carpforos en todas sus rplicas (tabla 9). Tambin se evidenci que
la colonizacin completa del micelio en el sustrato se present 30 das despus de
la inoculacin de la semilla. Este perodo de tiempo es mucho mayor comparado
con el reportado en la literatura por Stamets y Chilton (1983), en el cual los
resultados se dan a los 15 das de haber inoculado la semilla lo que retard aun
ms la aparicin de los primeros carpforos. Finalmente la precocidad de
colonizacin de los tratamientos en este trabajo tuvo una duracin alrededor de 40
das. Este retraso se debe a que la triptamina acta como inhibidor, prolongando
el crecimiento del micelio y la formacin de los cuerpos fructferos.
60
Tiempo promedio de precocidad de

colonizacin
50
das
40
30
20
10
0
Testigo
0.1 g de
Triptamina
0.2 g de
Triptamina
0.4 g de
Triptamina
Cantidad de precursor
Grfico 3. Tiempo promedio de precocidad de colonizacin para los

tratamientos
En el grfico 3 se observa que el promedio de los tratamientos de 0.1 y 0.2 g de
triptamina presentan un comportamiento similar, esto se debe a que todas las
rplicas de ambos tratamientos mostraron aparicin de carpforos en periodos de
tiempos similares. Se observa un comportamiento diferente en el promedio de los
tratamientos testigo y 0.4 g de triptamina debido a que no todas las rplicas
exhibieron aparicin de carpforos por lo que se observa una diferencia
significativa entre los tratamientos de testigo-0.4 g y 0.1-0.2 g de triptamina.
4.2.3.3. Rendimiento
Para la variable rendimiento se encuentran algunas diferencias en los resultados
obtenidos (tabla 9). Los rendimientos de los tratamientos testigo (anexo 5) se
observan que solamente se obtuvo cosecha de hongos en una caja (rplica 2)
dando como resultado 0.10 g de hongos frescos cosechados/cm2 de rea ocupada
por el sustrato hmedo, as mismo en el tratamiento de 0.1 g de triptamina se
obtuvieron cuerpos fructferos en todas las cajas experimentales dando como
resultados 0.11 (rplica 1), 0.05 (rplica 2), 0.03 (rplica 3) g de hongos frescos
cosechados/cm2 de rea ocupada por el sustrato hmedo (anexo 6), de igual
forma en el tratamiento de 0.2 g de triptamina (anexo 7) se obtuvieron cosechas
en todas las cajas con resultados de rendimiento de 0.11 (rplica 1), 0.07 (rplica
2) y 0.16 (rplica 3) g de hongos frescos cosechados/cm2 de rea ocupada por el
61
sustrato hmedo y en el tratamiento de 0.4 g de triptamina (anexo 8) solamente se

obtuvieron cosechas en dos rplicas presentando un rendimiento igual de 0.05 g
de hongos frescos cosechados/cm2 de rea ocupada por el sustrato hmedo en
cada una de las rplicas. Los tratamientos que reportaron los rendimientos ms
altos son aquellos que presentaron una mayor cantidad de cuerpos fructferos en
el rea ocupada por el sustrato hmedo, esto confirma que los mejores
tratamientos por replica en rendimiento son los que utilizaron 0.1 y 0.2 g de
triptamina (grfico 4).
g hongos cosechados/ cm2
Promedio de rendimiento
0,14
0,12
0,10
0,08
0,06
0,04
0,02
0,00
Testigo
0.1 g de
Triptamina
0.2 g de
Triptamina
0.4 g de
Triptamina
Cantidad de precursor (g)
Grfico 4. Rendimiento promedio para los tratamientos
En el grfico 4 no existen diferencias significativas entre los tratamientos del

testigo y 0.4 g de triptamina debido a que en stos no se presentaron cuerpos
fructferos en algunas de sus rplicas; ocurre lo contrario con los tratamientos de
0.2 y 0.4 g de triptamina porque stos si presentaron un crecimiento micelial y
aparicin de cuerpos fructferos en todas sus rplicas, por lo cual se confirma el
estudio realizado previamente donde los tratamientos de 0.1 y 0.2 g de triptamina
muestran un mayor rendimiento comparado con los dems.
62
4.2.3.4. Eficiencia biolgica

Para la eficiencia biolgica los mejores resultados obtenidos, igualmente que para
el rendimiento, fueron los de los tratamientos de 0.1 y 0.2 g de triptamina, con 4.50
y 8.22% respectivamente (tabla 10), ya que esta variable (eficiencia biolgica)
constituye la base para establecer el rendimiento y por ende conocer cul es la
cantidad de triptamina ms adecuada que favorezca el crecimiento del hongo.
Igual que en el estudio realizado en el promedio del rendimiento del tratamiento de
testigo, este presenta un resultado poco preciso debido a que solo se obtuvieron
resultados en una de las tres rplicas.
Para las variables rendimiento y eficiencia biolgica, no se encuentra una
diferencia significativa (anexos 9 y 11). Los valores que se sobreponen logran que
el valor P arrojado (0.1713 y 0.1853) permita asegurar con un 95% de
confiabilidad que los tratamientos no influyen en el rendimiento ni en la eficiencia
biolgica.
4.3.
ESTUDIO CUALITATIVO DE LA PRESENCIA DE PSILOCIBINA
Posterior a la recoleccin de los hongos se realiz el procedimiento de extraccin

del alcaloide por medio del ultrasonido de la Universidad EAFIT. A las muestras
obtenidas de la extraccin se les realiz el anlisis cualitativo de presencia de
alcaloide con el reactivo de Dragendorff que reaccion y tom una coloracin
marrn-naranja al entrar en contacto con las muestras (anexo 13 y 14).
4.4.
ESTUDIO CUANTITATIVO DE LA PRESENCIA DE PSILOCIBINA
Una vez detectada la presencia de Psilocibina, gracias a la coloracin naranja

presentada en las muestras analizadas, se procedi a realizar la tcnica de
Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia (HPLC) con el fin de hallar la cantidad del
compuesto de inters basado en las reas obtenidas de los cromatogramas y la
concentracin utilizada en el estndar interno lo que corresponde al estudio
cuantitativo de cantidad de Psilocibina presente en las muestras.
El estndar interno que se utiliz para realizar la cuantificacin del alcaloide
Psilocibina fue cafena (trimetil 1,3,7 xantina) (figura 27) , en proporciones de 25
63
ppm y se adicion en una relacin 1:1 con la muestra de inters para el anlisis en
el HPLC.
Figura 27. Estructura qumica de la cafena (Arango, 2002).

Para el estndar interno de cafena pura se realiz una corrida en el HPLC con las
mismas condiciones y caractersticas con las que se evaluaron las muestras de
extraccin de los diferentes tratamientos. Esta corrida se realiz con el objetivo de
observar el tiempo de retencin y el rea presentada por la muestra de cafena
(anexo 16), obtenindose un tiempo de retencin de 12.828 min con un rea de
1239.9 mm2.
Los tratamientos de testigo, 0.1, 0.2 y 0.4 g de triptamina se sometieron a un
anlisis de HPLC utilizando el mtodo descrito por Musshoff, F. et al., (2000). Los
resultados obtenidos fueron satisfactorios ya que el tiempo de retencin del
alcaloide Psilocibina se dio de 4 a 6 minutos (tabla 11) tal y como se muestra en el
Cromatograma (figura 25) planteado por el autor.
64
Tabla 11. reas y tiempos de retencin obtenidos de los cromatogramas por

tratamiento
Tratamientos
Testigo
0.1 g de
triptamina
0.2 g de
triptamina
0.4 g de
triptamina
rea de
Tiempo de
Psilocibina
retencin (min)
(mm2)
497.30
4.726
550.20
5.198
1316.70
4.792
1381.00
4.769
Los resultados de los cromatogramas (anexos 17, 18, 19, 20) muestran una
diferencia en sus reas, esto se debe a que los tratamientos fueron sometidos a
diferentes cantidades de precursor qumico, lo cual se puede observar en los
cromatogramas donde hubo un aumento de los picos de las reas
correspondientes al alcaloide Psilocibina.
El precursor qumico utilizado (triptamina) arroj el resultado esperado, puesto que
al realizar la cuantificacin del alcaloide Psilocibina en los tratamientos por medio
del estndar interno (cafena), se obtuvo un aumento en su concentracin. Los
resultados confirman lo reportado en la literatura por Gartz (1989) ya que a mayor
cantidad de triptamina utilizada mayor cantidad de alcaloide presente en el hongo.
A pesar de no conocer el procerdimiento del autor (Gartz) de la adicin del
precursor qumico en los tratamientos, la tcnica utilizada en el desarrollo, que
consisti en mezclar el precursor qumico con el sustrato, fue la ms adecuada
(tabla 12).
65
Tabla 12. Concentracin de Psilocibina (%)

Variables de
Respuesta
Testigo
0,1 g de
triptamina
0,2 g de
triptamina
0,4 g de
triptamina
rea de
Psilocibina
(mm2)
497.30
550.20
1316.70
1381.00
rea de Cafena
(mm2)
629.10
684.40
708.80
668.50
Concentracin
Cafena (ppm)
25.00
25.00
25.00
25.00
Concentracin
Psilocibina
(ppm)
19.76
20.10
46.44
51.65
% de Psilocibina
0.0353
0.0359
0.0829
0.0922
Para calcular el porcentaje de Psilocibina obtenido en la extraccin se procedi a

realizar el siguiente clculo:
% Psilocibina
19.76 mg Psilocibina
0.05 Lt me tan ol
Lt me tan ol
% Psilocibina
0.000988 g Psilocibina
2.8 g
100
1
1000mg
0.000988 g
Psilocibina
0.035
66
Concentracin de Psilocibina
Concentracin (ppm)
60
50
40
30
20
10
0
0
0,1
0,2
0,4
Triptamina (g)/(g) de sustrato
Grfico 5. Concentracin de Psilocibina (ppm)

En el grfico 5 se puede observar una diferencia significativa entre la
concentracin obtenida del alcaloide en el tratamiento de 0.1 y 0.2 g de triptamina
por lo que se puede decir que a cantidades mayores de 0.2 g de triptamina en los
tratamientos no se presenta una tendencia a incrementarse la concentracin de
Psilocibina por lo tanto no es recomendable realizar anlisis con cantidades
mayores a las 0.2 g de triptamina debido a que cantidades mayores de 0.4 g de
triptamina se da un retraso en el crecimiento micelial del hongo y puede llegar a no
presentarse la aparicin de carpforos. Adems el costo del precursor qumico es
considerablemente elevado y tarda mucho tiempo en su importacin.
Estadsticamente no existen diferencias significativas en cuanto a los resultados
arrojados por el software Statgraphics con un valor P de 0.8905 (p>0.05) y un
valor F de 0.20, puesto que al momento de realizar la extraccin del alcaloide
Psilocibina se realiz por tratamiento y no por rplica, debido a que no se contaba
con la suficiente cantidad de hongos secos para realizar el anlisis por rplica
(anexo 21). Aun as la grfica Box and Whisker Plot (anexo 22) muestra una
diferencia significativa entre la cantidad de alcaloide (Psilocibina) y la
concentracin de precursor (triptamina) utilizada, confirmando los anlisis
realizados previamente.
67
CONCLUSIONES
Sobre el compost de champin se present una adecuada propagacin y

crecimiento del micelio y se observ la presencia de cuerpos fructferos del
hongo P. cubensis, debido a sus propiedades nutricionales y a su alta
resistencia contra diferentes contaminantes. Por ello se comprueba que
este sustrato es el medio de cultivo ms propicio para el desarrollo del P.
cubensis.
El sustrato de trigo a pesar de tener un alto contenido nutricional, no es un
sustrato adecuado para la obtencin de cuerpos fructferos del hongo P.
cubensis debido a que es muy propenso a presentar contaminacin en las
etapas tempranas de la siembra.
Las diferentes concentraciones de triptamina utilizadas en el diseo de
experimentos, influyen significativamente en el crecimiento micelial del P.
cubensis debido a que la triptamina en altas concentraciones acta como
inhibidor del crecimiento y retrasando la aparicin de los carpforos.
Los tratamientos que menor tiempo de colonizacin presentaron fueron el
testigo (30 das) y 0.1 g de triptamina (36 das), debido a que la
concentracin de triptamina de 0.1 g fue muy baja comparada con lo
reportado en la literatura y el tratamiento de los testigos no presentab
concentracin del precursor triptamina por lo que la propagacin del micelio
fue ms rpida.
El tamao del pleo o sombrerillo y la precocidad de colonizacin obtenidas
en los tratamientos no presentan diferencias significativas en cuanto al
anlisis estadstico. Por ende las diferentes concentraciones de triptamina
utilizadas en el compost de champin no proporcionan elementos que
diferencien estas dos variables de respuesta.
Los tratamientos que arrojaron rendimientos ms altos, son aquellos que
presentaron una mayor cantidad de cuerpos fructferos por el rea ocupada
en el sustrato hmedo, en donde los tratamientos de 0.1 y 0.2 g de
triptamina tuvieron un comportamiento mayor en cuanto a la cantidad de
68
hongos cosechados comparados con los tratamientos de testigo y 0.4 g de

triptamina.
Los mejores tratamientos en cuanto a la eficiencia biolgica son igualmente
los tratamientos de 0.1 y 0.2 g de triptamina, esto se debe a que esta
variable constituye la base para establecer el rendimiento, lo que significa
que estadsticamente no existen diferencias significativas entre estas dos
variables de respuesta.
La resolucin de los picos obtenidos por HPLC del extracto del P. cubensis
fue mayor a medida que la concentracin de triptamina aumentaba en los
tratamientos, lo que cuantitativamente se pudo comprobar por medio de la
utilizacin de un estndar interno.
Despus de realizado el anlisis de HPLC en cuanto a la produccin de
Psilocibina presente en un tiempo de retencin de 4-6 min para cada uno
de los ensayos, no se evidenci diferencia significativas entre las dems
concentraciones de triptamina utilizadas.
Los resultados obtenidos en los cromatogramas del extracto de Psilocibina
son confiables, ya que en el momento de realizar la prueba HPLC no se
identificaron interferencias de ruido y presin.
El comportamiento del estndar interno (cafena) fue estable, debido a que
el tiempo de retencin en los diferentes cromatogramas se present
alrededor de los 12 minutos y la concentracin utilizada fue adecuada
puesto que la resolucin del pico del SI (estndar interno) comparada con la
resolucin del pico de la Psilocibina fue similar, lo que evita la presencia de
errores significativos al momento de realizar la cuantificacin del alcaloide.
El precursor qumico utilizado en el desarrollo de los tratamientos fue
adecuado, puesto que este aument en forma gradual la cantidad del
alcaloide producido intracelularmente por el hongo. Se evidenci que a una
cantidad de 0.4 g de triptamina se obtuvo un porcentaje de Psilocibina de
0.0922 % (51.65 ppm), mientras que el porcentaje obtenido en el extracto
del testigo para la Psilocibina fue 0.0353 % (19.76 ppm).
69
RECOMENDACIONES
Para obtener resultados satisfactorios en la produccin del P. cubensis, es

necesario proporcionarle las condiciones adecuadas para su crecimiento y
fructificacin. Esto se refiere a sustratos que contengan los nutrientes
bsicos para su crecimiento, adems del control de las condiciones
ambientales como la temperatura, humedad, incidencia de la luz, asepsia y
concentracin de oxigeno (Yang y Johg, 1987).
Para evitar la contaminacin en el sustrato de trigo, se recomienda dejarlo
sumergido en agua por dos horas antes de ser esterilizado ya que el trigo
contiene muchos contaminantes que pueden afectar los ensayos.
Gracias a los efectos benficos de la Psilocibina a nivel mdico y
psiquitrico, se recomienda realizar investigaciones que profundicen en
torno al uso de este alcaloide que permita fomentar su utilizacin legal en
Colombia.
Debido a que se realizaron anlisis sobre el crecimiento del P. cubensis en
dos tipos de sustratos slidos, se recomienda realizar estudios con otros
tipos de sustratos que proporcionen los nutrientes necesarios para el
desarrollo y el crecimiento de este.
Se recomienda no utilizar cantidades mayores de 0.4 g de triptamina en
futuras investigaciones, ya que una cantidad mayor a esta puede conllevar
un crecimiento lento de los cuerpos fructiferos y la no aparicin de cuerpos
fructferos, debido a que en el estudio realizado se noto una inhibicin de
desarrollo del micelio en el primer diseo de experimentos realizado.
Se recomienda evaluar otros tipos de precursores en diferentes
concentraciones para analizar la incidencia de este en el desarrollo del
hongo y la produccin del alcaloide. Se recomienda evaluar el precursor
qumico Valina.
70
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75
ANEXOS
Anexo 1.Tabla ANOVA para tamao de pleo por tratamiento

Tabla 13. Anlisis de varianza para el tamao de pleo por tartamiento
Fuentes de
Variacin
Entre grupos
Dentro de
grupos
Total (Corr.)
Suma de
cuadrados
46,7733
Grados de
libertad
3
Media de
cuadrados
15,5911
71,5667
8,94583
118,34
11
Valor
F
P
1,74 0,2355
Anexo 2. Intervalos LSD para tamao de pleo por tratamiento
Tamao de pleo
Means and 95,0 Percent LSD Intervals

11
9
7
5
3
1
-1
0
0,1
0,2
0,4
Triptamina
Grfico 6. LSD para tamao de pleo por tratamiento
76
Anexo 3. Tabla ANOVA para precocidad de colonizacin por tratamiento.

Tabla 14. Anlisis de varianza para la precocidad de colonizacin por
tratamiento
Fuentes de
Variacin
Entre grupos
Dentro de
grupos
Suma de
cuadrados
1415,33
Grados de
libertad
3
Media de
cuadrados
471,778
2115,33
264,417
3530,67
11
Total (Corr.)
Valor
F
P
1,78 0,2279
Precocidad de Colonizacin
Anexo 4. Intervalo LSD para precocidad de colonizacin por tratamiento

48
38
28
18
8
-2
0
0,1
0,2
0,4
Triptamina
Grfico 7. LSD para la precocidad de colonizacin por tratamiento
77
Anexo 5. Grfico de rendimiento en tratamiento de testigo
Rendimiento (g/cm2)
Rendimiento Testigo
0,12
0,1
0,08
0,06
0,04
0,02
0
0
0,5
1,5
2,5
3,5
Rplicas
Grfico 8. Rendimiento en tratamiento de testigo
Anexo 6. Grfico de rendimiento en tratamiento de 0,1 g de triptamina
Rendimiento (g/cm2)
Rendimiento
(0.1 g de Triptamina)
0,15
0,1
0,05
0
0
0,5
1,5
2,5
3,5
Rplicas
Grfico 9. Rendimiento en tratamiento de 0,1 g de triptamina
78
Rendimiento (g/cm2)
Rendimiento
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0
0,5
1,5
2,5
3,5
Rplicas
Rendimiento (g/cm2)
Rendimiento
0,06
0,04
0,02
0
0
0,5
1,5
2,5
3,5
Rplicas
79
Anexo 9. Tabla ANOVA para el rendimiento por tratamiento

Tabla 15. Anlisis de varianza para el rendimiento por tratamiento
Fuentes de
Variacin
Entre grupos
Dentro de
grupos
Total (Corr.)
Suma de
cuadrados
0,012825
Grados de
libertad
3
Media de
cuadrados
0,004275
0,0158657
0,0286917
8
11
0,00198333
Valor
F
P
2,16 0,1713
Anexo 10. Intervalo LSD para el rendimiento por tratamiento

Rendim iento
0,17
0,14
0,11
0,08
0,05
Grfico
12. LSD para el rendimiento por tratamiento
0,02
-0,01
0
0,1
0,2
0,4
Triptamina
Anexo 11. Tabla ANOVA para Eficiencia biolgica por tratamiento
Tabla 16. Anlisis de varianza para Eficiencia biolgica por tratamiento
Fuentes de
Variacin
Entre grupos
Dentro de
grupos
Total (Corr.)
Suma de
cuadrados
67,1705
Grados de
libertad
3
Media de
cuadrados
22,3902
87,3314
154,502
8
11
10,9164
Valor
F
P
2,05 0,1853
80
Anexo 12. Intervalo LSD para Eficiencia biolgica por tratamiento

14
EB
11
8
5
2
-1
0
0,1
0,2
0,4
Triptamina
Grfico 13. LSD para Eficiencia
biolgica por tratamiento
Anexo 13. Prueba de reactivo Dragendorff
Se prepara mezclando 8 g de nitrato de bismuto pentahidratado en 20 ml de cido

ntrico al 30% con una solucin de 27.2 g de yoduro de potasio en 50 ml de agua.
Se deja en reposo por 24 horas, se decanta y se afora a 100 ml. La presencia de
alcaloides se detecta por la formacin de un precipitado naranja rojizo cuando se
le adiciona est reactivo a una solucin cida de alcaloides. De los precipitados
lavados se pueden recuperar los alcaloides con una solucin saturada de
Carbonato de Sodio (Arango, 2002). A las muestras obtenidas por tratamiento de
la extraccin se les realiz la prueba cualitativa de reactivo de Dragendorff. Esta
prueba consiste en colocar una pequea cantidad del lquido de inters en un tubo
de ensayo y se adiciona una gota del reactivo. La figura 28 muestra la presencia
de alcaloide debido a la coloracin naranja que se observ.
81
Figura 28. Muestra analizada mediante el reactivo de dragendorff
Anexo 14. Prueba de reactivo de dragendorff en presencia de cromatografa

de capa fina
Tambin se utiliz la prueba cualitativa de reactivo de Dragendorff en presencia de
cromatografa de capa fina. Esta tcnica se basa en colocar una gota de la
muestra sobre una lmina especial de aluminio, el disolvente de la muestra
utilizado debe tener un punto de ebullicin bajo que pueda evaporarse fcilmente
despus de la aplicacin de la muestra en la placa. La placa se deja reposar al
aire libre para que el disolvente se vaya evaporando y transcurridos unos minutos
aparece una coloracin naranja que indica la aparicin de alcaloide en la muestra
(Aulta, 1998). En nuestro caso el disolvente utilizado fue metanol que se utilizo
desde la etapa de extraccin del alcaloide.
Figura 29. Muestra analizada mediante la cromatografa de capa fina y el

reactivo de Dragendorff
82
Anexo 15. Identificacin de la presencia de Psilocibina por medio de HPLC

Igualmente para la realizacin del anlisis cualitativo de presencia de Psilocibina
en los cuerpos fructferos obtenidos por medio del diseo de experimentos, se
realiz una prueba con hongos recolectados a campo abierto en el municipio de
Santa Elena (Antioquia). Este prueva se efectu con el fin de reafirmar que el
mtodo de extraccin utilizado en el artculo reportado por Musshoff, F. et al., 2000
es correcto
Figura 30. Cromatografa de extraccin del hongo P. cubensis de hongos

recolectados en campo abierto
El Cromatograma arrojado por el HPLC de la Universidad EAFIT de los hongos
recolectados en el sector de Santa Elena se comparo con el cromatograma
mostrado en el artculo, con lo que se demuestra que el mtodo empleado de
identificacin cualitativa es exacto y confiable debido a la similitud de los picos en
ambos espectros y la presencia del alcaloide en los tiempos de retencin de los
tratamientos realizados en el desarrollo del proyecto.
83
Anexo 16. Cromatograma estndar interno (Cafena)
Figura 31. Estndar interno de la cafena

Anexo 17. Cromatograma tratamiento testigo
Figura 32. Cromatograma tratamiento testigo
84
Anexo 18. Cromatograma tratamiento 0.1 g de triptamina
Figura 33. Cromatograma tratamiento 0.1 g de triptamina
85
Anexo 21. Tabal ANOVA para la cantidad de alcaloide Psilocibina

Tabla 17. Anlisis de varianza para la cantidad de alcaloide Psilocibina
Fuentes de
Variacin
Suma de
cuadrados
Grados de
libertad
Media de
cuadrados
Valor P
Entre grupos
Dentro de
grupos
287.059
95,6863
0.20
0,8905
3745.68
468,21
Total (Corr.)
4032.74
11
86
Anexo 22. Grfico Box and Whisker plot para la cantidad de alcaloide
Psilocibina
Box-and-Whisker Plot
Triptamina
0
0,1
0,2
0,4
0
10
20
30
40
50
60
Cantidad de Alcaloide
Grafico 14. Box and Whisker plot para la cantidad de alcaloide Psilocibina
87

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EVALUACIN DEL CRECIMIENTO DEL HONGO Psilocybe cubensis EN

MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS

MARIA PAULINA COGOLLO ZULETA

EVALUACIN DEL CRECIMIENTO DEL HONGO Psilocybe cubensis EN

MARIA PAULINA COGOLLO ZULETA

Trabajo De Grado Para Optar Por El Ttulo De Ingeniera De Procesos

Medelln, 18 de Enero de 2010

Deseamos expresar los ms sinceros agradecimientos a las personas que

Byron Durn, Ingeniero Ambiental, Universidad Catlica de Oriente.

Jorge Surez, Gerente y propietario Comercializadora de ChampionesSanta Elena.

OBJETIVO GENERAL ................................................................................ 17

OBJETIVOS ESPECIFICOS ..................................................................... 17

MARCO REFERENCIAL ...................................................................................... 18

GENERALIDADES DE LOS HONGOS ................................................... 18

DESCRIPCIN DEL HONGO P. cubensis ............................................. 19

Sombrero o pleo .................................................................................. 19

Estpite o tallo ....................................................................................... 20

Caractersticas microscpicas ........................................................... 21

Hbito, hbitat y distribucin .............................................................. 21

ESTNDAR INTERNO ............................................................................... 28

LA PSILOCIBINA Y LA LEY ...................................................................... 29

PRODUCCIN Y CULTIVO ...................................................................... 30

Cultivo en sustratos esterilizados ...................................................... 31

Etapas del cultivo .................................................................................................. 31

Estrategias bsicas para la formacin de hongos ........................................... 35

APLICACIONES Y USOS DE LA Psilocibina ......................................... 36

ESTADO DEL ARTE................................................................................... 37

PROPAGACIN DE LA CEPA ................................................................. 41

OBTENCIN DEL MICELIO DE SIEMBRA (SEMILLA DEL HONGO)

OBTENCIN DE LOS CUERPOS FRUCTIFEROS .............................. 44

Siembra en sustrato de trigo .............................................................. 44

Siembra en compost de champin ................................................. 44

DISEO DE EXPERIMENTOS Y ANLISIS ESTADSTICO .............. 47

Variables de respuesta ......................................................................................... 50

RECOLECCIN DE CUERPOS FRUCTIFEROS ................................. 51

EVALUACIN DE LA PRESENCIA DE PSILOCIBINA ........................ 53

RESULTADOS Y ANLISIS ................................................................................ 54

SUSTRATO DE TRIGO ............................................................................. 54

COMPOST DE CHAMPIN ................................................................... 55

Crecimiento de cuerpos fructferos en el tiempo ............................ 55

ESTUDIO CUALITATIVO DE LA PRESENCIA DE PSILOCIBINA ..... 63

ESTUDIO CUANTITATIVO DE LA PRESENCIA DE PSILOCIBINA .. 63

Tabla 1. Determinacin sistemtica del P. cubensis ................................................... 22

Figura 1. Pleo de P. Cubensis ....................................................................................... 19

Grfico 1. Crecimiento de estpite en el tiempo ........................................................... 55

Anexo 1.Tabla ANOVA para tamao de pleo por tratamiento .................................. 76

del P. cubensis y la produccin de Psilocibina en presencia de un precursor

Evaluar a escala de laboratorio el crecimiento del hongo Psilocybe cubensis,

Para que se cumpla el objetivo general, se plantean los siguientes objetivos

GENERALIDADES DE LOS HONGOS

DESCRIPCIN DEL HONGO P. cubensis

2.2.1. Sombrero o pleo

Figura 1. Pleo de P. Cubensis

Figura 2. Lamelas y esporada de P. cubensis

2.2.3. Estpite o tallo

Figura 3. Tallo del hongo P. cubensis

2.2.4. Caractersticas microscpicas

Figura 4. Caractersticas de P. cubensis esporas, cistidios y basidios (Kasuya

2.2.5. Hbito, hbitat y distribucin

AGENTES CONTAMINANTES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO

Los tipos de agentes contaminantes que pueden afectar el crecimiento del P.

Grupo A: Rpido crecimiento de color azul-marrn con un olor medicinal

ALCALOIDES PRESENTES EN DIFERENTES ESPECIES DE