Descripcin general de la valoracin biolgica de tuberculina en

cobayos
Para cada ensayo se emplean no menos de 6 cobayos (generalmente 12) albinos
machos, de peso entre 400-600 gr., de tipo uniforme y del mismo origen. Se
distribuyen los animales en jaulas en grupos de 3 y se los somete a una dieta
uniforme, que contenga vitamina C. La habitacin se mantiene a temperatura
constante, entre 20-25C.
Sensibilizacin de los cobayos
Los cobayos deben ser sensibilizados no menos de 3 semanas antes de efectuar
las pruebas de valoracin biolgica de las tuberculinas mediante la inyeccin
intramuscular de bacilos tuberculosos muertos por el calor y desecados,
suspendidos en parafina lquida estril. Para el ensayo de PPD bovino se emplean
bacilos de la cepa ANS, del PPD humano, bacilos de la cepa DT y del PPD aviar,
bacilos de la cepa D4. Generalmente, la prueba de valoracin se realiza
transcurridas de 3-8 semanas de efectuada la sensibilizacin, aunque sta
persiste durante 6 o ms meses. El perodo de sensibilizacin puede ser
importante en los ensayos de actividad relativa cuando existen pequeas
diferencias cualitativas entre las tuberculinas. Debe tenerse presente que la
pendiente en la curva de dosis - respuesta disminuye en funcin del tiempo
transcurrido desde la sensibilizacin. Es conveniente utilizar los cobayos slo una
vez, ya que pueden aparecer reacciones ms intensas en los sitios de inyecciones
previas. Si se usaran ms de una vez, deber transcurrir un intervalo de no
menos de 4 semanas entre uno y otro ensayo.
Seguidamente se detalla el mtodo de preparacin de la suspensin
sensibilizante. Se recomienda el uso de mscara protectora. Colocar 100 mg. de
bacilos en un mortero; agregar 100 mg. de polvo de piedra pmez y moler
cuidadosamente. Agregar algunas gotas de parafina lquida y repetir la molienda.
Agregar lo que resta de los 25 ml. de parafina y continuar mezclando para
asegurar una suspensin de bacilos uniforme.
La suspensin contiene 4 mg. de organismos/mi.; a cada cobayo se le inyectarn
0.5 ml. por va intramuscular.
Es conveniente tener siempre disponibles los siguientes materiales para poder
utilizarlos toda vez que sea necesario:
Morteros: para preparar suspensiones de bacterias, es aconsejable utilizar
morteros de 10 cm. de dimetro. Los morteros se deben mantener
esterilizados y autoclavar inmediatamente despus de su uso. La
viscosidad de la parafina se reduce con el calor, lo que facilita la limpieza.
Puesto que al retirarlos del autoclave los morteros estn an calientes,
bastar enjuagarlos con abundante agua caliente. Una vez limpios y secos
se envuelven en papel de aluminio y se esterilizan, estando en condiciones
de ser usados nuevamente.
Polvo de piedra pmez: una vez esterilizado durante 1 hora a 160C en

horno Pasteur, guardar el polvo de piedra pmez en cantidades de 100 mg.

en tubos de vidrio Pyrex (50 x 15 mm) con tapn de rosca.
Parafina lquida: mantener volmenes de 25 ml. de parafina lquida estril
en frascos cnicos de 100 ml. cubiertos con papel de aluminio.
Jeringas: es recomendable que las jeringas para inoculacin de animales
estn provistas de un adaptador de rosca (tipo Luer-lock). Para sensibilizar
a los cobayos se debe usar una jeringa con camisa y mbolo de vidrio de 1
ml. y aguja de 20 SWG x 18 mm. (18 x 20), adecuada para la inoculacin de
suspensiones de parafina lquida.
Esterilizar una cantidad suficiente de jeringas limpias para un ensayo, adems de
algunas de repuesto. Generalmente se usa una misma jeringa para los cobayos
de cada jaula. La esterilizacin se efectuar hirviendo las jeringas en agua
destilada durante 20 minutos o por aire caliente en un horno a I60C durante 1
hora.
Inmediatamente despus de utilizadas, hervir las jeringas durante 20 minutos en
agua destilada. Cuando se ha usado una suspensin de microorganismos en
aceite, se las retirar del agua mientras estn calientes y se las limpiar con
acetona, empleando un cepillo pequeo para quitar los residuos de aceite si fuera
necesario. Seguidamente se las enjuagar con agua destilada caliente, se las
dejar secar y se guardarn.
Bibliografa:
https://books.google.com.pe/books?
id=wOoqAAAAYAAJ&pg=PA227&lpg=PA227&dq=dosis+sensibilizante+a+cobayo
s&source=bl&ots=cP1PZPOVKE&sig=ww_Kq5EFld01eeMhDtxtWt4xAJ0&hl=es419&sa=X&ved=0CC0Q6AEwBGoVChMIgaSauZjmxwIVyNgeCh3wWgp#v=onepage&q=dosis%20sensibilizante%20a%20cobayos&f=false