Tecnicas de Manejo en Fincas Laboratorio Analisis

Técnicas de Bacteriología,
Análisis en Fresco, Calidad

de Agua y Buenas Prácticas
de Manejo y Bioseguridad
en Granjas Camaroneras
Contenido
Mazatlán, Sin. Marzo - 2003

• Bacteriología en Sedimentos, Agua y Organismos
- M. en C. Judith González Benitez
- B.P. Patricia Prado
- Aux. Téc. Dominga Quiñonez Aragón
• Análisis Patológico de organismos

- Ocean. Carlos Magaña Cervántes
• Análisis de Agua – Parámetros FQ

- B.A. Leonardo Sainz Carrión
• Generalidades de Enfermedades
Virales, Parásitos, Hongos.
• Principios de PCR
- Pas. B.A. Irene Janet Ibarra Viera
• Buenas Prácticas de Manejo y Bioseguridad

en Granjas Camaroneras
- Biól. Francisco Jiménez Valdez
• Sistemas de Registro y Análisis de Resultados

- Ing. Luis Miguel Aguiar Pérez

1. Objetivos
2. Enfermedades Bacterianas
3. Equipo y Material
4. Lavado y Esterilización de material
5. Medios de Cultivo (preparación y uso)
6. Análisis de Agua y Sedimentos
7. Análisis de postlarvas
8. Análisis de juveniles y adultos (HL y HP)
9. Estimación de Unidades Formadoras de Colonias (UFC)
10. Interpretación de Resultados
11. Aislamiento de Bacterias
12. Pruebas de susceptibilidad a antibióticos (Antibiograma y

MIC).
12. Bibliografía
1. Conocer las principales enfermedades causadas por bacterias en
las poblaciones de camarones peneidos.
2. Conocer y preparar los medios de cultivo utilizados para el

análisis bacteriológico de agua, sedimentos y camarones.
3. Conocer y aplicar los procedimientos para determinar la cantidad

y el tipo de bacterias que se encuentran en el agua y los
sedimentos de los estanques de cultivo.
4. Conocer y aplicar los procedimientos para determinar la cantidad

y el tipo de bacterias que se encuentran en la hemolinfa y en el
hepatopáncreas del camarón.
5. Conocer y aplicar los procedimientos para cuantificar las

Unidades Formadoras de Colonias (UFC).
6. Interpretar los resultados que generen los análisis bacteriológicos

en agua, sedimentos y organismos.
7. Conocer los procedimientos para el aislamiento de bacterias.
8. Conocer y aplicar las procedimientos para estimar la

susceptibilidad de bacterias a antibióticos (Antibiograma y MIC).
Las bacterias del género Vibrio, se han reportado a menudo como
patógenas oportunistas para camarón, tanto en la fase de larvicultura
como en la engorda.
En cada una de estas etapas algunos vibrios se han perfilado como

más frecuentes, de esta manera se ha reconocido la presencia de
Vibrio parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. vulnificus y V. damsela
principalmente en estanques de engorda de camarón así como de V.
harveyi y V. spendidus se han detectado mayormente en el cultivo
larvario.
Vibriosis: se puede definir como una enfermedad ocasionada por

bacterias del género Vibrio en organismos acuáticos. Esto, por
consiguiente, también es válido para infecciones ocasionadas por este
género en camarones, independientemente del estadio de desarrollo de
éstos.
Sin embargo, el rol de las bacterias en un estanque de camarón no solo

debe ser enfocado desde el punto de vista de las enfermedades, pues
estos microorganismos también cumplen un papel importante en el
reciclamiento de los nutrientes y la degradación del detritus en el
estanque y contribuyen por lo tanto a mantener la calidad del agua.
Vibriosis durante la engorda: Prácticamente todas las especies de

Vibrio han sido encontradas en camarones con problemas, pero esto no
implica que sean las responsables de la infección, sino que debido a su
carácter oportunista, proliferan cuando el camarón se encuentra
debilitado.
Tipos de Vibriosis Signos Clínicos
Camarón manchado • Infecciones en la cutícula, apéndices o branquias.

(Brown spot disease) • Lesiones localizadas en tonos de café a negro, en los
cuales la cutícula se encuentra erosionada.
• Involucra a otras bacterias oportunistas como
Aeromonas sp., Spirillum sp y Flavobacterium sp.
• Si no es controlada se vuelve más grave dando lugar al
desarrollo de “black splinter” o astilla negra que a su vez
puede llegar a una Vibriosis sistémica.
“Black spliter” • Forma crónica de vibriosis. El organismos presenta
(Astilla negra) pequeñas lesiones localizadas en la cutícula que se
infectan secundariamente con especies de Vibrio y se
melanizan. La infección progresa hasta desarrollar áreas
ennegrecidas en el tejido muscular.
• Esta forma de vibriosis parece más común en
camarones adultos debido, probablemente, a que los
camarones grandes son más propensos a herirse entre
sí por disputas territoriales, sexuales o por alimentos.
Vibriosis Sistémica • Esta enfermedad se considera una infección
generalizada que involucra varios sitios como: cutícula,
hepatopáncreas, órgano linfoide, glándula antenal,
corazón, hemolinfa y músculo estriado.
• Los camarones presentan señales de severo estrés:
opacidad en musculatura abdominal y anorexia,
expansión de cromatóforos y flexión ocasional del
abdomen cerca del tercer segmento abdominal.
• Se les observa nadando erráticamente en la superficie
y a orillas de los estanques.
• La coagulación de la hemolinfa es muy lenta y con
apariencia turbia.
Tipos de Vibriosis Signos Clínicos
Síndrome de la • Esta es una manifestación más de vibriosis y su

gaviota nombre proviene de la presencia de gaviotas que se
alimentan de camarones moribundos que nadan en la
superficie y en las orillas de los estanques.
• La bacteria más frecuentemente aislada de estos
camarones es un Vibrio que produce colonias verdes en
agar TCBS.
• Se asocia con algunos factores ambientales como alta
temperatura, cambios en la salinidad y elevadas
concentraciones de nitrogeno.
• También se han visto involucrados factores como:
conteos inusualmete altos de bacterias en las tomas de
agua, delicado estado de salud en los camarones debido
a la presencia de virus y gregarinas y altos niveles de
nutrientes en la entrada de agua con baja recirculación.
Vibriosis • Vibrio harveyi es la bacteria causal de la vibriosis
luminiscentes luminiscente y, como en la mayoría de las bacteremias,
constituye parte de la flora normal de las aguas costeras
y lagunares.
• Se adhiere a las superficies de los crustáceos marinos
o establecerse en el tracto digestivo al ser ingeridas.
• Los camarones en etapa juvenil son los más afectados.
• Este tipo de bacteria daña el hepatopáncreas
invidiéndolo masivamente.
Brown spot disease
Síndrome de la astilla negra

Vibrio parahaemolyticus
Corte del órgano linfoide: se observan

granulomas
Materiales:
50 Tubo de Ensaye con tapa de rosca de 16 x 150 mm
40 Tubo de Ensaye con tapa de rosca de 20 x 150 mm
4 Matraz Erlenmeyer con tapa de rosca de 500 ml
2 Matraz Erlenmeyer con tapa de rosca de 1000 ml
1 Probeta graduada de 100 ml
1 Probeta graduada de 500 ml
2 Vasos de precipitado de 100 ml
5 Cajas de petri de cristal de 100 x 15 mm
20 Lts de Agua destilada con envase
5 Lts de alcohol de 96°
20 Recipientes para pesar medios de cultivo
40 Placas multicelda de 96 pozos
5 Asa microbiológica de 1 – 1000
1 Espátula con mango de madera
1 Grádilla de plástico para tubo de cultivo con capacidad
de 40 tubos
1 Punta azul para micropipeta de 101 – 1000
1 Paquete de guantes de latex estéril
5 Varilla de vidrio para rastrillo de siembra
20 Paquetes de cajas petri desechables
1 Estuche de disección
1 Dosificador
Agares y Reactivos:
1 Agar TCBS Difco
1 Agar TSA
1 Caldo Muller Hinton
1 Bactopeptona
1 Extracto de levadura
2 Cloruro de sodio fisher
1 Cloruro férrico
1 Agar bacteriológico
2 Agar Marino Difco
1 Oxitetraciclina (sensidiscos)
1 Eritromicina (sensidiscos)
1 Enrofloxacina (sensidiscos)
1 Norfloxacina (sensidiscos)
1 Flumequina (sensidiscos)
Equipo:
1 Parrilla de calentamiento con agitación magnética
1 Quemador de gas artificial
1 Balanza de precisión 200 gr x 0.01 grs
1 Contador de colonias
1 Estufa incubadora std. 75°C
1 Autoclave alum. Eléctrica 21 Lts
1 Olla de presión de 25 Lts
1. El material a utilizar consistente en frascos de
cristal, cajas petri, rastrillos de cristal o asas
deberá estar en condiciones de asepsia para evitar
cualquier tipo de contaminación.
2. El área de trabajo deberá estar limpia y despejada,

con excepción de los materiales que serán
utilizados.
3. El personal deberá de asearse las manos, así

como usar bata, cubreboca y guantes de latex.
Los medios de cultivo se dividen de acuerdo a sus
características en: generales, selectivos o diferenciales.
Generales: permiten el crecimiento de cualquier tipo de

bacteria.
- Agar de Soya Tripticasa (TSA)
- Agar Marino o Zobell
- Agar Nutritivo
Selectivos: sólo permiten crecer un cierto tipo de

bacterias, p. ej., sólo un género.
- Agar TCBS : Vibrio
- Agar Cetrimida: Pseudomonas
- Caldo lactosado: coliformes
Diferenciales: permiten distinguir entre dos o más

bacterias por características coloniales.
- Agar TCBS: Diferencia entre colonias verdes y
amarillas de Vibrio.
- Agar Eosina Azul de Metileno: coliforme y E. coli
Medio tiosulfato citrato bilis sacarosa
Medio diferencial para el género Vibrio sp.
Procedimiento :
a) Se pesa la cantidad requerida de acuerdo al número de

cajas que se desea elaborar, y se disuelve en agua
destilada en un matraz.
b) Se pone a calentar en un termoagitador hasta que hierva

(dos veces); se deja enfriar hasta una temperatura de
45 °C.
c) Se mide el pH el cual debe ser de 8.6 ± 0.2
d) Posteriormente se vacia en cajas de petri

(aproximadamente 20 ml/caja de 90x10). Se espera a que
gelifique y se meten a secar en un horno a 30°C durante
24 horas.
Nota: Este medio no requiere de esterilización.

Medio tripticaseina de soya
Medio para crecer todo tipo de bacterias.
Procedimiento :

cajas que se desea elaborar.
b) Para este medio se agregan 2.0 gr de NaCl por cada 100

ml.
c) Se disuelve el medio en agua destilada en un matraz y se

calienta en un termoagitador hasta el punto de ebullición
para que se disuelve completamente (debe quedar
cristalino).
d) Se mide el pH el cual debe ser de 7.3 ± 0.2
e) Se esteriliza en autoclave a 120°C por 15 minutos.
f) Se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45°C, y

posteriormente se vacia en cajas de petri
solidifique el medio y se meten a secar invertidas en un
horno a 30°C durante 24 horas.
Medio Zobell
Procedimiento :

b) Se disuelve el medio en agua destilada en un matraz y se

calienta en un termoagitador hasta el punto de ebullición
para que se disuelva completamente (debe quedar
cristalino).
c) Se mide el pH el cual debe ser de 7.6 ± 0.2
d) Se esteriliza en autoclave a 121-124°C por 15 minutos.
e) Se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45°C, y

Medio MHA
Procedimiento :


ml.
c) Se disuelve el medio en agua destilada en un matraz y se

calienta en termoagitador hasta el punto de ebullición para
que se disuelve completamente (debe quedar cristalino).
d) Se mide el pH el cual debe ser de 7.3 ± 0.2
e) Se esteriliza en autoclave a 120°C por 15 minutos.
f) Se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45°C, y

Caldo de tripticaseina de Soya
Procedimiento :


ml.
c) Se disuelve el medio en agua destilada y se calienta hasta

el punto de ebullición, se vacía en tubos de ensaye con
tapón de rosca y se esteriliza en autoclave a 120°C
durante 15 minutos.
Caldo Muller – Hinton (MHB)
Procedimiento :

b) Para MIC se emplea el medio concentrado. El doble de la

cantidad indicada (gr).
c) Se disuelve el medio en agua destilada y se calienta hasta

el punto de ebullición para disolverlo completamente.
d) Se vacía en un frasco para medio con tapón de rosca y se

esteriliza en autoclave a 120°C durante 10 minutos.
Caldo Nutritivo
Medio para dilución en tubo, comprobaciones de

sensibilidad y resistencia a antibióticos.
Fórmula: Extracto de carne 3 g y Peptona 5 g.
Procedimiento :
a) Se pesan 11 gr para un litro y medio, 70% de agua de mar

filtrada y 30% de agua destilada, o la cantidad requerida
de acuerdo al número de tubos que desea elaborar.
b) Se disuelve el medio y se calienta hasta el punto de

ebullición para que se disuelva completamente.
c) Se distribuye en los tubos.
d) Se esteriliza en autoclave a 121°C por 15 minutos.

Solución Salina al 2.5%
Procedimiento :
a) Se pesan 2.5 gr de NaCl y se disuelve en 100 ml de agua

destilada. Si se puede se filtra.
Para
Preparar 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100
(ml)
Rinde 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5
para
(Cajas)
Nota: Todas las cajas de agar deben ser llenadas a poco menos
de la mitad, para evitar que éstas guarden humedad, así
como la interferencia en la observación de colonias
bioluminiscentes.
Toma de Muestras: Se deberán tomar en frascos o bolsas
estériles, se llenan dos tercios del volumen total del
recipiente y se colocan en hielo hasta su proceso en
laboratorio.
Procedimiento:
1.- Tomar 1.0 ml de la muestra y ponerlo en un tubo con 9.0

ml de solución salina (2.5%), volver a tomar 1.0 ml de la
primera dilución y ponerlo en otro tubo con 9.0 ml. De esta
forma tenemos en el primer tubo una dilución de 10-2 y en
el segundo tubo una de 10-3.
2.- Tomar 0.1 ml de cada dilución y sembrarlos en cajas petri

con agar marino y con agar TCBS, así tendremos en las
cajas una dilución final de 10-3 y 10-4 respectivamente.
3.- Incubar a 30°C por 24 horas y contar las Unidades

Formadoras de Colonias (UFC), volver a incubar las
placas en agar marino y volver a contar.
Toma de Muestras: Se deberán tomar con una jeringa de 10
ml con la punta recortada a manera de solo tener un
tubo con un embolo. Clavar la jeringa en el sedimento y
obtener más de 2 cm de sedimento. El sedimento puede
sacarse previamente con una pala tratando de no
alterarlo o revolverlo. La jeringa debe clavar en la parte
menos perturbada y entrando por lo que sería la
superficie del sedimento hacia abajo.
Procedimiento:
1.- Tomar 1.0 gr de la muestra y ponerlo en un tubo con 9.0

ml de solución salina (2.5%), volver a tomar 1.0 ml de la
primera dilución y ponerlo en otro tubo con 9.0 ml. De
esta forma tenemos en el primer tubo una dilución de
10-2 y en el segundo tubo una de 10-3.
2.- Tomar 0.1 ml de cada dilución y sembrarlos en cajas

petri con agar marino y con agar TCBS, así tendremos
en las cajas una dilución final de 10-3 y 10-4
respectivamente.
3.- Incubar a 30°C por 24 horas y contar las Unidades

Formadoras de Colonias (UFC), volver a incubar las
placas en agar marino y volver a contar.
Toma de Muestras: Se deberán tomar las postlarvas vivas y colocar en una bolsa
estéril con agua del tanque (o estanque) y transportarla hacia el laboratorio
de análisis a una temperatura alrededor de los 24°C.
Procedimiento:
1.- Las postlarvas deberán de estar vivas y siempre son medidas y pesadas de
manera individual.
2.- Se toma una larva con una pinza y se coloca en una malla de 150 µ, se
comienza el lavado que consiste en pasar sobre la larva un chorro de agua
destilada estéril, alcohol al 70% y solución salina estéril al 2.5%. Este
lavado se puede hacer ayudándose de una jeringa estéril.
3.- Se realiza una disección. Se extrae el hepatopáncreas, se pone en un

microtubo previamente tarado y se pesa. Después se le agregan 1000 µl de
solución salina y se macera.
4.- Se homogeniza bien macerado y se colocan 100 µl de éste en un tubo con

900 µl de solución salina estéril. Se homogeniza la solución.
5.- Teniendo ya los pasos 3 y 4 se procede a sembrar ambas muestras en

diferentes cajas de petri. Se colocan 100 µl de cada muestra en agar TCBS
como en agar Marino a fin de obtener conteo de bacterias dentro de los
rangos de 30-300 UFC.
6.- Ambas placas se incuban a 30°C durante un periodo de 18 a 24 horas.
7.- Pasado el tiempo de incubación se procede a realizar el conteo de colonias

para establecer las Unidades Formadoras de Colonias por gramo (UFC/gr).
Nota: En caso de que las larvas sean demasiado pequeñas y no se pueda extraer
el hepatopáncreas, éstas se maceran completas. Las UFC se establecen
por ml.
Toma de Muestras: Se deberán tomar los organismos vivos y colocar en una
bolsa estéril con agua del estanque y transportarla hacia el laboratorio de
análisis a una temperatura alrededor de los 24 °C.
Procedimiento:
1.- Los organismos deberán de estar vivos y ser medidos y pesados de manera
individual.
2.- Se limpia el camarón con una torunda con etanol al 96 %.
3.- Se realiza una disección. Se extrae el hepatopáncreas, se pesa y se coloca

en un tubo con 10 ml de solución salina estéril al 2.5%; se macera y se
extrae 1 ml para transferirlo a un tubo con 9 ml de solución salina estéril.
4.- Se homogenizan bien los inóculos y se procede a sembrar ambas muestras

en diferentes cajas de petri. Se colocan 100 µl de cada muestra en agar
TCBS.
5.- Ambas placas se incuban a 30°C durante un periodo de 18 a 24 horas.
6.- Pasado el tiempo de incubación se procede a realizar el conteo de colonias

para establecer las Unidades Formadoras de Colonias por gramo (UFC/gr).
Toma de Muestras: Se deberán tomar los organismos vivos y colocar en una
bolsa estéril con agua del estanque y transportarla hacia el laboratorio de
análisis a una temperatura de alrededor de 24°C.
Procedimiento:
1.- Se seleccionan organismos vivos que presenten signos clínicos tales como:
cutícula blanda o melanización, tracto digestivo vacío, coloración anormal en
apéndices, letárgia, nado errático, opacidad muscular, edema subcuticular,
expansión de cromatóforos, etc.
2.- Se saca el organismo con una red y se elimina el exceso de agua con una toalla
de papel. Se mide y se pesa.
3.- Se limpia toda la cutícula del camarón con una torunda de algodón impregnada
con alcohol al 96%; poniendo énfasis en la asepsia de las áreas cercanas al
corazón o a los pereiópodos; según sea el caso.
4.- Se procede a hacer la extracción de hemolinfa con una jeringa de insulina

(aproximadamente 50 µl, dependiendo del tamaño del camarón), de tal manera
que la aguja entre al corazón sin llegar a tocar el hepatopáncreas. Otro sitio donde
se puede extraer hemolinfa es el seno ventral y en la base del cuarto o quinto
pereiópodo.
5.- La hemolinfa extraída es cuantificda y sembrada en una placa de agar TCBS,

teniendo cuidado de dispersarla bien con un rastrillo sobre toda la superficie del
agar. Se deja una gota para colocarla sobre un portaobjetos y observar el tiempo
de coagulación; el cual no debe ser mayor a un minuto.
6.- La placa de TCBS es incubada a 30° durante un periodo de 18 a 24 horas.
7.- Pasado el tiempo de incubación se procede a realizar el conteo de colonias para

establecer las Unidades Formadoras de Colonias por mililitro (UFC/ml). Es
importante saber la cantidad de hemolinfa que fue sembrada.
Procedimiento:
Una vez transcurrido el tiempo de incubación de las bacterias (18-24 h), se
cuenta el número total de colonias de cada caja de agar. El cálculo de las
unidades formadoras de colonias (UFC), se describe a continuación:
HEMOLINFA:
UFC/ml = Número de colonias / Volumen de hemolinfa en ml
Ejemplo: 15 / 0.1 = 150 UFC/ml
HEPATOPÁNCREAS: En este caso se considera el peso en gramos del

hepatopáncreas y la dilución a la que se hizo la siembra de éste.
UFC/gr = Número de colonias x dilución / peso en gramos del HP
Ejemplo: Cuando un HP de 0.28 gr se diluye en 10 ml de solución salina al

2.5%, la dilución es 10-2
25 x 100 / 0.28 = 8,928 UFC/gr
POSTLARVAS: En este caso las larvas se maceran completas. Las UFC se

reportan por ml, gr o larva.
UFC/gr = Número de colonias x dilución / peso en gramos de la pl.

UFC/ml = Número de colonias x dilución / ml
UFC/larva = Número de colonias x dilución / # larvas
AGUA: UFC/ml = Número de colonias x dilución / volumen inóculo ml

5 x 100 / 0.1 = 5,000 UFC/ml
SEDIMENTO: Se toma 1 gr de sedimento y se mezcla en 9 ml de solución salina

estéril obteniendo así una dilución de 10-2, por lo tanto:
UFC/gr = Número de colonias x dilución / gr
5 x 100 / 0.1 = 5,000 UFC/gr
Interpretación tentativa de los tipos de colonias bacterianas
obtenidas de camarones en agar TCBS:
Hemolinfa Hepatopáncreas
Tipos de UFC en agar (UFC/ml) (UFC/gr)
TCBS
> 103 < 103 > 105 < 105
Verdes Luminiscentes Grave Grave Grave Serio
100%
Verdes > 50% Serio Elevado- Serio Elevado-
serio serio
Verdes < 50% Elevado- Elevado Elevado Normal-
serio elevado
Amarillas Elevado Normal- Normal- Normal
elevado elevado
Fuente: Dr. Bruno Gómez-Gil, CIAD, AC.
(UFC/postlarva)
Tipos de UFC en agar TCBS > 103 < 103
Verdes Luminiscentes 100% Grave Serio
Verdes > 50% Serio Elevado-serio
Verdes < 50% Elevado Normal-elevado
Amarillas Normal-elevado Normal

El aislamiento e identificación bacteriológico implica el uso de diferentes
medios de cultivo, tanto generales como selectivos adicionados de cloruro
de sodio para la observación de la morfología colonial, pruebas
bioquímicas, de movilidad, fermentación de carbohidratos, producción de
enzimas, pruebas de metabolismo respiratorio y crecimiento a diferentes
concentraciones de sal. La identificación bacteriana es de vital importancia
para la eleccion apropiada de agentes químicos y antimicrobianos, así
como la determinación de la dosis efectiva.
Pruebas necesarias para la identificación del género Vibrio:
Prueba Método Vibrio Aeromonas Photobacterium Plesiomonas
Gram Tínción de Gram - - - -
Motilidad Gota golgante y en el + (+) + +

medio OF
Acid. De glucosa + + + +
Gas de glucosa Caldo con camapan de - V V -

Durham y aceite mineral
Oxidasa Kit + + V +
Sensitiv. 0/129 Sensidisco de 150 µg + - +
O-F glucosa Método de Hugh y F F F F

Leifson
Crecim. 0% NaCl Agua peptonada (10 g) - + - +

sin sal
Hidrólisis de Mediante discos de + + (-) -

gelatina carbón-gelatina
Flagelos polares Método de Ryu + - - -

Toma de Muestras: Se deberán tomar con un asa algunas de las colonias
crecidas en las cajas petri con agar TCBS.
Procedimiento:
1.- De las bacterias crecidas en TCBS se seleccionan algunas colonias de acuerdo
con características tales como: color (verdes o amarillas), biolominiscencia y/o
abundancia.
2.- Estas colonias son aisladas, sembradas con asa en agar TSA e incubadas a 30°C
de 18 a 24 horas para su crecimiento.
3.- Una vez pasadas las 24 horas, las bacterias son tomadas con un isopo hume-
decido en solución salina estéril (NaCl al 2.5%) y sembradas en tapete sobre una
caja petri (150 x 20 mm) preparadas previamente con medio de cultivo Agar
Mueller – Hinton.
4.- La placa de Mueller – Hinton ya sembrada se deja secar entre 3 y 15

minutosdependiendo de la humedad que se observe, pero siempre tratando de no
exceder estos rangos.
5.- Finalmente proceder a colocar los sensidiscos de cada antibiótico a una distancia
no menor de 2.5 cm el uno del otro, para permitir la diferenciación del halo de
inhibición de forma independiente.
6.- Estas placas son incubadas a 30°C de 18 a 24 horas. Transcurrido este tiempo se
miden los halos de inhibición.
7.- Los resultados de las mediciones se comparan con los sugeridos para cada uno de
los antibióticos y se define a cuales son sensibles (S), Intermedios (I) y/o
resistentes ( R ).
Nombre Concentración
Antibiótico común (µg) R I S
Cloranfenicol 30 12 13-17 18
Oxytetraciclina 30 14 15-18 19
Trimethoprim Bactrim 1.25/23.75 10 11-15 16
Sulfamethoxazole
Florfenicol Nuflor 30 16 17-20 21
Enrofloxacin 5 15 16-20 21
R: Resistente, I: Intermedio, S: Sensible Fuente: Dr. Bruno Gómez-Gil, CIAD, AC.

Toma de Muestras: Se deberán tomar las cepas bacterianas de las cajas petri
con agar TCBS para determinar la mínima concentración de antibiótico que
inhibe su crecimiento.
Procedimiento:
Preparación de la cepa bacteriana:
1.- Se eligen las cepas que van a ser empleadas para el MIC.
2.- Estas cepas son sembradas en medio TSA para su crecimiento e incubadas a
30°C durante un periodo de 18-24 horas.
3.- Una vez incubadas las cepas, se toman con un asa y se disuelven en solución
salina estéril (NaCl al 2.5%). La concentración es ajustada basándose en la
turbidez, tomando como referencia el 0.5 de Mc. Farland.
Limpieza de microplacas:
1.- Se lavan las microplacas con agua y jab{on bactericida, se dejan escurrir y se
limpia cada uno de los pozos con un isopo remojado en alcohol al 96% alternado
con agua destilada (dos veces). Después se exponen las placas a luz ultravioleta
para su esterilización, cuatro horas destapadas y una hora más tapadas.
2.- Las microplacas son preparadas de la siguiente manera:
a) Se llena los pozos de la microplaca con 150 µl de caldo Mueller-Hinton

concentrado la línea A, a partir de la línea B hasta la línea H se vacían 100 µl. Se
mete a incubar durante 24 horas para asegurar que la microplaca no esté
contaminada.
b) Después de las 24 h se observa que la microplaca no presente ninguna
contaminación como hongos o bacterias (turbidez).
c) Posteriormente se llenan los pozos verticalmente y de acuerdo a la numeración de
placa:
Control 150 µl de caldo Mueller-Hinton (control negativo) (A)

Medio M-H + Bacteria 100 µl de caldo Mueller-Hinton 50 µl de bacteria (control positivo) (B)
Experimentales 100 µl de Mueller-Hinton+50µl del antibiótico de la concentración más
alta + 50 µl de bacterias
Nota: El llenado de los pozos se hace: primero se coloca el caldo de Mueller –
Hinton; después se pone el antibiótico en el cuarto pozo de cada fila (D) y a
partir de éste se comienzan a hacer las diluciones en forma descendente
hasta llegar al último pozo (H); del pozo H se toman 50 µl y se vierten al
pozo C; se homogeniza cuidadosamente se extraen 50 µl y se desechan.
Una vez terminadas las diluciones de cada antibiótico (cuatro antibióticos

por microplaca), se procede a realizar la inoculación agregando 50 µl de l
solución bacteriana a cada pozo (a excepción del control negativo (Pozo A),
y del control del antibiótico (Pozo C).
3. La microplaca es incubada a 30°C durante 24 h.
4. Después de 24 h se observan los cambios de turbidez en cada pozo para

detectar en que concentración se obtuvo la inhibición.
1. Objetivos
2. Enfermedades causadas por Virus / Bacterias intracelulares
3. Enfermedades casuadas por protozoarios parásitos
4. Enfermedades causadas por protozoarios epicomensales
7. Selección y toma de muestra
8. Análisis en Fresco (Método de Diagnóstico)
9. Análisis de Branquias
10. Análisis de Hepatopáncreas
11. Análisis de Intestino
12. Análisis de Músculo
13. Técnica de Tinción rápida para detección de WSSV y TSV
11. Bibliografía
1. Conocer las principales enfermedades causadas por organismos
patógenos en las poblaciones de camarones peneidos.
2. Conocer y preparar los materiales, equipo y soluciones utilizados

para el análisis patológico de camarones.
3. Conocer y aplicar los procedimientos para determinar el grado de

infestación y el tipo de protozoarios parásitos que se encuentran
en los organismos.

infestación y el tipo de protozoarios epicomensales que se
encuentran en en los organismos.

infestación y especies de virus (principalmente del tipo DNA) que
se encuentran en los organismos mediante técnicas de tinción
rápida.
6. Interpretar los resultados que generen los análisis patológicos

realizados a los organismos.
Nombre Signos Clínicos Diagnóstico y Control
BP Altas mortalidades en El diagnóstico se realiza

larvas, postlarvas y mediante la elaboración de
(Baculovirus Penei) juveniles. Se presenta una placas en fresco de
reducción de la tasa de hepatopáncreas, intestino
BP ha sido reportado crecimiento y alimentación medio, posterior y heces
como una enfermedad, en los organismos de protozoea I, postlarvas,
que causa altas infectados con BP e juveniles, adultos y
mortalidades en larvas, incremento en la reproductores. En las
postlarvas y juveniles de proliferación de epibiontes muestras se observan
camarones blancos y en la cutícula y branquias cuerpos de oclusión
azules. Ataca al de los organismos. tetrahédricos.
hepatopáncreas, intestino Los métodos que son
medio y posterior. Está utilizados para la detección
ampliamente distribuido en de este tipo de virus son:
cultivos de Estados - Hibridación in situ
Unidos, Centroamérica,
- Analisis en fresco
México, el Caribe, Brasil,
entre otros. - Histopatología
Para el control de BP es
necesario desechar los
organismos que lo
presenten.
Fuente: Lightner
IHHNV • En L vannamei es Diagnóstico presuntivo:

típicamente una • Histopatología directa.
(Virus de la Necrosis enfermedad de tipo
Hipodérmica y • Potenciamiento seguido
crónico. El síndrome de las por histopatología o
Hematopoyética deformidades y el pruebas de hibridación in
Infecciosa) enanismo que afecta a situ.
esta especie ha sido ligado
a IHHNV. • Hibridación en “Dot-Blot”.
IHHNV: Síndrome de la • Hibridación in situ
deformidad y enanismo (histología).
• Típicamente, los juveniles
afectados por RDS
IHHNV es un pequeño exhiben rostrums doblados • PCR en hemolinfa o de
parvovirus constituído por o deformes, antenas tejidos en camarones
una sencilla cadena de arrugadas, caparazón sospechosos.
ADN. áspero o rugoso y otras
deformidades.
Se presume que IHHNV es • Distribución de tallas
enzootico en camarones relativamente amplia con
peneidos silvestres ya que una proporción de tallas
ha sido detectado en pequeñas (enanas) mucho
poblaciones silvestres del mayor de lo normal (~ 30%
Indopacífico, incluído - 50%), miéntras que en
México. poblaciones libres de
IHHNV (y por lo tanto sin
RDS) son entre 10 – 30%.
• RDS: Runt Deformity

Syndrome.
Especimenes de P. Stylirosris durante la
fase aguda de la enfermedad causada
por IHHNV. Nótese el patrón anormal de
coloración en los segmentos
abdominales impartiéndole al camarón
una apariencia bandeada o moleada,
mostrándose extremadamente letárgicos.
Se muestran varios ejemplos de rostra

derformados en P. vannamei con IHHNV
en fase crónica (síndrome de las
deformaciones y el enanismo). El
rostrum puede llegar a mostrar
desviaciones prácticamente en cualquier
dirección.
Corte histológico de un juveniles P.

stylirostris en la etapa aguda de l
enfermedad causada por IHHNV
(G4=Grado severo). La preparación
muestra un corte hecho a través del
epitelio cuticular y del tejido conectivo
subcuticular, en la parte dorsal del
cuerpo. Se observan numerosas células
nicróticas con núcleos picnóticos o con
cuerpos de inclusión intracelulares
eosinofilicos de tipo patognómico
(inclusiones de Cowdry tipo A y CAI).
HPV • Los síntomas externos de Diagnóstico presuntivo:

la enfermedad no son • Método histológico.
(Parvovirus específicos de HPV. Sin
Hepatopancreático) • Método rápido de campo
embargo, en casos en los para la tinción de
que la infección es severa improntas de
HPV es un parvovirus es posible observar atrofia hepatopáncreas utilizando
pequeño (22 a 24 nm de y decoloración del la técnica de Giemsa.
diámetro) con un genoma hepatopáncreas, reducción
en la tasa de crecimiento, • Hibridación in situ usando
constituido por ADN de sondas genéticas especí-
una sola cadena. anorexia, reducción en la
actividad de limpieza ficas para HPV.
dando como resultado un
Debido a la manera de incremento en el
replicarse, al tamaño del ensuciamiento de
virión y al tipo de branquias y apéndices
inclusiones intranucleares ocasionado por la
que se tiñen fuertemente colonización de
con la reacción de Feulgen organismos epicomen-
(confirmando el contenido sales, opacidad ocasional
de ADN del genoma), HPV de músculos abdominales
es considerado como e infecciones secundatias
miembro de la familia por patógenos tales como
Parvoviridae. Vibrio sp.
Corte histológico de un juvenil P.
esculentus con infección avanzada de
HPV. Se pueden observar numerosos
cuerpos de inclusión basofílicos dentro
de los núcleos de las células epiteliales
de los túbulos del hepatopáncreas.
Tinción H&E de Mayer-Bennett.
Magnificación 700X..
Impronta de tejido del hepatopáncreas

mostrando racimos de células infectadas
por HPV y células normales. La tres
células vecinas en la porción superior de
la fotografía están infectadas y muestran
cuerpos de inclusión en diferentes etapas
de madurez. Las seis células en la
porción inferior se encuentran
aparentemente normales. Tinción:
Método rápido de campo con colorante
Giemsa de Wolbach. Magnificación:
2,600X.
Resultados de una prueba de hibridación

in situ para HPV utilizando una sonda de
ADN, marcada como DIG, específica
para la detección de este virus. La
presencia de un precipitado azul obscuro
o negro indica una reacción positiva de la
sonda y por lo tanto la presencia del
virus.
Tinción: Bismarck Brown y sonda
genética marcada con DIG.
Magnificación: 100 X
WSSV • La primera señal es una Prueba rápida:

drástica reducción en la Tinción con Hematoxilina y
(Virus de la Mancha alimentación en Eosina con solución
Blanca) camarones juveniles Davidson modificado en
tardíos y subadultos hasta organismos vivos.
El Virus de la Mancha dejar de comer por
Blanca se encuentra completo.
Se ha observado que esta
distribuído en los cultivos • Posteriormente se detec- enfermedad se presenta
de camarón de P. ta la aparición de principalmente en cultivos
monodon, P. japonicus, P. camarones moribundos con un medio ambiente de
chinensis, entre otros. Sin nadando cerca de la mala calidad, altas
embargo, posiblemente por superficie y en las orillas densidades, larvas con
la importación de cama- de los estanques. Estos muy poca resistencia a los
rones crudos congelados a animales pueden o no agentes patógenos, mala
las costas del Atlántico Sur tener manchas blancas calidad del alimento, uso
de los Estados Unidos, (0.5 a 2.0 mm de diámetro) irracional de antibióticos y
este virus de ha distribuído en el cefalotorax y en el mala calidad del agua.
ampliamente en los sexto segmento abdo-
camarones cultivados y minal. Las manchas
silvestres en muchos blancas son depósitos de Se requiere reducir el
países del continente calcio las cuales comun- estrés por mala calidad del
americano. mente comienzan a agua y fondos, así como
manifestarse después de por altas densidades y
pasar la fase aguda. dando una buena
• Una de las formas de alimentación puede ayudar
transmisión es el a minimizar el impacto de
canibalismo de animales esta enfermedad.
moribundos o muertos, así
como de partículas virales
libres en el agua, así como
de gran número de
huéspedes como otros
crustáceos e insectos.
Fuente: Lightner
TSV • Al iniciarse la epidemia • Se base en demostrar las

(Virus del Síndrome del es posible ver camarones lesiones histopatológicas
Taura) muertos o moribundos específicas de los tejidos
durante los muestreos. cuticular y subcuticular de
• En ocasiones la camarones sintomáticos.
El síndrome del Taura
(TSV) es una enfermedad presencia de camarones • El aspecto más
que fue reconocida en muertos se confirma con importante del TSV es
junio de 1992 en granjas aves predadoras en los claramente la prevención y
situadas cerca del Río estanques. control del problema.
Taura, en el Golfo de • Los juveniles de L. • Como en las
Guayaquil, Ecuador. vannamei en fase inicial o enfermedades infecciosas,
aguda son débiles, al reducir el reclutamiento
presentan cutícula suave, se ayuda a disminuir el
tracto digestivo vacío y estrés, y se reduce la
usualmente sus transmisión del patógeno.
cromatóforos están
expandidos.
• Los individuos que
sobreviven a un episodio
agudo presentan lesiones
cuticulares a manera de
melanosis, de forma
irregular en todo el cuerpo,
y usualmente tienen un
comportamiento normal.
• Los cambios histológicos
que caracterizan al TSV en
su fase aguda son:
necrosis multifocal del
epitelio cuticular y
frecuentemente el tejido
conectivo subcuticular. La
picnosis nuclear es común,
presentándose cuerpos de
inclusión esféricos con
tamaños de 1 a 20 µ.
Fuente: Lightner
NHP • Reducida ingesta de • Histología del hepatopán-

(Hepatopancreatitis alimento, anorexia, tracto creas mostrando atrofia,
Necrotizante) digestivo vacío. lesiones y la presencia
• Bajos crecimientos. masiva de bacterias
• Letargia intracelualres, Gram
La posición taxonómica de negativas en el celulas de
NHP ha sido recientemen- • Cutícula suave y flacidez. los túbulos epiteliales del
te determinada. • Branquias negras o HP.
obscurecidas. • Métodos de diagnóstico:
La bacteria es pequeña, • Expansión de cromató- - Técnica de Dot Blot.
Gram negativa, de foros dando apariencia de
altamente pleomórfica, suciedad en pleopodos y
intracelular que infecta a uropodos. • Temperatura y Salinidad
las celular epiteliales • Organismos epicomen- son factores ambientales
hepatopancreaticas. sales en la superficie de los cuales pueden jugar un
los organismos infectados. papel muy importante en el
presencia de NHP en
• Elevadas tasas de organismos.
mortalidad (en algunos
casos más del 90%).
Juvenil moribundo con NHP mostrando Juvenil moribundo con NHP mostrando
cromatóforos negros sobre los pleópodos dando hepatopáncreas atrofiado y reducido en un ~50%
una apariencia de falsa melanosis o suciedad. de su volumen normal.
Hepatopáncreas de camarón con NHP mostrando Hepatopáncreas de camarón juvenil con

túbulos melanizados y ausencia de lípidos. presencia en grado 3-4 de NHP. Se observa
severa inflamación hemocitica.
Fuente: Lightner
GREGARINAS • Color amarillento en la • Análisis en fresco de todo

(Nematopsis sp.) parte superior del el intestino del camarón
estómago. infectado.
Se encuentran infectando • Cuando las gregarinas se
la mucosa del instestino presentan con alta • Para el control de
medio y posterior, prevalencia y su grado de gregarinas es necesario
hepatopáncreas y ciegos severidad son altos causan erradicar al molusco que
de los camarones, en los organismos es el huésped
causando destrucción del destrucción del epitelio del intermediario que utilizan
epitelio intestinal y afectan estómago e intestino. para completar su ciclo de
la absorción del alimento. • Otros signos son la vida, mejor la calidad del
reducción en las altas de agua del estanque,
conversión y crecimiento. remoción del sedimento
La infección se da cuando entre cada ciclo de cultivo
los organismos ingieren • Incremento en la
proliferación de epicomen- y administración de cal u
moluscos bivalvos y otros productos para la
poliquetos del género sales y bacterias,
causando mortalides en los desinfección y destrucción
Polydora sp. Que de Polydora sp.
contienen esporas del cultivos, las cuales
parásito, las cuales se suceden en pocos días.
encuentran en el fondo de • El uso de Monensina
los estanques. Nematopsis sódica ha sido utilizada de
penaeus es la especie de manera exitosa para el
gregarinas más reportada control de este tipo de
a nivel mundial causante infección.
de enfermedad y
mortalidades en los
estanques.
Muestra de intestino medio, donde se
observa la sicigia de gregarina de 2.
Muestra en fresco de intestino medio, donde se

observan los trofozoitos de gregarinas.
Muestra de intestino medio, donde se observan

las sicigias de gregarinas de 2 y 3 divisiones. Muestra en fresco donde se observan los
gametocistos de gregarinas.
Fuente: Lightner
Nombres Signos Clínicos Diagnóstico y Control
Zoothamnium sp. • Es difícil detectar las • Se realizan montajes de

Epistilis sp. infecciones leves; sin branquias, cutícula y
Acineta sp. embargo signos como pleópodos para análisis en
coloración rojiza en la fresco. Se observan al
Ascophrys sp. superficie del cuerpo y microscopio de luz las
decoloración de las formas bien definidas de
Los protozoarios epico- branquias pueden servir los protozoarios epicomen-
mensales son organismos como ayuda para el sales de Zoothamnium sp.,
cosmopolitas que se diagnóstico preliminar. Epistylis sp., Acineta sp., y
encuentran de manera Ascophrys sp.
natural en los estanques • Para tener control sobre
de cultivo. Con frecuencia estos protozoarios es
se observan sobre necesario tener buena
branquias, apéndices y calidad de agua de cultivo,
cutícula de diversas partes buena alimentación y
del cuerpo del camarón a desinfección de los
cierto número de éstos estanques entre cada
organismos, sin que con cosecha.
ello se encuentren • Para el control de
enfermos. Sin embargo protozoarios en
cuando los camarones se reproductores en los
encuentran sometidos a laboratorios se utilizan
condiciones estresantes baños con mezcla de
reducen su actividad formaldehido a dosis de 50
limpiadora y/o no mudan, y ppm y cobre a dosis de
por lo tanto son altamente 0.25 ppm por un tiempo de
susceptibles a una 5 horas repitiendo este
invasión masiva. proceso cada 28 días.
Zoothamnium sp. Epistylis sp.
Acineta sp. Ascophrys sp.
Fuente: Lightner
Materiales:
1 Caja de portaobjetos
1 Caja de cubreobjetos
1 Bisturí
1 Juego de navajas de disección
1 Pinzas de disección
1 Tijeras finas de disección
1 Tabla de disección
10 Cajas petri
2 Pizetas
1 Paquete de guantes de latex
1 Bidón de solución salina al 2.5%
1 Frasco de solución al 1% de verde de malaquita
1 Frasco de solución de Giemsa
1 Tinción de Wright´s
1 Resina
1 Juego de jeringas desechables de varias medidas
Químicos:
1 Frasco de Hematoxilina (1 lt)
1 Frasco de Eosina –floxina (250 ml)
1 Solución Davidson (1 lt)
1 Frasco de Etanol al 80 y al 100% (1 lt)
1 Xileno
1 Frasco de Parafina
Equipo:
1 Microscopio compuesto con objetivos de 10, 20, 40 y
100 X
1. El material a utilizar consistente en portaobjetos,
cubreobjetos, cajas petri de cristal y equipo de
disección deberá estar en condiciones de asepsia
para evitar cualquier tipo de contaminación.

utilizados.

La toma de muestra debe estar elegida de acuerdo al
estado de salud de los organismos o a la sospecha de
alguna enfermedad.
La intensidad o periodicidad del muestreo dependerá de las

siguientes condiciones:
* Impacto de enfermedades en la unidad de
cultivo y de la región donde se ubica
* Intensidad del cultivo
* Condiciones climatológicas
* Condiciones de calidad de agua y sedimentos en
los estanques y del sistema lagunar del cual se
abastece.
Tipos de muestreo:
Al Azar: Si solamente el análisis es rutinario y no se
espera encontrar alguna enfermedad.
Dirigido: Si se tiene sospecha de la presencia de alguna

enfermedad o síndrome. Se seleccionan 10 organismos
que presente signos clínicos como :
* Decoloración en la cutícula
* Anorexia (falta de apetito)
* Letargia (reducción de la actividad normal)
* Mortalidad (flotando en las orillas de los
estanques)
* Coloración rojiza de los pleópodos y telsón.
El análisis en fresco es la técnica que se utiliza para monitorear el
estado de salud de los organismos y la realización de diagnósticos
presuntivos en laboratorio y campo. Consiste en la disección del
camarón en todos sus estadíos para observar las alteraciones que
presenten en órganos y tejidos del mismo.
Procedimiento:
1.- Los organismos se miden y pesan para sacar el peso y

tamaño promedio.
2.- Se selecciona una pequeña porción de cada tejido u

órgano. Cada porción se coloca en portaobjetos
separados y limpios, se les adicionan unas gotas de agua
de mar estéril y se pone el cubreobjetos procurando que
en la muestra no se formen burbujas que puedan
interferir, para ello hay que realizar una leve presión sobre
el cubreobjetos con la pinza de disección.
3.- Las muestas ya preparadas se analizarn en el microscopio

iniciando con el objetivo de menor aumento y finalizando
con el mayor. Se anota todo lo que se observa en cada
uno de los objetivos en la hora de reporte para después
calcular el porcentaje de prevalencia y determinar el grado
de severidad que presente la muestra para finalizar con el
diagnóstico.
GRADO SIGNOS CLÍNICOS
0 No presentan singnos de infección por patógenos,

parásitos o epicomensales. No presentan lesiones
características de síndromes.
1 Presencia muy baja de patógenos, parásitos o
epicomensales. En aquellos donde se tiene un número
estándar permitido, éste se encuentra justo arriba del
límite normal. Se observan muy pocas lesiones
características del síndrome.
2 Se observa la presencia baja y moderada de patógenos,
parásitos o epicomensales. Se observan muchas
lesiones características del síndrome. Incremento en la
mortalidad si no se aplica tratamiento (cuando existe
tratamiento)..
3 Se observa la presencia moderada de patógenos,
parásitos o epicomensales. Se observan muchas
lesiones características del síndrome. Potencialmente
letal si no se aplica tratamiento (cuando existe
tratamiento).
4 Se observan gran cantidad de patógenos, parásitos o
epicomensales. Se observan severas lesiones
características del síndrome. Muy letal con altas
mortalidades.
Fuente: Lightner, 1996.

Procedimiento:
1.- Con tijeras finas se toma una pequeña porción y se coloca en el

portaobjetos par buscar: cuerpo de inclusión viral, epibiontes,
hongos, bacterias, melanizaciones, deformaciones, etc.
Procedimiento:
1.- Se elimina todo el exoesqueleto del cefalotorax para descubrir el

hepatopáncreas y el estómago. Se observa la coloración (color
normal verde obscuro al microscopio), el tamaño del
hepatopáncreas para decidir si hay atrofias (reducción de tamaño)
o hipertrofia (aumento de tamaño) de este órgano.
2.- Con un bisturí se parte por la mitad y se observa la coloración del

fluido. Se toma una pequeña muestra y se coloca en un
portaobjetos para buscar : BP, MBV, gregarinas, bacterias y
cantidad de lípidos presentes.
3.- En la observación de HP revisar el estado de los túbulos,

presencia de patógenos, abundancia de lípidos, entre otros.
Procedimiento:
1.- El abdomen, se separa del cefalotórax, telson y urópodos

para facilitar la extracción del intestino.
2.- Por la parte posterior se localiza el intestino que puede o

no contener hilo fecal, con una pinza se extrae con
cuidado, se pesa y se coloca en el portaobjetos de la
siguiente manera:
Uno de los extremos del intestino se detiene con una

pinza se jala para extraer el contenido que se analiza al
microscopio para buscar: gregarinas, nemátodos, MBV y
BP.
Procedimiento:
1.- Se toma una pequeña muestra de músculo, especialmente

que muestre opacidad de tipo lechoso, se coloca en un
portaobjetos y se presiona para facilitar la búsqueda de
microsporidios.
Procedimiento:
1.- Se pesa el organismo que va a ser fijado para saber la

cantidad de solución Davidson que deberá ser aplicada.
2.- Para la fijación de organismos juveniles y adultos, inclusive

postlarvas grandes, se deberá iniciar con la zona del HP,
el cual es uno de los tejidos de más tendencia a
autolizarse, debido a su alta actvidad enzimática.
Procedimiento: (cont...)
3.- Posteriormente se continua con los segmentos

abdominales, abarcando ambos costados del organismo.
El volumen inyectado deberá ser del 5 al 10% del peso
corporal.
4.- Después de aplicar la solución el organismo es seccionado

por la parte ventral a trozarlo en dos secciones utilizando
una navaja de disección.
5.- El organismo es sumergido en volumen fijador 10 veces

mayor del volumen corporal.
6.- Los camarones ya fijados deberán durar de 24 a 72 horas,

dependiendo del tamaño del organismo. Posteriormente
se deberán cambiar a alcohol al 70% en el cual podrán
almacenarse por periodos largos.
7.- En caso de larvas y postlarvas (hasta PL18 inyectar

lentamente sólo el HP con jeringa de insulina) son
sumergidas en el fijador, las cuales deberán permanecer
de 12 a 24 horas. Posteriormente se cambian a alcohol al
70% para su almacenamiento.
8.- Es importante realizar las observaciones de las

condiciones del camarón ya que puede resultar útil para
determinar la fuente y causa del problema.
Procedimiento:
1.- Se toma una muestra de branquias y/o estómago y se coloca en un

tubo eppendorf con fijador Davidson. Si los organismos fueron fijados
con fijador Davidson-HCL deberán de permanecer 1 hr.
2.- Lavar con agua corriente por 15 minutos (a los 7:30 minutos se enjuaga
y se vuelve a lavar el tiempo restante).
3.- Adicionar alchol al 100% durante 2 minutos, descartar y repetir esta

operación 2 veces más.
4.- Adicionar alcohol al 96% durante 2 minutos, descartar y repetir esta

operación 2 veces más.
5.- Lavar con agua corriente por 10 minutos (a los 5 minutos se enjuaga y
se vuelve a lavar el tiempo restante).
6.- Anadir hematoxilina durante 10 minutos.
7.- Lavar con agua corriente por 15 minutos (a los 7:30 minutos se enjuaga
y se vuelve a lavar el tiempo restante).
8.- Añadir eosina durante 1-2 minutos.
9.- Adicionar alcohol al 96% por 2 minutos, descartar y repetir 2 veces
10.- Adicionar alcohol al 100% por 2 minutos, descarta y repetir 2 veces
11.- Adicionar xileno por 30 segundos. Repetir está operación 2 veces.
12.- Montar la muestra adicionando agua destilada cubriéndola con el

cubreobjetos y observar al microscopio (oculares de 20X y 40X).
330 ml de alcohol etílico absoluto
220 ml de formaldehido de 37 a 40%
115 ml de ácido acético glacial
335 ml de agua destilada
Procedimiento: Se mezclan todos los reactivos iniciando con el alcohol

y finalizando en agua.
Nota: Se inyecta el Davidson del 5 al 10% del peso corporal. Para
organismos juveniles se dejan en fijador de 24 horas, para
reproductores hasta 72 horas y para postlarvas se dejan en un periodo
de 24 horas.
330 ml de alcohol etílico absoluto

220 ml de formaldehido de 37 a 40%
115 ml de HCl
335 ml de agua destilada
Procedimiento: Se mezclan todos los reactivos iniciando con el alcohol

y finalizando en agua.
Nota: Se inyecta el Davidson del 5 al 10% del peso corporal. Para
procedimientos de tinción los organismos deberán permanecer durante
un periodo de 1 hr en el fijador.
Hematoxilina Mayer-Bennett
2000 ml de agua destilada caliente
2.0 gr de hematoxilina
180 gr de sulfato de aluminio y potasio
2.0 ml de ácido cítrico
100 gr de hidrato de cloral.
Procedimiento: Se mezclan todos los reactivos siguiendo el orden del

listado.
Eosina – Floxina
100 ml de solución Eosina (1% de eosina “Y” acuosa).
10 ml de solución de Floxina (1% de floxina “B” acuosa).
780 ml de alcohol al 95%.
4 ml de ácido acético glacial
0.3 gr de Wright
3.0 ml de glicerol
97.0 ml de alcohol absoluto
Procedimiento: Moler la tinción de Wright en un mortero y adicionarle

el glicerol. Mezclar completamente y adicionar el alcohol. Poner la
solución en un frasco ámbar y dejar reposar por 12 horas. Se filtra y se
deja madurar por 2 días para poder utilizarse.
1.0 de Giemsa
66.0 ml de glicerina
66.0 ml de alcohol absoluto
Procedimiento: Adicionar la glicerina a la Giemsa y poner a 60° por 1

hr. Adicionar el aocohol y dejar en reposo sin filtrar. Se realiza la
filtración cuando se va a utilizar la tinción.
2.0 ml de tinción de Giemsa

50 ml de agua destilada a pH de 6.5
Nota: Mezclar y utilizar como solución de trabajo.

1. Objetivos
4. Análisis de Fitoplancton
5. Análisis de Zooplancton
6. Parámetros Físico-Químicos
11. Bibliografía
1. Conocer los equipos y materiales necesarios para realizar los
análisis de calidad de agua de los estanques y sistemas
lagunares aledaños a las unidades acuícolas.
2. Conocer y aplicar los procedimientos para determinar la densidad

de especies de fitoplancton en las muestras de agua de las
unidades acuícolas.
3. Conocer y aplicar los procedimientos para determinar la densidad

de especies de zooplancton en las muestras de agua de las
unidades acuícolas.
4. Conocer y utilizar los equipos para determinar los niveles de

amonia, sulfitos, nitritos, nitratos, fostatos, salinidad y pH
presentes en las muestras de agua de las unidades acuícolas.
5. Interpretar los resultados que generen los análisis de calidad de

agua.
Materiales:
1 Lote de celdillas de cristal de 25 ml con tapón de hule
1 Litro de agua destilada
1 Frasco de Yodo-Lugol
1 Lote de chupones de 1 ml
1 Filtro para zooplancton
1 Pipeta Pasteur
Reactivos:
1 Lote de reactivos para Amonia (Cyanurate y Sallyicilate)
1 Lote de reactivos para Sulfitos (Sulfide 1 y 2)
1 Lote de reactivos para Nitritos (Nitriver 3)
1 Lote de reactivos para Nitratos (Nitriver 5)
1 Lote de reactivos para Fosfatos (Phosfate)
1 Buffers para calibrar pHmetro (4.0,7.0,10.0)
Equipo:
1 Hach modelo DR/2010
1 Microscopio con objetivos de 10X, 20X y 40X
1 pHmetro de mesa / pluma
1 Refractometro
1 Contadores manuales
1 Hematocitómetro (cámara de Neubawer)
1 Cámara para contar zooplancton
1. El material deberá de estár limpio y seco. No
requiere esterilización.

utilizados.

Toma de Muestras: Se deberán tomar en frascos de 250 ml,
debiéndose tomar de la columna de agua entre 30 – 40
cm de la superficie y se colocan en hielo hasta su proceso
en laboratorio.
Procedimiento:
1.- Se homogeniza la muestra tomándose una cantidad con

una pipeta pasteur para ser colocada en una cámara de
conteo de fitoplancton (hemacitómetro).
2.- Colocarla en el microscopio utilizando el objetivo de 10X.
3.- Hacer un recorrido por el campo para contaje de

dinoflagelados y otros, apoyándose de un contador
manual.
4.- Hacer de nuevo un recorrido por el campo para contaje e

identificación de especies de microalgas, como
diatomeas, cianofitas y clorofitas.
Interpretación:
Para determinar la cantidad de células/ml de fitoplancton, se
cuentan las células de los cuadrantes del campo de la cámara
multiplicándose x 10,000 y el resultado dividirlo entre 4.
Ejemplo: 160 cél = 160 x 10,000 / 4 = 400,000 cel/ml

Especies de Diatomeas (Chaetoceros sp.)
Toma de Muestras: Se filtran 5 litros de agua con un filtro para
zooplancton (< 30 µ) concentrando el contenido del filtro
en 25 ml de agua previamente filtrada y se colocan en
hielo hasta su proceso en laboratorio.
Procedimiento:
1.- Una vez concentrados los mircroorganismos en 25 ml de

agua, se le agrega de 4 a 5 gotas de solución lugol.
2.- Se homogeniza la muestra tomándose aproximadamente 1

ml para ser colocada en una cámara de conteo de
zooplancton.
3.- Colocarla en el microscopio utilizando el objetivo de 10X.
3.- Hacer un barrido total por la cámara para contaje e

identificación de especies de zooplancton, entre ellos
copépodos, nauplios, larvas de poliquetos, cladóceros y
otros, apoyándose de un contador manual.
Interpretación:
Para determinar la cantidad de organismos/lt de zooplancton, se
cuentan las organismos en la cámara multiplicándose x 5.
Ejemplo: 25 org = 25 x 5 = 125 org/lt

Especies de Copépodos Especies de Copépodos
Especies de Copépodos Especies de Rotíferos

Toma de Muestras: Se deberán tomar en frascos de 250 ml,
debiéndose tomar de la columna de agua entre 30 – 40
cm de la superficie y se colocan en hielo hasta su proceso
en laboratorio.
Procedimiento General:
1.- Instalación del equipo lector y organización de los reactivos

que serán utilizados para los diferentes análisis.
2.- Calibrar el aparato con una celdilla conteniendo 25 ml de

agua destilada (blanco).
3.- Programación del aparato dependiento del análisis químico

a realizar.
4.- Se vacía en las celdillas de cristal de 25 ml la muestra para

la aplicación del reactivo y su posterior léctura (se sugiere
que antes y después de cada lectura, calibrar el aparato).
Parámetro Procedimiento
Amonia Se prepara con agua destilada y reactivo
Nitritos Se utiliza solamente agua del estanque
Sulfitos Se prepara con agua destilada y reactivo
Nitratos Se utiliza solamente agua destilada
Fosfatos Se utiliza solamente agua del estanque
Programación Tiempo de reacción
# Prog. Long. Timer 1 Timer 2

Químico Reactivo (nm) (minutos) (minutos)
Amonia1 Sallycilate 385 655 3:00 15:00
(NH3-N) Cyanurate
Sulfitos Sulfide 1 690 665 5:00 ---
(S2) Sulfide 2
Nitritos Nitriver 3 371 507 20:00 ---

(NO2)
Fosfatos Phosver 490 890 2:00 ---
(PO4)
Nitratos Nitriver 5 353 400 1:00 5:00
(NO3)
Observaciones:
Amonia: El primer reactivo a aplicar a la muestra es amonia sallycilate, se
homogeniza y se le dá el tiempo de reacción (3 min), para enseguida aplicar el
segundo reactivo, (amonia cyanurate) colocando la muestra luego de haber
concluído el 2do. tiempo de reacción (15:00 min).
Sulfitos: Una vez aplicado el primer reactivo (Sulfide 1) se homogeniza para
luego aplicar el segundo reactivo (Sulfide 2) colocando la muestra una vez
concluído el tiempo de reacción (5:00 min).
Nitritos: Se aplica el reactivo a la muestra (Nitriver 3), se homogeniza
colocando la muestra una vez concluído el tiempo de reacción (20:00 min).
Fosfatos: Se aplica el reactivo a la muestra (Phosver), se homogeniza
colocando la muestra una vez concluído el tiempo de reacción (2:00 min).
Nitratos: Se aplica el reactivo a la muestra (Nitriver 5), se homogeniza por 1:00
min (primer tiempo de reacción), colocando la muestra una vez concluído el
2do. tiempo de reacción (5:00 min).
Procedimiento:
1.- Calibración del pHmetro o potenciómetro utilizando los

buffers de 4.0, 7.0 y 10 en dicho órden y viceversa.
2.- Proceder con la lectura de la muestra.
Procedimiento:
1.- Calibración del Refractómetro con agua destilada o agua

dulce.
2.- Proceder con la lectura de la muestra.

Interpretación:
1.- Se registrán los resultados de los análisis en un formato

para luego correlacionarlos con los rangos óptimos de los
diferentes parámetros físico-químicos.
1. Preparación de muestras para análisis de PCR
- Preparación de postlarvas
- Preparación de muestras de juveniles y adultos
2. Recorrido por el laboratorio
3. Plática sobre PCR
Bibliografía
Desinfectar bien el material con el que se va a tomar la
muestra con alcohol del 96%.
1. Tomar de 150 a 200 postlarvas por estanque y colocarla

en dos microtubos eppendorf de 1.5 ml.
2. Sacar la mayor cantidad de agua al tubo con postlarvas y

llenarlo de alcohol absoluto o con alcohol al 96%.
3. Tapar bien los microtubos y sellar con papel parafilm.

Poner con plumón indeleble y letra grande únicamente el
número del estanque colectado en el tubo.
4. Enviar las muestras en una caja de cartón con uno o dos

bolsas de gel para conservarlas frescas.
5. Especificar en documento de referencia la cantidad de

muestras que se están enviando (número de viales), la
procedencia, tamaño del organismo, especie y análisis a
realizar.
Nota: El número de cada tubo puede ir cubierto con cinta transparente y
sellar con papel parafilm. Poner con el plumón indeleble y letra
grande únicamente el número del tanque colectado en el tubo.
Para el caso de muestras para análisis de TSV se realizará el
mismo procedimiento de envío, solo que las muestras no serán
fijadas en alcohol sino se deberán mandar organismos vivos o
congelados completamente.
Desinfectar bien el material con el que se va a tomar la
muestra con alcohol del 96%.
1. Tomar de 5 a 10 juveniles por estanque y cortar el cuarto par de
pleópodos y colocarlos por separado en dos micotubos eppendorf
de 1.5 ml.
En el caso de reproductores se toman 5 organismos por estanque

y se corta un pleópodo del cuarto par (solo uno) y se secciona en
dos para colocarlos en dos microtubos eppendorf de 1.5 ml.
2. Llenar los microtubos con alcohol absoluto o con alcohol al 96%.
3. Tapar bien los microtubos y sellar con papel parafilm. Poner con
plumón indeleble y letra grande únicamente el número del
estanque colectado en el tubo.
4. Enviar las muestras en una caja de cartón con uno o dos bolsas de
gel para conservarlas frescas.
5. Especificar en documento de referencia la cantidad de muestras

que se están enviando (número de viales), la procedencia, tamaño
del organismo, especie y análisis a realizar.
Nota: El número de cada tubo puede ir cubierto con cinta transparente y

sellar con papel parafilm. Poner con el plumón indeleble y letra
grande únicamente el número del tanque colectado en el tubo.
Para el caso de muestras para análisis de TSV se realizará el
mismo procedimiento de envío, solo que las muestras no serán
fijadas en alcohol sino se deberán mandar organismos vivos o
congelados completamente.
1. Consideraciones generales previo al
inicio del ciclo de cultivo
- Características predominantes en la microregión
- Condiciones de calidad de agua y suelos en la
unidad acuícola
- Condiciones de cada estanque
- Uso de estructuras de control de depredadores
(filtros)
2. Prácticas preventivas
3. Recirculación en unidad acuícola
4. Uso y aplicación de productos para mejorar

la calidad del agua de los estanques
Bibliografía
a) Características predominantes en la zona
- Parámetros medio-ambientales (T° y salinidad)
- Parámetros químicos de los sistemas
lagunares o estuarinos aledaños
- Análisis bacteriológico y de PCR de organismos
muestreados en los afluentes.
b) Condiciones de calidad de agua y suelos de

la unidad acuícola.
- Análisis bacteriológico de sedimentos (Vibrio,
Heterotrofas y Autótrofas).
- Análisis de agua del canal de llamada (Amonia,
Nitritos, Sulfitos, Nitratos y Sulfatos, Salinidad y
pH).
c) Condiciones de cada estanque en partícular.

- Análisis bacteriológico de sedimentos (Vibrio,
Heterotrofas –Beige- y Autótrofas –Naranja-).
- Análisis del Materia Orgánica.
RASTREOS PARA
PULVERIZAR SUELOS
Cuando sólo se efectua un solo rastreo y debido al tamaño de los
“terrones” que no se desintegran, la materia orgánica no se oxida
completamente en la parte interior, es por ello que un segundo
rastreo permite pulverizar de tal manera que por los efectos que
produce el oxígeno se logra oxidar dicha materia orgánica
haciendo más efectivo este proceso de preparación de suelos.
• Considerar las condiciones climáticas, principalmente
temperatura y salinidad para la programación del ciclo de cultivo.
• Desinfección de estructuras fijas (marcos, mallas y tablas),

debiendo ser removido todo resto de organismo o residuo vegetal
que pudiera propagarse y afectar el ciclo de cultivo. Las
estructuras deberán ser desinfectadas con productos que
muestren un notable efecto bactericida y viricida, como por
ejemplo los derivados de cuaternarios de amonio.
• Estructuras de control de depredadores y especies de fito y

zooplancton ubicadas en canal de llamada, cárcamo, reservorio y
compuertas.
• Acondicionamiento del agua antes de la siembra (fertilización)
• Adquirir postlarvas PCR-Negativa.
• Pruebas de estrés a las postlarvas antes de la siembra.
• Aclimación adecuada para reducir estrés en la siembra.
• Recambio de agua controlado.
• Regimen de fertilización controlado para reducir el riesgo de un

deterioro en la calidad del agua (oxígeno y amonio entre los
principales).
• Uso adecuado de alimento balanceado (utilización de charolas
para el monitoreo del consumo).
• Monitoreo contínuo de la condición del camarón (microbiología,

técnica rápida de branquias, signos externos, histología e
inmunología).
• Aplicación de antibióticos en base a resultados de análisis de

sensibilidad o antibiogramas.
• Tránsito restringido a personal entre estanques.
• Desinfección de los utensilios de trabajo (botas, atarrayas y

pangas).
Marzo – 2003.
1. Sistema de Registro de Resultados de Análisis
- Formato para el registro de análisis patológico
- Formato para el registro de análisis bacteriológico
en organismos
en sedimentos
en agua
- Formato para el registro de análisis de fitoplancton,
zooplancton y parámetros químicos de agua
- Gráficas de resultados.
Marzo – 2003.
JUNTA LOCAL DE SANIDAD ACUÍCOLA SUR III
LABORATORIO DE ANÁLISIS EN FRESCO
SISTEMA DE MONITOREO EN SISTEMA LAGUNAR
CAIMANERO
Análisis Impresión Gráficas
Patológico Gráficas Patológico
Bact. Fresco Gráficas Bact. Fresco
Bact. Sedimentos Gráficas Bact. Sedimentos
Bact. Agua Gráficas Bact. Agua

Fechas
Monitoreo de al Carátula
Fito,Zoo,Químicos Gráficas Fito,Zoo,Químicos 3 01/08/2002 15/08/2002
ANALISIS PATOLOGICO
Granja Camaronera Hora de Muestreo Fecha
BRANQUIAS EPIPODITOS PALPO LABIAL INTESTINOS HEPATOPANCREAS
# de Long. Peso Gregarinas
Estanque Camarón Especie (cm.) (gr.) Grado Tipo Grado Tipo Grado Tipo Grado Observ. Condición Observaciones de campo
Observaciones:
Ectocomensales: Definiciones:
# de camarón 1 - Chico
Intestino: Gregarinas 2 - Mediano
3 - Grande
Epicomensales X - Presencia (10 - 30%)
Hepatopáncreas: XX - afectado (30 - 70%)
XXX - Afectado crítico (> 70%)
Gregarinas X - Presencia (10 - 20%)
Generales: XX - Afectado (20 - 50%)
XXX - Afectado crítico (> 50%)
Hepatopáncreas G1- Túbulos llenos
Recomendaciones: G2 - Túbulos semillenos
G3 - Túbulos a la mitad con corrugación
G4 - Túbulos vacios y corrugados
G5 - Túbulos vacios, deformes, necroz.
ANALISIS BACTERIOLOGICO EN HEPATOPÁNCREAS Y HEMOLINFA
Fecha de Fecha de
Granja Camaronera Toma de Muestra Análisis
HEPATOPÁNCREAS HEMOLINFA
Vibrios Tiempo Vibrios
Peso Amarillas Verdes de Amarillas Verdes
Estanque (gr) (UFC/gr) (UFC/gr) Coagulación (UFC/gr) (UFC/gr)
HEPATOPÁNCREAS
Vibrio:
Amarillas
Verdes
HEMOLINFA
Vibrio:
Amarillas
Verdes
ANALISIS BACTERIOLOGICO EN SEDIMENTOS
Fecha de Fecha de
Empresa Toma de Muestra Análisis
Vibrios Heterotróficas Autótrofas

Amarillas Verdes Beige Naranja
Estanque (UFC/gr) (UFC/gr) (UFC/gr) (UFC/gr)
SEDIMENTOS
Vibrio:
Heterotróficas:
Autotrófas:
SEDIMENTOS (UFC/gr)
Vibrios Heterot. Autotrof.
Rangos: Amarillas Verdes Beige Naranja
Bajo < 30,000 < 6,000 < 500,000 2,000,000
Medio 50,000 12,000 1,000,000 4,000,000
Medio alto 70,000 18,000 3,000,000 6,000,000
Alto > 70,000 > 20,000 5,000,000 8,000,000
ANALISIS BACTERIOLOGICO EN AGUA
Fecha de Fecha de
Granja Camaronera Toma de Muestra Análisis
Vibrios Heterotróficas Autótrofas

Amarillas Verdes Beige Naranja
Estanque (UFC/ml) (UFC/ml) (UFC/ml) (UFC/ml)
AGUA
Vibrio:
Heterotróficas:
Autotrófas:
AGUA (UFC/ml)
Vibrios Heterot. Autotrof.
Rangos: Amarillas Verdes Beige Naranja
Bajo < 500 < 300 < 50,000 150,000
Medio 600 - 1,000 400 - 600 100,000 300,000
Medio alto 1,100 - 3,000 700 - 1,000 300,000 900,000
Alto > 3,000 > 1,100 500,000 1,500,000
Fuente: Tecnimar
ANALISIS DE FITOPLANCTON, ZOOPLANCTON, QUÍMICOS
Fecha de Fecha de
Granja Camaronera Muestreo Análisis
RESULTADOS DE ANÁLISIS
Fitoplancton (Cel/ml) Zooplancton (Org/lt) Tóxicos No Tóxicos % de
Diatomeas Cainofitas Flagelados Dinoflagelados Totales Nauplios de Total Amonia Nitritos Sulfitos Nitratos Fosfatos Materia Salinidad
Estanques Cantidad Especie Cantidad Especie Cantidad Especie Cantidad Especie (cel/ml) Copépodos Copépodos Cladoceros Rotíferos Poliquetos Otros* Z00P/LT (mg/lt) (mg/lt) (mg/lt) (mg/lt) (mg/lt) Orgánica (ppm) pH
OBSERVACIONES:
DIATOMEAS AMONIA RECOMENDACIONES:
(NH3)
CIANOFITAS NITRITOS
(NO2)
FLAGELADOS SULFITOS
(S2)
DINOFLAGELADOS NITRATOS Rangos óptimos de parámetros *
(NO3)
ZOOPLANCTON FOSFATOS Amonia Nitritos Sulfitos Nitratos Fosfatos Silicatos Materia pH Salinidad
RECOMENDACIONES: (PO4) (NH3) (NO2) (S2) (NO3) (PO4) (SIO2) Orgánica (S°/oo)
SILICATOS < 0.1 < 0.1 0.009-0.010 0.40 - 0.80 0.10 - 0.30 2.0 - 4.0 1.0 - 4.0 8.10 - 9.00 15.0 - 45.0
(SIO2)
MATERIA ORGÁNICA SALINIDAD (°/oo) mg/lt mg/lt mg/lt mg/lt mg/lt mg/lt % ppm
(%) pH * Según H. Clifford / Boyd
GRÁFICAS DE ANALISIS DE FITOPLANCTON, ZOOPLANCTON, QUÍMICOS
Piscina Empresa Ciclo

19
Gráfica de Fitoplancton Gráfica de Zooplancton Gráfica de Amonia

Estanque 19 Estanque 19 Estanque 19
4,000,000 6,000 2.00

5,750
5,500 1.80
3,500,000 5,250
5,000
4,750 1.60
3,000,000 4,500
4,250 1.40
4,000
2,500,000 3,750
3,500 1.20
Cel/ml
Org/lt
mg/lt
3,250
2,000,000 3,000 1.00
2,750
2,500 0.80
1,500,000 2,250
2,000
1,750 0.60
1,000,000 1,500
1,250 0.40
1,000
500,000 750
500 0.20
250
0 0 0.00
06/06/2002 15/07/2002 29/07/2002 12/08/2002 26/08/2002 09/09/2002 23/09/2002 07/10/2002 21/10/2002 04/11/2002 06/06/2002 15/07/2002 29/07/2002 12/08/2002 26/08/2002 09/09/2002 23/09/2002 07/10/2002 21/10/2002 04/11/2002 06/06/2002 15/07/2002 29/07/2002 12/08/2002 26/08/2002 09/09/2002 23/09/2002 07/10/2002 21/10/2002 04/11/2002
08/07/2002 22/07/2002 05/08/2002 19/08/2002 02/09/2002 16/09/2002 30/09/2002 14/10/2002 28/10/2002 08/07/2002 22/07/2002 05/08/2002 19/08/2002 02/09/2002 16/09/2002 30/09/2002 14/10/2002 28/10/2002 08/07/2002 22/07/2002 05/08/2002 19/08/2002 02/09/2002 16/09/2002 30/09/2002 14/10/2002 28/10/2002
Diatomeas Cianofitas Flagelados Dinoflagelados Copépodos Nauplios Cladoceros Rotíferos Poliquetos Otros Amonia (NH3-N)
Gráfica de Nitritos Gráfica de Sulfitos Gráfica de Nitratos

0.300 0.400 4.000

0.380 3.800
0.275 0.360 3.600
0.250 0.340 3.400
0.320 3.200
0.225 0.300 3.000
0.280 2.800
0.200 0.260 2.600
0.175 0.240 2.400
0.220 2.200
mg/lt
mg/lt
mg/lt
0.150 0.200 2.000
0.180 1.800
0.125 0.160 1.600
0.100 0.140 1.400
0.120 1.200
0.075 0.100 1.000
0.080 0.800
0.050 0.060 0.600
0.025 0.040 0.400
0.020 0.200
0.000 0.000 0.000
06/06/2002 15/07/2002 29/07/2002 12/08/2002 26/08/2002 09/09/2002 23/09/2002 07/10/2002 21/10/2002 04/11/2002 06/06/2002 15/07/2002 29/07/2002 12/08/2002 26/08/2002 09/09/2002 23/09/2002 07/10/2002 21/10/2002 04/11/2002 06/06/2002 15/07/2002 29/07/2002 12/08/2002 26/08/2002 09/09/2002 23/09/2002 07/10/2002 21/10/2002 04/11/2002
08/07/2002 22/07/2002 05/08/2002 19/08/2002 02/09/2002 16/09/2002 30/09/2002 14/10/2002 28/10/2002 08/07/2002 22/07/2002 05/08/2002 19/08/2002 02/09/2002 16/09/2002 30/09/2002 14/10/2002 28/10/2002 08/07/2002 22/07/2002 05/08/2002 19/08/2002 02/09/2002 16/09/2002 30/09/2002 14/10/2002 28/10/2002
Nitritos (NO2) Sulfitos (S2) Nitratos (NO3)
Gráfica de Fosfatos Gráfica de Salinidad Gráfica de pH

6.000 50 9.5
5.500 45
5.000
40 9.0
4.500
35
4.000
3.500 30 8.5
mg/lt
ppm
3.000 25
2.500 20 8.0
2.000
15
1.500
10 7.5
1.000
0.500 5
0.000 0 7.0
06/06/2002 15/07/2002 29/07/2002 12/08/2002 26/08/2002 09/09/2002 23/09/2002 07/10/2002 21/10/2002 04/11/2002 06/06/2002 15/07/2002 29/07/2002 12/08/2002 26/08/2002 09/09/2002 23/09/2002 07/10/2002 21/10/2002 04/11/2002 06/06/2002 15/07/2002 29/07/2002 12/08/2002 26/08/2002 09/09/2002 23/09/2002 07/10/2002 21/10/2002 04/11/2002
08/07/2002 22/07/2002 05/08/2002 19/08/2002 02/09/2002 16/09/2002 30/09/2002 14/10/2002 28/10/2002 08/07/2002 22/07/2002 05/08/2002 19/08/2002 02/09/2002 16/09/2002 30/09/2002 14/10/2002 28/10/2002 08/07/2002 22/07/2002 05/08/2002 19/08/2002 02/09/2002 16/09/2002 30/09/2002 14/10/2002 28/10/2002
Fosfatos (PO4) Salinidad pH

INTERPRETACION DE LOS TIPOS DE COLONIAS BACTERIANAS
OBTENIDAS DE CAMARONES, SEDIMENTOS Y AGUA EN MEDIOS DE CULTIVO
ORGANISMOS SEDIMENTOS / AGUA

INTESTINO - RANGOS (UFC/gr) SEDIMENTOS (UFC/gr)
Vibrios Heterot. Autotrof. Vibrios Heterot. Autotrof.
Rangos: Amarillas Verdes Beige Naranja Rangos: Amarillas Verdes Beige Naranja
Bajo < 90,000 < 30,000 < 500,000 2,000,000 Bajo < 30,000 < 6,000 < 500,000 2,000,000
Medio 120,000 80,000 1,000,000 4,000,000 Medio 50,000 12,000 1,000,000 4,000,000
Alto > 120,000 > 80,000 5,000,000 8,000,000 Medio alto 70,000 18,000 3,000,000 6,000,000
Alto > 70,000 > 20,000 5,000,000 8,000,000
HEPATOPÁNCREAS - RANGOS (UFC/gr) Fuente: Tecnimar

Vibrios
Rangos: Amarillas Verdes AGUA (UFC/ml)
Bajo 90,000 < 50,000 Vibrios Heterot. Autotrof.
Medio 100-150,000 50,000 Rangos: Amarillas Verdes Beige Naranja
Alto > 150,000 > 100,000 Bajo < 500 < 300 < 50,000 150,000
Medio 600 - 1,000 400 - 600 100,000 300,000
HEMOLINFA - RANGOS (UFC/ml) MACERADO (UFC/gr) Medio alto 1,100 - 3,000 700 - 1,000 300,000 900,000
Vibrios Vibrios Alto > 3,000 > 1,100 500,000 1,500,000
Rangos: Amarillas Verdes Totales Fuente: Tecnimar
Bajo < 4,000 < 2,000 < 6,000
Medio 8,000 6,000 6,000 - 10,000
Alto > 12,000 > 6,000 > 10,000
Fuente: Dr. Bruno Gomez-Gil, CIAD Mazatlán
HEMOLINFA - RANGOS (UFC/ml) HEPATOPÁNCREAS (UFC/gr) POSTLARVAS (UFC/PL) ZOOPLANCTON
Rangos: > 103 < 103 >105 <105 >103 <103 Mínimo Máximo
Verdes 100% grave grave grave grave grave serio Diatomeas 20,000
Verdes >50% serio elevado-serio serio elevado-serio serio elevado-serio Clorofitas 50,000
Verdes <50% elevado-serio elevado elevado normal-elevado elevado-serio elevado Cianofitas 10,000 40,000
Amarillas elevado normal-elevado normal-elevado normal elevado normal-elevado Algas totales 80,000 300,000
Fuente: Dr. Bruno Gomez-Gil, CIAD Mazatlán Zooplancton 2 50
PARÁMETROS FISICO-QUÍMICOS
Rangos óptimos de parámetros *
Amonia Nitritos Sulfitos Nitratos Fosfatos Silicatos Materia pH Salinidad

(NH3) (NO2) (S2) (NO3) (PO4) (SIO2) Orgánica (S°/oo)
< 0.1 < 1.0 0.009-0.080 0.40 - 0.80 0.10 - 0.30 2.0 - 4.0 1.0 - 4.0 8.10 - 9.00 15.0 - 45.0
mg/lt mg/lt mg/lt mg/lt mg/lt mg/lt % ppm

* Según H. Clifford / Boyd
• Programa de Capacitación en Análisis Bacgeriológico de Agua, Sedimentos y
Camarones. Dr. Bruno Gómez Gil. QFB Carmen Bolán M. Laboratorio de Bacteriología.
CIAD, A.C. Unidad Mazatlán en Acuicultura.
• Lightner, D.V. 1996. A Handbook of Shrimp Pathology and Diagnostic Procedures for
Diseases of Cultured Penaeid Shrimp. World Aquaculture Society, Baton Rouge,
Louisiana, USA.
• Brock, J.A., and K. Main. 1994. A Guide to the Common Problems and Diseases of
Cultured Penaeus vannamei. Ocean Institute, Majapuu Point P.O. Box 25280, Honolulu,
Hi.
• Brock, J.A., and D.V. Lightner. 1990. Diseases of Crustacea, Diseases Caused by
Microorganims. In: O. Kinne (ed.) Diseases of Marine Animals. Volume 3. Biologische
Anstalt Helgoland Hamburg, Gemany.
• Conroy, D.A., and G. Conroy. 1990. Manual de Patología de los Camarones

Peneidos. Publicación Jorge Santacana. Segunda Edición. Maracay Venezuela.
• Atlas de Enfermedades de Peneidos. SEMARNAP. Dirección General de Acuacultura.
Marzo – 2003.
Deseamos expresar nuestro más sincero agradecimiento
a las siguientes personas cuyos trabajos de investigación e
incondicional apoyo en este Programa de Capacitación, han
motivado a la realización del presente Manual y en cuyo
contenido hemos expresado su valiosa contribución a la
sanidad en camaronicultura.
• Dr. Bruno Gómez-Gil. CIAD. A.C.
• Dra. Ana Margarida Trigo de Sousa Roque. CIAD, A.C.
• Dra. Alejandra García Gazca. CIAD, A.C.
• Ing. Cesareo Cabrera V. Maricultura del Pacífico, SA de CV
Marzo – 2003.
Junta Local Asistentes
1 Angostura Sergio A. Prado Brambila
2 Guasave Ramón de Jesús Rubio Zúñiga
3 Guasave II José Humberto Romero Peñuelas
4 Navolato Silvia M. Montes Salas
5 Culiacan I Miguel Angel Ibarra Bernal
6 Culiacán II José Luis Beltrán Felix
7 Jesús Alejo Gálvez López
8 Culiacán III Fernando López López
9 Gilberto Soto Cabrera
10 Elota Juan Ibarra Osuna
11 Héctor Julián Hernández Castro
12 Héctor Ceja Pérez
13 Sur I (S. Ignacio, Maz) Mateo Palomares Báes
14 Sur III (Rosario) Luis Miguel Aguiar Pérez
15 Leonardo Sainz Carrión
16 David Espinoza Prieto
17 CESASIN Santiago Rocha Rivas
18 Efraín Cerda Orozco

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Técnicas de Bacteriología,

Análisis en Fresco, Calidad

Mazatlán, Sin. Marzo - 2003

• Análisis Patológico de organismos

• Análisis de Agua – Parámetros FQ

• Buenas Prácticas de Manejo y Bioseguridad

• Sistemas de Registro y Análisis de Resultados

Mazatlán, Sin. Marzo - 2003

4. Lavado y Esterilización de material

5. Medios de Cultivo (preparación y uso)

6. Análisis de Agua y Sedimentos

8. Análisis de juveniles y adultos (HL y HP)

9. Estimación de Unidades Formadoras de Colonias (UFC)

10. Interpretación de Resultados

11. Aislamiento de Bacterias

12. Pruebas de susceptibilidad a antibióticos (Antibiograma y

11. Interpretación de Resultados

2. Conocer y preparar los medios de cultivo utilizados para el

3. Conocer y aplicar los procedimientos para determinar la cantidad

4. Conocer y aplicar los procedimientos para determinar la cantidad

5. Conocer y aplicar los procedimientos para cuantificar las

6. Interpretar los resultados que generen los análisis bacteriológicos

7. Conocer los procedimientos para el aislamiento de bacterias.

8. Conocer y aplicar las procedimientos para estimar la

En cada una de estas etapas algunos vibrios se han perfilado como

Vibriosis: se puede definir como una enfermedad ocasionada por

Sin embargo, el rol de las bacterias en un estanque de camarón no solo

Vibriosis durante la engorda: Prácticamente todas las especies de

Camarón manchado • Infecciones en la cutícula, apéndices o branquias.

Síndrome de la • Esta es una manifestación más de vibriosis y su

Síndrome de la astilla negra

Corte del órgano linfoide: se observan

2. El área de trabajo deberá estar limpia y despejada,

3. El personal deberá de asearse las manos, así

Generales: permiten el crecimiento de cualquier tipo de

Selectivos: sólo permiten crecer un cierto tipo de

Diferenciales: permiten distinguir entre dos o más

Medio diferencial para el género Vibrio sp.

a) Se pesa la cantidad requerida de acuerdo al número de

b) Se pone a calentar en un termoagitador hasta que hierva

c) Se mide el pH el cual debe ser de 8.6 ± 0.2

d) Posteriormente se vacia en cajas de petri

Nota: Este medio no requiere de esterilización.

Medio para crecer todo tipo de bacterias.

a) Se pesa la cantidad requerida de acuerdo al número de

b) Para este medio se agregan 2.0 gr de NaCl por cada 100

c) Se disuelve el medio en agua destilada en un matraz y se

d) Se mide el pH el cual debe ser de 7.3 ± 0.2

e) Se esteriliza en autoclave a 120°C por 15 minutos.

f) Se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45°C, y

Medio para crecer todo tipo de bacterias.

a) Se pesa la cantidad requerida de acuerdo al número de

b) Se disuelve el medio en agua destilada en un matraz y se

c) Se mide el pH el cual debe ser de 7.6 ± 0.2

d) Se esteriliza en autoclave a 121-124°C por 15 minutos.

e) Se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45°C, y

Medio para crecer todo tipo de bacterias.

a) Se pesa la cantidad requerida de acuerdo al número de

b) Para este medio se agregan 2.0 gr de NaCl por cada 100

c) Se disuelve el medio en agua destilada en un matraz y se

d) Se mide el pH el cual debe ser de 7.3 ± 0.2

e) Se esteriliza en autoclave a 120°C por 15 minutos.

f) Se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45°C, y

Medio para crecer todo tipo de bacterias.