INSTRUCTIVO DEL ANALIZADOR

BioTech HMB PARA BACTERIAS EN

AGUAS DE ENFRIAMIENTO.
I.

? POR QUE ANALIZAR BACTERIAS EN

ELLAS?

II.

METODOS DE ANALISIS

III.

a.

Mtodos de cultivos

b.

Mtodos bioqumicos

COMO HACER LAS PRUEBAS CON EL HMB

IV. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS DE

LAS PRUEBAS EN LAS MUESTRAS DE
AGUAS DE ENFRIAMIENTO.

I.

POR QUE ANALIZAR ACTIVIDAD BACTERIANA

EN AGUAS DE ENFRIAMIENTO?
POR SAM CYRUS, DE BioTech Internacional, Inc. Traduccin del Ing.
Guillermo Garca Cano de Inova, S.A. de C.V., Mxico
A. Efectos Biolgicos en Aguas de Enfriamiento
Las aguas de los circuitos de enfriamiento se utilizan para sacar de los
mismos el exceso de calor. Como agente de transmisin de calor, el agua
es el compuesto ms eficaz conocido en la Tierra. Existen, sin embargo,

dos efectos indeseables prominentes asociados con el uso del agua en

sistemas aereados:
o El agua produce corrosin, y
o Organismos biolgicos crecen en aguas contaminadas

La Corrosin causada por efectos no biolgicos no se considera en

este.
La Actividad Biolgica es el objeto de este instructivo. Lo siguiente se
relaciona con los problemas causados por la actividad biolgica en aguas
de enfriamiento, con su deteccin temprana, y con el mejor control de los
mismos.

Clasificacin de la Actividad Biolgica en Aguas de

Enfriamiento.
Existen varias formas de clasificar las diferentes formas de vida. Para los
propsitos del
presente Instructivo, los microorganismos se clasificarn como sigue:
1. Circulantes Libres. Estos son los esfricos, cilndricos, etc.;
organismos que tienen alguna movilidad, pero que no se fijan, por s
mismos, a las superficies. Incluyen los organismos patgenos, que
causan enfermedades a los seres humanos.
2. Organismos Sedentarios. Son los que en forma natural se adhieren a
las superficies, de masa creciente formando bio-pelculas.
ORGANISMOS CIRCULANTES LIBRES
La mayora de las bacterias son de este tipo. Se metabolizan y reproducen
circulando libremente, tanto como partculas suspendidas como en la superficie de
otras partculas suspendidas (impurezas). Puesto que las aguas de enfriamiento
tienden a ser bajas en contenidos de nutrientes, y que adems contienen reactivos
qumicos inhibidores, las bacterias circulantes libres se reproducen muy
lentamente en los sistemas bien mantenidos.

ORGANISMOS SEDENTARIOS
Estos incluyen las bacterias formadoras de lama. Todas las formas de
microorganismos compiten por los nutrientes disponibles en un determinado
ecosistema. Los circulantes libres tienen movilidad limitada, como para nadar y
encontrar alimentos. los formadores de lama son pegajosos, sin movilidad. Se fijan
a las paredes y esperan que el agua circulante les traiga su alimento. En circuitos
de enfriamiento muy contaminados, (por ejemplo los de fluidos de maquinados
metlicos),
los organismos libres circulantes tienen las ventajas y predominan. Pero en
ambientes circulantes de bajo contenido de nutrientes (torres de enfriamiento), las
bacterias formadoras de lama pueden predominar. Las bacterias formadoras de
lama se adhieren a las paredes sobre las que el agua circula. Todas las dems
partculas suspendidas en circulacin se llevan sobre estas clulas pegajosas, y
algunas de estas partculas se adhieren a la lama. Con el tiempo, lo pegajoso
causa que ms y ms clulas formadoras de lama crezcan en la masa.
Eventualmente, una capa de lama, o bio-pelcula, se forma sobre toda la
superficie. Esta capa de bio-pelcula es un excelente aislante que impide que el
agua se ponga en contacto con la superficie del cambiador de calor. Los cidos
orgnicos secretados como desechos de los metabolismos bacterianos se
depositan entre la bio-capa y la superficie metlica del cambiador de calor, y les
causan la corrosin. Esta es corrosin microbialmente inducida (CMI). Los otros
slidos circulantes, incluyendo las bacterias libres, se adhieren tambin a la biocapa, y son consumidos. As es como los organismos formadores de lama
dominan en los sistemas de recirculacin con bajo contenido de nutrientes.
Mediante esta accin, bacterias y nutrientes son "filtrados" del agua de
recirculacin por la lama que ha crecido, lo que resulta en una baja densidad de
poblacin de bacterias libres circulantes, aunque el sistema est gravemente sucio
por la presencia de bio-pelcula.
Las bacterias circulantes tienen suficiente movilidad para encontrar sus alimentos.
Las bacterias sedentarias se pegan a las superficies y esperan que el agua de
recirculacin les lleve sus alimentos.
Por algunas de sus propiedades nicas, las bacterias patgenas Legionella
Pneumophila pueden prosperar en este ambiente. Fue primero identificada como
el agente causante del brote de neumona bacteriana en una Convencin de la
Legin Americana en Filadelfia en 1976 (de all su nombre de Enfermedad de los
Legionarios).
Se le ha implicado en el Centro Para Control de Enfermedades (EUA) en 150,000
muertes por ao en ese pas, y muchas mas en el resto del mundo industrializado.
La Legionella es una bacteria gramo-negativa, aerbica, mvil, y de forma
cilndrica. Esto significa que no absorbe un gramo-mancha, que usa oxgeno, que

se puede mover en el ambiente, y que tiene forma de puro (Habano). Puede estar
presente en la tierra y en el agua. (ubicuidad). La mayora de los adultos tienen
anticuerpos hacia la Legionella, es decir, han sido expuestos a bajas dosis de ella,
y sus sistemas inmunolgicos han desarrollado defensas contra sus ataques. Las
vctimas son aquellas que tienen problemas en sus sistemas de inmunidad
(pacientes de Hospitales, alcohlicos, etc.,)
La Legionella tiene requerimientos nutricionales mas bien complejos que limitan la
velocidad a que se puede esparcir en la mayora de los ambientes. Pero tiene la
habilidad de invadir los sistemas de aguas de enfriamiento por las siguientes
razones.
Cuando se examinaron secciones de tejidos de vctimas de la enfermedad de los
Legionarios, en las autopsias, las bacterias Legionella fueron encontradas
creciendo dentro de macrofagios (clulas que se comen a otras clulas). No solo
esto, sino que estaban dentro de pequeas vesculas, (clulas dentro de una
clula, dentro de otra clula). En esta forma, las Legionella estn protegidas del
mundo exterior, y un tanto inmunes a los ataques de los biocidas. Cuando las
circunstancias permiten que las Legionellas se multipliquen hasta altas
concentraciones dentro del fagio anfitrin, este revienta liberndolas al ambiente
extracelular.
En los sistemas de aguas de enfriamiento, el mismo drama se repite con las
clulas que forman la lama, que forman la bio-pelcula, y que hacen el papel de los
fagios. Las Legionellas se "esconden" en los vesculas dentro de las clulas que
forman la lama. Esto las hace notablemente resistentes a los biocidas como el
Kathon y el cloro. As pues la lama est implicada en la produccin y el
almacenado de la Legionella en dos formas: las alimenta de nutrientes y las
escuda de los biocidas. Sin la bio-pelcula, las Legionellas son severamente
limitadas en las aguas de enfriamiento; controlando la bio-pelcula la Legionella se
restringe a niveles despreciables.
La Legionella se esparce a los humanos en forma de neblina aerosol. Cuando la
bio-pelcula en las superficies de los cambiadores de calor se deja crecer, captura
Legionellas, que migran hacia su interior, y se comienzan a reproducir. Cuando
una cantidad suficiente ha sido reproducida, una significativamente grande
cantidad de Legionella puede ponerse en circulacin, de donde es dispersada en
forma de neblina hacia el ambiente exterior y hacia los pulmones de los
desafortunados humanos que los inhalen. Esto se tiene con mayor facilidad y
frecuencia cuando los tomas de succin de los sistemas de ventilacin para los
edificios estn prximas a las torres de enfriamiento, y los vientos dominantes
arrastran o empujan los vapores y neblinas hacia adentro de los edificios.
Los Hospitales son especialmente vulnerables, puesto que tienen numerosos
agentes infecciosos (Clamidia, Staph, por ejemplo) presentes y una poblacin de
humanos cuyos sistemas de inmunidad estn dbiles.

Los dispositivos usados en terapias de inhalacin se han contaminado en

ocasiones con Legionella, siendo as fuentes de serios brotes mortales.
Resumiendo, las bacterias que forman lama tiene la tendencia a dominar en los
sistemas de recirculacin de aguas con bajos contenidos de nutrientes. Evitando a
los formadores de lama se controlan los tres principales problemas biolgicos en
los sistemas de enfriamiento, el ensuciamiento de los cambiadores de calor, la
corrosin inducida por la bio-pelcula, y el riesgo de la Legionella.

A.

Control Biolgico en Aguas de

Enfriamiento

El control biolgico en aguas recirculantes de enfriamiento se hace normalmente

dosificando biocidas. Los biocidas populares son tpicamente de amplio espectro,
y que por eso pueden matar un amplio rango de tipos de clulas. De la explicacin
anterior, se demuestra que la formacin de bio-pelcula es la principal causante de
los problemas de las aguas de enfriamiento: es el agente mecnico que ensucia
los cambiadores de calor, hacindolos ineficientes, induce la corrosin y puede
actuar como anfitrin "casero" de la Legionella. En sistemas bien operados y
mantenidos, en los que se evita preventivamente la formacin de bio-pelcula, la
Legionella no podr alcanzar altas concentraciones. En los sistemas descuidados,
que permiten el crecimiento de bio-pelcula, es lo ms probable que un amplio
espectro de microorganismos contaminantes proliferen significativamente.
La dosificacin de los biocidas debe administrarse cuidadosamente. Cuando
excesiva pone en riesgo la salud de los seres humanos. Cuando deficiente,
problemas de mutaciones pueden ocurrir. Los biocidas son costosos, dando la
motivacin adicional para buscar la mayor eficiencia en su uso.

I.

Anlisis
La mejor manera de hacer uso eficiente de los biocidas es controlando los
sistemas mediante anlisis biolgicos y dosificando los biocidas en funcin
de sus resultados.
Existen esencialmente dos metodologas de anlisis que pueden usarse:
Mtodos de Cultivo y Mtodos Bioqumicos. Los de cultivo requieren de
la colocacin de una pequea muestra en una mezcla de nutrientes y de su
incubacin durante de uno a tres das. Las clulas viables de la muestra
pueden crecer hasta formar colonias, que son visibles, y estas se cuentan
como unidades formadoras de colonias por mililitro de muestra. (Cfu/ml).
Los mtodos de cultivo dan un estimado de la cuenta de clulas que
estaban en la muestra original, sin explicar que estaban haciendo en ella.

Los mtodos bioqumicos miden la presencia de ciertas molculas

"marcadoras" que resultan de la actividad biolgica. Por ejemplo, el anlisis
del HMB mide la enzima Catalasa que es producida por clulas aerbicas
cuando se metabolizan. Otro mtodo bioqumico mide el nivel de las
molculas productoras de energa ATP. Como tales, estos mtodos no son
conteos, pero son mediciones de actividades. Bajo ciertas condiciones, las
mediciones de actividades pueden correlacionarse con los conteos, pero en
lo general no lo son. Tpicamente, los resultados de los mtodos
bioqumicos se obtienen en solo unos cuantos minutos.
Gracias a los resultados inmediatos, las frecuencias de los anlisis
bioqumicos son usualmente menores. Esto significa un ahorro. Los
mtodos de cultivos tardan de uno a tres das en producir los resultados, sin
explicar que es lo que los microorganismos estn haciendo en el sistema.
Los mtodos bioqumicos producen resultados en minutos, dando
informacin repetible, digital, sobre que tanto estn los microorganismos
haciendo, pero no los registra a menos que estn metablicamente activos.
Ambos mtodos son tiles. Pero nada de eso cuenta a menos que la
muestra analizada pueda dar informacin que pueda ser utilizada para
tratar al sistema en una forma significativa. Como antes explicamos, esta
informacin no est en el agua recirculante. Est en las superficies de los
cambiadores de calor. Ya que cuantificar estos crecimientos representa un
problema difcil, si no es que insoluble, la solucin es usar un "testigo". El
anlisis debe producir informacin despus de que los microorganismos
hubieran crecido hasta niveles detectables, pero antes de que daen el
sistema. El procedimiento y sus productos asociados (patente pendiente en
EUA 11/99) son sencillos y confiables. Se describen a continuacin. El
objetivo: proporcionar informacin confiable que permita al operador tratar
en tal forma que evite el ensuciamiento por bio-pelcula de las superficies
del sistema, se logra con este procedimiento.