Prctica No.

Nombre de la prctica:
Mtodo para la determinacin de Salmonella en alimentos

Objetivo:
Identificacin de Salmonella en una muestra de carne
NOM:
NOM-114-SSA1-1994
Muestra utilizada: Carne picada
Caractersticas fsicas: Alimento slido,
en buenas condiciones.
Medios utilizados:
Reactivos utilizados: Condiciones de
Morfologa
Agua peptonada
------------------------incubacin:
microscpica de la
Caldo Tetrationato
Tcnica utilizada:
37C/ 24-48 h
bacteria
a
Caldo Selenito
Preenrequimiento,
investigar:
Agar Salmonella
para su posterior
Bacilos gran
Shigella
siembra en medios
negativos, con
Agar Xilosa Lactosa selectivos
y
flagelos peritricos
Dextrosa
realizacin
de
y que no
Agar Sulfito Bismuto pruebas
desarrollan
bioqumicas.
capsula ni esporas.

Agua peptonada:
Diluyente y
preenriquecimiento

FUNCIN DE LOS MEDIOS

Caldo Tetrationato:
Caldo Selenito:
Enriquecimiento
y Enriquecimiento y
selectividad
aislamiento.

Agar Xilosa Lactosa Agar

Sulfito
Dextrosa:
Bismuto:
Aislamiento
y Selectividad
y
selectividad
diferenciacin

Agua peptonada:
Medio usado como
diluyente
y
para
enriquecimiento
bacteriano a partir de
alimentos
y
otros
materiales de inters
sanitario.

Agar Xilosa Lactosa

Dextrosa
Utilizado
para
el
aislamiento
y
diferenciacin
de
bacilos
entricos

Otro medio:
Agar MacConkey
Aislamiento
diferenciacin

Agar Salmonella
Shigella:
Medio selectivo
para Salmonella y
Shigella.
Otro medio:
Agar
Verde
y Brillante
Enriquecimiento y
selectividad

UTILIDAD DE LOS SIGUIENTES MEDIOS

Caldo Tetrationato: Caldo Selenito:
Medio de cultivo Medio
de
utilizado para el enriquecimiento
enriquecimiento
para el aislamiento
selectivo
de de Salmonella spp.
Salmonella spp. a a
partir
de
partir de heces, materiales clnicos,
orina, alimentos y especialmente
otros materiales de heces.
importancia
sanitaria.

Agar
Sulfito
Bismuto
Medio
selectivo
para el aislamiento
y diferenciacin de
Salmonella typhi y

Agar Salmonella
Shigella:
Medio de cultivo
utilizado para el
aislamiento
de
Salmonella spp. y
de
algunas
especies
de
Shigella
spp.
a
partir de heces,
alimentos y otros
materiales en los
cuales se sospeche
su presencia.
Otro medio:
Otro medio:
Agar MacConkey
Agar
Verde
Este
medio
se Brillante
utiliza
para
el Medio
de
aislamiento
de enriquecimiento
bacilos
Gram altamente

gram
negativos, otras Salmonellas a
especialmente
del partir de diversas
gnero Shigella y Sal
muestras.
monella.

negativos de fcil selectivo para el

desarrollo, aerobios aislamiento
de
y
anaerobios Salmonella
spp.,
facultativos.
excepto S. typhi y
Permite diferenciar S.
paratyphi,
a
bacterias
que partir de muestras
utilizan
o
no, clnicas, alimentos,
lactosa
en y otros materiales
muestras
clnicas, de
importancia
de
agua
y sanitaria.
alimentos.
PRUEBAS BIOQUIMICAS UTILIZADAS
Ureasa: Negativa
Indol: Negativo
Rojo de metilo:
Voges proskauer:
Positivo
Negativo
Citratos: Positiva
Triple Azcar
Lisina Hierro Agar:
Caldo Glucosado:
Hierro: Positivo
Positivo
Positivo con gas
Motilidad: Positiva
Produccin de
Caldo Lactosado:
Caldo sacarosado:
Sulfuro: Positivo
Negativo
Negativo
Notas:
Conclusiones:
Las bioqumicas se observaron un da
De acuerdo a la literatura y a los
despus.
resultados obtenidos, se demuestra la
presencia de Salmonella en la muestra
de carne.
Bibliografa:
http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/gss/publications/documents/ArgentinaLevelI/Manual_procedi
mientos_Salmonella.pdf

Observaciones:
En todas las placas se obtuvieron colonias caractersticas de Salmonella, en su
mayora con puntos negros, en donde se presuma la presencia del microorganismo. Y
al igual en las bioqumicas, donde el TSI y el Indol se observaron todo negro, dato
adjudicado a Salmonella. Adems de todas las bioqumicas que indican su bioqumica
fueron correctas.
PRUEBA BIOQUIMICA
UREASA
Fundamento Terico
Los microorganismos que poseen la
enzima Ureasa tienen la capacidad de
hidrolizar la urea contenida en el medio
con produccin de amoniaco, para esta
prueba se utiliza el caldo urea de stuart
o agar urea de christensen. El caldo
sturat esta estabilizado con sales de
fosfato
a
un
pH
de
6.8.
el
microorganismo
en
estudio
debe
producir
cantidades
relativamente
grandes a fin de superar el sistema
estabilizador del medio y elevar el pH del
medio los suficiente como para virar el
indicador (por encima de 8.0)
Medios utilizados:
Reactivos
Caldo urea
utilizados:

Reaccin:

Condiciones de
incubacin:
Inoculacin en
caldo, incubar a 37
C por 24 horas.

Observacin:
(+):
(-): Negativa

Utilidad de la prueba:
Un cambio de color Rojo fucsia indica que
la urea fue hidrolizada por la ureasa del
microorganismo.
Control positivo:

Tcnica de inoculacin:
Inoculacion mediante asadas.
Control Negativo

Bibliografa:
http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm#UREA
http://edicion-micro.usal.es/web/identificacion/AyudaPruebas.html
PRUEBA BIOQUIMICA
Indol
Fundamento Terico
Reaccin:
El indol, es uno de los productos de la
degradacin metablicas del amino
acido triptofano. Las bacterias que
producen la enzima triptofanasa son
capaces de hidrolizar y desaminar el
triptofano con produccin de Indol,
acido piruvico y amoniaco. La prueba
del indo esta basada en la formacin
de un complejo rojo cuando el Indol
reacciona con el grupo aldehdo pdimetilaminobenzaldehido. Este es el
principio activo del reactivo de
Kovacs.
Medios utilizados: Reactivos
Condiciones de
Agar SIM o caldo
utilizados:
incubacin:
triptofano
Reactivo de
37C/ 24-48h
Kovacs

Observacin:
(+):
(-): Negativo

Utilizacin de la prueba:
El desarrollo de un color rojo-fucsia
en la interfase del reactivo y de los
medio segundos despus aadir el
reactivo de Kovacs indica la presencia
de indol.

Tcnica de inoculacin:
Inocular al medio realizando siembra por
picadura hasta la mitad del medio a partir del
cultivo del microorganismo en estudio.
Incubar 24 horas a 37 grados C. al finalizar
este periodo aadir 5 gotas del reactivo de
Kovacs por la pared del tubo.

Control positivo

Control Negativo

Bibliografa:
http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm#SIM
http://edicion-micro.usal.es/web/identificacion/AyudaPruebas.html
PRUEBA BIOQUIMICA
Rojo de Metilo
Reaccin:

Fundamento Terico
Determinar la capacidad de un
microorganismo para producir y
mantener estables los productos
terminales cidos de la fermentacin de
la glucosa y vencer la capacidad
amortiguadora del sistema. La prueba
Rojo de metilo es cuantitativa para la
produccin de acido y requiere que los
microorganismos produzcan cidos
fuertes a partir de la glucosa, de forma
que el medio del pH descienda a menos
de 4.4. Esta distincin puede hacerse a
travs del indicador Rojo de metilo que
presenta color amarillo por encima de un
pH de 5.1 y solo presenta color rojo
cuando el pH desciende a 4.4.

Medios utilizados:
MRVP

Reactivos
utilizados:
Indicador Rojo de
Metilo

Condiciones de
incubacin:
Incubar 24-48 horas
a 37 C.

Observacin:
(+): Positivo
(-):

Utilizacin de la prueba:
El desarrollo de un color rojo estable en
la superficie del medio indica que la
produccin de acido es suficiente como
para bajar el pH a 4.4 y es una prueba
positiva.

Tcnica de inoculacin:
Inocular en el caldo RMVP con una colonia
del cultivo del microorganismo en estudio.
finalizado este periodo adicionar 5 gotas
del revelador Rojo de metilo.

Control positivo:

Control negativo:

Bibliografa:
http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm#ROJ
http://edicion-micro.usal.es/web/identificacion/AyudaPruebas.html
PRUEBA BIOQUIMICA
Voges Proskawer
Reaccin:

Fundamento Terico
Medios utilizados:

Reactivos
utilizados:

Utilizacin de la prueba:

Condiciones de
incubacin:
37C 24-48 hrs
Tcnica de inoculacin:

Control positivo:

Control negativo:

Observacin:
(+):
(-):

Bibliografa:

PRUEBA BIOQUIMICA
Citratos
Reaccin:

Fundamento Terico
Medios utilizados:

Reactivos
utilizados:

Condiciones de
incubacin:

Utilizacin de la prueba:

Observacin:
(+):
(-):
Tcnica de inoculacin:

Control positivo:

Control negativo:

Bibliografa:

Fundamento Terico

PRUEBA BIOQUIMICA
Triple Azcar Hierro
Reaccin:

Medios utilizados:

Reactivos
utilizados:

Condiciones de
incubacin:

Utilizacin de la prueba:

Observacin:
(+):
(-):
Tcnica de inoculacin:

Control positivo:

Control negativo:

Bibliografa:

PRUEBA BIOQUIMICA
Lisina Hierro Agar
Reaccin:

Fundamento Terico
.
Medios utilizados:

Reactivos
utilizados:

Utilizacin de la prueba:

Observacin:
(+):
(-):
Tcnica de inoculacin:

Control positivo:

Control negativo:

Bibliografa:

Imgenes de Selenito y Tetrationato

Condiciones de
incubacin:

Imgenes de Cajas

Imgenes de Pruebas Bioquimicas

TSI

Citratos

Rojo de Metilo

Voges-Proskauer

LIA

SIM

Ureasa

Caldo Glucosado

Caldo Lactosado

Caldo Sacarosado