El captulo que van a leer a continuacin corresponde a los aspectos generales de los virus.

Pertenece al Libro de la Dra. Guadalupe Carballal VIROLOGIA MEDICA. Editorial El

Ateneo. 2 edicin. Si bien es del ao 1996 los conceptos generales estn vigentes, mientras
que las consideraciones ms modernas, de cada virus en particular, se abordarn en los
diferentes captulos de este mdulo Virologa del curso.
Capitulo 1
VIROLOGIA: ASPECTOS GENERALES
Dra. Carballal
1. PROPIEDADES DE LOS VIRUS
1.1. Concepto y caractersticas
Los virus son agentes infecciosos responsables de numerosas enfermedades del
hombre, de los animales y plantas, que pueden afectar tambin a las bacterias. En este
libro analizaremos solamente los virus que producen patologa en el ser humano.
Debido a sus caractersticas especiales como son su pequeo tamao y su parasitismo
intracelular obligado, los virus no pudieron ser estudiados hasta principios del siglo XX, si
bien algunas de las enfermedades producidas por ellos ya se conocan desde la
antigedad (viruela, rabia, hepatitis, etc.).
Los virus pueden definirse como agentes infecciosos caracterizados por:
a) ser parsitos intracelulares obligados;
b) su pequeo tamao, 20 a 250 nanmetros (nm)
c) poseer una estructura elemental y un mecanismo especial de replicacin.
Dado que los virus carecen de los constituyentes fundamentales para el crecimiento y
multiplicacin, tales como los que poseen las clulas procariticas o eucariticas
(sistemas enzimticos productores de energa, o necesarios para la sntesis de cidos
nucleicos y de protenas, ribosomas, etc.) deben necesariamente utilizar los sistemas de
la clula que parasitan y por ello se denominan parsitos intracelulares obligados.
Sin embargo, la mayora de los virus poseen enzimas especiales necesarias para iniciar
su replicacin (transcriptasas) u otras enzimas y, a veces, ribosomas de origen celular.
1.2. Tamao
La mayora de los virus poseen un tamao muy inferior al de las bacterias, por ello, solo
pueden observarse adecuadamente en el microscopio electrnico; sin embargo, los virus
ms grandes son de mayor tamao que ciertas bacterias pequeas o que los

micoplasmas (fig. 1). Dado su pequeo tamao, es necesario utilizar para su medicin
una medida inferior al micrn, llamada nanmetro (nm) o milimicrn (m).
Los virus ms pequeos, por ejemplo los que integran la familia Picornaviridae, donde se
incluye el virus de la poliomielitis y el virus de la hepatitis A, entre otros, , miden alrededor
de 27 nm y los ms grandes, como los de la familia Poxviridae, donde se encuentran por
ejemplo el virus de la viruela y el del molusco contagioso, miden aproximadamente 250
nm (tabla 1).

Fig. 1. Tamao comparativo de los virus con otros agentes infecciosos.

Tabla 1. Equivalencias de las unidades de medida y lmites de resolucin de los
microscopios utilizados en microbiologa
Milimicrn (m) o nanmetro (nm)
10 -9 metros
ngstrom ()
10-10 metros
Micrn (m)
10-6 metros
Microscopio ptico
= 250 nm
Microscopio de fluorescencia
=125 nm
Microscopio electrnico
0,5 a 0,05 nm
Tamao promedio de los virus
20 a 300 nm
Tamao promedio de las bacterias
0,7 a 10 m

Linfocito

10 m

1.3. Estructura
La composicin qumica de un virus se conoci por primera vez en el ao 1933 y se
determin que estaba constituida por cidos nucleicos y protenas. Posteriormente, se
demostr que todos los virus poseen un solo tipo de cido nucleico ya sea cido
desoxirribonucleico (ADN) o ribonucleico (ARN).
Una partcula vrica esta constituida por el cido nucleico que se encuentra protegido por
una cubierta proteica denominada cpside y a veces, por una envoltura de composicin
lipoproteica (fig. 2).
La partcula viral completa e infectante se denomina virin.
El cido nucleico, ya sea ADN o ARN constituye el nucleoide y, asociado a protenas se
designa como core viral. En ste se encuentra toda la informacin gentica del virus y es
el responsable de la infectividad. El core est protegido por la cpside y, en ciertos casos,
por una envoltura lipdica.
La cpside est formada por subunidades proteicas denominadas capsmeros o
unidades morfolgicas que se encuentran en la superficie de la partcula. Los
capsmeros estn formados por subunidades proteicas denominadas protmeros. Los
capsmeros pueden ser estructuras esferoidales huecas (por ej. en los adenovirus) o en
forma de prisma con una zona hueca central (por ej. en los herpesvirus).
La cpside tiene las siguientes funciones:
a) la proteccin del cido nucleico de la desecacin y de las enzimas titulares
b) la de presentar estructuras que permitirn la unin del virus a los receptores de
membrana de la clula que infectarn. Esto sucede en los virus desnudos, es decir
carentes de envoltura.
c) la de actuar como complejo antignico, estimulando la respuesta inmune del husped.
La mayora de los virus desnudos son resistentes al medio externo, a la desecacin y a
los solventes de lpidos.
Algunas familias de virus poseen, fuera de la cpside, una envoltura lipoproteca.
Aquellos virus que la poseen se denominan envueltos. Dado que la envoltura est
constituida por lipoprotenas, todos los virus con envoltura son muy sensibles a los
solventes de lpidos, tales como el ter y sales biliares. En la envoltura se encuentran
glicoprotenas que constituyen importantes antgenos del virus. Las funciones de la
envoltura son similares a las de la cpside.

En los virus envueltos es la envoltura la que presenta estructuras que permitirn la unin
a receptores de la clula husped. Se trata de glicoprotenas ancladas en la membrana a
modo de espculas (tabla 2).
Tabla 2. Estructura de un virin
NUCLEOCAPSIDE
nucleoide
ADN o
ARN

* informacin gentica
* infectividad

Cpside

protenas

* proteccin del nucleoide

* unin a receptores celulares
* determinantes antignicos

ENVOLTURA

lipoprotenas

* proteccin del nucleoide

* unin a receptores celulares
* determinantes antignicos

1.4. Diferencias con bacterias, micoplasmas, clamidias y rickettsias

Los virus se diferencian de otros agentes patgenos en su organizacin, composicin
qumica y mecanismos de replicacin (tabla 3). Los virus poseen un solo tipo de cido
nucleico, ya sea ADN o ARN pero nunca ambos. No crecen ni se multiplican por fisin
binaria y su replicacin siempre produce ms de una copia. Todos los virus se replican
por sntesis y ensamble de los componentes recientemente formados en el interior de la

clula husped. Por esta razn, son parsitos intracelulares obligados y no pueden
replicar en medios inertes como lo hacen las bacterias, ya que estos medios carecen de
clulas vivas.
La unin a la clula que infectarn es el paso inicial de la replicacin viral y se produce
por interaccin de las estructuras presentes en la superficie del virin con receptores de
la membrana de la clula husped. Algunos viriones contienen polimerasas, enzimas
necesarias para iniciar el ciclo replicativo; otros pocos, poseen ribosomas de origen
celular (leucovirus y arenavirus), cuya funcin en el virin no se conoce con exactitud.
Una vez formados los nuevos viriones, estos saldrn de las clulas donde replicaron e
iniciaran nuevos ciclos de infeccin en otras clulas.
Las principales diferencias entre los virus y otros agentes que producen patologa en el
ser humano se resumen en la tabla 3.
Tabla 3. Diferencias entre virus, bacterias, micoplasmas, clamidias y rickettsias
Virus
Rickettsia Clamidia Micoplasma Bacteria
cido nucleico
ADN o ARN
Ambos
Ambos
Ambos
Ambos
Fisin binaria
No
+
+
+
+
Enzimas met.energtico
No
+
+
+
Ribosomas
No
+
+
+
+
Replicacin en
medios inertes
No
No
No
+
+
Tamao
20-250mm
300
nm
250
nm
0,7
a 10
1 m
m
* Algunos virus, excepcionalmente, poseen ribosomas de origen celular, por ejemplo arenavirus .
1.5. Composicin qumica: cidos nucleicos, protenas, lpidos y glcidos
cidos nucleicos: Los virus se clasifican en dos grandes grupos de acuerdo con el tipo
de su cido nucleico. Si este es ADN se denominan desoxirribovirus y, si es ARN,
ribovirus.
Los ribovirus constituyen junto con los viroides, los nicos organismos hasta ahora
conocidos en la naturaleza, en que el ARN es el portador de toda la informacin gentica.
Los cidos nucleico s pueden ser monocatenarios, es decir estar formados por una sola
cadena de nucletidos, o bicatenarios, es decir doble cadena de nucletidos.
En los ribovirus, el ARN es generalmente monocatenario (togavirus, mixovirus,
picornavirus) siendo la excepcin los reovirus que poseen ARN bicatenario.
Los desoxirribovirus presentan en general un ADN bicatenario (adenovirus, poxvirus y
herpesvirus), con la excepcin de los parvovirus y algunos fagos en que el ADN es
monocatenario.

Los pesos moleculares del cido nucleico y, por ende su longitud, dependen de la
complejidad del virus y pueden variar desde 1,6 a 160 millones de daltons.
Los cidos nucleicos pueden ser molculas continuas lineales o circulares, o bien
segmentadas. Las molculas circulares pueden a su vez ser planas o hiperenrolladas (fig.
3).

Fig. 3. Tipos de ADN. ADN bicatenario: I, forma

lineal; II, forma circular; III, forma circular
hiperenrollada.

Los virus se clasifican por convencin en virus de polaridad positiva o negativa, segn
tengan o no polaridad de mensajero.
En los ribovirus monocatenarios, el ARN puede ser de cadena positiva, es decir, con
polaridad de ARN mensajero o por el contrario, presentar cadena negativa, con polaridad
de antimensajero. Tambin existen ARN virus con polaridad mixta o ambisense, por
ejemplo los arenavirus.
Los desoxirribovirus monocatenarios tienen en general cadena positiva; los bicatenarios
poseen una cadena positiva y otra negativa.
Los retrovirus, son una excepcin y poseen dos cadenas idnticas de ARN que estn
invertidas, lo que se denomina dmero invertido.
La proporcin de cidos nucleicos en el virin vara mucho de acuerdo con la familia que
se considere. La proporcin de cido nucleico es del 1 % en el virus de la influenza y
puede llegar a un 50 % en algunos bacterifagos. La cantidad de informacin gentica
contenida vara de acuerdo al tamao del genoma.
Pueden tener 1.000 a 100.000 codones. Si consideramos que un gen posee alrededor de
300 codones se puede concluir que los virus ms pequeos pueden tener 4 a 8 genes y
los mayores varios centenares.
A mayor tamao del genoma, mayor ser la informacin para gran diversidad de
protenas especficas.
La composicin de bases es variable. La proporcin de guanina citosina vara mucho. En
los virus de mayor tamao (ej. herpes), esta proporcin difiere en mayor grado con la

clula husped que en aquellos virus de menor tamao en que es ms parecida al ADN
celular.
Los cidos nucleicos constituyen la base de la infectividad del virus. Estas molculas son,
en general, muy frgiles y pierden su actividad rpidamente si no estn protegidas por la
cpside y/o la envoltura. Sin embargo, en algunos virus (por ej. los poliovirus) que poseen
un ARN con polaridad de mensajero, el ARN puro, separado de las cubiertas del virin e
introducido artificialmente en los cultivos, es capaz de infectar y dar lugar a la formacin
de nuevos viriones. Esto se denomina cido nucleico infeccioso.
Por el contrario, en la mayora de los virus, el cido nucleico puro separado del virin no
es capaz de dar origen a progenie ya que necesita de las actividades de polimerasas
presentes en el virin, sin las cuales la replicacin no puede iniciarse.
Protenas: Las protenas constituyen la parte cuantitativamente ms importante de los
virus (50 a 90 %). Segn el tamao y complejidad del virin ste puede contener desde 2
a 30 polipptidos estructurales diferentes. Las protenas del virin pueden ser
estructurales o no estructurales. Se define como protena estructural a aquella que est
presente en el virin generalmente en proporcin importante y manteniendo la estructura
del mismo. El virin puede contener protenas de superficie y protenas internas. Las
protenas de superficie constituyen los capsmeros que dan lugar a la cpside, as como
tambin las proyecciones de la envoltura, denominadas peplmeros (del griego peplos =
tnica).
En aquellos virus que presentan simetra icosadrica, los capsmeros estn formados por
polipptidos (1 a 6 molculas) de la misma clase (homopolmeros) o de clase diferente
(heteropolmeros) (mero = parte). La cpside constituye como un recipiente formado por
los capsmerosn en nmero variable segn el tamao del virus que se trate.
En los virus con simetra helicoidal, los capsmeros estn constituidos por un nico tipo
de protena y se denominan protmeros. Las cpsides as constituidas son muy
resistentes a la digestin por enzimas proteolticas y al medio externo.
Las protenas de la envoltura, que son proyecciones denominadas peplmeros son
glicoprotenas que pueden tener, en determinados casos, funciones biolgicas
importantes tales como actividad de hemaglutinina o de neuraminidasa. Las
hemaglutininas virales, en general se unen a receptores mucoproteicos presentes en
ciertas clulas (glbulos rojos, clulas del tracto respiratorio, etc.) permitiendo as la
adsorcin, mientras que la enzima neuraminidasa en general es la que cliva esa unin
permitiendo la liberacin del virus. En algunos virus existen otras glicoprotenas que
actan como factor de fusin, etc.
Las protenas de superficie de los virus tienen las siguientes funciones:
a) constituyen un mecanismo de proteccin del genoma contra la accin de las nucleasas
bacterianas o titulares

b) presentan afinidad con receptores celulares, lo que iniciara la adsorcin y penetracin

del virus a la clula husped; esta afinidad selectiva ser la que determine el tropismo del
virus por determinados tejidos
c) poseen capacidad antignica, ya que las protenas externas constituyen potentes
inmungenos, que inducirn en un husped inmunocompetente una respuesta inmune,
mediada fundamentalmente por anticuerpos neutralizantes. Estos anticuerpos son los
responsables de la proteccin del husped.
Las protenas estructurales internas del virin pueden ubicarse:
a) en la cara interna de la envoltura, por ejemplo la protena M de los paramixovirus
b) entre capas de capsmeros colocados debajo de la cpside (cpside interna)
c) en el centro del virin, asociadas al core. Estas ltimas suelen ser histonas.
Un ejemplo de protenas no estructurales lo constituyen las enzimas requeridas para el
ciclo de replicacin que se sintetizan en las fases tempranas de la replicacin: pueden
detectarse en las clulas infectadas, pero no se incorporan al virin, como ocurre por
ejemplo con la polimerasa del virus polio. En otros casos, algunas de esas enzimas son
constituyentes virales, por ejemplo la polimerasa ARN dependiente del virus de la
influenza o la transcriptasa reversa de HIV.
Las protenas internas son, en general, menos antignicas y los anticuerpos que inducen
no son protectores.
La enorme diversidad de protenas que pueden presentar los virus permite distinguir entre
virus de los diferentes grupos y, aun dentro de un mismo grupo, identificar diferentes
serotipos (tipos antignicos). Esto constituye una de las bases de la clasificacin viral.
Glcidos y lpidos: Algunos virus poseen glcidos y lpidos en pequeas cantidades. Los
virus con envoltura contienen lpidos o glicolpidos de origen celular, ya que adquieren su
envoltura por brotacin en la membrana celular o nuclear de la clula husped. Todos los
virus con envoltura son sensibles a los solventes de lpidos como ter, cloroformo, sales
biliares y detergentes.
Otros virus poseen pequea cantidad de lpidos de origen viral (poxvirus) y glcidos que
forman parte de las glicoprotenas presentes en la envoltura (mixovirus y paramixovirus).
1.6. Concepto de simetra: helicoidal, icosadrica y compleja
La simetra, es decir la forma que adopta un virus en el espacio est dada por la
estructura de su nucleocpside.
La simetra puede ser helicoidal, icosadrica o compleja (tabla 4).

Tabla 4. Simetra de algunas familias de virus

Los virus con simetra helicoidal son aquellos que presentan una nucleocpside cilndrica
que puede estar extendida, como en el virus del mosaico del tabaco (que infecta las
plantas de tabaco) o en el bacterifago M13 ambos son virus desnudos o bien
arrollada sobre s misma y recubierta por una envoltura, como por ejemplo en el virus de
la influenza (fig. 4).
Los virus con simetra icosadrica son poliedros regulares con 20 caras triangulares, 30
aristas y 12 vrtices. Los virus con esta simetra pueden ser desnudos, por ejemplo el
virus de la poliomielitis o el adenovirus, o estar recubiertos de envoltura como los
herpesvirus o los togavirus (fig. 5).
Fig. 4. Simetra helicoidal: A, desnuda, virus del mosaico del tabaco; B, envuelta,
ortomixovirus.

Fig. 5. Simetra icosadrica: A, desnuda, adenovirus; B, envuelta, herpesvirus.

Se denominan virus de simetra compleja a aquellos que presentan una nucleocpside
helicoidal o icosadrica recubierta por una envoltura laxa. Pueden ser ovoides, esfricos
o pleomrficos dado que la envoltura no es rgida. Los poxvirus poseen forma de ladrillo y
son ejemplo de esta simetra. Tambin se incluyen como de simetra compleja a algunos
bacterifagos que poseen una cabeza con simetra icosadrica y una cola con simetra
helicoidal (fig. 6).

Fig. 6. Simetra compleja.

2. CONCEPTO DE REPLICACIN VIRAL: ETAPAS
Al carecer de las enzimas biosintticas necesarias para su replicacin los virus no crecen,
no aumentan de tamao ni su divisin es por fisin binaria. Por esta razn, no pueden
replicarse en medios de cultivo inertes (como los usados para las bacterias) sino que
necesitan de clulas vivas.
La replicacin se hace en el interior de una clula husped susceptible. En los comienzos
de la virologa, se utilizaron embriones de pollo o de pato y o animales de
experimentacin (ratones, cobayos o conejos). Posteriormente, con el advenimiento de
las tcnicas para mantener vivas clulas in vitro se pudieron desarrollar infinidad de
cultivos celulares, aptos para la replicacin de la mayora de los virus que causan
patologa humana y animal. En la actualidad, para el aislamiento de los virus humanos se
utilizan casi exclusivamente los cultivos celulares (ver tem 7.2).
Luego de la penetracin del virus en una clula susceptible, la replicacin se lleva a cabo
utilizando los mecanismos biosintticos de la clula, dirigidos por la informacin contenida
en el cido nucleico viral (ADN o ARN). Este acta como codificador de los mecanismos
enzimticos de sntesis de cidos nucleicos y protenas. De esta forma, la clula
parasitada por un virus en vez de producir sus propios cidos nucleicos y protenas,
recibe rdenes codificadas en el genoma viral para sintetizar productos virales que, luego
de su ensamble darn lugar a la formacin de nuevos viriones. Estos saldrn de la clula
donde replicaron para iniciar nuevos ciclos de replicacin en otras clulas susceptibles.
La replicacin viral puede dividirse en las siguientes fases o etapas:
1) Adsorcin: que depende de la interaccin de protenas de superficie del virus con
receptores celulares especficos.

2) Penetracin y descapsidacin: La penetracin a travs de la membrana plasmtica

de la clula puede efectuarse por diversos mecanismos.
Puede ocurrir un pasaje directo (ej. adenovirus y picornavirus) o una fusin de la
membrana celular con la envoltura viral (ej. paramixovirus, herpes) o bien un mecanismo
conocido como endocitosis o viropexis, que es el ms frecuente. Este consiste en un
fenmeno similar a la fagocitosis en el cual el virus es incluido en una vacuola fagoctica.
Luego de la penetracin se produce la descapsidacin, es decir la liberacin del nucleico
viral de la nucleocpside.
3) Eclipse: En esta etapa no pueden observarse viriones en el interior de la clula, ni se
recupera virus infeccioso.
4) Latencia: Este perodo va desde que se pierde la infectividad inicial hasta que se la
recupera debido a la aparicin de los nuevos viriones. Durante las fases de eclipse y
latencia ocurre la biosntesis de los cidos nucleicos y de las protenas virales.
5) Maduracin: Se produce el ensamble de los cidos nucleicos neoformados con las
protenas de la cpside.
6) Liberacin: Los viriones recin formados pueden salir de la clula por lisis de la
misma (ej., poliomielitis) o bien por brotacin a travs de la membrana celular (ej.,
paramixovirus, arenavirus); de la membrana nuclear (herpesvirus) o del retculo
endoplsmico (togavirus).
3. TIPOS DE HUSPEDES
Si bien casi todos los seres vivos pueden ser infectados por virus, la relacin virushusped es claramente especfica. Cada virus afecta solamente a un grupo bien definido
de especies biolgicas (hombre, animales, vegetales o bacterias) y dentro de ellas,
solamente a algunas clulas. Esto se debe a la especificidad de la unin del virus a
receptores ubicados en la membrana celular, cuya presencia se debe tanto a factores
genticos como fisiolgicos.
Por estas razones, an antes de que se conociera la estructura y formas de replicacin
de los virus, se los clasificaba teniendo en cuenta las especies y los tejidos que
afectaban. As, se hablaba de virus dermotropos, neumotropos, hepatotropos,
neurotropos y pantropos. Actualmente, se ha reconocido que esta clasificacin es artificial
ya que muchos virus afectan a diversos tejidos, aunque las manifestaciones de la
infeccin sean ms evidentes en un determinado tejido u rgano. Por ejemplo, el virus del
sarampin produce manifestaciones evidentes en piel y mucosas, pero puede infectar
tambin otros rganos como pulmn o cerebro.
Los virus que afectan animales y plantas no infectan en general al hombre. Constituyen
una excepcin aquellos virus que son productores de zoonosis (enfermedad comn al
hombre y animales). En estos casos los virus pueden replicar tanto en el hombre como en
animales reservorios y en artrpodos vectores. Como ejemplos de zoonosis podemos

mencionar a la rabia, las enfermedades producidas por arbovirus (fiebre amarilla,

encefalitis equinas) y por arenavirus (fiebre hemorrgica Argentina, fiebre de Lassa, etc.).
La clasificacin actual de los virus toma en cuenta no solamente los huspedes, sino
tambin otros aspectos tales como el tipo de cido nucleico, la simetra, la presencia o no
de envoltura, las diversas protenas constitutivas del virin, el lugar de replicacin, etc.
(ver tem 4).
Sin embargo, el mdico debe ensamblar la clasificacin moderna con el tropismo de cada
virus porque la accin patgena viral depender de su tropismo y segn ella se orientar
la confirmacin etiolgica dentro de un espectro limitado de virus causantes de una
patologa determinada.
3.1. Interaccin de los virus con la clula husped
El efecto de la infeccin viral sobre las clulas depende tanto de las caractersticas del
virus como de la sensibilidad de las clulas. Al igual que sucede con los bacterifagos, los
virus animales se clasifican en citocdicos o no citocdicos (citocidales o no citocidales).
Tambin se de denomina efecto o accin citopatognica (ECP o ACP)
Se denominan virus citocdicos aquellos que producen la lisis de la clula en que replican,
lo cual se puede observar histolgicamente (por ej., el virus de la poliomielitis si afecta la
mdula espinal, lesionar en forma irreversible las motoneuronas del asta anterior,
ocasionando as una parlisis permanente de los msculos inervados por dichas
neuronas).
Otros virus, en cambio, se denominan no citocdicos, porque pueden replicar sin destruir
a la clula husped. Esto sucede por ejemplo con los arenavirus. Sin embargo, esto no
significa que no existan alteraciones de algunas funciones celulares que no son
indispensables para la vida de la clula y por ello denominadas de lujo, como la
produccin de hormonas. Por ejemplo, el virus de la coriomeningitis linfoctica (LCM) que
puede inhibir la produccin de la hormona de crecimiento (somatostatina) en ratones
infectados.
Dentro de los virus no citocdicos se encuentran tambin aquellos capaces de integrarse
al genoma celular como los retrovirus o los herpesvirus e inducir estados de portador
(periodos de latencia).
Se denomina infeccin productiva a aquella que da origen a nuevos viriones como
consecuencia de la replicacin. Las infecciones productivas son las que se producen
habitualmente cuando un virus infecta clulas susceptibles. Por el contrario, cuando un
virus infecta clulas no totalmente susceptibles o bien cuando el virus presenta defectos
en su replicacin se producen infecciones abortivas es decir, sin produccin de nuevos
viriones. Las infecciones abortivas pueden detectarse mediante la bsqueda de antgenos
virales en las clulas infectadas.

3.2. Los virus: son seres vivos?

Si la vida se define como una serie compleja de procesos resultantes de plasmar la
informacin codificada por los cidos nucleicos, los virus son seres vivos solo cuando
invaden una clula husped y pueden replicarse. Desde este punto de vista, no seran
seres vivos cuando cristalizan o cuando se encuentran conservados en congeladoras a
-70C o en nitrgeno lquido a -196C. En estas circunstancias, es decir fuera de una
clula, son metablicamente inertes, si bien conservan su potencialidad de infeccin.
Cuando en 1953 Stanley pudo cristalizar el virus del mosaico del tabaco se suscitaron
discusiones sobre el hecho de que los virus fueran o no seres vivos. Al respecto, podra
aplicarse a ellos la frase del Evangelio:...Los conoceris por sus obras"... Es decir, por
sus efectos sobre la clula que infectan.
4. FUNDAMENTOS DE LA CLASIFICACIN ACTUAL DE LOS VIRUS
Todos los seres vivientes pueden ser parasitados por virus. Los virus pueden clasificarse
de acuerdo con sus huspedes, forma de transmisin o por sus propiedades
fisicoqumicas.
De acuerdo con sus huspedes, los virus pueden ser clasificados como virus de
vertebrados, virus de insectos, virus de plantas, virus de bacterias (bacterifagos) y de
parsitos.
Anteriormente, los virus se clasificaban de acuerdo con su especificidad de husped, con
el tipo de enfermedades producidas o bien con su tropismo tisular. As, por ejemplo, los
arbovirus replican en un artrpodo vector, los poliovirus producen poliomielitis, los
adenovirus se aislaron de adenoides, etctera.
Desde un punto de vista epidemiolgico, los virus pueden transmitirse por va respiratoria,
digestiva, cutneomucosa o ingresar directamente a la sangre a travs de picaduras de
artrpodos (arbovirus) o bien por inoculacin de sangre (transfusiones) o materiales
contaminados con sangre (virus de hepatitis B, C, Delta, virus HIV).
Los virus entricos son aquellos que penetran y replican primariamente en el tracto
gastrointestinal. Este grupo incluye numerosos virus desnudos y por ello resistentes al
cido y a las sales biliares, como los enterovirus (virus de poliomielitis, Coxsackie y virus
de la hepatitis A), rotavirus, calicivirus, etc.
Los virus respiratorios penetran a travs de la mucosa respiratoria, por inhalacin o por
contacto con materiales contaminados (manos, pauelos, etc.) y producen patologa
localizada exclusivamente en el aparato respiratorio. Este grupo incluye a los
ortomixovirus, muchos de los paramixovirus, coronavirus, rinovirus y algunos adenovirus.
Otros virus, si bien penetran por va respiratoria se diseminan a otros rganos por
viremia, como el virus del sarampin, el de paperas, rubola y viruela.

El termino arbovirus se aplica a aquellos virus que infectan a artrpodos hematfagos y

replican en ellos. Se transmiten al hombre o a los animales por picadura del vector (por
ej., mosquito). El nombre proviene del ingls (arthropod-borne viruses). Dentro de los
arbovirus se incluyen cuatro familias que se trasmiten por artrpodos; togavirus, flavivirus,
bunyavirus y orbivirus.
Actualmente, existe un Comit Internacional de Taxonoma que se encarga de la
clasificacin de los virus y de la inclusin de los nuevos agentes virales que se
descubren, en el lugar que les corresponde. Los virus se agrupan en familias y estas se
subdividen en gneros. La subdivisin de los gneros en especies esta todava en
discusin. Los criterios para definir una familia son: 1) tipo de cido nucleico,
caractersticas del mismo y mecanismos de replicacin; 2) tamao del virin y simetra de
la cpside; 3) nmero de capsmeros en el caso de los virus desnudos o dimetro de la
hlice en los virus helicoidales; 4) presencia o no de envoltura; 5) lugar de ensamble de
las partculas virales (ncleo o citoplasma); 6) forma de salida de la clula husped (por
lisis o por brotacin).
Los virus que causan patologa en el hombre se agrupan actualmente en 17 familias que
incluyen aquellos virus con caractersticas similares (tabla 5 y fig. 7). Las caractersticas
generales de cada familia as como sus integrantes se detallaran al comienzo de cada
captulo.
La subdivisin de las familias en gneros depende de criterios diferentes segn las
familias. Cada gnero puede tener cientos de especies distintas, las que se identifican por
diferencias serolgicas.
Tabla 5. Clasificacin de los virus y principales caractersticas de las familias

#: cido nucleico infeccioso; : pasan a ADN por medio de la transcriptasa reversa. pol: polaridad del
genoma; segm.: genoma segmentado; PM; peso molecular expresado en daltons.? desconocido.
capsomeros o hlice: nmero de capsomeros o dimetro de la hlice.

Existen muchos virus an en proceso de clasificacin y los nuevos mtodos pueden ser
variados.

5. VIRIONES, VIROIDES Y PRIONES

Se denomina virin a la partcula viral completa e infectarte. Es decir a aquella partcula
que posee todas sus caractersticas intactas y, por ende, es capaz de infectar a una
clula husped (fig. 2).
Existe otro tipo de partculas virales que se denominan defectivas porque son
defectuosas en algn aspecto de su replicacin.
Por ello, no pueden dar lugar a nuevos viriones pero pueden interferir con la replicacin
normal; esto se denomina fenmeno de autointerferencia. Las partculas defectivas
pueden competir con los viriones por los receptores celulares (fenmeno de von Magnus);
sto se ha descripto con el virus de la influenza y con el de la hepatitis B, entre otros.
Cuando el genoma viral se encuentra integrado al genoma de la clula husped se
denomina provirus. Esto ocurre por ejemplo, en la familia Retroviridae. Este genoma
puede quedar en estado latente durante aos, o bien transcribirse luego de la induccin
que puede ser espontnea u ocurrir como consecuencia de diversos estmulos. No se
conocen con exactitud cuales son los mecanismos de induccin pero se postula que
estaran controlados por genes celulares (Retrovirus). De todas formas, la existencia de
un provirus puede modificar la membrana de la clula husped y adems es capaz de
inducir la transformacin celular.
Dentro de los agentes que producen enfermedades en las plantas, se ubican los viroides,
descubiertos por Dienner en 1971. Los viroides presentan como los virus un nico tipo de
cido nucleico y son parsitos absolutos. Sin embargo, se diferencian de los virus en que
carecen totalmente de cpside y de envoltura y no poseen informacin para la sntesis de
protenas. Son altamente resistentes a los agentes externos como calor y su cido
nucleico es siempre infeccioso en condiciones naturales. Producen enfermedades en
diversas plantas (pepino, crisantemo, ctricos, etc.).
Finalmente, existen agentes virales llamados no convencionales. Estos comparten
algunas propiedades con los virus, pero se diferencian en su estructura y en su
extraordinaria resistencia a los agentes que inactivan a los virus como el calor, luz
ultravioleta, formol, glutaraldehdo, etc. Carecen de cpside o envoltura y no se conoce su
cido nucleico, por lo que serian los primeros agentes infecciosos sin cido nucleico
detectable hasta el momento.
Son productores de infecciones lentas del sistema nervioso central que afectan al hombre
(kuru o ataxia degenerativa endmica; y la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob o demencia
presenil) y al ganado ovino (scrapie).
Inicialmente se pens que estas enfermedades eran producidas por viroides, pero
recientemente se pudo aislar de la sustancia amiloide de estos enfermos unas
glicoprotenas capaces de transmitir la enfermedad a ratones. Se las denomin priones y
se observan como fibrillas de 20-200 nm al microscopio electrnico. Son muy resistentes
a todos los agentes inactivantes de virus y no poseen capacidad antignica. No se

conoce su mecanismo de replicacin pero algunos autores postulan que dado su

pequeo tamao no poseen la informacin gentica necesaria para su propia sntesis, por
lo que esta estara codificada en el cido nucleico de la clula husped.
Normalmente esa informacin estara reprimida y la infeccin con priones producira su
desrepresin y por lo tanto la replicacin del prin y el desarrollo de enfermedad.
6. EFECTO DE AGENTES FISICOQUIMICOS SOBRE LOS VIRUS
Diversos agentes fisicoqumicos pueden actuar sobre los constituyentes del virin
produciendo su inactivacin. En general, los virus son ms sensibles que las bacterias o
los hongos a la accin de los agentes fsicoqumicos. El conocimiento de la sensibilidad
de los virus a las condiciones ambientales es importante para determinar la viabilidad de
muestras clnicas para diagnstico virolgico, para la conservacin de vacunas virales a
virus vivo y para estimar la infectividad a temperatura ambiente.
Asimismo, es fundamental conocer la viabilidad de los virus para poder lograr una
inactivacin adecuada de aquellos materiales contaminados que necesitan desinfeccin o
para efectuar el tratamiento indicado para un correcto abastecimiento de agua potable,
etc. Entre los inactivantes fsicoqumicos pueden mencionarse la temperatura, luz
ultravioleta, el pH, medio inico y los solventes de lpidos.
6.1. Temperatura
La mayora de los virus son lbiles al calor. En general es suficiente una hora a 55-60 C
para inactivar a la mayora de los virus por desnaturalizacin de las protenas de la
cpside, lo que impide la adsorcin y la decapsidacin. Constituyen excepciones a esta
regla el virus de la hepatitis B, los adenoasociados y viroides, que resisten esa
temperatura.
Como regla general, la vida media de la mayora de los virus puede ser medida en
segundos a 60C, en minutos a 37C, en horas a 4C, en das a -20C, en meses a -70C
y en aos a -196C.
La esterilizacin por calor seco en estufa (1 hora a 180C) o por calor hmedo en
autoclave (30 minutos a 120C y 1 1/2 atmsfera de presin por encima de la presin
atmosfrica), destruyen a todos los virus, incluyendo a los ms resistentes como el de
hepatitis B. Por esta razn la esterilizacin en estufa o autoclave es el procedimiento de
eleccin.
La temperatura ambiente, destruye muchos virus aunque el tiempo requerido para la
inactivacin depende de las caractersticas de la familia.
Por ejemplo, el virus de hepatitis B y los poxvirus (viruela) pueden conservar su
infectividad a temperatura ambiente durante meses. En cambio, otros como los
ortomixovirus (influenza) o los paramixovirus (sarampin) se inactivan en pocas horas.

Por estas razones, es fundamental que las muestras clnicas para diagnstico virolgico
por aislamiento sean conservadas a la temperatura adecuada, es decir a 4C en hielo
granizado y enviadas al laboratorio en el menor tiempo posible. Es importante evitar la
congelacin ya que muchos virus, en especial aquellos con envoltura como el virus
sincicial respiratorio, o el citomegalovirus son muy sensibles a la congelacin y
descongelacin.
Solamente debern congelarse aquellas muestras que necesitan ser transportadas largas
distancias que no permitiran el mantenimiento del hielo granizado. Por ello, el empleo de
sal para descender el punto crioscpico del mismo debera ser aadido al hielo,
conservndolo como tal durante ms tiempo.
En el laboratorio habitualmente deben conservarse las cepas virales semillas o stocks.
Esto se hace mediante congelacin en pequeas alcuotas con medios protectores
conteniendo suero o dimetilsulfxido. Las alcuotas se descongelan una sola vez para su
utilizacin. Los stocks virales se conservan en congeladoras a -70C o en tanques de
nitrgeno lquido a -196C durante meses o aos.
Otro procedimiento empleado en el laboratorio para preservar la infectividad es la
liofilizacin (desecacin al vaco). Este mtodo se utiliza habitualmente para la
conservacin de vacunas virales.
El hecho de que la vacuna antivarilica liofilizada pueda ser conservada durante meses,
aun a temperatura ambiente, fue un factor fundamental que permiti la eficacia de las
campaas de vacunacin que lograron erradicar la viruela del planeta.
6.2. pH y medio inico
La mayora de los virus se conservan mejor en medios isotnicos y a pH fisiolgico,
aunque algunos virus pueden soportar un amplio rango de pH y fuerzas inicas. Por
ejemplo, los enterovirus resisten el pH cido del estomago y, por esa razn pueden
penetrar por va digestiva.
En la preparacin de vacunas a virus vivo y atenuado es imprescindible la preservacin
de la infectividad, Para ello, se adicionan ciertas sales (MgCl 2), que aumentan la
resistencia a la inactivacin trmica.
6.3. Radiaciones
La radiacin ultravioleta y las radiaciones ionizantes (rayos X o radiaciones gamma) al
producir alteraciones en el genoma son capaces de inactivar los virus, en especial
aquellos con cidos nucleicos monocatenarios. Para inactivar algunas vacunas se utiliza
luz ultravioleta, por ejemplo, en la vacuna antirrbica de uso humano en Argentina
(Fuenzalida-Palacios).
Las radiaciones ionizantes (provenientes del cobalto 60) se utilizan para esterilizar
materiales plsticos de uso mdico (sondas, catteres, etc.) o de laboratorio (botellas,

tubos y policubetas para cultivos celulares). En la actualidad, la mayora del material

descartable se esteriliza por ese mtodo.
Las radiaciones ionizantes actan alterando irreversiblemente el genoma viral. Dado que
este es mucho ms pequeo que el genoma bacteriano, la dosis de radiacin necesaria
para inactivar virus es mayor que para matar a las bacterias.
La luz ultravioleta se emplea para esterilizar reas de trabajo (flujos laminares para
cultivos celulares, etc). La fuente emisora es un tubo denominado tubo germicida y la
radiacin emitida acta formando dmeros entre cadenas adyacentes de pirimidinas.
Dado que la luz ultravioleta posee escaso poder de penetracin, slo puede emplearse
en la esterilizacin de superficies que reciban directamente la luz emitida.
6.4. Solventes de lpidos
La presencia o no de envoltura determina la sensibilidad de los virus a los solventes
lipdicos. Todos los, virus con envoltura se inactivan fcilmente con solventes de lpidos
como ter, cloroformo, sales biliares, o detergentes aninicos.
Por el contrario, los virus carentes de envoltura son resistentes a estos agentes y por ello
son infectivos por va digestiva, ya que no son sensibles a las sales biliares (por ej., los
integrantes de la familia Picornaviridae, que incluye a los virus d poliomielitis, Coxsackie,
etc.). La sensibilidad a los solventes de lpidos es tambin empleada en la clasificacin
preliminar de virus aislados de muestras clnicas.
6.5. Esterilizacin y desinfeccin
La esterilizacin se define como la ausencia total de microorganismos viables, mientras
que la desinfeccin es la destruccin de la infectividad potencial de un material
determinado.
Un factor fundamental para prevenir las infecciones nosocomiales es el uso de los
procedimientos adecuados de esterilizacin y desinfeccin. Para esterilizacin pueden
utilizarse mtodos fsicos o qumicos. Los mtodos fsicos son la temperatura, las
radiaciones o los agentes mecnicos (filtracin). El mtodo a elegir depende del material
a esterilizar. Por ejemplo para ropas, material de goma y soluciones tamponadas sin
protenas debe utilizarse el autoclave, ya que no resistiran el calor seco de la estufa.
Para aquellos materiales que resisten el calor (vidrio, instrumental quirrgico metlico)
puede emplearse la estufa de esterilizacin.
En caso de materiales que no resistan el calor (plsticos, sondas, etc.) se utiliza el xido
de etileno o la radiacin ionizante.
Para medios de cultivo que contienen protenas, sueros animales, vitaminas, enzimas,
etc., se emplea habitualmente la filtracin a travs de membranas especiales que

seleccionan por tamao; es decir, al pasar la solucin por un filtro de 0,2 m este retendr
a todas las bacterias y los hongos presentes.
En todos los casos debe tenerse en cuenta que slo se lograr una esterilizacin
adecuada cuando se logre la exposicin requerida en cuanto a temperatura y/o presin.
La temperatura adecuada en una estufa de esterilizacin es 180C durante 1 1/2 hora y,
en el autoclave es 120C durante 20 minutos a 1 1/2 atmsfera de presin por encima de
la presin atmosfrica.
Para desinfeccin de superficies y material de laboratorio contaminado se utiliza
hipoclorito de sodio al 10% (comnmente llamado agua lavandina, de uso
domstico) o 1 al 5% de cloro activo. Tambin puede emplearse glutaraldehdo al
2% o cido peractico.
Es importante recordar que la solucin de hipoclorito de sodio debe prepararse
diariamente a la concentracin adecuada, ya que se evapora y as disminuye su
concentracin y, por lo tanto, su efectividad como desinfectante.
Para antisepsia de manos y piel no pueden utilizarse los productos recin mencionados
por ser txicos. En este caso debern utilizarse alcohol iodado al 2%, cloroheximida al 0,5
-1%, o bien etanol al 70%.
6.6. Vacunas a virus inactivados
Las vacunas a virus inactivados estn constituidas por suspensiones de virus en las que
se inactiva la capacidad infecciosa conservndose la antigenicidad. El formaldehdo es un
inactivante clsico y fue usado por Jonas Salk para preparar la primera vacuna
antipoliomieltica. El formaldehdo reacciona con los grupos amino de las protenas y los
cidos nucleicos. Para lograr una correcta inactivacin de una vacuna, la suspensin no
debe contener agregados de viriones que impediran la accin del inactivante en el
interior del agregado, quedando as partculas sin inactivar. Otros inactivantes utilizados
para vacunas de uso humano son la luz ultravioleta y la betapropiolactona. Para inactivar
vacunas animales se pueden usar, adems, otros inactivantes que no estn permitidos
para vacunas de uso humano.
7. MTODOS DE ESTUDIO DE LOS VIRUS (tabla 6)
Los virus pueden estudiarse por mtodos fisicoqumicos o bien por medio de
procedimientos que demuestren su interaccin con las clulas vivas, es decir su
capacidad infecciosa.

Tabla 6. Mtodos de estudio de los virus

Mtodos fisicoqumicos deteccin y * partcula virales
posible caracterizacin de:
* unidades hemaglutinantes
* antgenos (protenas o glicoprotenas)
* cidos nucleicos

Mtodos para dileccin de

infectividad

* el virus como agente infeccioso, mediante

demostracin de la replicacin en animales de
experimentacin, huevos embrionados o cultivos
de clulas (o cultivo de tejido).

Los mtodos fisicoqumicos pueden detectar a los virus como partculas virales por
microscopa electrnica; como unidades hemaglutinantes por hemaglutinacin; como
antgeno, mediante tcnica inmunoqumicas; o como cidos nucleicos mediante
hibridizacin molecular.
Tambin pueden estudiarse las caractersticas de sus protenas y cidos nucleicos. De
ellos puede determinarse su peso molecular contenido en guanina-citosina, secuencia
nucleotdica, longitud y polaridad. Estos ltimos mtodos se emplean solamente con fines
de investigacin en laboratorios de virologa bsica.
Los dems mtodos se usan tambin para diagnstico virolgico en forma habitual, junto
con aquellos tendientes a determinar la infectividad.
Los estudios de infectividad son fundamentales tanto en virologa bsica como en
virologa clnica. En la primera, para obtener la cantidad necesaria de viriones para
estudios de sus constituyentes, su forma de replicacin, etc.; en la segunda, para
determinar la presencia del agente infeccioso viable en muestras clnicas provenientes
del paciente.
El fundamento de los estudios de infectividad es detectar al virus contenido en una
muestra clnica o inculo como agente infeccioso. Para ello, un requisito esencial es
lograr la replicacin y propagacin del virus en clulas vivas, ya sea en animales de
experimentacin, huevos embrionados o cultivo de clulas in vitro, dado que los virus no
pueden cultivarse en medios acelulares.
7.1. Mtodos fisicoqumicos
7.1.1. Observacin de partculas virales por microscopa electrnica. El microscopio
electrnico permite observar la morfologa de las partculas virales y este procedimiento
se utiliza con fines de investigacin y, en algunas ocasiones, como mtodo de
diagnostico. (fig. 8).

Existen dos tcnicas bsicas: la tincin negativa de las partculas virales y los cortes
ultrafinos (obtenidos con micrtomo) de clulas o tejidos infectados, seguido de tinciones
especiales
7.1.2. Recuento de partculas. Los viriones pueden identificarse claramente con el
microscopio electrnico aunque no es posible distinguir entre partculas infecciosas y no
infecciosas.
Para averiguar el nmero de partculas virales en una suspensin viral el mtodo ms
empleado es mezclar la suspensin con un nmero conocido de partculas de ltex y
luego contar al microscpico electrnico los viriones y las partculas de ltex y as
determinar mediante un simple clculo el nmero de viriones presentes.
7.1.3. Hemaglutinacin viral. Muchas familias de virus poseen la capacidad de aglutinar
glbulos rojos de diversas especies animales. Esta propiedad, descubierta en 1941 para
el virus de la gripe (familia Orthomyxoviridae) es un mtodo sencillo para cuantificar virus
y se ha usado durante muchisimo tiempo hasta el advenimiento de cuantificaciones
moleculares .
Algunas familias de virus (Orthomyxoviridae, Paramyxoviridae, Togaviridae) y los
arbovirus poseen en las espculas de la envoltura, glicoprotenas con capacidad de
aglutinar glbulos rojos, que se denominan hemaglutininas.
Otros virus (Adenoviridae) son desnudos, ADN y poseen esta sustancia en proyecciones
de la cpside. Aunque las condiciones en que se produce la hemaglutinacin varan para
los distintos virus, el fenmeno bsico es la unin de las molculas de hemaglutinina viral
a receptores mucoproteicos presentes en los glbulos rojos (fig. 9). Si la concentracin de
viriones es suficiente, se formarn mltiples puentes entre ellos y los glbulos rojos y los
agregados de glbulos rojos se depositarn en forma de retculo en el fondo del tubo. El
borde de este depsito tiene una forma de sierra caracterstica. En cambio, los glbulos
que no fueron aglutinados se depositarn en forma de botn. La lectura de la reaccin es
visual (fig. 10).

Habitualmente, se realizan diluciones dobles de la suspensin viral las que se mezclan

con glbulos rojos (107 x ml). La ltima dilucin que presenta hemaglutinacin completa
es el ttulo hemaglutinante.
El mecanismo responsable de la hemaglutinacin es la unin de las hemaglutininas
virales a receptores que se encuentran en la membrana de muchas c1ulas y que son
especialmente abundantes en los glbulos rojos. Los receptores son mucoprotenas que
contienen cido N-acetil-neuramnico (NANA). Estos receptores tambin se encuentran
en las c1ulas del tracto respiratorio y son los que permiten la absorcin de los mixovirus
y paramixovirus.
Los receptores son inactivados por el peryodato que oxida los grupos glicol del azcar y
por la enzima neuraminidasa que cliva el NANA. Esta enzima se encuentra, como
protena estructural, en los mixovirus y paramixovirus y acta separando los viriones del
eritrocito. Este fenmeno se denomina elucin y ocurre a 37C. Por el contrario, a 0C la
enzima no acta y la unin del virin a los glbulos rojos es estable. Los viriones eludos
pueden volver a aglutinar otros eritrocitos, en cambio los eritrocitos eludos no pueden
volver a ser aglutinados ya que su receptor ha sido destruido por la neuraminidasa. Por
esta razn, esta enzima se llama enzima destructora de receptores. La neuraminidasa se
encuentra en las espculas de los mixovirus y paramixovirus y tambin puede obtenerse
de filtrados de cultivos de vibrin colrico (bacteria).
En muchos lquidos biolgicos (suero, orina, saliva) estn presentes mucoprotenas con
cido salico con residuos terminales de NANA y pueden unirse a las hemaglutininas
virales inhibiendo competitivamente la Hemaglutinacin de los eritrocitos.
7.1.4. Reaccin de inhibicin de la hemaglutinacin. Si se hace reaccionar un virus
con capacidad de hemaglutinacin con su anticuerpo especifico, este anulara su
capacidad de hemaglutinacin por bloqueo de las hemaglutininas presentes en la
envoltura del virin. Este fenmeno se llama inhibicin de la hemaglutinacin y es
utilizado con frecuencia como mtodo diagnstico tanto para identificar virus como para
estudios serolgicos para determinar la presencia de anticuerpos especficos inhibidores
de la hemaglutinacin en el suero del paciente.
7.1.5. Deteccin de antgenos virales. La determinacin de antgenos virales en clulas
o tejidos infectados por virus es un mtodo de extraordinaria importancia para el
diagnstico rpido de muchas infecciones virales. El fundamento es detectar en las
muestras clnicas, la presencia de antgenos virales mediante mtodos
inmunohistoqumicos tales como inmunofluorescencia (fig. 11), inmunoperoxidasa o
enzimoinmunoensayo.
Fig. 11. Inmunofluorescencia para deteccin de antgenos virales. Cerebro de ratn
lactante infectado con virus Junn (fiebre hemorrgica Argentina). Inmunofluorescencia
indirecta. 400X. Se observa antgeno viral intracitoplasmtico

Fig. 12. Mtodos de aislamiento de virus

7.1.6. Estudio de los cidos nucleicos. Algunos de estos mtodos se emplean slo con
fines de investigacin pero otros, como la deteccin de genomas virales en muestras
clnicas ya estn comenzando a ser utilizados con fines diagnsticos.
7.2. Estudios de la infectividad.
Dado que los virus slo replican en clulas vivas, en todo estudio de infectividad deben
utilizarse clulas vivas susceptibles al virus en estudio, ya sean provenientes de animales
de experimentacin, huevos embrionados o cultivos celulares in Vitro (fig-12).
La infectividad se mide determinando la cantidad de inculo necesario para obtener en
determinado husped una respuesta especfica. La determinacin puede ser cuali o
cuantitativa. La determinacin cuantitativa de la infectividad de una preparacin viral se
denomina titulacin. Por lo tanto un ttulo, es el nmero de unidades infecciosas
presentes en el inculo por unidad de volumen.
Se denomina unidad infecciosa a la minina cantidad de material que es necesario inocular
a un husped para obtener una respuesta determinada.

Esta respuesta puede ser localizada o generalizada. Segn el tipo de respuesta, los
mtodos para cuantificar un virus se clasifican en 3 grupos: a) titulacin de punto final; b)
enumerativos; c) degradacin.
7.2.1. Animales de experimentacin. La inoculacin de animales es el mtodo ms
antiguo para aislar y conservar los virus. La inoculacin de virus en animales puede
producir enfermedad con lesiones tpicas y/o muerte. Los animales habitualmente
utilizados en el laboratorio son ratones lactantes o adultos, cobayos, conejos y en algunos
casos, primates.
Numerosos virus pueden aislarse en animales de experimentacin como los mixovirus
por instilacin nasal en hurones, los arbovirus y los arenavirus por inoculacin
intracerebral en ratones lactantes, etc. Sin embargo, debido al alto costo del
mantenimiento de los animales, a la complejidad de las instalaciones necesarias
(bioterios), al riesgo de manipulacin de animales infectados y a la presencia de virus
latentes en los mismos, los animales de experimentacin se utilizan cada vez menos en
estudios de infectividad ya que fueron reemplazados por los cultivos de clulas in vitro. A
pesar de ello, todava se utilizan animales en el aislamiento de algunos virus (ratones
para aislamiento de virus rbico, togavirus, arenavirus y algunos Coxsackie).
Por el contrario, los animales resultan indispensables para trabajos de investigacin sobre
patogenia e inmunidad de las enfermedades virales, para ensayos de vacunas y estudios
sobre virus oncognicos as como para la preparacin de antisueros, para fines
diagnsticos.
7.2.2. Huevos embrionados. Los virus pueden inocularse en las diferentes estructuras
de los huevos embrionados de pollo o de pato. As, los mixovirus se inoculan en cavidad
alantoidea, los paramixovirus y mixovirus en cavidad amnitica, los herpesvirus en saco
vitelino y los poxvirus en membrana corioalantoidea (fig. 12). Para la inoculacin, se
practica un pequeo orificio en la cscara de los huevos embrionados de 7-14 das,
previa antisepsia y se inyecta el inculo con aguja y jeringa. Luego se tapa el orificio con
tela adhesiva y se incuban los embriones a 37C. La replicacin viral puede producir la
muerte del embrin (herpes y parotiditis) o puede no inducir lesiones aparentes aunque
se pueden detectar antgenos virales (por ej. hemaglutininas). La inoculacin en
membrana corioalantoidea de los poxvirus y herpesvirus produce lesiones focalizadas
que se denominan pocks.
Los huevos embrionados presentan la ventaja de ser bacteriolgicamente estriles, de
poseer escasos virus latentes y de carecer de respuesta inmune. Adems, son de fcil
manipulacin. Sin embargo, actualmente el uso de huevos esta restringido al aislamiento
y propagacin de mixovirus y poxvirus y a la produccin de vacunas para mixovirus y
algunos paramixovirus.
7.2.3. Cultivo de tejidos. Los cultivos de clulas in vitro fueron descubiertos por Alexis
Carrel a mediados del siglo XX. Para ello fue necesario el descubrimiento previo de los
antibiticos, imprescindibles para evitar la contaminacin bacteriana de los cultivos. Los
cultivos de tejidos pueden obtenerse a partir de trozos de tejidos (explantes) o de clulas
aisladas (cultivos celulares) o de cortes de rganos (cultivos de rganos).

Enders fue quien descubri que los virus podan desarrollarse en cultivos de clulas in
vitro y esto constituye un hito fundamental en el desarrollo de la virologa.
Los cultivos celulares constituyen el mtodo de eleccin para la replicacin de la mayora
de los virus. En todos ellos se mantienen las clulas vivas en botellas o tubos en
condiciones de esterilidad, con medios nutritivos enriquecidos con sueros y antibiticos y
a 37 C. Existen diversos tipos de cultivos celulares tales como cultivos primarios, cepas
de clulas diploides y lneas celulares (fig. 13).
Los cultivos primarios se obtienen por tratamiento con tripsina de pequeos trozos de
tejidos del hombre o animales. Las clulas disgregadas se lavan, se cuentan en cmaras
cuentaglbulos (tipo Neubauer) y se siembran en tubos, botellas o policubetas de vidrio o
de plstico. Todo el material a emplearse debe ser estril. Se aade el medio nutritivo con
antibiticos y las clulas se colocan a 37C. Luego de pocas horas las clulas se
adhieren a la superficie del recipiente y posteriormente multiplican formando islotes que
van cubriendo toda la superficie hasta formar una monocapa Cuando dos islotes se unen
se inhibe su crecimiento, fenmeno que se denomina inhibicin por contacto. Los medios
de cultivo, que aportan nutrientes a dichas clulas, deben cambiarse 2 o 3 veces por
semana. Estas clulas pueden usarse para infeccin con virus o bien para repicar, es
decir obtener nuevos cultivos mediante tratamiento con tripsina de las monocapas y
siembra de nuevos cultivos. Esto se denomina pasaje o subcultivo.
El mayor inconveniente de los cultivos primarios es que al cabo de unos pocos pasajes
(cultivos secundarios) las clulas mueren y es necesario obtener un nuevo cultivo
primario a partir del animal (u hombre). Por ello los cultivos primarios son muy costosos.
Sin embargo, presentan un amplio espectro de sensibilidad a los virus por lo que son
sumamente tiles en el laboratorio de diagnstico virolgico.
Los cultivos primarios ms utilizados son los fibroblastos de rin de mono, clulas
embrionarias (de pollo o de rin humano) o clulas amniticas. Los cultivos pueden
tener el aspecto de clulas epiteliales o fibroblsticas normales.
7.2 3.1. Cultivos de clulas diploides. A partir de cultivos celulares primarios es posible
seleccionar clulas que conserven intacta su morfologa y su nmero normal de
cromosomas (nmero diploide) as como su capacidad de crecimiento durante un nmero
limitado de pasajes. Esto se denomina cepa de clulas diploides. Habitualmente pueden
repicarse un nmero limitado de veces (50-100) sin perder sus caracteres normales. Las
cepas diploides tienen una alta sensibilidad a muchos virus y son aptas para produccin
de vacunas de uso humano, ya que habitualmente no estn contaminadas con virus
latentes.
Las cepas mas usadas son las denominadas MRC-5 (provenientes de rin de mono
Rhesus) o las WI38 (Wistar Institute) de origen humano. Se utilizan como sustrato para el
aislamiento de diferentes virus (citomegalovirus, varicela, rinovirus) as como sustrato
para la replicacin de cepas vacnales (fig. 14).

7.2.3.2. Lneas celulares. A partir de un cultivo primario es tambin posible adaptar las
clulas a crecer in vitro durante un nmero ilimitado de pasajes. Estas clulas adaptadas
al cultivo in vitro poseen caractersticas similares a las del cultivo primario que les dio
origen, generalmente de tipo epitelial. Sin embargo, su nmero de cromosomas es
variable (aneuploida). Es decir, pueden tener un nmero mayor o menor de cromosomas
que el nmero normal de la especie que los origin.
La gran ventaja que presentan estas lneas celulares es que pueden repicarse un nmero
ilimitado de veces en el laboratorio (mltiples pasajes), no siendo necesario recurrir a
tejidos animales como es necesario hacer con los cultivos primarios. Se las denomina por
ello lneas inmortales.
Actualmente existen numerosas lneas celulares, tanto de origen normal como
neoplsico. De origen normal son las clulas VERO, provenientes de rin de mono
verde africano, las LLC-MK2 de rin de mono, las BHK de rin de hmster o las RK-13
de rin de conejo.
Dentro de las de origen neoplsico podemos mencionar a las clulas HeLa, derivadas de
un carcinoma de crvix, o las HEP-2 de un carcinoma de laringe. La sensibilidad a los
virus es limitada y se utilizan para aislamiento de virus sincicial respiratorio, herpes,
rubola, poliovirus, Coxsackie, adenovirus, etctera.
7.2.3.3. Cultivo de rganos. Para el aislamiento de ciertos virus tales como coronavirus
o rotavirus, se pueden utilizar cultivos de rganos. Estos consisten en cortes de tejidos
embrionarios que conservan su estructura y funcin durante un cierto tiempo, mantenidos
en medios especiales adecuados.
7.2.4. Deteccin de los virus en cultivos celulares. El desarrollo de la replicacin viral,
es decir la amplificacin del virus inoculado en el cultivo puede identificarse por medio de
diferentes procedimientos. Todos ellos tienden a detectar las modificaciones producidas
en el cultivo por efecto de la replicacin viral.
Muchos virus replican con produccin de accin citopatognica (ACP), es decir
alteraciones de las monocapas celulares que se pueden observar directamente al
microscopio ptico invertido in vivo, sin necesidad de efectuar ninguna coloracin. Existen
diversos tipos de ACP que son caractersticas de algunos virus. Por ejemplo, los
poliovirus y los herpes producen en cultivo una ACP rpida (horas) que consiste en
redondeamiento de las clulas, desprendimiento de la monocapa de la superficie en que
crece y por lo tanto, liberacin de las clulas alteradas al medio de cultivo (fig. 15). Esta
accin suele observarse en forma generalizada a toda la monocapa celular. Por el
contrario, otros virus como el citomegalovirus, tienen una ACP lenta (das o semanas) que
comienza en forma de focos bien delimitados de clulas redondeadas.
Otros virus producen inclusiones caractersticas localizadas en el ncleo o en el
citoplasma de las clulas. Estas inclusiones pueden ser visualizadas mediante tinciones
histolgicas o por mtodos inmunohistoqumicos. Aquellos virus que tienen en su

envoltura protenas de fusin, son capaces de inducir la fusin de clulas vecinas

formando sincicios (clulas gigantes multinucleadas). Esto se observa con el virus
sincicial respiratorio y el virus sarampin.
El desarrollo de ACP en un cultivo celular permite reconocer que se ha aislado un virus.
Sin embargo, es imposible en esta etapa poder afirmar de qu virus se trata, ya que la
ACP es solamente orientadora debido a que muchos virus pueden desarrollar ACP de
caractersticas similares. La identificacin del virus aislado ser la que permitir el
diagnstico definitivo y se realiza, en general, por procedimientos inmunoqumicos.
Dentro de ellos, los ms utilizados son la inmunofluorescencia, el enzimoinmunoensayo y
la inmunoperoxidasa (fig. 16)
Fig. 15, Accin citopatognica generalizada. Virus polio.

Fig. 16. Inmunofluorescencia. sobre cultivos infectados para identificacin del virus.
Antgeno de adenovirus en clulas Hep-2. Inclusiones intranucleares.

Algunos virus, si bien son capaces de replicar en cultivos celulares, no producen accin
citopatognica visible directamente al microscopio ptico.
Sin embargo, como producto de la replicacin viral se liberan al medio de cultivo
protenas de origen viral que pueden ser demostradas por diversos procedimientos. Por
ejemplo hemaglutininas que pueden detectarse por reacciones de hemoaglutinacin u
otros antgenos que pueden ponerse en evidencia por reacciones de fijacin de
complemento, etctera
Los virus que poseen hemaglutininas, en general expresan estos antgenos en la
membrana celular de las clulas que infectan. Esto puede demostrarse por reacciones de
hemadsorcin, es decir fijacin de glbulos rojos en las clulas infectadas. Esta reaccin
se utiliza habitualmente para la identificacin de virus respiratorios.
En algunos virus la replicacin ocurre sin produccin de ACP pero, sin embargo, esta
replicacin es capaz de inhibir la replicacin de un segundo virus que se inocule en el
cultivo. Este mecanismo se denomina interferencia viral, y se debe a inhibicin de la
penetracin viral. Este mtodo se utiliza principalmente con fines de experimentacin y
fue empleado para el diagnstico del virus de rubola
Finalmente, en los ltimos aos se han desarrollado tcnica que permiten detectar los
genomas virales en las clulas infectadas. Estos mtodos poseen una alta sensibilidad y
consisten en detectar secuencias de cidos nucleicos virales mediante sondas, es decir
secuencias complementarias especficas, marcadas con mtodos radioactivos o no
radioactivos. Estos mtodos se denominan de hibridacin molecular y recin comienzan a
ser utilizados para diagnstico en muestras clnicas.
7.2.5. Mtodo de recuento de placas bajo agarosa (plaqueo). El mtodo de recuento
de placas bajo agarosa permite cuantificar la cantidad de viriones presentes en un
inoculo. Es un procedimiento enumerativo que se utiliza en investigacin (fig. 17).
Se basa en el recuento de lesiones localizadas, por ejemplo: focos en membrana
corioalantoidea de embrin de pollo (pocks), placas de lisis en monocapas de clulas,
focos de proliferacin en cultivos celulares (en el caso de los virus tumorales). Tambin
puede utilizarse para cuantificar bacterifagos, contando las placas de lisis en un cultivo
bacteriano. De todos estos mtodos, el recuento de placas bajo agarosa es un
procedimiento de fundamental importancia por ser de fcil realizacin, reproducible y
exacto.
Cuando se inocula un virus en un cultivo celular susceptible, este se disemina
habitualmente a todas las clulas del cultivo a travs del medio de cultivo. Por lo tanto, no
es fcil cuantificar la cantidad de virus presente en el inoculo, a menos que se efecten
diluciones del mismo. Para realizar el recuento de placas bajo agarosa se infectan los
cultivos celulares (en botellas o policubetas) con diluciones de virus. Luego de una hora
de adsorcin a 37C, se cubre la monocapa celular con un medio de cultivo que contiene
agarosa o metilcelulosa, suero y antibiticos y se precede a la incubacin de las clulas
durante varios das a 37C. La cobertura de la monocapa con un medio semislido impide
la diseminacin del virus a travs del medio de cultivo y hace que los nuevos viriones

formados deban infectar las clulas vecinas. Es decir, se produce una diseminacin de
clula a clula. Cada virin se replica y produce un foco o clon de clulas infectadas.
Luego de varios das de incubacin, se tie la monocapa infectada con un colorante vital
(rojo neutro). Solamente se teirn las clulas vivas, mientras que las infectadas
quedaran sin teir y formarn una placa, visible a la observacin directa. Las placas se
cuentan visualmente y mediante una multiplicacin por la dilucin del virus del inculo se
obtendr el ttulo viral.

Fig. 17. Mtodo de placas bajo agarosa para recuento y clonado de virus
Mediante este mtodo se cuantifican los viriones por medio de unidades formadoras de
placas (UFP), plaque forming units (PFU). Este mtodo se emplea en investigacin para
determinar la cantidad de virus presente en las muestras analizadas con alta precisin.
Adems, dado que selecciona clones de virus se emplea para la seleccin de mutantes
de virus en la produccin de cepas atenuadas para uso en vacunacin.
7.2.6. Pruebas de punto final o dilucin limite. Algunos virus no producen placas bajo
agarosa y, por ello, esa prueba no puede utilizarse para cuantificar la presencia de virus.
En estos casos deben emplearse tcnicas de punto final o dilucin limite. Si bien estos
mtodos no son tan precisos como el recuento de placas bajo agarosa, permiten
determinar en forma aproximada la cantidad de virus presente en una muestra (ttulo
viral).

Para esta prueba deben realizarse diluciones seriadas del virus (en general en base 10),
las que se inoculan en nmeros iguales de unidades de prueba (tubos con clulas
susceptibles o animales de experimentacin). Luego de la incubacin, se registra
cuidadosamente a lo largo de varios das o semanas, la aparicin de lesiones (en
cultivos) o de enfermedad o muerte (en los animales). Las unidades de prueba
desarrollarn signos de infeccin en las diluciones ms bajas del virus y no en las ms
altas. En las diluciones intermedias, solamente una parte de ellas mostrar signos de
infeccin. Por razones matemticas es necesario emplear los datos obtenidos en las
distintas diluciones para poder calcular la dilucin lmite en que el 50 % de las unidades
de prueba estn infectadas. Para este clculo existen diversas frmulas, siendo la ms
utilizada la de Reed y Mench (1938). Este mtodo se basa en la propuesta de que si
una unidad de prueba dio un resultado positivo en una dosis alta de virus, tambin dar
positivo en dosis mayores (es decir en diluciones ms bajas del inculo).
Coincidentemente, la unidad de prueba que dio resultado negativo con cierta dosis, dar
negativo con dosis ms bajas. La estimacin de las dosis infectantes de cultivo 50 (DICT
50) se basa en las acumulativas de las respuestas positivas y negativas.
Tabla 7, Mtodo Reed de Mench para estimacin del ttulo viral
Dilucin
de virus

N de cultivos
con ACP/N de
cultivo inoculados

N acumulativo
de cultivos
infectados

N acumulativo
de cultivos no
infectados

Infectividad
cociente

4/4
3/4
2/4
0/4

9
5
2
0

0
1
3
7

9/9
5/6
2/5
0/7

100
83
40
0

10-3
10-4
10-5
10-6

El mtodo de Reed y Mench toma en cuenta los resultados obtenidos en varias

diluciones del inculo. La dilucin que infecta el 50 % de las unidades de prueba se
denomina DICT 50, si se trata de cultivos, o bien dosis letal 50 (DL50), si se trata de
animales.
Analicemos el siguiente ejemplo: en l se infectaron con 0,1 ml de cada dilucin decimal
de virus (10-3, 10-4, 10-5,10-6) 4 tubos conteniendo monocapas de clulas en cultivo. Luego
de varios das de incubacin a 37C, se observ y registro la aparicin de accin
citopatognica (ACP) (tabla 7).
En este ejemplo, la distancia entre 2 diluciones donde se encuentra la DICT 50
(diluciones 10 y l0-5 se calcula mediante la siguiente frmula:
Infectividad mayor de 50 % - 50%
=
Infectividad mayor de 50 % - infectividad debajo de 50 %

83 50
0,7
83 40

Por lo tanto, una suspensin viral diluida 10 -4,7 contenida en 0,1 ml (volumen del inculo)
representa 1 DICT 50. Esto significa que en esa dilucin la mitad de los cultivos se
infectarn con el virus.
Consecuentemente, una suspensin diluida 10 -2,7 contendr 100 DICT 50/0,1 ml; una
dilucin de 10-1,7 contendr 1000 DICT 50, etctera.
Este mtodo no es tan exacto como el recuento de placas bajo agar, pero es sumamente
til para estimar el ttulo de los virus en el laboratorio.
Actualmente las cuantificaciones virales se realizan con tcnicas moleculares en la mayor
parte de los centros de referencia.
BIBLIOGRAFA
Fields BN, Knipe DM. Virology 2nd Edition. Raven Press, 1990
Hsiung GD. Diagnostic Virology. 3rd Edition. Yale University Press New Haven and
London, 1982.
Matthews RE F: Classification and nomenclature of viruses. 3rd Report of the International
Committee on Taxonomy of viruses. Intervirology, 12: 129, 1979
White DO and Fenner F. Medical Virology, 3rd edition. Academic Press. Orlando, 1986
Captulo 4
MECANISMOS DE DEFENSA DEL HUESPED FRENTE A LAS INFECCIONES
VIRALES
Jos R. Oubia y Guadalupe Carballal
Los mecanismos de defensa del husped contra las infecciones virales han sido
descriptos como una sinfona de factores especficos e inespecficos. La informacin
obtenida del estudio de infecciones virales naturales o experimentales permiti evaluar la
importancia relativa de ambos mecanismos, ya que estos varan de acuerdo con los
diferentes virus que se consideren.
Uno da los mayores avances en la medicina moderna ha sido el desarrollo de vacunas
contra muchas de las infecciones virales severas y aun mortales.
Las vacunas actan en general induciendo la formacin de anticuerpos especficos contra
el virus y, en algunos casos promoviendo tambin el desarrollo de inmunidad celular; de
esa manera, cuando el husped es expuesto a la infeccin natural, los anticuerpos
preformados neutralizarn al virus infectante y acortarn el curso de la infeccin.
Clsicamente, se consideraba a los anticuerpos como el nico factor de defensa contra
los virus. Sin embargo, en las ltimas dcadas se demostr que factores inespecficos y

la inmunidad celular especfica tienen un papel fundamental en la recuperacin del

paciente en muchas enfermedades virales.
Los mecanismos con los que el husped se defiende de las infecciones virales dependen
fundamentalmente del modo por el cual los virus se diseminan dentro del husped (tabla
1).
Tabla 1. Formas de diseminacin de los virus y mecanismos de resistencia.
Tipo de
diseminacin
1-lisis
2-Brotacin
3-Integracin al genoma celular

Mecanismo de resistencia
ms importante
Inmunidad humoral
Inmunidad celular
?

Ejemplo
Polio
Varicela zoster
Retrovirus

Los virus pueden diseminarse por 3 rutas. El primer tipo de diseminacin es a travs del
lquido extracelular (tipo 1). Los nuevos viriones formados son liberados por lisis al lquido
extracelular, de all se dirigen a la sangre y por medio de ella (viremia) pasan a infectar
nuevas clulas susceptibles. El ejemplo tpico de esta forma de diseminacin es el virus
polio.
El segundo tipo de diseminacin es por brotacin de clula a clula, es decir por
contigidad (tipo 2). El virus varicela zoster se disemina de clula a clula por brotacin
en las membranas de clulas contiguas, sin necesidad de pasar por el lquido
extracelular.
El tercer tipo de diseminacin es por integracin al genoma celular. El provirus queda
integrado al genoma de la clula husped y puede permanecer en ese estado por un
cierto tiempo. Cuando la clula se divide, dar lugar a nuevas clulas hijas que llevarn
en su genoma el provirus integrado. Por mecanismos no bien conocidos, el provirus
puede activarse dando lugar a la formacin de nuevos viriones que irn a infectar a otras
clulas. Los retrovirus (por ej. el virus de la inmunodeficiencia humana, as como diversos
virus productores de leucemias murinas y humanas) son ejemplos de este tipo de
diseminacin.
1. RESISTENCIA INESPECFICA
Los factores de resistencia inespecfica a los virus son los siguientes: la edad del
husped, su estado nutricional, la funcin de las clulas macrfagas, factores genticos y
los fenmenos de interferencia, sean estos mediados por virus o por el sistema interfern.
La edad del husped puede determinar la susceptibilidad o la resistencia a determinados
virus. Por ejemplo, los neonatos infectados con el virus de la hepatitis B, mediante
transmisin perinatal desarrollan infecciones persistentes ya que no son capaces de
eliminar el virus de su organismo, probablemente por una inadecuada respuesta de su
sistema inmunolgico frente a la infeccin.

Desde el punto de vista de las infecciones experimentales, se ha observado diferente

susceptibilidad de ratones a la infeccin con arenavirus segn su edad. Los ratones
lactantes de 24-48 hs de vida inoculados por va intracerebral con el virus Junn -agente
de la fiebre hemorrgica argentina- son altamente sensibles y mueren como
consecuencia de una encefalomielitis mediada por linfocitos T. Por el contrario, los
ratones adultos (ms de 20 das) de casi todas las cepas estudiadas hasta el presente
exhiben resistencia a la infeccin con el mismo virus, desarrollando una infeccin
inaparente con sntesis de anticuerpos especficos. Esta diferencia en el comportamiento
se atribuye a la maduracin de la respuesta inmune y al desarrollo en los animales
adultos de una respuesta especfica supresora.
En nios desnutridos, muchas infecciones virales revisten mayor gravedad que en nios
eutrficos. Ello se observa, por ejemplo, en la evolucin ms severa de diversas
infecciones gastrointestinales o respiratorias. Esto se debe a que la desnutricin implica
una desventaja para el normal desarrollo de la respuesta inmune.
Sorprendentemente, recientes estudios efectuados en ratones infectados con Coxsackie
B5 demostraron tambin una alteracin de la respuesta a dicho virus, como consecuencia
de la alimentacin hipercolesterolmica, habindose sugerido que la susceptibilidad
aumentada sera debida a la disfuncin de macrfagos hepticos y a trastornos de la
movilizacin de monocitos desde el lecho sanguneo.
Los factores genticos condicionan la presencia o ausencia de receptores en las
membranas celulares que permitirn la adsorcin de los virus, es decir, el primer paso de
la replicacin viral. Por esta razn, el ser humano no se infecta generalmente con virus de
animales (excepto en el caso de zoonosis) o con virus de plantas o bacterias. La
susceptibilidad a formas graves de algunas infecciones virales se ha asociado a ciertas
estructuras genticas: por ejemplo existe mayor frecuencia de hepatitis crnicas en
individuos que expresan alelos especficos del complejo mayor de histocompatibilidad,
como B8 o DR3.
1.1. Fenmeno de interferencia viral
La interferencia viral consiste en el bloqueo de la replicacin de un virus por accin de
otro virus que acta en primer trmino.
Esta interferencia puede ser homloga (es decir producida por virus integrantes de la
misma familia) o heterloga (por virus de familias diferentes). El mecanismo del fenmeno
de interferencia no se conoce con exactitud, si bien se ha determinado que puede
realizarse a nivel de receptores de membrana (bloquendolos o destruyndolos) o bien a
nivel intracelular, mediante sntesis de productos de origen viral que interfieren con la
replicacin de un segundo virus.
Un ejemplo bien conocido de autointerferencia es el producido por las cepas atenuadas
de virus polio que constituyen la vacuna Sabin. Estas cepas, al ser administradas por va
oral replican en el intestino e interfieren con la adsorcin de las cepas salvajes de virus

polio. Este mecanismo es de corta duracin, ya que ocurre solamente cuando hay activa
replicacin viral en los primeros das posteriores a la administracin de la vacuna.
Posteriormente, se induce inmunidad local (IgA secretoria) y generalizada (IgM e IgG
sricas), las que producen una proteccin duradera.
1.2. Interferones
El estudio de los fluidos de cultivos celulares infectados con virus permiti a Isaacs y
Lindenmann en 1957 demostrar la presencia de una protena que protega contra una
amplia variedad de virus y que fue entonces designada con el nombre de interfern.
Hoy se sabe que los interferones son pptido que promueven la actividad antiviral en
clulas tratadas.
Los efectos antivirales de los interferones son inespecficos, ya que activan las clulas
sobre las que actan, contra todos los virus. La induccin de esta activacin es
genticamente restringida: a diferencia de las interleuquinas, los interferones solamente
pueden ser activos en limitado grado sobre clulas de una especie diferente a la de las
que originaron su sntesis.
Los interferones constituyen el primer mecanismo defensivo contra la infeccin viral que
opera en el husped. Su accin comienza al cabo de pocas horas de iniciada la infeccin.
Los interferones participan significativamente en la limitacin de las infecciones virales, lo
cual contribuye a la ocurrencia de un gran nmero de infecciones subclnicas.
Hasta la fecha se reconocen en el ser humano tres protenas o glicoprotenas con
actividad de interfern: son denominadas alfa, beta y gamma interfern, respectivamente
(tabla 2).
Todas ellas poseen diverso grado de las siguientes funciones: 1) antiviral; 2)
inmunorregulatoria; 3) inhibitoria del crecimiento celular; 4) antitumoral; 5) activadora de
macrfagos; 6) aumentadora de la citotoxicidad linfocitaria; 7) reguladora de la produccin
de interfern; 8) modificadora de las membranas celulares; 9) activadora celular por
mecanismos "tipo hormona".
1.2.1. Tipos de interfern inducidos por virus. La produccin de interfern alfa, beta o
gamma depende del tipo de virus infectante y de las interacciones celulares participantes.
Los virus pueden inducir la sntesis de interfern alfa humano a travs de 3 mecanismos:
1) mediante la infeccin e induccin directa de linfocitos (T, B o nulos) o macrfagos; 2)
mediante la infeccin de cualquier tipo de clula nucleada con expresin de antgenos
sobre la membrana citoplasmtica seguida de interaccin e induccin de linfocitos B o
nulos; 3) a travs de la adsorcin de virus o alguno de sus componentes sobre la
membrana celular con posterior interaccin e induccin de linfocitos B o nulos.
La sntesis de interfern beta es debida fundamentalmente a la infeccin de clulas
epiteliales o fibroblsticas.

A su vez, el interfern gamma se produce como resultado de la interaccin de los

antgenos virales con linfocitos T sensibilizados y posiblemente nulos (nunca linfocitos B).
Como ocurre con otras linfoquinas, la sntesis de interfern gamma requiere la produccin
de interleuquina 1 y la presentacin del antgeno por clulas accesorias singeneicas.
La estimulacin no inmunolgica de linfocitos T induce la produccin de interfern alfa
ms que de interfern gamma pero nunca una mezcla de ambas.
Sin embargo, dependiendo del tipo de clula involucrada, pueden producirse uno o ms
tipos de interfern simultanea o consecutivamente.
1.2.2. Induccin viral del interfern.
Hasta el presente se desconocen los mecanismos ntimos de induccin celular de
interfern, aunque se han propuesto diversos modelos.
Ante la infeccin viral de una clula, se produce la liberacin del genoma viral (ADN o
ARN). La presencia o replicacin genmica viral se asocia con fenmenos de
desrepresin gnica celular (20 genes del brazo corto del cromosoma 9 para interfern
alfa; 1 gen para interfern beta en el mismo cromosoma; y 1 gen en el brazo largo del
cromosoma 12 para el interfern gamma). Ello induce la sntesis de ARN mensajero para
interfern y traduccin mediante, en la produccin de interfern. Este es secretado al
fluido extracelular, donde podr interactuar con receptores para interfern expresados en
las clulas ya infectadas que le dieron origen, as como en aquellas clulas vecinas o
ubicadas a distancia que an no hubieran sido infectadas.
El interfern alfa y el beta comparten receptores, pero el interfern gamma tiene el propio.
Los receptores para el interfern alfa y beta son codificados por el cromosoma 21; para el
receptor de interfern gamma se requieren 2 componentes codificados por los
cromosomas 6 y 21.
El complejo interfern-receptor se moviliza hacia el interior celular, donde el interfern es
degradado en los lisosomas. Se ignora si la internalizacin es necesaria para la actividad
antiviral. Los receptores para interfern no son reciclados ni reexpuestos sobre la
membrana externa celular.
Los interferones son capaces de disminuir el cuantum viral en las clulas ya infectadas,
aunque generalmente son ms efectivos en la inhibicin de la replicacin viral de las
clulas vecinas o aquellas ubicadas a distancia, a medida que aumenta el nivel de
interfern y el tiempo de exposicin celular al mismo.
Mientras se produce la sntesis de interfern, ciertos virus pueden completar su ciclo
replicativo en una clula dada, dejar sta e infectar clulas vecinas. La sntesis de
interfern puede producirse al cabo de pocas horas de iniciada la infeccin viral y muchas
veces precede o es concomitante con la liberacin del virus. Dicha sntesis disminuye
merced a un efecto combinado de retroalimentacin negativa y por eliminacin de
inductores virales.

1.2.3. Respuesta celular inducida por interfern a la infeccin viral. Los interferones
inducen la degradacin del ARN viral y la inhibicin de la sntesis proteica a travs de
diferentes vas metablicas.
Una vez producida la unin interfern-receptor, se inicia un proceso de induccin celular
probablemente mediado por molculas seales. Estas molculas inducen la desrepresin
gnica celular de molculas efectoras antivirales: se sintetiza nuevo ARN mensajero y
traduccin mediante, se producen dichas molculas efectoras. Las funciones de estas
molculas no se conocen totalmente, pero estaran relacionadas a enzimas inducidas por
el interfern y a otras molculas que se mencionan en la figura 1.
Se desconoce el mecanismo de accin por el cual las molculas efectoras antivirales
inhiben ms los ARN mensajeros virales que los de la clula infectada.
Tabla 2. Caracteres diferenciales de los interferones alfa, beta y gamma.
Interferones
Caracterstica

Alfa

Estructura
Peso molecular
Agente inductor

Producido por

17.000

Beta

Gama

Protena

Protena

17.000

17.000

Infeccin viral
Infeccin viral
Mitgenos (linfocitos no
ARN de doble ARN de doble sensibilizados); antgenos
cadena
cadena
especficos (linfocitos
sensibilizados)
Leucocitos

Fibroblastos

Linfocitos

Genes identificados

20

Ubicacin cromosmica

12

Estabilidad a pH 2

No

Efectos sobre el
sistema inmune

+++

+++

+++

+++

+++

Efecto antiviral
Efecto inhibidor de la
multiplicacin celular

El nivel de la actividad antiviral de las molculas efectoras parecera ser regulado por las
concentraciones de interfern que interactan con los receptores y con la produccin de
un inhibidor de la actividad de interfern.
1.2.4. Transferencia de la actividad antiviral inducida por interfern. Adems de la
clsica va de induccin de actividad antiviral mediada por interfern, se ha observado un
segundo mecanismo por el cual clulas colindantes no expuestas a interfern adquieren
tambin un estado antiviral. Este proceso requiere del contacto intercelular para su
desarrollo.
Se ha demostrado que si se cocultivan clulas efectoras tratadas inicialmente con
interfern (activadas) con clulas alogeneicas o xenogeneicas sin tratar se produce un
estado antiviral en estas ltimas. Teniendo en cuenta que la actividad antiviral en las
clulas sin tratar es anterior a la sntesis de ARN mensajero de molculas efectoras
antivirales en las clulas activadas, se ha postulado que estas produciran molculas -de
naturaleza desconocida- responsables de la induccin de la sntesis de molculas
efectoras antivirales en las clulas receptoras. De estos hallazgos se desprende que la
transferencia de la actividad antiviral ampla el espectro de accin primitivo del interfern,
ya que clulas que responden lentamente a ste o que no han sido expuestas al mismo
pueden tambin desarrollar un estado antiviral.
Si bien se desconoce la importancia de este fenmeno en la limitacin de las infecciones
virales in vivo, se ha sugerido que podra ser fundamental en tejidos avasculares
(epitelios del tracto respiratorio, digestivo u ocular) y en aqullos accesibles al trnsito de
leucocitos (reas de infeccin e inflamacin).
2. RESISTENCIA ESPECFICA
La infeccin viral desencadena en el husped inmunocompetente el desarrollo de
mecanismos especficos de inmunidad adquirida tanto a nivel humoral (anticuerpos),
como a nivel celular, dirigidos contra distintos constituyentes del virin, as como contra
protenas no estructurales expresadas durante la infeccin.
La magnitud de la respuesta depender de muchos factores, tales como la naturaleza del
virus, la puerta de entrada del mismo, su forma de diseminacin, etctera.
Tanto la inmunidad humoral como la celular son fundamentales para limitar y terminar con
la infeccin e inducir resistencia duradera a las reinfecciones.
Diferentes estructuras virales antignicas pueden ser expuestas al sistema inmune del
husped como consecuencia de una infeccin viral. Ello puede deberse a la circulacin
linfohemtica de virus libres (o de algn componente subviral particulado o soluble) o a la
"expresin" en la superficie celular de pptido virales procesados o de glicoprotenas de
envoltura ancladas en aquella.
En el caso de las partculas virales intactas en circulacin se produce la estimulacin del
sistema inmune humoral por parte de los antgenos de superficie (presentes en la

envoltura de algunos virus o bien en la cpside de aquellos que son desnudos). En otros
casos, tambin se detectan anticuerpos contra productos de degradacin o clivaje de
componentes virales circulantes. Los linfocitos T citotxicos no pueden reconocer las
protenas virales (aisladas) en circulacin, ya que no estn presentadas en el contexto de
antgenos de clase I del complejo mayor de histocompatibilidad.
La expresin de antgenos de superficie del virin, o bien de protenas internas (por
ejemplo, nucleoprotenas de virus envueltos y algunas polimerasas) o no estructurales
producidas durante la replicacin viral luego de su procesamiento, como pptidos en la
membrana citoplasmtica de las clulas infectadas -en el contexto de antgenos de
histocompatibilidad de clase I- inducir el reconocimiento por los linfocitos T citotxicos de
aquellas clulas infectadas, lo que permitir la lisis de estas.
Es por ello que las infecciones causadas por virus que salen de la clula al lquido
extracelular mediante lisis (diseminacin de tipo 1) son fundamentalmente controladas
por la respuesta humoral, mientras que aquellos que lo hacen por brotacin -sin lisis(diseminacin de tipo 2) son limitadas principalmente por mecanismos de inmunidad
mediada por clulas. En este caso, los anticuerpos pueden participar en la neutralizacin
viral si existe viremia, o en la lisis de clulas infectadas con participacin del
complemento o de ciertas clulas citotxicas asesinas -killer o K- (fenmeno no
demostrado fehacientemente in vivo).
Si bien se describirn a continuacin separadamente los componentes humoral y celular
de la respuesta inmune, es menester tener presente su interrelacin: los linfocitos B son
ayudados por una subpoblacin de clulas T y, en ciertas circunstancias, suprimidos por
otra subpoblacin T. A su vez, las clulas K podran ejercer sus efectos dependiendo de la
presencia de anticuerpos como mediadores.
2.1. Inmunidad humoral
La respuesta srica de anticuerpos que se produce luego de un primer contacto con un
virus (respuesta primaria) es bifsica, presentando un pico a los 5-8 das postinfeccin,
seguido de otro pico a los 15-20 das (fig. 2).
Esto se debe a la aparicin secuencial de IgM y luego de IgG especficas. La IgA aparece
en suero en menor cantidad, despus de la IgM e IgG. La IgM decae a niveles no
detctables en tiempos variables para cada infeccin viral, en general al cabo de 2 3
meses. Por ello, su deteccin permite realizar un diagnstico de infeccin reciente. Por el
contrario, la IgG especfica dura en circulacin meses o aos, y a veces durante toda la
vida.
La intensidad y duracin de esta respuesta depende de la puerta de entrada y de la forma
de diseminacin del virus. Si ste se disemina mediante viremia, la estimulacin
antignica ser intensa y afectar a todo el tejido linfoide del organismo (ganglios, bazo,
mdula sea). Por ello, la respuesta de anticuerpos ser de gran magnitud. En las
respuestas secundarias a las infecciones virales (reinfecciones) puede haber una

respuesta anamnsica de IgM (de corta duracin), seguida de una importante produccin
de IgG.
Fig. 2. Infeccin viral aguda. Produccin de anticuerpos e interfern

Por el contrario, cuando el virus penetra por va mucosa y queda restringido a ella, por
ejemplo en infecciones respiratorias o intestinales, existir una produccin local de IgA
secretoria pero la respuesta srica ser de escasa magnitud.
Es menester destacar que la estimulacin producida por pequeas dosis de antgeno(s)
viral(es) durante perodos cortos induce la sntesis de IgM solamente. Una vez que el
estmulo cesa, el nivel de IgM disminuye hasta niveles no detectables. Por el contrario, la
estimulacin viral intensa, induce la sntesis de IgM y luego de IgG e IgA. Al cesar dicha
estimulacin, el nivel de IgM decae como en el primer caso, pero el de IgG se mantiene
por perodos variables. Ante un segundo contacto con el mismo antgeno viral, en el
primer caso se producir nuevamente una respuesta primaria de IgM, mientras que en el
segundo habr una respuesta inmune aumentada de tipo anamnsica.
Se ha detectado IgA secretoria especfica antiviral en secreciones respiratorias, oculares,
intestinales, genitales y en la leche materna.
La IgA se sintetiza localmente en los ndulos linfoides de la submucosa. Muchos virus
inducen la sntesis de IgA, como por ejemplo se observa en infecciones producidas por
virus cuya puerta de entrada es respiratoria (ortomixovirus, paramixovirus, adenovirus,
rubola, etc.), o entrica (hepatitis A, rotavirus, etc.).
La produccin local de IgA puede estimularse como consecuencia de infecciones
naturales o de inmunizaciones por va mucosa (tal como se observa en la prevencin
antipoliomieltica empleando la vacuna Sabin).

La respuesta de IgA ser ms intensa si se inmuniza con un virus capaz de replicar. En

este caso habr produccin de IgA secretoria y tambin de IgA srica. Por el contrario, si
el virus no es capaz de replicar y se inmuniza por va mucosa, la respuesta ser
solamente de IgA secretoria y de escasa magnitud. Esto sucede en la administracin
experimental de vacunas inactivadas por va mucosa.
La IgA tiene importancia en la resistencia a reinfecciones con virus respiratorios. La leche
materna, que contiene IgA especfica protege contra numerosos virus respiratorios y
entricos.
2.1.1. Papel de los anticuerpos en el control de las infecciones virales. Los
anticuerpos desempean en las infecciones virales diversas funciones: 1) eliminacin de
la infeccin primaria; 2) limitacin de la viremia; 3) limitacin de la enfermedad y
prevencin de las reinfecciones.
Como respuesta a los antgenos virales circulantes o asociados a clulas infectadas se
pueden producir anticuerpos especficos contra todos los constituyentes inmunognicos
del virin con los que el organismo toma contacto. Los anticuerpos dirigidos contra
constituyentes externos del virin sern capaces de "neutralizar" la accin del virin por lo
que se denominan neutralizantes. Estos anticuerpos estn dirigidos contra glico y/o
lipoprotenas (en los virus envueltos) y contra polipptidos de la cpside (en los virus
desnudos).
Los anticuerpos circulantes constituyen una barrera para evitar que los virus libres en el
espacio extracelular o en la sangre, puedan alcanzar los "rganos blancos". Estos
anticuerpos tambin previenen las reinfecciones, lo cual constituye el fundamento de la
inmunizacin activa mediante vacunacin o de la inmunizacin pasiva mediante la
transferencia de anticuerpos especficos, para disminuir la morbimortalidad de numerosas
enfermedades virales.
Cuando la infeccin viral es generalizada (sarampin, poliomielitis, rubola, etc.) la
inmunidad especfica que se desarrolla luego de la infeccin es de larga duracin, en
general de por vida y se debe a la presencia de anticuerpos neutralizantes en circulacin.
Habitualmente, la inmunidad es tipo-especfica lo que significa que protege contra el
mismo tipo antignico, pero no contra serotipos diferentes, los que sern capaces de
producir reinfecciones en ese husped. Cuando las infecciones quedan localizadas en las
mucosas (por ejemplo en infecciones del tracto respiratorio), la IgA secretoria es la que
previene la colonizacin y evita las reinfecciones mediante la neutralizacin del virus
infectante. Esta respuesta local de IgA es de corta duracin (1 a 4 aos); por ello se
pueden producir reinfecciones por el mismo serotipo y se selecciona en la comunidad la
circulacin de cepas que presentan mnimas diferencias antignicas: es el caso de las
variaciones menores observadas en el genoma del virus influenza.
2.1.2. Mecanismos de neutralizacin. La neutralizacin se define como la perdida de la
infectividad causada por los anticuerpos.

El mecanismo de neutralizacin viral no se conoce con exactitud pero la interaccin virusanticuerpo puede actuar en uno o ms de los siguientes pasos de la replicacin: 1)
inhibiendo la adsorcin del virin a receptores celulares previniendo la penetracin; 2)
inhibiendo la descapsidacin; 3) provocando la lisis inmune de las partculas mediante
anticuerpos y complemento (C), activado por la va clsica; 4) favoreciendo la fagocitosis
mediante opsonizacin y agregacin de las partculas virales.
El primer paso es la unin del anticuerpo a la superficie del virin, seguido de un cambio
conformacional en ambos reactivos La superficie viral posee estructuras indispensables
para mantener la infectividad de las partculas, denominadas sitios crticos y otras,
importantes para mantener la integridad estructural que se denominan sitios "no crticos".
Algunos virus poseen un slo sitio crtico (bacterifago T), otros poseen mltiples sitios
(influenza) y en otros toda la superficie se considera crtica para la infectividad (virus del
mosaico del tabaco).
Los sitios crticos son los blancos para los anticuerpos neutralizantes y su nmero,
tamao y localizacin en el virin tienen importancia en la reaccin de neutralizacin. Si el
anticuerpo esta dirigido contra un sitio no critico, cuando aquel se una al virin, ste
retendr su infectividad.
Actualmente se estn desarrollando numerosas vacunas compuestas por subunidades
del virin. Para que estas vacunas sean efectivas debern contener el sitio crtico para la
induccin de anticuerpos neutralizantes. Para el virus de influenza A se observ que es
fundamental mantener la integridad antignica de dos glicoprotenas de envoltura, la
hemaglutinina, y la neuraminidasa; en los virus de aftosa (virus que afectan al ganado)
slo una de las cuatro protenas de la cpside (VP1) es importante en la induccin de
anticuerpos neutralizantes.
Cuando los anticuerpos neutralizantes se unen a las partculas virales se produce una
agregacin de las mismas y por lo tanto se disminuye la infectividad. Por ello la
agregacin es un mecanismo de neutralizacin, aunque esto es dependiente de muchos
factores tales como concentracin viral, tamao de la partcula, tipo de anticuerpos, etc.
En algunas ocasiones (por ej. en el suero de etapas tempranas de la infeccin,
conteniendo anticuerpos de baja afinidad) es posible disociar las partculas y recuperar la
infectividad. En otros casos, esta ltima puede persistir: es la fraccin persistente an en
presencia de exceso de anticuerpos (anticuerpos no neutralizantes), hecho que se
atribuye a diversos factores como agregados de partculas, anticuerpos de baja afinidad o
factores estricos. Estas fracciones persistentes se observan en ratones infectados con
virus de coriomeningitis linfoctica y en pacientes infectados con hepatitis B o con virus
Epstein-Barr.
Existen factores accesorios en la neutralizacin viral que ayudan a los anticuerpos en
dicha funcin. Dentro de ellos, el ms importante es el complemento (C), debindose
mencionar tambin los llamados factores reumatoideos.

El C al unirse a los anticuerpos, a su vez unidos a una partcula viral, puede producir una
"virlisis inmune" o bien puede provocar alteraciones en la superficie de las partculas y/o
agregacin de las mismas. Las partculas opsonizadas y agregadas son ms fcilmente
fagocitadas por los macrfagos.
Los anticuerpos antivirales, unidos a las membranas de las clulas que expresan
antgenos virales tambin pueden activar el C, y como consecuencia lisar las clulas
infectadas.
El sistema de C puede ser activado por la va clsica: las clulas infectadas cubiertas con
anticuerpos promueven la activacin de C1 y subsiguientemente la cascada de
fenmenos de clivaje enzimtico que culminan con la formacin de un gran complejo
multimolecular (C5, C6, C7, C8 y C9). Sin embargo, la lisis celular no se produce si la va
de activacin alternativa del C esta alterada, indicando la incapacidad de la va clsica
para lisar las mismas per se.
Los anticuerpos no son requeridos para la activacin por va alternativa del C. Sin
embargo, paradjicamente, la IgG podra participar en este sistema aumentando el
depsito de C3b sobre la superficie celular, lo cual generara ms sitios para el clivaje de
C5 y el posterior ensamblaje e insercin del complejo C5b-9, con la consecuente lisis
celular.
A este fenmeno se suma la respuesta inflamatoria producida por diversos factores que
se liberan en la activacin del C (factores quimiotcticos, anafilotoxinas, etctera), el
aumento de la fagocitosis, y la presencia de clulas NK., entre otros.
2.2. Inmunidad celular
En trminos generales, las protenas solubles inducen una adecuada respuesta humoral,
pero raramente desencadenan una respuesta citotxica celular. La participacin de esta
ltima requiere de la sntesis del material inmunognico en el husped. La naturaleza de
los virus permite la intervencin de ambas respuestas. Como contrapartida, la utilizacin
de vacunas virales inactivadas o de pptidos sintticos no induce generalmente la
participacin de linfocitos T citotxicos.
En la figura 3 se esquematizan las interacciones celulares que operan en la respuesta
inmune celular y humoral frente a la infeccin viral.
Los linfocitos T pueden expresar el fenotipo CD4 + (ayudadores o de hipersensibilidad
retardada) o bien CD8 + (citotxicos o supresores). La subpoblacin ayudadora de los
linfocitos CD4+ colabora en las funciones de otras clulas T o con los linfocitos B. La
actividad ayudadora de los linfocitos CD4 + sobre los linfocitos T CD8 + supresores puede
contribuir a travs de estos ltimos a restringir la actividad de los linfocitos B y por ende,
limitar la produccin de anticuerpos.

Fig. 3. Mecanismos de resistencia a la infecci6n viral. 1. Infeccin viral de una clula

epitelial. Replicacin viral y expresin de antgenos virales en la membrana celular:
diferentes pptidos pueden ser presentados en la ranura formada por los dominios 1 y
2 de las molculas de clase I del complejo mayor de histocompatibilidad (Ag-I CMH). Los
inductores del interfern Ifn (cidos nucleicos genoma y antgenos Ag
virales y las clulas infectadas como tales) promueven la desrepresin de los genes del
Ifn . 2. Produccin de ARNm para Ifn . 3. Sntesis de Ifn . 4. Secrecin de Ifn al
lquido extracelular. 5. Unin a receptores de Ifn en la clula productora y en una clula
contigua, que es entonces activada. 6. Las clulas estimuladas desreprimen genes
codificadores de molculas efectoras antivirales (MEAV), necesarias para establecer la
resistencia antiviral. 7. Sntesis de ARNm de las MEAV. 8. Sntesis de las MEAV. 9-11. Las
clulas activadas estimulan a otras clulas contiguas por un mecanismo desconocido a
producir tambin MEAV. 12. La infeccin viral de leucocitos o el aflujo de estos a la zona
de colonizacin viral promueve la sntesis de Ifn . 13. Este Ifn circulante puede
proteger clulas blanco de rganos distantes. 14-15. Si el virus estimula ciertos linfocitos

nulos, es mitognico para linfocitos o esta presente ante la expansin clonal de linfocitos
T activados se sintetiza Ifn . En ste ltimo caso, ello ocurre slo luego de la liberacin
de interleuquina-1 (IL-1), IL-6 y el factor de necrosis tumoral (FNT) por las clulas
presentadoras de antgenos (CPA), cuya accin se cumple en el contexto de sus Ag de
clase II del CMH. 16. El Ifn potencia los efectos del Ifn y del Ifn . 17. Todos ellos
inducen adems una mayor expresin de Ag-I del CMH. 18. El Ifn potencia tambin
otros sistemas de defensa mediados por macrfagos y clulas NK. 19. Las clulas NK
pueden lisar las clulas infectadas.

Fig. 3 (continuacin) 20. Linfocitos T (LT) de ayuda CD4 + colaboran con el montaje de la
respuesta especfica celular y humoral, liberando IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IFn y FNT. 21-23.
Se produce la proliferacin clonal de LT CD8+ y de LB, bajo la estimulacin de IL-2 e IL-6,
con diferenciacin hacia clulas citotxicas y plasmocitos, respectivamente. 24. La
expresin aumentada de Ag-I del CMH en las clulas infectadas juntamente con la
presentacin de pptidos virales por dichas molculas, permite el reconocimiento de LT
citotxicos CD8+, los cuales lisan las clulas mediante la liberacin de perforinas (PF) y
un factor de desintegracin nuclear (FDN). 25-26. Los plasmocitos sintetizan y liberan Igs
M/G que pueden neutralizar el virus circulante. Si estos anticuerpos no estn dirigidos
contra sitios crticos, podrn promover igualmente la neutralizacin en presencia de
complemento (C), factor reumatoideo o anticuerpos antiglobulinas mediante la formacin
de agregados de partculas. 27-28. Estos anticuerpos pueden reconocer antgenos virales
expresados en las superficies celulares y unirse a ellos. El sistema del complemento -a
travs de la va alternativa (C')- puede tambin lisar la clula infectada. El papel de las Igs
en este mecanismo no esta determinado fehacientemente. 29. Un mecanismo de
citotoxicidad anticuerpo dependiente (CAD) mediado por diferentes clulas (Killer K-,
NK, M o polimorfonucleares PMN-) con receptor para el fragmento Fc de las Igs podra
participar en la lisis celular con la consiguiente limpieza viral.
Sin embargo, recientemente se han detectado linfocitos CD4 + citotxicos y CD8+
ayudadores tanto en estudios in vitro como en reacciones de rechazo de injertos in vivo.
Ello demuestra las dificultades de identificar las clulas citotxicas nicamente mediante
dichos marcadores.
La estimulacin viral del componente celular del sistema inmune del husped pone en
funcionamiento la actividad citoltica de las clulas NK y posteriormente de los linfocitos T
citotxicos.
2.2.1. Clulas NK. La actividad de las clulas NK es de induccin rpida (mediada por el
interfern o directamente por las glicoprotenas virales), inmunolgicamente inespecfica y
autolimitada. Su mecanismo probable de accin consistira en la liberacin de una
sustancia antignicamente relacionada a la fraccin C9 del sistema de complemento, la
cual ejercera similares efectos que dicha fraccin sobre las membranas celulares
alterando su integridad. Esta sustancia se conoce como perforina. Se ha sugerido que el
receptor para transferrina -ubicuamente distribuido en clulas metabolitamente activaspodra ser el blanco para la citlisis mediada por clulas NK.
La administracin de interfern alfa a pacientes incrementa la actividad de las clulas NK.
A su vez, se detectan clulas NK activadas en el curso de diversas infecciones agudas:
sarampin, mononucleosis infecciosa, parotiditis y enfermedad citomeglica, entre otras.
Recientemente se ha sugerido una correlacin entre la mortalidad asociada a infeccin
por citomegalovirus y un defecto de la actividad de estas clulas en pacientes
inmunosuprimidos sometidos a transplante de medula sea. Diversos virus son capaces
de inhibir la capacidad citotxica de las clulas NK in vitro. Ello podra constituir un

importante mecanismo de modulacin negativa de la respuesta del husped contra las

infecciones virales in vivo.
El linaje de las clulas NK se desconoce. Pueden reconocerse mediante su marcador de
superficie asialo GM 1.
2.2.2. Linfocitos T citotxicos. Los linfocitos T citotxicos reconocen sobre la superficie
de la membrana celular infectada un producto del antgeno viral procesado -asociado a
una molcula de clase I del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH)- a travs del
receptor de linfocitos T. Recientemente se ha demostrado en el ser humano que una
minora de linfocitos T citotxicos esta tambin restringida por molculas de clase II del
CMH.
El significado operacional de este fenmeno de restriccin ejercido por las molculas del
CMH es que los linfocitos T citotxicos migran hacia sitios donde reconocen clulas
infectadas como no propias, pero no pueden ser bloqueados o estimulados en su
actividad por la presencia de virus libre en sangre u otro fluido. Como ya fuera expresado,
los viriones libres, en cambio, son controlados por los anticuerpos neutralizantes, los que
pueden producirse en exceso rpidamente. La velocidad de la respuesta de linfocitos T
citotxicos es dependiente del porcentaje de linfocitos T precursores y del tiempo de
duplicacin de los linfocitos efectores.
Contrariamente a postulados anteriores, el antgeno viral no es presentado al linfocito T
citotxico inmerso en la membrana citoplasmtica. Si esto ltimo ocurriera, implicara que
slo los antgenos virales externos (por ejemplo de glicoprotenas de la envoltura de
aquellos virus que se liberan de la clula por brotacin) podran expresarse en las
membranas, y por ende, ser reconocidos como extraos. Sin embargo, muy recientes
experimentos demostraron que dichos antgenos virales no se encuentran anclados en la
membrana en protenas intactas, sino en pptidos cortos, productos de su procesamiento,
presentados al linfocito T citotxico por las molculas de clase I. Estos pptidos estn
unidos a la ranura ubicada entre los dominios alfa 1 y alfa 2 de las molculas de clase I
pueden originarse en cualquier protena viral, no slo en las glicoprotenas de los
antgenos externos, sino tambin en las nucleoprotenas, las polimerasas o las protenas
tempranas no estructurales. Ello implica el reconocimiento de la clula infectada -como
extraa- an antes de producirse la progenie viral. Todos los productos codificados por el
genoma viral quedan de esta forma sometidos a la vigilancia del sistema inmune: los
linfocitos citotxicos reconocen la asociacin entre el pptido del antgeno viral procesado
y la molcula de clase I del CMH.
Este reconocimiento induce una transduccin de la seal a travs de la membrana del
linfocito T, de la cual resultara la lisis de la clula infectada. Los linfocitos citotxicos
liberan al menos 2 sustancias: la perforina y un factor de desintegracin nuclear.
Se ha observado que pacientes infectados con citomegalovirus, varicela zoster o herpes
simples exhiben la respuesta antiviral ms importante de los linfocitos citotxicos dirigida
contra protenas expresadas inmediatamente en la infeccin.

En el caso de la mononucleosis infecciosa la infeccin de los linfocitos B por el virus de

Epstein-Barr produce la transformacin de los mismos. Esta poblacin celular se
encuentra tambin bajo el control de linfocitos T citotxicos.
Se detectan linfocitos T citotxicos en infecciones por virus influenza, sincicial respiratorio,
sarampin, parotiditis, de la inmunodeficiencia humana (HIV) y otros.
En la infeccin por virus de influenza existen linfocitos T citotxicos dirigidos contra la
mayora de las protenas virales, y principalmente contra la nucleoprotena. Esta protena
determina el tipo viral: A, B o C. Aquellos linfocitos T reaccionan in vitro produciendo la
lisis no slo frente a clulas infectadas por la misma cepa viral de un subtipo
determinado, sino tambin contra clulas infectadas por un subtipo diferente de un mismo
tipo (por ej. B1, B2 o B3 del tipo B), con el nico requisito de compartir antgenos de clase
I del CMH. Estos resultados demostraron que en esta infeccin, la mayora de los
linfocitos T citotxicos -aunque no todos- son tipo especficos y no dependientes de
antgenos de la superficie viral (hemaglutinina o neuraminidasa). Estos antgenos
determinan a su vez el subtipo de virus. Sorprendentemente, la minora de linfocitos T
citotxicos que son subtipo-especficos no parecen tampoco estar relacionados con la
expresin de dichos antgenos glicoproteicos de la superficie viral en la membrana de la
clula infectada.
Se desconoce el motivo por el cual los linfocitos T citotxicos que reaccionan
cruzadamente con diferentes subtipos virales in vitro no protegen frente a la infeccin por
un segundo subtipo in vivo.
Fue precisamente con el virus de influenza que A. R. M. Townsend y colaboradores
demostraron en 1986 que los receptores de los linfocitos T citotxicos reconocen ppticos
de antgenos virales internos procesados por la clula infectada, y presentados en
asociacin con molculas de clase I del CMH. Este trascendental descubrimiento fue
recientemente confirmado en infecciones con citomegalovirus, virus de la coriomeningitis
linfocitaria y otros agentes.
En pacientes con sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) o con complejo
relacionado al SIDA, se han detectado linfocitos citotxicos contra protenas codificadas
por los genes gag, pol y env aunque se desconoce si desempean algn papel en la
patogenia de la infeccin.
Hasta el presente existe una sola evidencia experimental de linfocitos T citotxicos que
reaccionan con hepatocitos infectados con virus de hepatitis B (VHB): linfocitos T de
sangre perifrica de pacientes con hepatitis crnica activa son capaces de lisar in vitro
hepatocitos autlogos infectados con VHB. Dicha lisis es inhibida con anticuerpos antiantgeno de core (anti HBc = anti-nucleocpside) pero no con anticuerpos anti-antgeno
de superficie (anti HBs). Aunque estos resultados concuerdan con estudios de
inmunofluorescencia demostrando antgeno HBc pero no HBs sobre la membrana de los
hepatocitos, los mismos son sorprendentes pues, con pocas excepciones, los anticuerpos
dirigidos hacia protenas virales no inhiben habitualmente el reconocimiento por linfocitos

T citotxicos. Por lo tanto, debe aguardarse una prueba definitiva de la existencia de esta
poblacin celular en un sistema mejor definido.
Sin embargo, es casi universalmente aceptada la hiptesis que postula que la injuria
heptica en la infeccin viral aguda esta mediada por linfocitos T citotxicos -dirigidos
contra uno o ms productos codificados por el genoma del HBV y expresados sobre la
membrana celular.
3. CONTROL DE LA INFECCIN VIRAL
Una vez producida la implantacin viral en la puerta de entrada al organismo (por ej. la
superficie del epitelio respiratorio o digestivo) se sintetizan elevados niveles de interfern
beta.
Este interfern se une a sus receptores e induce un estado antiviral en las clulas
vecinas. A su vez, sensibiliza clulas colindantes y dstales para producir ms interfern
luego de producirse la infeccin viral. Simultneamente, se inicia el mecanismo de
transferencia de la actividad antiviral inducida por interfern a clulas contiguas cuya
respuesta al mismo es ms lenta, o est limitada por el grado de accesibilidad de aquel.
La infeccin de leucocitos, a su vez, puede producir la liberacin de interfern alfa. Este
interfern puede ser tambin liberado por dichas clulas en el sitio inicial de implantacin
viral, una vez que las mismas confluyen en dicha zona. El interfern alfa difunde hacia la
circulacin con mayor eficacia que los tipos beta y gamma.
La interferonemia puede conferir proteccin a rganos ubicados a distancia donde podra
replicar el virus. La produccin de interfern gamma puede ocurrir ante alguna de las
siguientes situaciones: 1) efecto mitognico del virus sobre leucocitos; 2) estimulacin
viral de linfocitos nulos; o 3) mantenimiento de la presencia viral ante la aparicin de
linfocitos T sensibilizados. El interfern gamma es entonces capaz de potenciar los
efectos de los tipos alfa y beta.
La resultante de dichas interacciones es la amplificacin general del sistema: se producen
ms molculas efectoras con actividad antiviral y se potencian otros mecanismos
defensivos mediados por la activacin de clulas NK y macrfagos y de citotoxicidad
mediada por anticuerpos. La actividad mxima de las clulas NK tiene lugar a los 3 das
de iniciada la infeccin. En segundo trmino el interfern induce la expresin de
antgenos de clase I del complejo mayor de histocompatibilidad. Ello implica para estas
clulas dos efectos inmediatos: 1) disminucin de la sensibilidad a las clulas NK; 2) la
clula infectada se convierte en blanco para los linfocitos T citotxicos CD8 + que
aparecen aproximadamente a los 7 das de iniciada la infeccin.
Los linfocitos circulantes expuestos al interfern o que migran desde la zona de
implantacin del virus son capaces de inducir cierto grado de actividad antiviral en
diversos tejidos mediante el mecanismo de transferencia, an en ausencia de
interferonemia.

Recientemente se ha demostrado el sinergismo existente entre el sistema interfern y los

anticuerpos sricos antivirales: la coexistencia de ambos es capaz de potenciar ms de
mil veces el efecto que cada uno de ellos ejercera individualmente sobre la infeccin.
Todas estas interacciones funcionan en plenitud si el virus contina su replicacin y
diseminacin a distancia a rganos blanco. Debido a la respuesta inespecfica y
especfica del husped, esta situacin existe en un nmero limitado de casos.
Es menester subrayar, sin embargo, que el interfern no es la nica ni la ms importante
causa de recuperacin de una infeccin viral. Si as fuera, la produccin del mismo ante
una primera infeccin sistmica, o bien ante la administracin de una vacuna viral
atenuada, debera conferir proteccin contra cualquier virus no relacionado, al menos
durante un cierto lapso de tiempo. Sin embargo, este fenmeno no ocurre generalmente.
Slo parecera ser responsable de cierta proteccin temporal al ocurrir infecciones por un
virus en el tracto respiratorio o digestivo frente a otros agentes que penetran por la misma
puerta de entrada. Esto sugiere una limitacin temporoespacial del efecto del interfern:
su principal mecanismo antiviral sera la proteccin de clulas vecinas a las del sitio inicial
de implantacin viral durante un perodo restringido de tiempo.
4. INFECCIONES
CONGNITAS

VIRALES

EN

PACIENTES

CON

INMUNODEFICIENCIAS

Las inmunodeficiencias congnitas tienen escasa frecuencia en la poblacin general. Por

el contrario, existe un alto nmero de pacientes bajo distintos tratamientos
inmunodepresores debido a neoplasias o a transplantes de rganos. En los ltimos aos,
el incremento extraordinario de casos clnicos de SIDA y de pacientes con infeccin
asintomtico con este virus hace que cada vez sea mayor el nmero de pacientes con
inmunodepresin adquirida.
Muchos virus pueden producir infecciones graves, y an mortales en estos pacientes.
En pacientes con defectos de la inmunidad humoral (agammaglobulinemia en su forma
comn o ligada al sexo) pero con funcin T normal se observa una incidencia mayor de
poliomielitis paraltica. Recordemos que este virus se disemina al medio extracelular
mediante viremia (tipo 1 de diseminacin). Se ha establecido que esos pacientes seran
10.000 veces ms susceptibles a desarrollar poliomielitis luego de la vacunacin con
vacuna a virus vivo y atenuado (vacuna Sabin) que los sujetos normales. Tambin son
ms susceptibles a desarrollar infecciones persistentes con virus ECHO.
El virus del sarampin puede producir infecciones fatales (neumona a clulas gigantes)
en pacientes con inmunodepresin T o B.
En pacientes con defectos de la inmunidad celular suelen ser graves, y aun fatales las
infecciones por virus que se diseminan por brotacin (mecanismo tipo 2 de diseminacin),
tales como herpes simplex, varicela-zoster y citomegalovirus. Estos pueden producir
neumonas intersticiales, infecciones del sistema nervioso central o infecciones
diseminadas.

BIBLIOGRAFA
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Interferon 5. Academic Press Inc. New York. 1983.
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