EXMENES

BACTERIOLGICOS

PASOS GENERALES PARA LA

IDENTIFICACIN DE LAS
BACTERIAS

OBTENCIN DE LA MUESTRA
AISLAMIENTO Y SIEMBRA EN MEDIOS DE CULTIVO
A PARTIR DE LA MUESTRA BIOLGICA
INCUBACIN
MORFOLOGA COLONIAL Y
MICROSCOPICA

PRUEBAS BIOQUMICAS

PRUEBAS SEROLOGICAS

Procedimiento:

El paciente debe defecar en un recipiente limpio y

seco, sin mezclar con orina. (Si es lactante, tomar del
paal la muestra recin emitida)

Recipiente estril: frasco de boca ancha con tapa.

Introduzca directamente en el frasco de boca ancha,

ms o menos 1 a 2 grs. de la muestra;

La muestra debe enviarla al Laboratorio antes de una

hora de su obtencin si esta temperatura ambiente.

IMPORTANTE :
Informar si est tomando antibiticos
Identificar la muestra con nombre y fecha

AISLAMIENTO DE BACTERIAS EN
MEDIOS DE CULTIVO
Medios de cultivo
para el
aislamiento de
bacterias

No selectivo
Selectivo
EMB

AGAR SIMPLE

1.- La siembra y el aislamiento de bacterias se

realiza a partir de la muestra biolgica y se hace
junto al mechero para evitar contaminacin

2.- Con el asa esterilizada se toma el inculo

3.- Se deposita el inculo en el medio de cultivo con

movimientos circulares en un rea de
aproximadamente un 1 cm. llamada zona de
descarga

4.- Se tapa la caja de Petri y se esteriliza el asa

bacteriolgica a la flama del mechero

Una forma de separar a las bacterias para que

formen colonias, consiste en depositar
inicialmente en el medio de cultivo a las bacterias
juntas en una zona de descarga

Despus separarlas con una asa bacteriolgica,

realizando un arrastre con movimientos en zig zag
en cuatro cuadrantes, esterilizar el asa entre cada
uno de ellos

Quedan cuatro estras

cruzadas

Una vez que se han

sembrado las bacterias en
el medio de cultivo, es
necesario incubarlas a
37 C durante 24 horas para
que se reproduzcan y
formen colonias, que son
acmulos de una gran
cantidad de bacterias que
pueden ser detectadas a
simple vista

CRECIMIENTO BACTERIANO
SOBRE AGAR SIMPLE

CRECIMIENTO BACTERIANO
SOBRE EMB

El observar colonias diferentes

en un mismo medio de cultivo,
indica que se trata de bacterias
diferentes

CONSISTE EN DESCRIBIR LAS CARACTERSTICAS

MACROSCPICAS DE LA COLONIA

Tamao: puntiforme, pequeo, mediano, grande

Forma: circular, filamentosa, irregular, rizoide, fusiforme
Color: incoloras o de color
Elevacin: plana, convexa, acojinada, abultada, ondulada
Luz reflejada: brillante o mate
Luz transmitida: opaca, translcida, transparente
Borde: entero, ondulado, lobulado, crenado, filamentoso
Superficie: rugosa o lisa
Consistencia: dura, cremosa, butirosa, mucosa

 La

morfologa colonial nos permite

seleccionar a las colonias sospechosas de
patgenos en el caso de zonas colonizadas,
para continuar con ellas el proceso de
identificacin

En

caso de que la muestra biolgica

pertenezca a una zona estril, es necesario
identificar cualquier colonia que aparezca

La morfologa microscpica consiste en

determinar la forma, la agrupacin y el Gram al
que pertenecen que puede ser positivo o negativo

Este paso al igual que el de la morfologa

colonial nos va orientando hacia la identificacin
de la bacteria
Para poder observar la morfologa microscpica
es necesario observar a las bacterias al
microscopio, para lo cual es necesario hacer un
frotis y una tincin

1- Poner una gota de agua en un

portaobjetos limpio y seco

3- Con el asa bacteriolgica fra

tomar a las bacterias de la colonia
seleccionada tocndola levemente

2- Esterilizar el asa bacteriolgica

4- Mezclar a las bacterias con el agua,

con movimientos circulares

5- Esterilizar el asa bacteriolgica con

la flama del mechero

6- Dejar secar el frotis y fijarlo al

calor, pasndolo varias veces
sobre la flama del mechero de
manera rpida
7- Tocar con el dorso de la mano la
parte de abajo del portaobjetos, para
confirmar que no se ha calentado
demasiado, pues de ser as se
alterar la morfologa de las
bacterias

TINCIN DE GRAM
La

mayora de las bacterias son incoloras,

por lo que para poder observarlas con fines
de identificacin es necesario teirlas. Una
de las tcnicas ms usadas para stos fines
es la tcnica de Gram que nos permite
dividirlas en dos grandes grupos:

Gram (+)
Gram (-)

1- Tren de tincin de Gram

3- Cubrir el frotis con cristal

violeta por el lapso de 1

2- Poner el frotis bacteriano

sobre el puente de tincin

4- Enjuagar con agua

TINCIN DE GRAM

5- Cubrir el frotis con lugol

durante 1 minuto

7- Alcohol-acetona paso rpido

6- Enjuagar con agua

8- Enjuagar con agua

TINCIN DE GRAM

9- Cubrir el frotis con safranina

por 1 minuto

10- Enjuagar con agua, dejar

secar el frotis teido y observarlo
en el microscopio ptico

11- La morfologa microscpica

se observa con el objetivo de
inmersin 100x

Al teir a las bacterias

con la tcnica de Gram
las gram positivas se
tien de color morado
y las gram negativas
de color rojo, debido a
que existen diferencias
en la composicin
qumica de su pared
celular

Gram (+)

Gram (-)

 Es

un examen de laboratorio que permite

identificar por observacin directa al
microscopio a algunos parsitos; protozoarios,
helmintos, sus larvas o huevecillos
La

muestra utilizada es materia fecal

Procedimiento
El paciente debe defecar en un recipiente limpio y seco, sin
mezclar con orina. (Si es lactante, tomar del paal la muestra
recin emitida);
Coloque una porcin del tamao de una nuez en el frasco de
boca ancha
Las muestras deben obtenerse de 3 das seguidos hasta
completar las tres.

Si observa algn gusano, debe colocarlo en un frasco limpio con

agua de la llave y llevarlo al laboratorio con la muestra.

El estudio del gusano corresponde a una observacin

macroscpica que debe hacerse adicionalmente.

Conservar las muestras en refrigerador a 4C.

IMPORTANTE: identificar la muestra con nombre del paciente y

fecha.

Se requieren tres muestras de das consecutivos,

aunque pueden ser de das salteados
Se piden de das consecutivos para poder facilitar
su entrega en el laboratorio

Examinar tres muestras de materia fecal del

mismo paciente aumenta la probabilidad de
detectar a los parsitos intestinales

Las muestras del CPS deben analizarse el mismo

da que se tomaron, sobre todo si son diarreicas, si
son formadas se le pide a las personas que junten
las 3 muestras y las conserven en refrigeracin o
en un lugar seco y fresco; y una vez que las renan
las lleven al laboratorio

La muestra debe ser depositada en un frasco de

boca ancha limpio y seco, o bien en un copropac

COPROPAC

Examen macroscpico:
Se revisan las caractersticas fsicas de la muestra
buscando rasgos de sangre, moco o parsitos que se
pueden ver a simple vista

Examen microscpico:
La tcnica de Faust es una tcnica de
concentracin por flotacin para la deteccin de
parsitos intestinales microscpicos, sus larvas
o huevecillos

HELMINTOS
En algunas
ocasiones al hacer
el examen
macroscpico de la
muestra pueden
aparecer
progltidos de
Taenia sp.

PROGLTIDOS DE Taenia sp.

La tcnica de Faust es una tcnica que permite

aumentar la probabilidad de detectar a los
parsitos intestinales al concentrarlos en una
pelcula en la superficie del tubo de ensaye.
Su fundamento es la flotacin

La parte de la muestra de materia fecal que se

toma debe ser aquella donde se aprecie, moco o
sangre

TCNICA DE FAUST

1.-Tomar una porcin de materia

fecal con una varilla de vidrio

2.-Hacer una suspensin de materia

fecal con agua y vaciarla a un tubo de
ensayo de 13 X 100

3.- Centrifugar durante 1

minuto a 1500rpm

4.- Decantar y resuspender con

reactivo de Faust (sulfato de Zinc).
Llenar el tubo aproximadamente
hasta 1 cm abajo del borde con el
reactivo de Faust

5.- Centrifugar 1 minuto a

1500rpm

6.- Formar el menisco gota a

gota con reactivo de Faust

MENISCO

7.- Dejar reposar el menisco al

menos un minuto
8.- Tomar el menisco
tocando con el
cubreobjetos

9.- Dejar caer el cubreobjetos sobre

una gota de lugol en un portaobjetos
10.- Se pueden observar dos
muestras en un portaobjetos

11.- Observar al microscopio

con los objetivos de 10X y
40X

QUISTE DE Entamoeba coli

QUISTE DE Entamoeba histolytica

QUISTES DE Giardia lamblia

HUEVECILLO FRTIL DE
Ascaris lumbricoides

HUEVECILLO DE UNCINARIA

Los huevecillos de Taenia sp. y Enterobius

vermicularis pueden llegar a observarse en
un examen coproparasitoscpico, sin
embargo sto no es frecuente, por lo tanto el
CPS no es la tcnica de eleccin para su
diagnstico

Existen ms protozoarios, parsitos y

comensales que pueden encontrarse en un
examen coproparasitoscpico, aqu se han
ilustrado slo algunos de los ms
frecuentes en Mxico

Su objetivo es identificar el parsito en

cualquiera de sus estados a travs de
tcnicas directas o indirectas

*Directo:

Es la observacin del agente

etiolgico
y
su
caracterizacin
morfolgica.

Ejemplos:
*Examen en fresco
*Examen macroscpico
*Examen microscpico
*Mtodos de concentracin
*Mtodos cuantitativos
*Coloracin rpida

*Indirecto:

Deteccin indirecta del parsito, ya sea

por la respuesta humoral que desencadena el paciente o
por la ruptura de los antgenos que el parsito libera.

 Obtencin de la muestra fecal

Nmero de muestras

Conservacin y envo de muestras fecales

Examen
macroscpic
o

Examen
microscpico

estudio microscpico + anlisis

bioqumicos
pH

Azcares reductores
Sangre oculta
Prueba para
hemoglobina humana

Recuento en placa microscpica a partir de 2 mg de materias

fecales, se hace recorriendo toda la laminilla, el nmero total de
huevos x laminilla se multiplica por 500 para dar el resultado en
h.p.g
Tcnica de Kato-katz

Tincin de Romanowsky

Tincin de Tricromo

Tincin de Giemsa

Fierro-Hematoxilina