Guia de Bioquimica

UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO
FARMACIA Y BIOUIMICA
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL

CUSCO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD.

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIQUIMICA
Gua
Docente
: PRCTICAS DE BIOQUIMICA CLINICA

: Q.F. CARLOS ENRIQUE CHALLCO APAZA
BIOQUMICO - FARMACUTICO
2015 - II
Q.F. CARLOS E. CHALLCO APAZA
Pgina

PRACTICA N 1
BIOSEGURIDAD
1.- FUNDAMENTO.Las normas de bioseguridad estn destinadas a reducir el riesgo de
transmisin de microorganismos de fuentes reconocidas o no
reconocidas de infeccin en Servicios de Salud vinculadas a accidentes
por exposicin a sangre y fluidos corporales.
2.- COMPETENCIAS: Las competencias del alumno de Medicina son:
Cumplir con las medidas de prevencin de accidentes del personal

de salud que est expuesto a sangre y otros lquidos biolgicos.
La conducta a seguir frente a un accidente con exposicin a

dichos elementos.
Demuestra respeto por la vida humana mediante comportamiento
tico y solidario en su actuar profesional.
3.- PRINCIPIOS DE LA BIOSEGURIDAD

1. Universalidad: Las medidas deben involucrar a todos los
pacientes, trabajadores y profesionales de todos los servicios,
independientemente de conocer o no su serologa. Todo el
personal debe seguir las precauciones estndares rutinariamente
para prevenir la exposicin de la piel y de las membranas
mucosas, en todas las situaciones que puedan dar origen a
accidentes, estando o no previsto el contacto con sangre o
cualquier otro fluido corporal del paciente. Estas precauciones,
deben
ser
aplicadas
para
todas
las
personas,
independientemente de presentar o no enfermedades.
2. Uso de barreras: Comprende el concepto de evitar la exposicin
directa a sangre y otros fluidos orgnicos potencialmente
contaminantes, mediante la utilizacin de materiales adecuados
que se interpongan al contacto de los mismos. La utilizacin de
barreras (ej. guantes) no evitan los accidentes de exposicin a
estos fluidos, pero disminuyen las probabilidades de una
infeccin.
3.
Medios
de
eliminacin
de
material
contaminado: Comprende el conjunto de dispositivos y
procedimientos adecuados a travs de los cuales los materiales
utilizados en la atencin de pacientes, son depositados
4.- BIOSEGURIDAD EN SALUD OCUPACIONAL.-Se la define como El

conjunto de medidas preventivas y correctivas, destinadas a que los
procedimientos realizados en Instituciones sanitarias humanas y
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animales no afecten la salud y seguridad de trabajadores, pacientes,

visitantes y medio ambiente.
Se refiere a prevenir y tratar la exposicin a agentes infecciosos.
La base es el Sistema de Precauciones Universales que fue
establecido por un grupo de expertos del Centro de Control de
Enfermedades (C.D.C) de Atlanta, en 1987, con guas para prevenir
la transmisin de los pacientes hacia los trabajadores de la salud y
viceversa.
PRINCIPIO BASE:
Todos los pacientes y sus fluidos corporales,
independientemente del diagnstico, deben ser considerados
como infectados e infectantes y tomarse las precauciones
necesarias para prevenir la transmisin
5.-CLASIFICACIN DE LAS REAS SEGN EL RIESGO.-A diario el
trabajador de salud labora en ntimo contacto con pacientes, por lo
que existe la posibilidad de transmitir y contraer enfermedades
infecciosas durante la atencin mdica. Segn el rea se clasifica:
a) reas de alto riesgo crticas.-Son aquellas en las que existe
contacto directo y permanente con pacientes y sus fluidos
corporales.
Salas de ciruga.
Servicios de urgencias.
Hospitalizacin.
Rayos X de urgencias.
Unidades de cuidados
Laboratorio clnico.
intensivos.
Banco de sangre.
Neonatologa.
Odontologa.
Unidades de quemados.
Patologa.
Salas de parto.
Lavandera.
Unidades spticas.
Depsitos de desechos
Unidades de dilisis.
finales.
Urologa.
b) reas de riesgo intermedio semicrticas.-reas de
actividades en donde el contacto con sangre o lquidos
corporales no es permanente:
Consulta externa.
Servicios de alimentacin.
Esterilizacin.
Servicios de
mantenimiento.
Fisioterapia.
Servicios de limpieza y
Rayos X de hospitalizacin.
aseo.
reas de preparacin de
soluciones enterales y
parenterales.
c) reas de bajo riesgo no crticas.-reas donde se realizan
actividades que no implican por s mismas exposicin a sangre y
lquidos corporales:
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reas administrativas
Pasillos
Salas de espera
Farmacia
Oficina de nutricin.
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UNIVERSIDAD ANDINA DEL CUSCO

P.A.P. MEDICINA HUMANA
6.- TABLA DE NIVELES DE BIOSEGURIDAD

Los niveles de bioseguridad son estndares internacionales
y su clasificacin est dada en funcin del grado de letalidad
de las enfermedades
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7.- CUESTIONARIO
Indique cul es el objetivo de la bioseguridad?
Cules son los lquidos para los que deben
observarse las Precauciones Universales
Realice un plan de trabajo para evitar
contaminaciones en laboratorio?
Indicar los colores frecuentes usados en laboratorio
sobre bioseguridad y para qu sirven?
indique los principios bsicos de la bioseguridad?
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PRACTICA N 2
TOMA DE MUESTRA - VENOPUNCION
1.- FUNDAMENTO.- Se practica cuando el Medico

solicitante ordena un anlisis de sangre para confirmar o
descartar su diagnostico clnico.
2.- COMPETENCIAS.-
Que el alumno aplique los conocimientos y actitudes que se

desarrollan dentro del laboratorio.
Analiza la importancia y utilidad de la venopuncin.
Aplica la tcnica de la venopuncin.
Aprende a extraer muestra de sangre.
Aprende a utilizar el Vacutainer
Los exmenes hechos en la sangre o en partes de sta le

pueden suministrar claves importantes al mdico acerca de
la salud de la persona, orientndolo hacia el diagnstico y/o
tratamiento.
3.- METODOS.-El profesional de la salud coloca una banda

elstica o torniquete alrededor de la parte superior de la
zona que se va a punzar con el fin de aplicar presin en el
rea y hacer que las venas se llenen de sangre. El sitio de
puncin se limpia entonces con un antisptico, la mayora de
las veces con alcohol isoproplico.
Algunos profesionales de la salud escogen golpear con

suavidad sobre la superficie de la piel por encima de la vena
para causar una dilatacin venosa refleja. Otros prefieren
evitar esa prctica.
4.- PROCEDIMIENTO
TENER CUIDADO DE:
PARA
TOMAR
LA
MUESTRA:
Escribir el nombre del sujeto sobre los tubos que se va a llenar.
Usar guantes de goma protectores para asegurar las medidas de

precaucin universal.
Una vez escogida la vena apropiada para la puncin (vena

mediana baslica que es ms superficial). Se limpia la zona de
puncin, con alcohol al 70 % no se debe volver a tocar dicha zona.
La aguja debe apuntar en la misma direccin que la vena, bisel
hacia arriba.
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La sangre comenzara a penetrar en la jeringa. Tan pronto la aguja

entre en la vena y se obtenga una cantidad de sangr se retira el
torniquete y luego se retira la aguja.
Se coloca una torunda de algodn sobre el sitio de la puncin y se

comprime con los dedos de la otra mano no se flexiona el codo.
La sangre extrada en el tubo dejar coagular 10 min y luego

centrifugar para obtener el suero.
5.- COMPLICACIONES QUE SE PUEDEN PRESENTAR EN

LA TOMA DE MUESTRA:
Sincope (Prdida repentina del conocimiento y de la sensibilidad,

debida a la suspensin sbita y momentnea de la accin del
corazn
En algunos pacientes con tendencia a las hemorragias, puede
producirse una estribacin local de la sangre. Aplicando una
presin adecuada (torunda) sobre el lugar de puncin se evita la
formacin de hematomas.
Despus de una serie de punciones venosas repetidas puede
producirse trombosis (Formacin de un trombo en el interior de un
vaso sanguneo). O flebitis (inflamacin de las venas).
La aguja usada debe desecharse en un recipiente adecuado.
CUESTIONARIO
DEFINA VENOPUNCION?
INDIQUE LOS PASOS A SEGUIR DURANTE TODO EL

PROCESO DE TOMA DE MUESTRA SANGUINEA
(VENOSA Y ARTERIAL)?
INDICAR LOS USOS DE LOS DIFERENTES TUBOS

OBSERVADOS DURANTE LA PRCTICA?
QU MATERIALES SE UTILIZA PARA LA PRACTICA?
CUALES SON LAS PRECAUCIONES QUE SE DEBE

OBSERVAR EN LA TOMA DE MUESTRA?
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PRACTICA N 3
DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES Y

ALBUMINAS
1.- FUNDAMENTOS DEL METODO:
Las protenas del suero se tratan con SO4Cu en presencia de
tartrato alcalino de sodio y potasio para dar una coloracin
violeta estable (reaccin de Biuret), la cual se valora por foto
colorimetra. La cantidad de color producido es proporcional
a
la
concentracin
de
protenas
y
es
medida
espectrofotomtricamente a 540 nm. En conclusin los
enlaces peptdicos de las protenas reaccionan con el in
cprico, en medio alcalino, para dar un complejo color
violeta con mximo de absorcin a 540 nm, cuya intensidad
es proporcional a la concentracin de protenas totales en la
muestra.
2. COMPETENCIAS.Que el alumno tenga una definicin correcta de las protenas.

Que el alumno explique las funciones principales de las protenas.
Conocer la importancia de las protenas plasmticas.
Conocer la importancia nutricional de las protenas y los
aminocidos.
Manejar la tcnica de cuantificacin de protenas totales y
fraccionadas en suero humano, e interpretar los resultados
correctamente.
3.- SIGNIFICACION CLINICA

Las protenas son compuestos orgnicos macromoleculares,
ampliamente distribuidos en el organismo y esenciales para
la vida. Actan como elementos estructurales y de
transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas,
anticuerpos, factores de coagulacin, etc.
La protena ms abundante en plasma es la albmina. Una
de sus funciones ms importantes es la de permitir el
transporte de cidos grasos, hormonas esteroides,
bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son insolubles
en medio acuoso.
La concentracin de albmina en plasma influye notablemente en el mantenimiento de la presin coloidosmtica, lo
que estara relacionado con su relativamente bajo peso
molecular y su gran carga neta.
En condiciones patolgicas como prdidas renales, desnutricin, infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse
hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma
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mltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentraciones de

diversos orgenes, se observan hiperproteinemias.
En general, ambas situaciones se ven acompaadas tambin por hipoalbuminemias. Los aumentos anormales de
albmina son ocasionales y se relacionan casi siempre con
deshidratacin que produce el consecuente aumento en el
contenido proteico del plasma.
4.-SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES:

Los niveles superiores a los normales en SUERO puede
deberse a:
Enfermedades Inflamatorias crnicas
Enfermedades infecciosas crnicas ( VIH, Hepatitis B o C)
Mieloma mltiple.
Enfermedad de Waldenstrom.
Deshidratacin
(
hiperproteinemia
debido
a
la
hemoconcentracin)
Los niveles inferiores a los normales puede deberse:
Agamaglobulinemia
Enf. Heptica
Sangrado
Mala absorcin
( hemorragias)
Desnutricin
Quemaduras
Enteropata
por
( extensas)
perdida de protena
Glomerulonefritis
5.- MATERIALES Y METODOS:
Biolgico. Utilizar suero libre de hemolisis.
Reactivo 0.5% (peso/volumen) yoduro de potasio, 0.9%
(peso/volumen) tartrato de sodio y potasio, 0.3% (peso/ volumen)
de sulfato cprico. ( Reactivo de Valtex).
Equipo requerido: Espectrofotmetro con absorbancia de 540nm.
5.1. METODOS:
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Mezclar con varilla. Incubar en BM por 15 min a 37C ,
leer las absorvancias a 540 nm llevando a cero el
espectrofotmetro con el blanco de reactivo. El color
resultante es estable por a lo menos treinta minutos.
6.-PRECAUCIONES.-Puede ser txico si se ingiere. No
pipetee con la boca.
7. RESULTADOS.- Se realizan mediante la formula
Concentracin Standard g/dl
Factor = -------------------------------------Absorbancia Standard
Protena Total gr/dl = Factor (27gr/dl) x
Absorbancia del desconocido.
8. VALORES DE REFERENCIA
Protenas totales: 6.1 a 7,9 g/dl.
VALORES NORMALES DE PROTENAS EN SUERO
Los valores normales en adultos son entre 6 y 8,3 gr/dl
Los valores normales en prematuros son entre 4,2 y 7,6
gr/dl
Los valores normales en recin nacidos son entre 4,6 y 7,3
gr/dl
Los valores normales en lactantes son entre 6 y 6,7 gr/dl
Los valores normales en nios son entre 6,2 y 8 gr/dl.
9.- CUESTIONARIO
Cules son las razones por las que se realiza el
examen de protenas totales?
Indique cules son las interferencias en el desarrollo
de la prctica?
Realice el flujo grama del procedimiento hasta la
obtencin de resultados?
existe relacin entre la intensidad de la coloracin y
la concentracin de proteinas?
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1.- FUNDAMENTOS DEL METODO

La albmina reacciona especficamente -sin separacin previa- con la forma aninica de la 3,3',5,5'-tetrabromo
cresolsulfon ftalena (BCF), en presencia de un exceso de
colorante, en medio tamponado a pH 3,8. El aumento de
absorbancia a 625 nm respecto del Blanco de reactivo, es
proporcional a la cantidad de albmina presente en la
muestra.
2.- COMPETENCIAS.-
Analizar la importancia que tiene la albumina.
Conocer los valores normales de albumina.
Entender cmo influye la alimentacin.
DETERMINACION DE ALBUMINAS
3.- SIGNIFICANCIA CLNICA.- La albmina es la protena

de ms concentracin en la sangre. La albmina transporta
muchas molculas pequeas (bilirrubina, progesterona, y
medicamentos), y tiene tambin la funcin de mantener la
presin sangunea ya que favorece la presin osmtica
coloidal para mantener lquidos en el torrente sanguneo y
que no pasen a los tejidos, manteniendo un equilibrio. Por
ello la concentracin de albmina en la sangre es mucho
mayor que la del sodio o cloro, a diferencia de los tejidos en
los que ocurre lo contrario. La albmina representa el 60%
de las protenas que contiene el suero, el resto son las
globulinas.
4.-VALORES BAJOS DE ALBUMINA EN SANGRE SE

PUEDE DEBER:
Mal nutricin
Ascitis
Enfermedades
renales
(glomerulonefritis,
sndrome nefrtico)
Enfermedades del hgado
(hepatitis, cirrosis)
Enfermedades intestinales
con mala absorcin
5.- METODOS:
Quemaduras
Insuficiencia
cardiaca
congestiva
Cncer como el sarcoma o
amiliodosis.
Infecciones
como
la
tuberculosis.
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Mezclar con varilla. Mantener los tubos entre 15 y 28 o C

durante 10 min. Leer en espectrofotmetro a 625 nm llevando
a cero con el blanco del reactivo estable 20 min.
6.- RESULTADOS.- Se realizan mediante la formula
Albumina (mg/dl) = Factor ( 15) x Absorbancia

desconocida.
7.- VALORES DE REFERENCIA.-
Albumina: 3,5 a 4,8 g/dl.
Relacin A/G 1,2 a 2,2
8.- CUESTIONARIO
Para que se realiza el anlisis?
Indique cuando tenemos valores elevados y si tiene

importancia clinica?
Explique sobre la relacin albumina /globulina y su

importancia?
Qu color es la reaccin de las albuminas y tiene relacin

con la concentracin?
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PRACTICA N 4
SEPARACIN DE PROTENAS POR
DILISIS
1.- FUNDAMENTO.-Las protenas son los materiales que

desempean un mayor nmero de funciones en las clulas de
todos los seres vivos.
Por un lado, forman parte de la estructura bsica de los tejidos

(msculos, tendones, piel, uas, etc.) y, por otro, desempean
funciones metablicas y reguladoras (asimilacin de nutrientes,
transporte de oxgeno y de grasas en la sangre, inactivacin de
materiales txicos o peligrosos, etc.).
Tambin son los elementos que definen la identidad de cada ser

vivo, ya que son la base de la estructura del cdigo gentico
(ADN) y de los sistemas de reconocimiento de organismos
extraos en el sistema inmunitario.
Son macromolculas
orgnicas, constituidas bsicamente por carbono (C), hidrgeno
(H), oxgeno (O) y nitrgeno (N); aunque pueden contener
tambin azufre (S) y fsforo (P) y, en menor proporcin, hierro
(Fe), cobre (Cu), magnesio (Mg), yodo (I), etc.
Lo anterior determina que las protenas sean incapaces de

atravesar membranas semipermeables, lo que posibilita que una
solucin en donde existen protenas y otros constituyentes de
menor peso molecular (aminocidos, monosacridos, urea
creatinina, sales iones etc.) las primeras pueden ser separadas al
no poder pasar atreves de los poros de las membranas
semipermeables; en tanto que los otros constituyentes, de menor
peso molecular, pasaran sin problema alguno.
2.-COMPETENCIAS:
Aprende a aislar las protenas de alto peso molecular del suero

sanguneo.
Analiza el carcter macromolecular de las protenas, al utilizar un

mtodo para separarlas de otros componentes de menor peso
molecular.
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Identificara los dos grandes tipos de protenas (albuminas y

globulinas) por su solubilidad en agua y en soluciones salinas
diluidas.
Estudiar el efecto de la fuerza inica sobre la solubilidad de las

protenas del suero sanguneo.
Constatara la accin del acido tricloroacetico (TCA) como agente

precipitante de las protenas.
3.- METODO.- Dilisis del suero sanguneo utilizando como

membrana semipermeable una bolsa de celofn.
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4.- PROCEDIMIENTO.1. Medir en el interior de una bolsa de celofn, 5 ml de suero

sanguneo y cerrar la bolsa.
2. Colocar la bolsa de celofn en el interior de un beaker
conteniendo agua destilada, la misma que debe ser renovada
cada cierto tiempo (20 minutos).
3. Al notar algo de precipitado en el interior de la bolsa, vaciar su
contenido a u tubo de centrifuga y centrifugar por 5 min. a 2500
rpm.
4. Separar el sobrenadante en un tubo de ensayo y aadir 5 ml de
acido tricloroacetico al 10 % . Observar lo que sucede.
5. Trate de disolver el precipitado que quedo en el tubo de centrifuga
utilizando agua destilada, de no ser posible, aada unas gotas de
NaCl al 10 % y observar si dio resultado.
5.- RESULTADOS:
1. Escriba si observo precipitado en el interior de la bolsa y a que

puede corresponder.
2. Que observo al aadir el cido tricloroacetico al 10 %, explique la
reaccin.
3. Fue posible disolver el precipitado del tubo con agua destilada,
investigue porque.
4. Que ocurri al aadir el NaCl al 10 %.
5. Qu es fuerza inica?
6.-CUESTIONARIO:
Porque es necesario renovar el agua destilada del beaker

cada cierto tiempo?
Cul es el fundamento de la precipitacin de las protenas

por el cido tricloroacetico?
Investigue que es dilisis y para qu sirve?
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Explique y de un ejemplo de solucin hipotnica,

isotnica, hipertnica?
Pgina

PRACTICA N 5
DETERMINACION DE AMILASA EN SANGRE ( AMILASEMIA )
El sustrato, almidn tamponado, se incuba con la muestra,
producindose la hidrlisis enzimtica. Esta se detiene por el
agregado de reactivo de iodo, que al mismo tiempo produce color
con el remanente de almidn no hidrolizado. La disminucin de
color respecto de un sustrato color (sin muestra) es la medida de
la actividad enzimtica, que se expresa en Unidades Amilolticas
(Smith & Roe) /decilitro (UA/dl), comparables con las Unidades
Sacarognicas (Somogyi)/decilitro.
2.-. SIGNIFICACION CLINICA
La amilasa, producida en el pncreas excrino y en las glndulas

salivales, escinde los enlaces 1-4 glucosdicos de los polisacridos (almidn
y glucgeno).
Se encuentra elevada en el suero de pacientes con pancreatitis aguda,

alcanzando los valores ms elevados entre las 24 y 30 horas posteriores al
ataque, declinando luego para volver a los niveles normales entre las 24 y 48
horas siguientes.
Tambin se ve aumentada en este caso la excrecin urinaria de la

enzima, persistiendo la hiperamilasuria 3 a 5 das, luego de que la actividad
srica ha alcanzado los niveles normales.
Tambin es posible encontrar valores aumentados en cualquier caso de

"abdomen agudo" o intervencin quirrgica en regiones prximas al
pncreas.
Las parotiditis bacterianas y paperas se asocian tambin con

elevaciones en los niveles de amilasa srica.
Es una prueba que mide la cantidad de la enzima amilasa en la

(sangre). La amilasa se puede tambin probar en orina.
3. PREPARACIN PARA EL EXAMEN.- Se debe evitar el

consumo de alcohol antes del examen. Es posible que el mdico
aconseje la suspensin de medicamentos que pueden afectar los
resultados de ste. Los medicamentos que pueden aumentar las
mediciones de amilasa son, entre otros: asparraguinas, aspirina,
frmacos colinrgicos, corticoesteroides, indometacina, diurticos
de asa y tiazdicos, metildopa, opiceos (codena, morfina),
anticonceptivos orales (pldoras anticonceptivas) y pentazocina.
4. RAZONES POR LAS QUE SE REALIZA EL EXAMEN.-Este

examen se realiza principalmente para diagnosticar o controlar
enfermedades del pncreas e igualmente puede detectar algunos
problemas del tubo digestivo. La amilasa es una enzima que
ayuda a digerir el glucgeno y el almidn, y es producida
Pgina

principalmente en las glndulas salivales, pncreas, hgado y

trompas de Falopio. Cuando el pncreas se enferma o se inflama,
la amilasa se escapa hacia la sangre.
5. VALORES NORMALES.-El rango normal es de 23 a 85 U/L.

Algunos laboratorios dan un rango de 40 a 140 U/L.
6.- SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES: Los

niveles elevados de amilasa pueden indicar: (investigue y
fundamente su respuesta)
Pancreatitis aguda
La disminucin de los niveles de amilasa puede indicar:
Dao al pncreas
Enfermedad renal
Cncer pancretico
Toxemia del embarazo
Otras afecciones bajo las cuales se puede realizar el examen son:
Pancreatitis crnica
Cetoacidosis diabtica
Seudoquiste pancretico
CUESTIONARIO
Indique cules son los valores normales de amilasa
srica?
tiene relacin la intensidad de color con la concentracin
de amilasa?
Qu cuidados se debe tener durante el procedimiento y
cuales son los interferentes en la reaccin?
Por qu es importante su determinacin?
Pgina

PRACTICA N 6
FACTORES QUE DETERMINAN LA ACTIVIDAD
DE LA CATALASA
EN TEJIDO ANIMAL Y EN
SANGRE
1.- COMPETENCIAS.Analiza la presencia de la enzima catalasa en una muestra de
tejido animal
(Hgado) y en la sangre.
Interpreta el efecto de la temperatura en las reacciones
enzimticas.
Observa el efecto de un inhibidor sobre la catalasa.
2.- INTRODUCCION.- Las enzimas son protenas que catalizan las

reacciones qumicas en los seres vivos con una elevada eficiencia
(actividad molar).
2H 2 O2
Catalasa
2H2 O
+ O2
Esta
enzima es una hemoproteina, considerada as por la
presencia del grupo hemo que constituye su sitio cataltico.
La catalasa aumenta la velocidad de la reaccin en 10 - 10, la
regin de la enzima que participa en la reaccin se denomina
centro activo, es a travs de este lugar que se puede explicar la
eficiencia de las enzimas.
3. MATERIALES Y REACTICOS.- Muestra, suero, perxido de

hidrogeno, sulfato de cobre (Reactivo de Biuret).
1.
2.
3.
4.
5.
4. PROCEDIMIENTO.Pesar 10 g de muestra.
Licuar con 30 ml de agua destilada.
Centrifugar a 3500 rpm por 15 min.
A 3 ml del sobrenadante, aadir 5 ml de perxido de hidrogeno.
Observar el burbujeo que se produce.
5. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD DE

LA CATALASA. Medir un volumen de agua, colocar en un tubo de ensayo y dejar a
temperatura ambiente; enseguida adicionar al mismo tubo
solucin de catalasa, agitar y medir la altura de la espuma
producida.
Realizar el mismo procedimiento a diferentes temperaturas,
( TA,28,40,60 4 C.).
Pgina

6.- EFECTO DE UN INHIBIDOR.-Medir un volumen de perxido

de hidrogeno agregar la solucin de catalasa y el inhibidor
correspondiente, midiendo la altura de espuma producida.
CUESTIONARIO
Investigue que otros factores influyen en la reaccin de
las enzimas.?
importancia de la reaccin de la catalasa?
explique con graficas la reaccin que observo?
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PRACTICA N 7
DETERMINACION DEL INDICE DE GLICEMIA
1. FUNDAMENTOS DEL METODO.El esquema de la reaccin es el siguiente:

Glucosa + O2 +H2O
-----GOD
Acido glucnico +
H2O2
2H2O2 + 4-AF + Fenol ---------POD
Quinona coloreada + 4
H2O
La glucosa reacciona con el reactivo enzimtico que contiene la
mezcla de enzimas glucosa oxidasa (GOD) y peroxidasa (POD).
En la primera etapa la glucosa es oxidada enzimaticamente por la
GOD (glucosa oxidada)a cido gluconico y agua oxigenada, el
agua oxigenada formada es separada por la enzima POD
(peroxidasa) que reacciona con el 4-AF (sol de 4- aminofenazona)
producindose un compuesto coloreado quinona coloreada ms
agua con un mximo de absorcin a 505 nm en cantidad
proporcional a la cantidad de glucosa presente:
La patologa ms comn relacionada con el metabolismo de los
hidratos de carbono es la diabetes mellitus. El diagnstico precoz
y el control de los pacientes diabticos, tienen por objeto evitar la
cetoacidosis y las complicaciones de los sntomas resultantes de
la hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado.
Dado que existen mltiples factores causales de hiper o
hipoglicemia, debe considerarse en cada caso la condicin
fisiolgica y/o la patologa presente en el paciente en cuestin.
3.- COMPETENCIAS.-
Conocer la importancia de los carbohidratos en la nutricin del ser

humano.
Explicar el proceso de digestin de los glcidos, su mecanismo de

transporte y el
destino de estos en el cuerpo humano.
Describir las reacciones enzimticas de la va glicoltica sobre la

generacin de
energa as como su regulacin.
Conoce las condiciones para la toma de muestra.
Pgina

Conocer los efectos metablicos de la insulina.
Aprende cual es la alimentacin y cuidados del diabtico.
Al finalizar la sesin educativa, los alumnos sern capaces de

realizar por si solos y sin errores, la tcnica de control de glicemia
mediante Hemoglucotest.
4. MATERIALES Y METODO:
4.1. Materiales:
Biolgico: Utilizar suero libre de hemolisis.
Reactivo De WINER LAB para la determinacin de glucosa
enzimtica.
Standard: solucin de glucosa 1 g/l.
Enzimas GOD/POD, Solucin de glucosa oxidasa y peroxidasa.
Reactivo 4 AF: solucin de 4 aminofenazona 25 mmol/l en Buffer
Tris 0.92 mol/l.
Reactivo fenol: solucin de fenol 55 mmol/l.
Equipo requerido: Espectrofotmetro. Rango de absorbancia 505
nm.
4.2. Mtodos:
B
S
D
(Blanco)
(Standard
(Descono
)
cido)
Standard
- 10ul
( ml)
Muestra
- 10ul
(ml)
Reactivo
1ml
1ml
1ml
de
trabajo
(ml)
Mezclar e incubar 10 min en BM a 37C , leer las absorvancias
a 505 nm llevando a cero el espectrofotmetro con el blanco de
reactivo. El color resultante es estable por a lo menos treinta
minutos.
5. RESULTADOS.- Se realizan mediante la frmula:
100g/l
Factor = -------------------------------------
Absorbancia Standard
Glucosa (g/l) = Factor ( 252) x Absorbancia

desconocida.
6. VALORES DE REFERENCIA.-
Pgina

Suero o plasma: 0,70 1,10 g/l
70 - 110 mg/dl.
CUESTIONARIO
Investigue sobre la diabetes, causas, clasificacin y prevencin?
Importancia de la glicemia?
Cules son los interferentes en la reaccin?
explique cmo sacar el factor de la glucosa?
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PRACTICA N 8
PERFIL LIPIDICO
DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL.

El Colesterol es oxidado enzimticamente por el colesterol oxidasa
(CHOD), previa hidrlisis enzimtica de los steres mediante una
lipasa de origen fungal. El Agua oxigenada (H2O2) generada en la
oxidacin permite la unin oxidativa del fenol con la 4aminoantipirina mediante una reaccin catalizada por la
peroxidasa (POD). El indicador final es la quinoneimina.
El esquema reaccional es el siguiente:
lipasa
steres de colesterol. > colesterol + cidos grasos
CHOD
colesterol + O2. > colesten-3ona + H2O2
POD
H2O2 + 4-AF + fenol > quinona coloreada + H2O
La determinacin de colesterol en forma aislada tiene utilidad
diagnstica limitada. Se ha visto que el colesterol es uno de los
factores contribuyentes a la formacin de ateromas dado que las
complicaciones arteriosclerticas prevalecen en individuos
hipercolesterolmicos.
Estudios epidemiolgicos demuestran que el riesgo de contraer
enfermedad cardaca coronaria para individuos de ms de 40 aos
con colesterolemia menor a 2,10 g/l es 3 veces menor que entre
individuos con ms de 2,30 g/l y 6 veces menor que entre
individuos con ms de 2,60 g/l.
3.- COMPETENCIAS.Describir el mecanismo de digestin, absorcin, transporte y
destino de los lpidos
Conoce, las funciones importantes de los lpidos.
Aplica condiciones de toma de muestra.
Realiza correctamente las tcnicas de dosaje de colesterol en
humano e interpretar correctamente los resultados obtenidos.
Aprende, el diagnostico de las dislipemias.
4.- MATERIALES Y MTODOS

Material biolgico:
Suero o plasma.
REACTIVOS:
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Standard: solucin de colesterol 2 g/l.

Enzimas suspensin conteniendo lipasa fungal 300U/ml, colesterol
oxidasa (CHOD).3 U/ml y peroxidasa ( POD) 20 U/ml.
Reactivo 4 AF: solucin de 4 aminofenazona 25 mmol/l
Reactivo fenol: solucin de fenol 55 mmol/l.
Equipo requerido: Espectrofotmetro. Rango de absorbancia

505 nm.
Tcnicas:
B
(Blanco)
S
(Standar
d)
10m ul
P
(Proble
ma)
Standard
Muestra
-
10 ul
Reactivo
1 ml
1ml
1ml
enzimtico
(ml)
Incubar 15 minutos en BM a 37C o 30 minutos a 25C. Leer

las absorbancias
a 505 nm llevando a cero el
espectrofotmetro con el blanco. El color resultante es estable
por a lo menos 30 minutos.
5.- RESULTADOS Y CLCULOS.
200g/l
Factor = ------------------------------------
Absorbancia Standard.
Colesterol (g/l) = Factor (
g/l ) x Absorbancia problema.
6.-VALORES DE REFERENCIA.Deseable:
2,00 g/l 200 mg/dl
Moderadamente alto:
2,00-2,39 g/l
Elevado:
2,40 g/l
No todo lo que brilla es oro, dice el refrn. Ni todo colesterol es
malo, se podra agregar. De hecho, no hay colesteroles distintos,
ni buenos ni malos, se trata de la misma molcula que es esencial
para la vida.
CUESTIONARIO
Cules son las enfermedades cardiovasculares, explique

porque se producen?
Dibuje la estructura del colesterol?
Mencione las diferentes fracciones del colesterol?
indique las enzimas que participan en la reaccin?
Pgina

Pgina

PRACTICA N 9
DETERMINACION DE FRACCIONES DE COLESTEROL HDL Y
LDL
HDL
COLESTEROL

Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) se separan precipitando
selectivamente las lipoprotenas de baja y muy baja densidad (LDL
y VLDL) mediante el agregado de sulfato de dextrn de PM 50.000
en presencia de iones Mg++.
En el sobrenadante separado por centrifugacin, quedan las HDL y
se realiza la determinacin del colesterol ligado a las mismas,
empleando el sistema enzimtico Colesterol oxidasa/ Peroxidasa
con colorimetra segn Trinder (Fenol/4-Aminofenazona).

Las lipoprotenas plasmticas son partculas esfricas que
contienen cantidades variables de colesterol, triglicridos,
fosfolpidos y protenas. Estas partculas solubilizan y transportan
el colesterol en el torrente sanguneo.
La proporcin relativa de protena y lpido determina la densidad
de estas lipoprotenas.
La funcin principal de las lipoprotenas de alta densidad o HDL
(high density lipoprotein) en el metabolismo lipdico es la
captacin y transporte de colesterol desde los tejidos perifricos al
hgado en un proceso conocido como transporte reverso de
colesterol (mecanismo cardioprotectivo).
El HDL colesterol bajo, est asociado con un alto riesgo de
enfermedad cardaca. Por este motivo la determinacin de HDL
colesterol es una herramienta til en la identificacin de
individuos de alto riesgo.
3. COMPETENCIAS. Aprende la importancia de los valores altos del colesterol HDL.

Conoce las principales enfermedades que se producen en la
disminucin de los valores normales de HDL.
Analiza la importancia de las lipoprotenas HDL de alta densidad.
4. MATERIALES.- Muestra.- Suero o plasma.

Reactivo dextran: solucin de sulfato de dextran.
Reactivo magnesio: solucin de cloruro de magnasio.

5. PROCEDIMIENTO. En un tubo medir (0.5 ml o 500 ul) de muestra, utilizaremos la
mitad 250 ul de suero, (50 ul de Reactivo Precipitante), en este
caso 25 ul . Homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 seg y
dejar 30 a 40 min en refrigerador ( 4- 10 C ) o 15 min en BM
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Centrifugar 15 min a 3000 r.p.m.Usar el sobrenadante lmpido

como muestra.
En 3 tubos de foto colorimtrico marcados B, S y D Colocar:
B
(Blanco)
S
(Standar
d)
10 ul
1ml
P
(Proble
ma)
50 ul
Sobrenadante
Standard
Reactivo
1 ml
1ml
enzimtico
(ml)
Mezclar e Incubar 5 min. en BM a 37C, retirar del BM y enfriar.
Leer las absorbancias a
505 nm, llevando a cero el
espectrofotmetro con el blanco.
6. CALCULOS DE LOS RESULTADOS.HDL Colesterol (g/l) = D x F
F = 151 g/l
7. VALORES DE REFERENCIA:
HDL Colesterol 0,40 0,60 g/l
CUESTIONARIO
Cul es el significancia clnico de la determinacin de las
lipoproteinas?.
Importancia del HDL en el organismo?
Cul es la importancia del reactivo precipitante?
explique los valores elevados y bajos?
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DETERMINACION DE FRACCIONES DE COLESTEROL HDL Y

LDL
LDL
COLESTEROL
1.-. FUNDAMENTOS DEL METODO
Las lipoprotenas de baja densidad (LDL o -lipoprotenas) se
separan del suero precipitndolas selectivamente mediante el
agregado de polmeros de alto peso molecular. Luego de
centrifugar, en el sobrenadante quedan las dems lipoprotenas
(HDL y VLDL); el colesterol ligado a las mismas se determina
empleando el sistema enzimtico Colesterol oxidasa/Peroxidasa
con colorimetra segn Trinder (Fenol/4-AF).
Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el
sobrenadante, se obtiene el colesterol unido a las LDL.
El contenido aproximado de colesterol en cada familia de
lipoprotenas es (en % por unidad de peso): 1% en los
quilomicrones, 18% en las VLDL, 50% en las LDL y 23% en las
HDL. Dado que cada familia posee distinta actividad biolgica, el
significado clnico de un aumento de colesterol depende de la o
las lipoprotenas que se encuentran en exceso.
Por otra parte, los mecanismos reguladores de los niveles
plasmticos de lipoprotenas son muy complejos y pueden ser
afectados por mltiples factores (genticos, ambientales,
fisiolgicos o patolgicos), siendo posible encontrar valores de
colesterol total cercanos al rango normal acompaados de
alteraciones en las fracciones lipoproteicas.
Las HDL y las LDL han sido las ms estudiadas por su importante
actividad biolgica:
las LDL, producto del metabolismo de las VLDL en
plasma, son las encargadas del transporte del colesterol
exgeno (y en mucho menos proporcin, endgeno)
hacia el interior de las clulas;
las HDL, sintetizadas en el hgado, remueven el colesterol
no utilizado por las clulas (dentro de ciertos lmites de
concentracin), transportndolo hacia el hgado para su
degradacin.
Diversos estudios epidemiolgicos han confirmado que el exceso
de colesterol de LDL con respecto a un valor crtico (1,9 g/l) debe
ser considerado como factor de riesgo para el desarrollo de
enfermedad cardaca coronaria, considerando que el efecto
protector de las HDL slo parece tener relevancia dentro de cierto
rango de concentraciones de colesterol circulante.
Tales hallazgos permiten deducir que los valores aislados de
colesterol de HDL o de LDL no pueden tomarse como ndices
predictivos de riesgo, sino que es necesario conformar un perfil
Pgina

lipdico con los valores de colesterol total, colesterol de HDL y

colesterol de LDL.
3. COMPETENCIAS.Analiza la importancia del valor alto de las lipoprotenas LDL.

Establece relaciones entre las dos fracciones HDL y LDL.
Conoce, identifica y valora, los resultados para determinar las
patologas relacionadas a la prueba.
4. MATERIALES.- Suero ( el paciente debe estar en ayunas de 12

a 16 horas).
5. PROCEDIMIENTO.-En un tubo colocar:
Muestra:
200 ul.
Reactivo precipitante:
100 ul.
Homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 seg. Y dejar 15
min en un BM entre 20-25 oC.
Centrifugar 15 min a 3000 rpm. Separar inmediatamente el
sobrenadante y usar para el ensayo colorimtrico.
Tomar tres tubos:
B
(Blanco)
S
(Standar
d)
10 ul
1ml
P
(Proble
ma)
50 ul
Sobrenadante
Standard
Reactivo
1 ml
1ml
enzimtico
(ml)
Mezclar e Incubar 5 min. en BM a 37C.Retira del bao y dejar
enfriar . Leer en espectrofotmetro a 505 nm , llevando a
cero con el blanco.
6-CALCULOS DE LOS RESULTADOS.LDL Colesterol ( g/l) = Colesterol total - D x F

Riesgo bajo o nulo LDL colesterol menores de 1,29 g/l
Riesgo elevado a moderado 1,30 y 1,89 g/l
Riesgo muy elevado 1,90g/l.
8.- CUESTIONARIO
segn su criterio cual de las lipoproteinas es ideal que se
encuentre en concentraciones altas y porque?
Pgina

el LDL es considerado como colesterol bueno o malo por

que?
Cules son las condiciones pre analticas para la
determinacin de LDL colesterol?
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PRACTICA N 10
DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS
El esquema de reaccin es el siguiente:
lipoprotein lipasa
triglicridos > glicerol + cidos grasos
glicerol kinasa
glicerol + ATP > glicerol-1-P + ADP
GPO
glicerol-1-fosfato + O2 .> H2O2 +
dihidroxiacetonafosfato
POD
2 H2O2 + 4-AF + clorofenol ..> quinonimina
roja
2. SIGNIFICACION CLINICA.- Los triglicridos son lpidos
absorbidos en la dieta y tambin producidos en forma endgena a
partir de los carbohidratos, es el principal tipo de grasa
transportado por el organismo. Su medicin es importante en el
diagnstico y manejo de las dislipidemias y en el contexto de una
actitud preventiva de lesiones ateroesclerticas (Schreier y col.,
2001) y por tanto de posibles eventos isqumicos (Immanuel et al,
2006).
Estas enfermedades pueden tener origen gentico o ser
secundarias a otras tales como nefrosis, diabetes mellitus y
disfunciones endcrinas. El aumento de triglicridos se ha
identificado como un factor de riesgo en enfermedades
aterosclerticas. Luego de comer, el organismo digiere las grasas
de los alimentos y libera triglicridos a la sangre. Estos son
transportados a todo el organismo para dar energa o para ser
almacenados como grasa. El hgado tambin produce triglicridos
y cambia algunos a colesterol. El hgado puede cambiar cualquier
fuente de exceso de caloras en triglicridos.
Los niveles de triglicridos varan con la edad, y tambin
dependen de qu tan reciente ingiri alimentos antes del examen.
La medicin es ms precisa si no se ha comido en las 12 horas
previas al examen. El valor normal es de 150 mg/dl. Para quienes
sufren problemas cardiacos, los niveles de esta sustancia deben
ser inferiores a los 100 mg./dl.
Si el colesterol tiene un valor normal, un nivel elevado de
triglicridos no parece ser un factor de riesgo de enfermedad
cardiaca, pero s puede ser riesgoso al asociarse con diabetes y
pancreatitis.
3. CAPACIDADES.Estudia la funcin de los triglicridos.
Pgina

Conoce que enfermedades estn asociados a niveles altos de

triglicridos.
Aprende como estn asociados los triglicridos con el colesterol.
4. MATERIALES.- Suero o plasma (previo ayuno de 12 a 14

horas).
REACTIVOS PROVISTOS:
Enzimas: Viales conteniendo lipoprotein lipasa, glicerol kinasa
(GK), glicerol fosfato oxidasa GPO, peroxidasa POD ,ATP y 4
aminofenazona,4-AF.
5. PROCEDIMIENTO.-
B
(Blanco)
S
(Standar
d)
-10 ul
1 ml
P
(Proble
ma)
10 ul
-1 ml
Muestra ml
Standard ml
Reactivo
1 ml
enzimtico
(ml)
Mezclar e incubar 5 minutos a 37C o 20 minutos a TA ( 18-25
C).Enfriar y leer en el espectrofotmetro a 505 nm, llevando el
aparato a cero con agua destilada.
.
6.- RESULTADOS Y CALCULOS
TG g/l = D x F
Factor = 360 g/l.
Triglicridos (g/l) = Factor x Absorbancia problema.
7. VALORES DE REFERENCIA.Deseable 1,50 g/l o 150 mg/dl
Moderamente elevado a elevado: 1,50-1,99 g/l
Elevado; 2,00 4,99 g/l
Muy elevado: 5,00 g/l o 500 mg/dl.
CUESTIONARIO
Indique la importancia de los triglicridos?
En qu alimentos se encuentra mayor concentracin de
triglicridos?
Explique el fundamento del mtodo?
Pgina

explicar cmo se calcula el factor?
Pgina

PRACTICA N 11
PRUEBAS FUNCIONALES RENALES O PERFIL RENAL
DETERMINACION DE UREMIA.
La ureasa descompone especficamente a la urea produciendo
dixido de carbono y amonaco; ste reacciona con fenol e
hipoclorito en medio alcalino produciendo azul de indofenol que se
determina colorimtricamente.
2.- SIGNIFICADO CLINICO.- La urea CO(NH2)2 es uno de los
constituyentes nitrogenados no proteicos (NNP) ms abundantes
en el cuerpo ( lquidos biolgicos). Los dems son la creatinina, el
cido rico, el amonio y los aminocidos. En otros tiempos todos
eran medidos juntos (prueba del NNP), pero debido a que el
anlisis de cada componente por separado es bastante sencillo y
proporciona datos ms precisos, las pruebas individuales han
sustituido al global casi por completo.
La urea es el principal producto nitrogenado de desecho del
metabolismo de las protenas y slo se sintetiza en el hgado, a
partir de la destruccin de las protenas, durante la digestin las
protenas son separadas en aminocidos, estos contienen
nitrgeno que se libera como in amonio, y el resto de la molcula
se utiliza para generar energa en las clulas y tejidos. El ion
amonio se une a pequeas molculas para producir urea, la cual
aparece en la sangre y es eliminada por la orina.
Su
concentracin es igual en todos los lquidos corporales, con
excepcin de la sangre entera debido a la diferencia de valores
que existe entre el suero y los eritrocitos. Por lo tanto, se prefiere
el suero o plasma a la sangre entera para analizar el nitrgeno de
urea. Las determinaciones de urea y creatinina en suero son dos
de los estudios ms solicitados para detecta la capacidad del
rin para excretar desechos metablicos. La elevacin de estos
valores se emplea, junto con otros, como indicador de la
necesidad de dilisis en pacientes con insuficiencia renal crnica.
La interpretacin de los valores del nitrgeno de urea exige el
conocimiento de la ingestin de protena exgena y de lquidos, y
las condiciones que pueden incrementar la produccin endgena
(por ejemplo: la actividad muscular, un traumatismo, la infeccin
de una dieta muy restringida, el ayuno o la inanicin). Cualquiera
de estas variables puede aumentar la concentracin sangunea o
urinaria que en s mismo no es un reflejo real de la depuracin
renal de urea. Pueden usarse dos pruebas, con las debidas
precauciones e la interpretacin, como indicadores aproximados
de mejora o deterioro de la funcin renal del individuo. Aunque
las determinaciones de urea es mucho menos especfica que de la
creatinina srica, es de uso comn, particularmente en pediatra,
como una prueba de rutina para la funcin renal y para conocer
algo sobre el estado de hidratacin del individuo. Grados menores
Pgina

de disfuncin renal requieren anlisis ms sofisticados como las

pruebas de depuracin.
En general es un parmetro que indica la disfuncin renal si
existe una concentracin srica de urea, los valores sricos de
urea se encuentran ntimamente relacionados con la dieta y el
metabolismo proteico por lo que cualquier alteracin en estas
variantes se traducir en un cambio de la concentracin de urea
en el suero.
Pgina

3.- COMPETENCIAS. Aprende los valores normales de uremia y las variaciones que
sirven para el diagnstico de las enfermedades renales y
hepticas.
Interpreta los resultados de esta prueba de laboratorio para el
adecuado diagnostico evaluacin de tratamiento y pronostico del
paciente portador de estas patologas.
Aprender a explicar al paciente las razones para los exmenes

que se le practican y guardara la confidencialidad de los resultados.
UREA
Puede aparecer la urea disminuida en:

Dieta pobre en protenas
Exceso de hidratacin.
Insuficiencia heptica
Malnutricin
4. MATERIALES.- Suero problema.

Reactivos: Reactivo liquido para la determinacin enzimtico de
urea (uremia mtodo enzimtico).
- R-1; reactivo desecado conteniendo fenol y nitroferricianuro
de sodio.
- R-2; reactivo concentrado de hipoclorito de sodio e hidrxido
de sodio.
- Standard: solucin de urea 0,60 g/l.
Nota: 1 gota tiene aproximadamente 50 ul.
5. TCNICAS: Seguir el siguiente cuadro:
Muestra ml
Standard ml
Ureasa
Mezclar por agitacin

Luego agregar.
Reactivo 1
Reactivo 2
Mezclar por agitacin

Agua destilada
B
(Blanco)
-
-
25 ul
suave y esperar
S
(Standar
d)
-10ul
25 ul
5 minutos
P
(Proble
ma)
10ul
-
25 ul
a 37 C.
0,5ml
0,5ml
0,5ml
0,5ml
suave e incubar 5 min a 37

5ml
5ml
0,5ml
0,5ml
5ml
Mezclar por inversin y retirar del BM. Despus de 10 minutos

leer las absorbancias en el espectrofotmetro a 540nm
llevando a cero con el blanco de reactivo.
Pgina

6. RESULTADOS Y CALCULOS.Urea (g/l) = Factor ( 252) x Absorbancia problema.

0.20 a 0.45 g/l. 20 - 45 mg/dl.
CUESTIONARIO
En qu patologas esta elevado la urea explique?
Explique el fundamento de la uremia?
En qu casos se encuentra urea disminuida?
Se podr trabajar en suero y en plasma o existe alguna
diferencia explique?
Pgina

PRACTICA N 12
DETERMINACION DE ACIDO URICO.

El esquema reaccional es el siguiente:
UOD
cido rico + 2 H2O + O2 .> alantona
+ H2O2 + CO2
POD
H2O2 + 4-AF + clorofenol .> quinona coloreada
+ H2O
El cido rico es un metabolito de las purinas, cidos nucleicos y
nucleoprotenas. Habitualmente la concentracin de cido rico
en suero vara de un individuo a otro de acuerdo a diversos
factores tales como: sexo, dieta, origen tnico, constitucin
gentica, embarazo.
Niveles anormales de cido rico en suero son ndice de desorden
en el metabolismo de las sustancias que lo originan o de defectos
en su eliminacin.
3.-COMPETENCIAS.Aprender la importancia de una buena alimentacin.
Analizara la relacin directa de la ingesta de protenas con
patologas propias de su metabolismo.
Conoce, Identificara las complicaciones que produce el exceso de
acido rico en la sangre.
Analiza el ciclo del acido rico.
4.-MATERIALES Y MTODOS
Material biolgico:
Suero problema.
Reactivos: Reactivo liquido para la determinacin enzimtico de
Acido rico (uricostat enzimtico).
Tcnicas;
B
(Blanco)
S
(Standar
d)
50 ul
P
(Proble
ma)
Standard
Muesta
-
50 ul
Reactivo
2.5 ml
2.5ml
2.5 ml
enzimtico
(ml)
Mezclar e incubar 15 minutos a 37C, o a TA por 30 min. Retirar
enfriar y leer las absorbancias llevando a cero el
espectrofotmetro con el blanco de reactivo a 505 nm. El color
resultante es estable por a lo menos 30 minutos.
Pgina

5. RESULTADOS Y CALCULOS.
Acido rico (mg/l) = D x F ( 45 )
Pgina

Varones 25 a 60 mg/l. 2,5 6 mg/dl
Mujeres 20 a 50mg/l
2 6 mg/dl
CUESTIONARIO
Cul es significado clnico de la determinacin de cido
rico?
Cules son las condiciones para la toma de muestra para
cido rico?
En qu situaciones se incrementa el cido rico?
En qu enfermedades menos frecuentes se producen aumento
de cido rico?
Cules son los alimentos prohibidos cuando tenemos el

cido rico alto?
Pgina

PRACTICA N 13
DETERMINACION DE
CREATININA.
La creatinina reacciona con el picrato alcalino en medio
tamponado,
previa
desproteinizacin
con
cido
pcrico,
obtenindose un cromgeno que se mide a 510 nm.
2. SIGNIFICACION CLINICA.- La creatinina (anhdrido de la
creatina) es un compuesto orgnico de desecho, generado a partir
de la degradacin de la creatina (que es un nutriente til para los
msculos). Es producida por el cuerpo en una tasa muy constante
(dependiendo de la masa y funcin muscular) normalmente
filtrada por los riones y excretada en la orina.
La creatinina es excretada del cuerpo completamente por los
riones y con una funcin excretora renal normal, el nivel de
creatinina srica debe mantenerse constante y normal.
Su determinacin se utiliza para evaluar la funcin renal, que
cuando est anormal, muestra aumento en los niveles de
creatinina en la sangre, debido a la disminucin en su excrecin
por la orina. Los niveles de creatinina tambin pueden variar de
acuerdo con la talla y masa muscular de la persona. Algunos
medicamentos y otras sustancias pueden producir toxicidad renal
y aumentar los niveles sricos de creatinina, entre los cuales
merece destacar: aminoglicsidos (por ejemplo, gentamicina),
cimetidina, agentes quimioteraputicos como el Cisplatino, los
cuales deben ser administrados bajo estricta vigilancia mdica.
3. COMPETENCIAS.Aprende a identificar la funcin de la creatina fosfato e identificar
el producto final de la degradacin de este.
Conoce la funcin importante del rin en la eliminacin de este
metabolito.
Comprende que su medicin es til en el diagnostico de diversas
nefropatas.
Entiende que su control permanente es de gran utilidad en
pacientes que requieren dilisis.
Conoce algunos medicamentos que producen toxicidad renal y
aumentar los niveles de creatinina.
Analiza la importancia de los valores altos de la creatinina en
sangre.
4. MATERIALES Y MTODOS
Material biolgico:
Suero u orina
Pgina

Se obtiene suero de la manera usual. Puede emplearse tambin orina

de 2 o de 24 horas, su recoleccin en recipiente limpio mantenido en
refrigerador ( 2 10 oC) durante el tiempo de recoleccin.
5. PROCEDIMIENTO.- En caso de que la muestra a utilizar sea

suero, debe efectuarse una DESPROTEINIZACIN:
En un tubo de ensayo se verter: 07 ml o lo que es su equivalente
700 ul de suero, se utilizara la mitad; (350 ul), agregar 3,5 ml de
R. N 1, la mitad es 1,75 ml R-1.Mezclar por inversin. Dejar
reposar 10 min. y centrifugar a 3000 r.p.m. por 5 min.
Suero + cido Pcrico

Suero
desproteinizado
REACTIVOS:
R # 1 ; acido pcrico 41,4 mmol/l
R # 2 ; buffer glicina/NaOH 1 mol / ph final 12,4
S. solucin de creatina 20 mg/l.
Seguir el siguiente cuadro:
B
S
Ds
Do
Desproteiniz
1,5
ado
ml
(sobren
adante
)
Standard
0,2
5 ml
Orina
0,25
diluida
ml
( 1:50)
Agua
0,25
destilada
0,5m
,25
ml
l
ml
Reactivo 1
1 ml
1 ml
ml
Reactivo 2
0,
0,2
0,25
,25
25
5 ml
ml
ml
ml
Mezclar por inversin. Incubar 20 minutos a TA.Leer en
espectrofotmetro a 510 nm, llevando el aparato a cero con agua
destilada. (Estable 10 min).
Creatinina en suero (mg/l) = Factor (8,8 ) x Absorbancia
problema. F=20mg/l
Suero: 8 a 14 mg/l. o 0,8 a 1,4 mg/dl
Orina: 0,9 a 1,5 g/24 horas.
Pgina

CUESTIONARIO
Defina la importancia de la creatinina?
Cundo una persona necesita de hemodilisis?
Cules son las caractersticas observables en un paciente
con nefropata?
Indique algunos medicamentos que producen dao renal?
indique cuales son los valores normales de creatinina y
por que existe incremento en dao muscular?
Pgina

PRACTICA N 14
PRUEBAS FUNCIONALES HEPATICAS O PERFIL HEPATICO
DETERMINACION DE BILIRRUBINA.

La bilirrubina reacciona especficamente con el cido sulfanlico
diazotado produciendo un pigmento color rojo-violceo
(azobilirrubina) que se mide fotocolorimtricamente a 530 nm.
Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente
con el diazorreactivo, la bilirrubina no conjugada (indirecta)
requiere la presencia de un desarrollador acuoso (Reactivo A) que
posibilite su reaccin. De forma tal que, para que reaccione la
bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presente en la
muestra, debe agregarse benzoato de cafena al medio
dereaccin.

La bilirrubina, compuesto de degradacin de la hemoglobina, es
captada por el hgado para su conjugacin y excrecin en la bilis.
Las alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden
provocar hiperbilirrubinemias.
La eritroblastosis fetal o anemia hemoltica del recin nacido es
una patologa provocada por incompatibilidad materno-fetal en la
que se produce una destruccin excesiva de glbulos rojos. Esto
resulta en un severo aumento de la bilirrubina srica con el
consecuente riesgo de difusin del pigmento al sistema nervioso
central, por lo que la determinacin de la bilirrubina en estos
nios recin nacidos resulta sumamente importante.
3.- COMPETENCIAS:
Aprende que la bilirrubina es el producto de la degradacin de la
hemoglobina.
Busca e investiga fuentes de informacin.
Aprende las manifestaciones clnicas de la hiperbilirrubinemia.
Aprende a evaluar la funcin del hgado.
4. MATERIALES.- Suero, plasma, o lquido amnitico.
Reactivos.- Desarrollador: sol acuosa de benzoato de cafena.
R. sulfanilico: sol de acido sulfanilico y acido

clorhdrico.
Diazoreactivo = NaNO2 (nitrato de sodio) + cido

Sulfanlico
Seguir el siguiente cuadro:
Pgina

B
(Blanco)
D
(Directa
)
200ul
T
(Total)
Muestra
200ul
200ul
( suero)0
Agua destilada
2.5 ml
2.5 ml
-(ml)
Desarrollador
-
-
2,5ml
Reactivo
200ul
Sulfanilico
Diazoreactivo
200ul
200ul
Mezclar cada tubo por inversin. Luego de 5 min leer en el

espectrofotmetro a 530nm, bilirrubina total es estable por 15
minutos la bilirrubina directa se mide a los 5 minutos exactos.
5. VALORES DE REFERENCIA.En adultos:
Directa: Hasta 2mg/l.
Total: Hasta 10mg/l
Recin Nacidos. Hasta las 24 horas 60mg/l. Hasta el 3er o 4to da:
120 mg/l
6. VALORES AUMENTADOS: En la bilirrubina indirecta .
Anemia hemoltica
Problemas en las
transfusiones de sangre
Eritroblastosis fetal
Enfermedad de Gilbert
Otras anemias
Ictericia fisiolgica del
recin nacido
Los niveles aumentados de bilirrubina total pueden indicar:
Cirrosis
Hepatitis
Tumores de vas biliares

Deficiencia enzimtica
Obstruccin de va biliar
(colangitis, colelitiasis)
Ictericia
7- RESULTADOS Y CLCULOS.
Bilirrubina Total (mg/l) = (T B) x f ( 20 )
Bilirrubina Directa = (D-B) x f ( 20 )
CUESTIONARIO
Indique la importancia de la bilirrubina en recin nacidos?
Explique el fundamento de la determinacin de
bilirrubinas?
Pgina

Diga ud las diferencias entre bilirrubina directa y la

indirecta?
En qu patologas encontramos valores elevados de
bilirrubinas?
Pgina

PRACTICA N 15
DETERMINACION DE TRANSAMINASA GLUTAMICO PIRUVICA
TGP.
DETERMINACION DE TRANSAMINASA GLUTAMICO
OXALACETICA TGO.
La GOT cataliza la siguiente reaccin:
GOT
L aspartato+ alfa cetoglutarato
Glutamato+ Oxalacetato
L alanina+ alfa cetoglutarato

Glutamato+ Piruvato
TGP
El piruvato formado (el oxalacetato es inestable y se transforma

en piruvato), reacciona con la 2,4-dinitrofenilhidracina
producindose, en medio alcalino, un compuesto coloreado que se
mide a 505 nm.
Reaccin qumica de coloracin
Oxalacetato Piruvato+ 2,4 dinitrofenilhidrazina
Hidrazona
Las transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente
difundidas en el organismo con elevada concentracin en corazn,
hgado, msculo esqueltico, rin y eritrocitos.
La actividad srica en condiciones normales es baja o nula.
Un dao o enfermedad en cualquiera de estos tejidos conduce a
un aumento en los niveles sricos. As, luego de un infarto de
miocardio se produce en suero un marcado aumento de la
actividad de GOT (abundante en msculo cardaco).
En hepatitis virales y otras formas de enfermedad heptica que
involucren necrosis tisular, predominar la actividad srica de GPT
(abundante en tejido heptico).
Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse
tambin en traumas accidentales o quirrgicos y en distrofias
musculares o miositis.
3. COMPETENCIAS.Conoce la existencia de enzimas en rganos especficos cuya
funcin son especficas.
Pgina

Aplica las recomendaciones para la toma de muestra en la

determinacin de esta prueba.
Expone cuando se produce un aumento de transaminasas en la
sangre.
4. CAUSAS DE AUMENTO DE LA TGO Y TGP.- La TGO y la TGP
son importantes en la clnica y su aumento se debe a un proceso
necrtico en rganos con alta funcionalidad como lo es el hgado y
el miocardio. En lesiones hepticas aumentan ambas
transaminasas en el suero; cuando sobreviene la mejora clnica
ambas descienden en forma paralela, y si aparece una recada, las
dos suben nuevamente. Sus modificaciones son muy precoces y
se puede hacer el diagnstico de la hepatitis hasta 3 semanas
antes de la aparicin de los sntomas y signos clnicos.
Las transaminasas tambin se elevan en casos de cirrosis e
ictericia por obstruccin; en las ictericias por lesin hepatocelular,
su elevacin es muy marcada, coincidiendo con una elevacin
muy baja o nula de fosfatasa alcalina, mientras en las
obstrucciones las transaminasas suben de modo discreto y la
fosfatasa alcalina se encuentra elevada.
El tejido miocrdico es muy rico en TGO y el ascenso de esta
enzima acompaa a los procesos destructivos del corazn; sube al
mximo entre las 12 y 48 horas y suele volver a lo normal a los 4
7 das. El ascenso es, en general, proporcional a la extensin del
infarto; a veces da datos positivos en casos con datos
electrocardiogrficos de difcil interpretacin, pero tiene el
inconveniente de elevarse en diversos cuadros, sobre todo en la
congestin heptica.
Razn por las que se les llama de "escape".
Estas enzimas siempre estn presentes en el suero pero en
concentraciones muy bajas, por lo tanto su elevacin nos indicara
que hay un proceso anormal en estos rganos, lo cual las hace
muy tiles en los diagnsticos.
5. MATERIALES.- Suero
B
TGO
Sustra
0,5
to TGO
ml
Sustra
to TGP
Muestr
a
(Suero
)
Agua
100
destila
ul
problema.
B TGP
0,5ml
100 ul
P
TGO
0,5 ml
100 l
P
TGP
0,5 ml
100 l
Pgina

da
Mezclar por agitacin suave e incubar a 37C durante 30 minutos.
Reacti
vo de
Color
2,4DHNF
Diluyen
te para
enzima
NaOH
1N
0,5
ml
Incubar por 10 minutos 37 oC.
5 ml
Mezclar por inversin y retirar del bao. Despus

de 2 min leer la absorvancia en
espectrofotmetro a 505 nm.Llevando el aparato
a cero con los blancos respectivamente.
0.5 ml
5 ml
0.5 ml
5 ml
0.5 ml
5 ml
Realizar el clculo grficamente segn curva patrn anexado para
reactivo de Wiener Lab.
7. VALORES DE REFERENCIA.-.
Se consideran valores normales de transaminasas ( GOT Y GPT )
hasta 12 U/L.
CUESTIONARIO.
Indique el fundamento de la reaccin?
Por qu en problemas cardiacos existe elevacin de la
TGO?
Cul de las transaminasas se eleva en dao heptico y
por qu?
Se puede utilizar plasma fresco para su determinacin y
por que?
Pgina

PRACTICA N 16
DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA.
La fosfatasa alcalina desdobla al fenilfosfato de sodio en medio
alcalino tamponado con aminometil propanol (AMP). El fenol
liberado se determina por reaccin con 4-amino-antipirina y
ferricianuro como agente oxidante. El color desarrollado es
directamente proporcional a la actividad enzimtica y se mide a
520 nm.
La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el
organismo. Hidroliza los monosteres del cido ortofosfrico en
medio alcalino.
En el adulto proviene en parte del hgado (fraccin termoestable)
y en parte del hueso, sistema reticuloendotelial y vascular
(fraccin termolbil), dando lugar a distintas isoenzimas.
La actividad srica de fosfatasa alcalina sea, en condiciones
normales, alcanza su mayor actividad en los nios en edad de
crecimiento (llegando a triplicar los niveles del adulto) debido a
que esta isoenzima se localiza en los osteoblastos (relacionados
con la calcificacin y formacin de estructuras seas). Tambin es
fisiolgico el aumento que se produce al final del primer trimestre
del embarazo, a expensas de la
isoenzima placentaria que en este perodo alcanza niveles
mximos (aproximadamente el doble de los valores normales).
Entre las patologas que afectan la actividad srica de fosfatasa
alcalina, se pueden citar: carcinomas metastsicos en hgado y en
hueso (productores de enzima), colestasis biliar, fenmenos
osteoblsticos, trastornos de malabsorcin acompaados de
lesiones ulcerosas (donde la deficiencia de vitamina D produce
osteomalacia con el consecuente aumento de fosfatasa alcalina
sea) e incluso lesiones en vas de reparacin tales como infarto
agudo de miocardio, infarto pulmonar o renal
3.- COMPETENCIAS. Conoce las principales enfermedades que producen

variaciones significativas en los parmetros bioqumicos de
Fosfatasa alcalina.
Entiende que tanto el aumento como la disminucin de
estas enzimas tiene significado clnico.
4. MUESTRA.- Suero problema.
B
S
P
Sustrato
0.5 ml
0.5ml
0,5ml
Pre Incubar a 37C durante algunos minutos, luego agregar.
Pgina

Suero
Standart
Mezclar e Incubar por 10 minutos con cronometro
Reactivo
2,5 ml
2,5 ml
2,5 ml
de Color.
Mezclar de inmediato. Retirar los tubos del bao y leer en el
espectrofotmetro a 520nm.
50l
50l
Realizar el clculo de Fosfatasa alcalina (UI/L).
Fosfatasa alcalina = Factor x Absorbancia Problema.
200 UI/L
Donde
Factor = F= ---------------------------------------Absorbancia standard
6. NIVELES ELEVADOS DE FOSFATASA ALCALINA PUEDE

INDICAR:
Alcoholismo
Hepatitis
Anemia
Colestasis ( obstruccin de
va biliar)
Cncer de hueso, prstata
Enfermedades de hueso,
Curacin de fracturas
hgado, riones.
seas
7.NIVELES BAJOS DE FOSFATASA ALCALINA
Ingesta insuficiente de protenas
Malnutricin
Fosfatasa alcalina: Adultos: 68-240 UI/L
Nios: 100 400 UI/L
NOTA: Debido al proceso osteoblastico, la isoenzima sea se
encuentra aumentada en la niez y adolescencia hasta los 18
aos, proporcionando valores de fosfatasa alcalina elevados
habindose observado valores de hasta 700 UI/L sin patologa
que justificara un origen extra seo.
CUESTIONARIO
Por qu la fosfatasa alcalina forma parte del perfil
heptico?
Por qu los niveles de fosfatasa son elevados en nios?
el consumo excesivo de lpidos alterara la fosfatasa por
qu?
Pgina

En que patologas se eleva la fosfatasa y en qu

disminuye?
explique el fundamento de la determinacin de fosfatasa
alcalina?
PRACTICA N 17
DETERMINACION DE LOS NIVELES DE CALCIO.

El calcio reacciona con la cresolftalen complexona (cfx) a pH 11,
dando un complejo de adicin color magenta que se mide
fotocolorimtricamente a 570 nm.
El calcio es esencial en la mayora de las reacciones de la
coagulacin sangunea y en la regulacin de la excitabilidad de las
fibras musculares. Su concentracin en suero y orina est
regulada por la accin de factores tales como niveles de
parathormona, vitamina D y fsforo, observndose fluctuaciones
fisiolgicas debidas a edad, sexo, embarazo, actividad fsica,
cambios estacionales (por accin de la luz solar).
La hipercalcemia est relacionada con distintas patologas:

hiperparatiroidismo, neoplasias seas, intoxicaciones con vitamina
D. La hipocalcemia se asocia con desrdenes tales como
hipoparatiroidismo, deficiencia de vitamina D, malabsorcin.
3.- COMPETENCIAS.Valora la importancia de una buena alimentacin a base de

lcteos y derivados
Experimenta en el laboratorio los resultados del anlisis de calcio
en sangre.
Expresa sus vivencias y emociones relacionadas al tema.
Asume sus responsabilidades en la educacin nutricional.
4. MATERIALES.- Suero problema.

5.PROCEDIMIENTO.-Se aconseja trabajar
tubos de fotocolormetro.
S
Reactivo
25l
Cfx
Buffer
1,75ml
directamente en los
P
25l
1,75ml
Pgina

Mezclar con la varilla y leer la absorbancia de ambos tubos (blancos

internos de BS y BP) en el espectrofotometro a 570nm llevando el
equipo a cero con agua destilada.Agregar:
Standard
10l
Muestra
10l
Mezclar e Incubar por 10 minutos a TA volver a leer el Standard y
el Problema
Realizar el clculo de Calcio en suero.
Corregir los valores quitando del Blanco del Stardard y el blanco
del suero.
Calcio en suero = Factor ( 33 ) x Absorbancia Problema.
Calcio Srico: 8.5 a 10.5 mg/dl.
Los niveles aumentados de Calcio en la sangre pueden
indicar:
Hiperparatiroidismo
Acromegalia
Enfermedad de Paget
Hiperparatirodismo
Hipertiroidismo
Metstasis seas
Mieloma mltiple
Insuficiencia adrenal
Aumento de la ingesta de Calcio
enfermedades renales
Fracturas mltiples
Ingestin excesiva de carbonato de calcio.
Tumores paratiroideos; reposo en cama prolongado.
Los niveles disminuidos de Calcio en la sangre pueden
indica
CUESTIONARIO.
Por qu es importante la determinacin de calcio?
En nios existe elevacin o disminucin por qu?
Explique el fundamento de la tcnica?
Mencione algunos interferentes en la muestra y si es
posible determinar calcio en orina?
NOTA. Se adicionara posteriormente prcticas

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Pgina

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