PRODUCCIN DE ETANOL A PARTIR DE LA LECHUGA DE AGUA (Pistia

stratiotes L.)

El bioetanol se ha producido a partir de residuos de biomasa producida por las industrias

agrcolas y forestales como el maz, mazorcas, bagazo de caa de azcar, paja de trigo,
y astillas de madera (Eklund y Zacchi, 1995; Sreenath et al, 2001; Martn et al., 2002).
En lugar de las plantas terrestres, las plantas acuticas son el siguiente recurso
prometedor de energa renovable ya que tienen muchas ventajas tales como, crecen en
cuerpos de agua sin competir con la mayora de los granos y verduras de tierras de
cultivo; tambin se utilizan para la purificacin de aguas para extraer metales pesados y
especialmente, forma la vegetacin de plantas acuticas que flotan libremente haciendo
ms fcil su cosecha. A pesar de las ventajas, no hay datos sobre la produccin de
bioetanol a partir de plantas acuticas, a excepcin del Jacinto de agua (Eichhornia
crassipes) (Kahlon y Kumar, 1987; Nigam, 2002; Abraham y Kurup, 1996). Otra planta
de flotacin libre que puede servir como un sustrato para la produccin de etanol es la
Lechuga de agua (Pistia stratiotes L.), cuya tasa de crecimiento es tan alto como el
jacinto de agua (60 a 110 t/ha en 1 ao) (Gumbricht, 1993). El cuerpo suave de la
lechuga de agua facilitara su molienda para aumentar la respuesta bioqumica (Mishima
et al., 2006). En comparacin con el jacinto de agua (1 metro ms desde las races a las
hojas), el menor tamao corporal (alrededor de 0,3 m) de la lechuga de agua es
adecuado para la cosecha.

Pre tratamiento de la muestra

Las hojas son recogidas y lavadas manualmente con agua de grifo, se secan a 60 C y
se procede a su molienda, una vez en polvo se pasa por un tamiz de 0,8 mm de malla.
Se da a la muestra un tratamiento previo alcalino/oxidativo, que es el mejor mtodo para
la hidrlisis enzimtica de las plantas acuticas (Mishima et al., 2006). Brevemente, las
muestras se hacen reaccionar en 1% (w / v) de NaOH a temperatura ambiente durante
12 h, a continuacin, se aade suavemente 31% H 2O2 (w / v) de modo que la
concentracin final de H2O2 alcance el 1% (w / v); Se lleva a cabo la reaccin otras 12
h. Despus de la reaccin, las muestras pretratadas se recogen y se lavan con agua
corriente, usando una malla de 38-m hasta que alcance el valor de pH del agua drenada
neutral. Entonces las muestras se secan a 60 C y en polvo. Las muestras pretratadas se
usan para los Experimentos de SSF Y SHF.
Produccin de etanol a partir de la biomasa pre tratada
Se puede hacer de modos diferentes, SHF y SSF, se utiliza la hidrlisis enzimtica y la
fermentacin de la biomasa pretratada para la produccin de etanol. En la hidrlisis
enzimtica (proceso de SHF), se utilizan matraces Erlenmeyer (500 ml), conteniendo
cada uno 25 g de la muestra pretratada, se trata en autoclave a 121C durante 20 min.
Luego, se filtra 250ml de solucin de celulasa; (Shin Nihon Chemical Co. Ltd., Japn
Sumitime C) (actividad celulasa: 20 unidades de papel de filtro (FPU) (g/sustrato), la
actividad xilanasa: 615 unidades (g/sustrato) en 0,1 M de fosfato de sodio (pH 5,0) se

aade al matraz y se hiace reaccionar a 45C y 120 rpm durante 96 h para la hidrlisis.
Despus de la reaccin enzimtica, el hidrolizado se centrifuga a 21.000/g durante 10
min.
El sobrenadante se suplementa con nutrientes adicionales para dar un medio de base
composicin de: extracto de 2,0 g/L de levadura, 0,2 g/L de (NH 4)2HPO4, 0,02 g/L de
MgSO4.7H2O para S. cerevisiae NBRC 2346, o medio LB y 40 mg/L cloranfenicol
para E. coli KO11. El pH inicial se ajusta, respectivamente, a 5,0 y 6,8 por S. cerevisiae
NBRC 2346 y E. coli KO11. Los 80 ml de hidrolizado se transfieren a un matraz
Erlenmeyer de 125 ml con un tapn de goma y muestreo aguja, autoclave de nuevo para
detener la reaccin enzimtica, y finalmente esterilizarlo.
Para la fermentacin, 4 ml de cada precultivo se inocula aspticamente en el matraz. La
fermentacin se lleva a cabo durante 96 horas a 30C y 120 rpm en un agitador
rotatorio. Las muestras se retiran peridicamente para el anlisis HPLC de azcares y
etanol.
Las mezclas de reaccin SSF consisten en 8 g de la muestra pretratada de plantas
acuticas (previamente tratada en autoclave para 20 min. a 121C), celulasa es
esterilizada por filtracin (20 FPU (g/sustrato) solubilizado en fosfato de sodio 0,1 M, y
5 ml de inculo microbiano para dar la misma concentracin que la del experimento
SHF. El pH inicial de la mezcla de SSF se ajusta a 5,0 para S. cerevisiae NBRC 2346 o
6.0 para E. coli KO11. La reaccin SSF se lleva a cabo a 37C en frascos cnicos de
125ml con 80 ml de volumen de trabajo. Los matraces se sellan con tapones de goma a
travs del cual se produce el escape del CO2 por agujas hipodrmicas.
Se retiran las muestras a travs de la aguja, y se analizan para los contenidos de etanol,
azcares y productos de degradacin de azcares. La eficiencia de conversin se define
como la relacin del rendimiento de etanol producido con el rendimiento terico
calculado en el supuesto de que la totalidad del componente de glucosa en la biomasa
sea convertible en etanol.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Abraham, M., Kurup, G.M., 1996. Bioconversion of Tapioca (Manihot esculenta) waste
and water hyacinth (Eichhornia crassipes) Influence of various physico-chemical
factors. J. Ferment. Bioeng. 82, 259263.
Bailey, M.J., Biely, P., Poutanen, K., 1992. Interlaboratory testing of methods for assay
of xylanase activity. J. Biotechnol. 23, 257270.
Lee, J., 1997. Biological conversion of lignocellulosic biomass to ethanol. J.
Biotechnol. 56, 124.
Nigam, J.N., 2002. Bioconversion of water-hyacinth (Eichhornia crassipes)
hemicellulose acid hydrolysate to motor fuel ethanol by xylosefermenting yeast. J.
Biotechnol. 97, 107116.