1.

- INTRODUCCIN
La aminotransferasa de aspartato o aspartato aminotransferasa (AST) es una enzima que
pertenece a la clase de transferasas. Suele conocerse como transaminasa e interviene en la
transferencia de un grupo amino entre aspartato y a-cetocidos.
El uso clnico de AST se limita sobre todo a la evaluacin de trastornos hepatocelulares y
participacin del msculo esqueltico.
Las concentraciones altas de AST se encuentran con frecuencia en embolismo pulmonar.
Despus de la insuficiencia cardaca congestiva, las concentraciones de AST se pueden
incrementar tambin, lo que es probable que refleje participacin heptica como resultado de
suministro sanguneo inadecuado a ese rgano. Las concentraciones de AST son ms altas en los
trastornos hepatocelulares agudos.
2.- OBJETIVO
Determinar cuantitativamente AST en una muestra de plasma para al obtener resultados
compararlos y relacionarlos con alguna enfermedad o patologa, en este caso se podrn relacionar
los valores anormales con alguna enfermedad o padecimientodel hgado.
3.- SIGNIFICACION CLINICA
La aspartato aminotransferasa es una enzima bilocular (citoplasmtica y mitocondrial)
ampliamente difundida. Se encuentra en mayor concentracin en hgado y corazn. Cualquier
alteracin de estos tejidos produce un aumento en los niveles de AST circulante.
En el infarto agudo de miocardio, se observa un aumento moderado de la enzima a las 6 u 8 horas
de ocurrido el episodio, alcanza niveles mximos alrededor de las 48 horas y retorna a la
normalidad entre el 4 y el 6 da.
En pacientes con afecciones hepticas se observan las mayores elevaciones de AST, sobre todo
en los casos de hepatitis con necrosis.
La determinacin de AST adquiere importancia diagnstica cuando sus valores se comparan con
los de otras enzimas de similar origen tisular, es decir que permite completar el perfil enzimtico
de rganos tales como corazn e hgado.
4.- FUNDAMENTOS DEL METODO
Basado en el siguiente esquema reaccionante:

5.- REACTIVOS PROVISTOS

A. Reactivo A: solucin de buffer TRIS pH 7,8 conteniendo L-aspartato.

B. Reactivo B: soluciones conteniendo 2-oxoglutarato, nicotinamida adenina dinucletido

reducido (NADH), malato deshidrogenasa (MDH) y lactato deshidrogenasa (LDH).

Concentraciones finales
TRIS.......................................................................................................................100 mmol/l; pH 7,8
L-aspartato..........................................................................................................................200 mmol/l
NADH.................................................................................................................................0,18 mmol/l
MDH....................................................................................................................................... 400 U/l
LDH........................................................................................................................................ 600 U/l
2-oxoglutarato.......................................................................................................................12 mmol/l
6.- INSTRUCCIONES PARA SU USO
Reactivos provistos: listos para usar. Estos pueden usarse separado o como Reactivo nico,
mezclando 4 partes de Reactivo a con 1 parte de Reactivo b (ej.: 4ml de Reactivo A + 1 ml de
Reactivo B).
PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro".
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de anlisis
clnicos.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente.
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO
Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2 - 10C) hasta la fecha de vencimiento
indicada en la caja. Una vez abiertos, no deben permanecer fuera del refrigerador por periodos
prolongados. Evitar contaminaciones.

Reactivo nico (premezclado): estable 2 meses en refrigerador (2 10C) a partir de la fecha

de su preparacin.
INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS
Cuando el espectrofotmetro ha sido llevado a cero con agua destilada, lecturas de absorbancia
del Reactivo nico inferiores a 0,900 D.O. o superiores a 1,800 D.O. (a 340 nm) son indicio de
deterioro del mismo.
7.- MUESTRA
Suero o plasma
a) Recoleccin: se debe obtener de la manera usual.
b) Aditivos: en caso de que la muestra a utilizar sea plasma, se debe usar heparina como
anticoagulante.
c) Sustancias interferentes conocidas:
Las muestras provenientes de pacientes hemodializados o con hipovitaminosis o patologas
asociadas con deficiencia de piridoxal fosfato producen valores falsamente disminuidos.
No se observan interferencias por bilirrubina hasta 30 mg/l, triglicridos hasta 500 mg/l. la
hemoglobina infiere significativamente aumentando los resultados debido a la presencia de
GOT en los eritrocitos.
Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de las drogas en el presente mtodo.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la GOT en suero es estable hasta 3 das
en refrigerador, sin agregado de conservantes. No congelar.
8.- MATERIAL REQUERIDO (no provisto)

Espectrofotmetro.
Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados.
Bao de agua a la temperatura indicada en el procedimiento.
Cronmetro.

9.- CONDICIONES DE REACCION

Longitud de onda: 340 nm
Temperatura de reaccin: 25, 30 37oC. Ver los VALORES DE REFERENCIA
correspondientes a cada temperatura.
Tiempo de reaccin: 4 minutos.
Volumen de muestra: 100 ul

Los volmenes de Muestra y de Reactivo se pueden reducir proporcionalmente, sin que varen los
factores de clculo correspondientes.

10.- PROCEDIMIENTO:
PROCEDIMIENTO
A) 30 37 C
I. TCNICA CON REACTIVO NICO
En una cubeta mantenida a 30 37 C, colocar
Reactivo nico
1,0 ml
Preincubar unos minutos, luego agregar:
Muestra
10 ul
Mezclar inmediatamente y disparar simultneamente el cronmetro.
Eserar 90 segundos y leer la absorbancia inicial (ver LIMITACIONES
DEL PROCEDIMIENTO) y luego a los 1, 2 y 3 minutos de la primera
lectura. Determinar la diferencia promedio de absorbancia/min
(A/min), restando cada lectura de la anterior y promediando los
valores. Utilizar este promedio para los clculos.
II.- TCNICA CON REACTIVOS SEPARADOS
En una cubeta mantenida a 30 37 C, colocar:
Reactivo A
0,80 ml
Muestra
10 ul
Preincubar unos minutos, luego agregar:
Reactivo B
0,20 ml
Mezclar inmediatamente y disparar simultneamente el cronmetro.
Eserar 90 segundos y leer la absorbancia inicial (ver LIMITACIONES
DEL PROCEDIMIENTO) y luego a los 1, 2 y 3 minutos de la primera
lectura. Determinar la diferencia promedio de absorbancia/min
(A/min), restando cada lectura de la anterior y promediando los
valores. Utilizar este promedio para los clculos.
B) 25 C
Emplear 250 ul e Muestra siguiendo el procedimiento indicado en A)

11.- CLCULO DE LOS RESULTADOS

GOT (U/l) = A/min x factor
En cada caso deber emplearse el factor de clculo correspondiente de acuerdo a la temperatura
de reaccin seleccionada:
Factor(30 37 C) = 1.746
Factor(25 C) = 794
12.- VALORES DE REFERENCIA
Temperatura
Hombres
Mujeres

25 C*
hasta 18 U/l
hasta 15 U/l

30 C*
hasta 25 U/l
hasta 21 U/I

37oC*
hasta 38 U/l
hasta 32 U/l

*Calculados
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
13.- CONVERSIONES AL SISTEMA SI
GOT (U/l) x 0,017 = GOT (ukat/l)
14.- EVIDENCIAS DE LA PRCTICA

Obtencin de la muestra y muestra ya separada donde se

observa el paquete globular, glbulos blancos y el plasma

Reactivo A y B (de izquierda

a derecha)

Pipeteo de reactivo y cubetas listas para llevar al espectrofotmetro

Blanco

90 segundos

1 minuto despus

2 minutos despus

3 minutos despus

15.- CONCLUSIONES
Como se ha mencionado con anterioridad, la aspartato aminotransferasa, es un indicador de
enfermedades y padecimientos hepticos, es muy importante que las personas no solo se cuiden
como suele ser comn (alimentacin, estilo de vida, cantidad de ejercicio, entre muchos otros
factores) porque hay que recordar que todo en exceso es malo, por ello el cuidarse demasiado a
veces no va a significar que estemos sanos, por ello es recomendable que las personas chequen
cmo est su cuerpo por dentro; aqu entra esta prctica que abarca un elemento de la qumica
sangunea, donde el mdico puede decirnos si hay algn padecimiento o alguna enfermedad.