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ELABORARON:
M.C. Amanda Dvila Lezama
M.C. Marnie Gonzlez Estvez
M.C.Marisela Martnez Gamboa
FIRMA:
FIRMA:
FECHA
FIRMA:
FECHA
NDICE
INTRODUCCIN
OBJETIVO GENERAL
9
16
25
36
42
49
57
63
ANEXOS
A1: EVALUACIN DEL LABORATORIO
A2: INFORMACIN COMPLEMETARIA PRCTICA No. 1
A3: INFORMACIN COMPLEMENTARIA PRCTICA No. 2
77
A4: INFORMACIN COMPLEMENTARIA PRCTICA No. 4
78
A5: INFORMACIN COMPLEMETARIA PRCTICA No. 7 Y 8
80
A6: INFORMACIN COMPLEMETARIA PRCTICA No. 9
70
71
75
83
INTRODUCCIN
El presente Manual de Laboratorio de Biologa celular rene las prcticas a desarrollar
en las sesiones de laboratorio de la asignatura, recopila la informacin necesaria para su
realizacin e indica los pasos principales de la experimentacin, de tal manera que los
estudiantes cuentan con la herramienta terica bsica para la realizacin exitosa de las
prcticas.
Este material de apoyo didctico ha sido diseado para servir de apoyo tanto para los
alumnos como para los instructores, el proceso de experimentacin en un laboratorio escolar
es fundamental para relacionar y aplicar los conocimientos adquiridos en clase y reforzar el
proceso de enseanza aprendizaje, sin importar la orientacin cientfica por la que se inclinen
los alumnos.
Para que el alumno desarrolle las capacidades de resolucin de problemas es
necesario proporcionarle un ambiente donde tenga la oportunidad de encontrarse con casos
y/o situaciones que lo motiven a experimentar. El proceso constante de integracin de
informacin requiere apoyarse en la construccin de ideas, y es ah donde las actividades
experimentales propician la reorganizacin y clarificacin de conocimientos que facilitan
alcanzar un aprendizaje significativo.
As pues, el seguimiento y la aplicacin del mtodo cientfico en un proceso de
experimentacin culmina con encontrar una respuesta a cuestionamientos que surgen en base
a sucesos reales; los objetivos del laboratorio de Biologa celular, es extrapolar a casos reales
problemticas revisadas en teora, donde el alumno podr sugerir posibles soluciones en base
a datos arrojados por un proceso de experimentacin desarrollado por el mismo.
OBJETIVO GENERAL
El objetivo general que persigue el presente Manual de Laboratorio como herramienta
de trabajo es que el alumno tenga a su alcance la informacin necesaria referente a la
reglamentacin del uso y permanencia de laboratorio, as como la temtica de cada una de las
prcticas permitiendo as avanzar favorablemente en la prctica.
Las ilustraciones y ejemplos que contienen las prcticas aqu propuestas respaldan y
demuestran los resultados de las sesiones, de sta manera, el alumno podr apoyarse en las
mismas para elaborar un informe de laboratorio completo y al nivel de trabajo que la materia y
la sesin prctica exija.
Este reglamento es de observancia obligatoria para cualquier persona que ingrese o visite los
laboratorios del Centro de Ciencias de la Salud (CISALUD).
1. Usar bata blanca de laboratorio con manga larga, abotonada, traje quirrgico
Los alumnos de primer semestre la portarn hasta que el Centro las proporcione.
3. Esperar afuera del laboratorio hasta que el docente indique la entrada para iniciar
sesin.
Prohibido: introducir alimentos y/o bebidas, fumar, gritar, correr, jugar, sentarse en las
mesas de trabajo, usar joyera y/o alhajas grandes que pudieran ocasionar accidentes,
lesin o interferencia en el trabajo, usar celulares o sistemas de comunicacin mvil.
5. Mantener sus pertenencias fuera del rea de trabajo o en los espacios asignados por el
docente de laboratorio.
6. Lavarse las manos antes y despus de trabajar en cada sesin.
7. No se podrn realizar prcticas sin la supervisin de un responsable del laboratorio.
8. Mantener limpia, ordenada y/o saneada su rea de trabajo, antes y despus de realizar
la actividad.
9. Usar equipo de proteccin personal (guantes de ltex, lentes de seguridad, mascarilla,
etc.) durante la permanencia dentro del laboratorio, de acuerdo a la actividad a realizar.
10. No distraer a sus compaeros durante la manipulacin de material, equipo y sustancias
qumicas.
11. No presentarse bajo el influjo de bebidas alcohlicas o cualquier otra droga.
12. Respetar horarios de actividades y en caso de no terminar la actividad en su horario,
solicitar acceso al responsable.
13. No mover, sustraer, manipular o hacer uso indebido de equipo sin autorizacin, as
como sistemas de cmputo y/o transmisin de datos.
14. Reportar incidentes o accidentes por leve que sean con o sin lesin, condiciones
inseguras y equipo daado al docente de laboratorio o al responsable del laboratorio.
15. No trate de atender un accidente o contingencia para lo cual no ha sido capacitado.
16. En simulacros o contingencias obedecer las disposiciones de seguridad indicadas por el
docente, coordinador o responsable del evento.
17. Disponer los residuos generados en la prctica en los contenedores correspondientes
bajo supervisin del tcnico acadmico, docente, responsable del laboratorio o por
personal capacitado para ello. Es responsabilidad del docente de laboratorio
proporcionar la informacin pertinente para la correcta disposicin de los residuos.
18. Prohibido verter slidos o sustancias qumicas peligrosas en los lavabos.
19. Mantener las puertas y ventanas cerradas en caso de que la actividad a realizar as lo
requiera.
20. Prohibido visitas no autorizadas. (Los responsables del laboratorio o direccin son los
que autorizan las visitas y debern de advertir a los visitantes sobre los riesgos y
medidas de seguridad del laboratorio).
4.
21. El usuario deber de contar con material de limpieza de acuerdo a las actividades
realizadas.
22. Los alumnos que tengan asignada gaveta o rea, mantenerla limpia, en buenas
23. No se podrn guardar reactivos en las gavetas, a menos que el tcnico acadmico,
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
docente, investigador o responsable del laboratorio tenga una gaveta exclusiva para
ello.
Respetar las condiciones de seguridad y funcionalidad del laboratorio.
En caso de ruptura o dao del material o equipo de laboratorio, ste deber ser
repuesto o reparado en un lapso no mayor a 15 das.
El responsable de la sesin o actividad, deber anotar, las cantidades de reactivos
utilizados en las prcticas, investigaciones o servicios externos; en la bitcora de
consumo de reactivos.
Al terminar la sesin de laboratorio, verificar que los servicios de agua, gas, vaco, aire a
presin y/o energa elctrica no se desperdicien.
Prohibido introducir mascotas al laboratorio.
Se deber notificar al Coordinador o Responsable de laboratorio acerca de las prcticas
que requieran muestras biolgicas. En caso de ser externas, se llenar y firmar el
formato de consentimiento informado. Las muestras slo pueden ser utilizadas con fines
de docencia.
No se podrn tomar muestras biolgicas sin la autorizacin y supervisin de un
responsable de laboratorio.
Por lo cual, en caso de incumplimiento parcial o total a estos lineamientos, se harn acreedores
a las sanciones correspondientes indicadas en la reglamentacin universitaria o estipulada en
el contrato colectivo de trabajo segn corresponda.
NOTAS:
Los alumnos (as) que no aporten el material que les sea solicitado para
alguna de las prcticas no podrn permanecer en el laboratorio.
En caso de que el material consumible se agote, el alumno ser
responsable de traer nuevo material para la realizacin de su prctica.
7. Para las prcticas que involucren el uso del microscopio, queda prohibido el uso de
maquillaje de ojos.
8. Los alumnos debern limpiar con solucin desinfectante el rea de trabajo ANTES de
empezar y al TERMINAR la prctica.
9. Los alumnos se harn cargo de la limpieza e integridad del material y equipo
El manual de laboratorio tendr una doble funcin como bitcora, ya que cada prctica
contiene los espacios destinados para que el alumno vaci la informacin que se le pide a
mano.
La bitcora deber ser llenada y entregada en cada sesin de laboratorio con las siguientes
caractersticas:
Resultados e interpretacin.
Realizar lo que indica la prctica para esa seccin con una descripcin detallada.
PRCTICA No. 1
MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO-INFECCIOSOS (RPBI)
TEMA TERICO AL QUE APOYA: Introduccin al curso de Biologa celular y bases qumicas
de la biologa.
FUNDAMENTO DE LA PRCTICA:
La Ley General del Equilibrio Ecolgico y la Proteccin al Ambiente, define como
residuos peligrosos a todos aquellos residuos que por sus caractersticas corrosivas, reactivas,
explosivas, txicas, inflamables y biolgico-infecciosas, que representan un peligro para el
equilibrio ecolgico o el ambiente (LEGEEPA, 2010).
La manipulacin de Residuos Peligrosos Biolgico Infecciosos implica un riesgo para la
salud de las personas directamente relacionadas con los residuos pero tambin puede
significar un riesgo potencial para la poblacin en general y el medio ambiente. Por tales
motivos, las personas y empresas que generan y manejan dichos residuos estn obligadas a
seguir la normatividad vigente elaborada con el fin de minimizar riesgos y eficientizar su uso y
disposicin.
La normatividad para el manejo de los residuos peligrosos biolgico-infecciosos
responde a estrictas regulaciones ambientales, las cuales, es necesario actualizar tomando en
consideracin las experiencias y competencias de los sectores involucrados en su
cumplimiento, con el fin de que sus disposiciones sean operativas y adecuadas para proteger el
medio ambiente y la salud de la poblacin en general (Diario Oficial de la Federacin, 2003).
As pues, siguiendo la labor de informacin, se hizo una actualizacin de la Norma
Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-1995, resultando la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002,
publicada en el Diario Oficial de la Federacin. (Diario Oficial de la Federacin, 2003).
Las empresas que manejan y generan R.P.B.I tiene la responsabilidad de consultar la
Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 para reglamentar cada una de los
procedimientos que se relacionan con estos residuos, as como tener a la mano un plan de
contingencia en caso de que suceda el derrame de algn residuo considerado peligroso (Diario
Oficial de la Federacin, 2003).
Para la identificacin de las reas, recipientes, materiales o procedimientos que
impliquen un riesgo biolgico se utiliza un smbolo universal, el cual se muestra en la imagen
de la derecha.
MARCO TERICO:
10
MATERIALES Y EQUIPO
METODOLOGA
1. El instructor explicar las condiciones de generacin, disposicin y
manejo de los
residuos peligrosos biolgico infecciosos en el laboratorio.
2. El alumno identificar el rea de disposicin de los R.P.B.I. en el laboratorio.
3. Los alumnos llevarn a cabo la clasificacin de los siguientes materiales (incluyendo
basura normal):
Cmara de jeringa.
Hisopo con saliva.
Aguja.
Torunda de algodn.
Tubo vacutainer con muestra de sangre.
Gasa.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Cubreobjetos con muestra.
Gasa con sangre.
Empaque de la jeringa.
Algodn con sangre.
Guantes.
Cmara de jeringa con sangre.
Algodn impregnado y tirando sangre.
Hisopos.
Sangre.
Portaobjetos con muestra de eritrocitos.
Papel.
Tubos rotos.
Abatelenguas con saliva.
Guantes con sangre o fludos.
Puntas de pipeta contaminadas.
Hoja de bistur contaminada.
11
DIAGRAMA DE FLUJO:
12
RESULTADOS E INTERPRETACIN
A. Organiza tus resultados en un mapa mental tomando en cuenta la normatividad para la
13
CUESTIONARIO
1. Por qu es importante el buen manejo de los RPBI dentro y fuera del laboratorio?
PRCTICA No. 2
MARCO TERICO:
17
MATERIALES Y EQUIPO:
Microscopio ptico
Laminillas con diferentes muestras
Aceite de inmersin
METODOLOGA:
1. Designar dos integrantes de cada equipo como responsables de llevar el microscopio a
su mesa de trabajo, anotarse en la bitcora de uso y esperar las indicaciones del
instructor.
2. Seguir la explicacin del instructor(a) sobre el manejo y los componentes del
microscopio ptico.
3. Observar al microscopio laminillas con diferentes tipos celulares bajo el siguiente
procedimiento:
a. Colocar la laminilla en el centro de la platina, deslizando los clips sujetadores.
b. Verificar que el objetivo que est colocado para la visualizacin sea el de menor
aumento.
c. Colocar mediante el movimiento de la platina la muestra de estudio en el centro del
microscopio.
d. Acercar la platina al objetivo hasta alcanzar una distancia aproximadamente de 2
mm, entre el cubreobjetos y el objetivo, mediante el ajuste macromtrico, y bajo la
observacin directa de la platina con los oculares.
e. Enfocar la muestra a observar, viendo a travs del ocular y usando el ajuste
micromtrico. Regule el diafragma para mejorar la iluminacin.
f. Al observar las caractersticas de la muestra con el lente objetivo de menor
aumento, cambiar el lente objetivo por el siguiente de mayor aumento. Enfocar la
imagen con el ajuste micromtrico y observar la diferencia.
g. Barrer la muestra a travs de movimientos de la platina, de arriba hacia abajo en
forma de ondas.
h. Cambiar nuevamente el objetivo hacia el de mayor aumento. Ajustar la imagen con
el ajuste micromtrico y regular el diafragma para mejor iluminacin.
i. Al llegar al objetivo de 40X y pasar al 100X es necesario que agregar una gota de
aceite de inmersin en la muestra y solo entonces colocar el objetivo mayor.
4. Elaborar dibujos de lo observado en las laminillas.
18
DIAGRAMA DE FLUJO:
19
RESULTADOS:
En los siguientes espacios dibuja lo observado en cada uno de los objetivos utilizados.
Laminilla 1:
20
Laminilla 2:
21
CUESTIONARIO:
1. Indica el nombre de cada una de las partes del microscopio:
22
2. Indica las ventajas y desventajas del uso y manejo del microscopio ptico:
23
Ventajas
Desventajas
LITERATURA CITADA:
1. Bernis, M. 1998. Atlas de Microscopia. Mxico D.F. Segunda edicin. Editorial Fernando
Aldape Barrera. Pags. 95-107.
2. Vovides, A. 2000. Microscopia ptica: para las ciencias biolgicas. Chiapas. Universidad
de Ciencias y Artes del Estado de Chiapas. Pags. 14-19.
3. Seplveda, J. 2011. Histologa: Biologa celular y tisular. Instructivo de laboratorio.
Quinta edicin. Editorial Mc Graw-Hill. Pg. 2.
PRCTICA No. 3
FROTIS BUCAL
TEMA TERICO AL QUE APOYA: Generalidades de la organizacin y estructura celular.
COMPETENCIA: El alumno aprender a elaborar preparaciones de muestras biolgicas que le
permitirn observar y reconocer clulas eucariotas y procariotas al microscopio, as como, sus
principales estructuras.
FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA:
La clula es la unidad bsica funcional y estructural ms pequea que forma a los organismos
vivos. En su estado natural, son casi invisibles al microscopio convencional, una manera de
hacerlas visibles es realizar preparaciones donde se tian con colorantes orgnicos selectivos,
los cuales, se comportan como compuestos cidos o bsicos y tienen la tendencia de formar
uniones electrostticas con los radicales ionizables de los tejidos.
Las preparaciones pueden ser temporales, frescas y permanentes. Una preparacin temporal
es aquella que es utilizada en el momento de la observacin, ya que requiere que el medio de
montaje no se evapore tan rpidamente y que sea posible que el material biolgico se conserve
por un tiempo en condiciones de ser observado. Las preparaciones permanentes son aquellas
que permanecen intactas por siempre, por lo que se debe hacerse con un material especial
para que el cubreobjetos permanezca perfectamente adherido al portaobjetos durante aos y
muestra no se deteriore.
MARCO TERICO:
27
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Gotero.
METODOLOGA:
CLULAS EUCARIOTAS:
1. Colcate los guantes.
2. Toma un portaobjetos y un cubreobjetos bien limpios y secos.
3. Para obtener la muestra, tira del labio inferior hacia fuera y raspa de forma circular, la parte
interna del mismo con un hisopo estril.
4. Coloca la muestra en el portaobjetos frotando el hisopo en sobre el centro del mismo.
5. Deposita una gota de agua sobre la muestra, en el centro del portaobjetos.
6. Con el extremo contrario del hisopo, extiende la mucosa extrada y disprsala en la gota de
agua.
7. Teir las preparaciones agregando una gota de azul de metileno sobre la muestra.
8. Colocar el cubreobjetos cuidando de no hacer burbujas.
9. Observar al microscopio, enfocando progresivamente con los objetivos de menor a mayor
aumento.
28
CLULAS PROCARIOTAS:
Preparacin de la muestra:
1. Sujeta la lengua del paciente con el abatelenguas y frota con firmeza la pared
posterior de la garganta con el hisopo de algodn seco y estril (Fig. 1). NOTA:
Se debe tener cuidado de no tocar la epiglotis para no provocar el vmito en el
paciente.
DIAGRAMA DE FLUJO:
30
RESULTADOS:
CLULAS EUCARIOTAS (Objetivo 4x)
Descripcin
31
32
33
34
CUESTIONARIO:
1. Se observa algn orgnulo citoplasmtico? Cul?
3. Cules colorantes se utilizan para teir clulas eucariotas, adems del azul de metileno?
35
PRCTICA No. 4
EXTRACCIN DE ADN
COMPETENCIA:
El alumno al finalizar la prctica conocer el procedimiento para extraer ADN a partir de una
muestra sangunea humana.
FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA:
El cido desoxirribonucleico (ADN) constituye el material gentico de los organismos,
por lo tanto, es el componente qumico primario de los cromosomas y el material del que los
genes estn formados.
La molcula de ADN es lineal, sin ramificaciones, forma hebras largas, y est formado
por dos cadenas de polinucleotidos enrolladas alrededor del mismo eje, comnmente
conocidas como doble hlice con giro a la derecha. Cada una de estas cadenas, est formada
por grupos fosfatos que se encuentran al exterior de la molcula en contacto con el medio
acuosa, a estos grupos se unen, en C5 y C3, un azcar de cinco tomos de carbono llamado
desoxirribosa.
Existen diferentes tcnicas de extraccin de ADN de las clulas, ya sean eucariotas o
procariotas, varan en algunos pasos entre s pero al finalizar la practica el producto se puede
distinguir mediante la observacin de un material precipitado. Estos resultados pueden
utilizarse en numerosas investigaciones, diagnsticos, estudios moleculares, etc. los cuales
arrojan resultados sobre ciertas regiones de inters del genoma, todo esto aunado a que
conociendo la informacin gentica de un individuo se pueden manipular muchas de sus
funciones con fines mdicos.
MARCO TERICO:
38
MATERIALES Y EQUIPO:
Muestra de sangre.
Microtubos.
Pipeta semiautomtica.
Puntas para pipeta.
Gradilla.
Agua destilada.
Tris-HCl 10mM y 20 mM (pH 7.6)
Isopropanol.
EDTA 1mM.
SDS 0.1% p/v.
Acetato de potasio 5M.
cido actico glacial.
Buffer TE.
Etanol absoluto.
MIcrocentrfuga.
39
4.
5.
6.
7.
DIAGRAMA DE FLUJO:
RESULTADOS:
Anota tus observaciones. Cul era la apariencia del ADN?. En qu momento se empez a
observar la formacin de ADN?
OBSERVACIONES
CUESTIONARIO:
a) Explique la importancia de la extraccin y purificacin de DNA en la investigacin biomdica
y prctica clnica.
261.
PRCTICA No. 5
ELECTROFORESIS DEL ADN
TEMA TERICO AL QUE APOYA: ADN.
FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA:
La concentracin e integridad del ADN extrado, as como el tamao de distintos
fragmentos de ADN (por ejemplo, productos de PCR) pueden ser verificadas mediante
electroforesis en geles de agarosa o poliacrilamida. La electroforesis consiste en la separacin
de molculas (protenas, isoenzimas, cidos nucleicos) a travs de una matriz tamponada
(agarosa, acrilamida, almidn). La matriz funciona como un filtro, separando las molculas en
un campo elctrico, de acuerdo al tamao y la carga neta que poseen. En el caso de los cidos
nucleicos, el grupo fosfato es el responsable por la fuerte carga negativa en condiciones de pH
neutro, haciendo que los fragmentos migren hacia el polo positivo (nodo) durante la
electroforesis (Posso y Ghneim 2008).
La resolucin y velocidad de separacin de fragmentos de ADN por electroforesis son
reguladas a travs de la concentracin de agarosa (o acrilamida) en el gel y el voltaje aplicado
durante la electroforesis. La agarosa funciona como un filtro en el que los fragmentos de menor
tamao migran ms rpidamente hacia el nodo que aquellos de mayor tamao. Al aumentar la
concentracin de agarosa se dificulta el movimiento de los fragmentos a lo largo del gel,
permitiendo obtener una mayor resolucin en los fragmentos de menor longitud. El incremento
del voltaje aumenta proporcionalmente la velocidad de migracin de los fragmentos en el gel
(Posso y Ghneim op cit.).
Los cidos nucledos separados en geles de agarosa pueden visualizarse mediante
tincin con colorantes fluorescentes, lo cual permite evaluar su integridad y estimar su
concentracin mediante un anlisis comparativo con patrones de concentracin conocida. Los
colorantes fluorescentes actan mediante insercin entre las pares de bases que conforman el
cido nucleco. El bromuro de etidio es ampliamente utilizado para la visualizacin de ADN y
ARN. Sin embargo, ste es un reactivo altamente txico, con propiedades mutagnicas, por lo
que debe ser manejado con extremo cuidado en el laboratorio. En la actualidad existen
colorantes fluorescentes alternativos, como SYBR Safe, SYBR Gold, SYBR Green I, Vistra
Green y Syto60, desarrollados especficamente para reducir los riesgos potenciales de
mutagnesis.
Pipetas semiautomticas.
Puntas para pipeta.
Probeta.
Matraz Erlenmeyer.
Cmara de electroforesis horizontal con peine y bandeja.
Fuente de poder.
Guantes.
Sybr Green.
Agarosa grado molecular.
Tris base
cido Brico
EDTA
Azul de bromotimol
Glicerol
SDS
Agua Destilada.
METODOLOGIA:
DIAGRAMA DE FLUJO:
47
CUESTIONARIO:
1. Mencionar que otros tipos de electroforesis existen y los tipos de geles que se utilizan en
ellos.
48
PRCTICA No. 6
ANLISIS DE CARIOTIPO
TEMA TERICO AL QUE APOYA: Cromosomas.
COMPETENCIA: El alumno tiene la capacidad de identificar y distinguir a partir de una imagen
de cromosomas metafsicos el cariotipo de un ser humano con o sin aberraciones
cromosmicas.
PROPSITO GENERAL: El alumno puede reconstruir un cariotipo humano a partir de una
fotografa o imagen de cromosomas desordenados. Adems reconoce anomalas
cromosmicas frecuentes.
INTRODUCCIN:
El cariotipo humano es la imagen del arreglo de sus 46 cromosomas que se hacen visibles
durante la metafase de la mitosis. En las ltimas tres dcadas las tcnicas de tincin han
permitido resolver ambigedades de la identificacin individual de los cromosomas e identificar
dentro de ellos regiones especficas dnde se localizan los genes. El anlisis de los
cromosomas metafsicos con las tcnicas de tincin ha permitido distinguir alrededor de 2000
regiones ricas en adeninas y timinas (A y T) que facilitan la localizacin de genes especficos
(Alberts y colaboradores, 1994). Cada cromosoma posee un estrechamiento denominado
centrmero, de gran relevancia para los movimientos de los cromosomas durante divisin
celular. De acuerdo a la posicin del centrmero los cromosomas se clasifican en telocntricos,
acrocntricos, submetacntricos y metacntricos. En organismos diploides, como nosotros, las
clulas a excepcin de las gamticas poseen un doble juego de cromosomas (cromosomas
homlogos) que se indica con los caracteres 2n, mientras que las clulas con una sola especie
(clulas haploides) con la letra n (Junqueira y Carneiro, 1997).
Las variaciones en el nmero normal de cromosomas de una especie se conocen como
aberraciones cromosmicas. Adems del nmero, pueden varan en la forma, lo que se conoce
como aberraciones estructurales. Cuando no son letales, en ocasiones pueden transmitirse a la
progenie y producir malformaciones y o enfermedades congnitas, por lo cual estudiar el
cariotipo resulta ser una actividad importante. Este tipo de anlisis suele ser utilizado para
evaluar a parejas con antecedentes de abortos espontneos o examinar infantes con rasgos
inusuales o retrasos en el desarrollo. Los anlisis de cariotipo pueden realizarse prcticamente
a partir de cualquier tejido, incluyendo lquidos amnitico, sangre, mdula sea, etc
(MedlinePlus).
MARCO TERICO:
51
DIAGRAMA DE FLUJO:
52
MATERIALES Y EQUIPOS:
METODOLOGA:
1. Cuente y recorte individualmente los cromosomas de la imagen del cariotipo desordenado
que se le proporciona en los anexos.
2. Ordnelos por tamao.
3. Identifique, por su patrn de bandas, los pares cromosmicos. (Para averiguar de qu
cromosoma se trata, comprelos con el patrn de bandas mostrado por el idiograma).
4. Llene la tabla I de la seccin resultados.
5. Una vez ordenados los cromosomas, sujtelos con cinta adhesiva o goma.
6. Indique en la imagen de la seccin de resultados qu cromosomas son metacntricos,
cuales submetacntricos y cuales acrocntricos.
7. Indique segn el nmero de cromosomas a qu organismo pertenece?, si ste presenta
anomalas numricas y si existe dimorfismo sexual en los cromosomas a que sexo
corresponde el grupo de cromosomas analizado.
8. Discuta los resultados obtenidos con los de otros equipos y concluya a partir de su
discusin el cuerpo de conocimientos obtenido.
53
Ch's autosmicos
Ch's sexuales
C
D
Ch's acrocntricos
Ch's metacntricos
Ch's submetacntricos
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
CUESTIONARIO:
2.
Cules son las diferencias que podran encontrarse en un cariotipo de una persona
sana y en una persona con alguna enfermedad relacionada con aberraciones
cromosmicas?
Down?
PRCTICA No. 7
MARCO TERICO:
Jeringa.
Torniquete.
Torundas de algodn.
Alcohol etlico.
Tubo vacutainer con anticoagulante (EDTA).
Microtubos o tubos de ensaye.
Soluciones de NaCl al 1.8%, 0.9% y 0.45%
Solucin de sodio-dodecil-sulfato (SDS) al 0.1%
Agua destilada.
Pipetas semiautmaticas y puntas desechables.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Microscopio ptico.
Papel de seda y lquido para limpieza de lentes de microscopio.
Recipientes para RPBI.
METODOLOGA:
1.
2
3
4.
5.
6.
7.
8.
Obtener sangre fresca (aprox. 3 ml) de uno de los alumnos del subgrupo, utilizando la
tcnica apropiada de venopuncin (descrita en ANEXO 6 de este manual)
Transferir la sangre a un tubo vacutainer con EDTA o heparina.
Rotular los 4 tubos de ensaye de acuerdo a la solucin que van a contener (1.8%, 0.9%,
0.45% y SDS 0.1% respectivamente).
a. En el tubo # 1, colocar 1.5 ml de solucin NaCl al 0.45 %
b. En el tubo # 2, colocar 1.5 ml de solucin NaCl al 0.9 %.
c. En el tubo # 3, colocar 1.5 ml de solucin NaCl al 1.8 %.
d. En el tubo # 4, colocar 1.5 ml de solucin NaCl 0.9%, agrega 1 gota de SDS al
0.1%.
Aadir 1 gota de sangre a cada uno de los 4 tubos de ensaye.
Mezclar con cuidado.
Rotular 4 portaobjetos limpios de la misma forma que los tubos de ensaye.
Realizar 4 preparaciones temporales, colocando 1 gota de cada una de las
suspensiones obtenidas en el portaobjetos correspondiente y cubrir cuidadosamente
con un cubreobjetos.
Visualizar la morfologa eritrocitaria al microscopio en el objetivo 40X.
DIAGRAMA DE FLUJO:
RESULTADOS:
62
CUESTIONARIO:
a
LITERATURA CITADA:
1 Karp, G. 2001. Biologa Celular y Molecular. ISBN: 9701016440
2
Alberts et al. 2006. Essential Cell Biology, An Introduction to the Molecular
Biology of the Cell. Garland Publishing, Inc. ISBN 0-8153-2045-0
63
PRCTICA No. 8
FR AC CI O N AM I EN TO CELUL AR Y TI NCI N DE MI TO
CO NDRI AS
MARCO TEORICO:
65
DIAGRAMA DE FLUJO:
66
67
OBJETIVO 100x
Descripcin
CUESTIONARIO:
1. Qu otras tcnicas existen para la separacin de organelos celulares?
3. Cules son las ventajas y las desventajas de trabajar con clulas enteras o fraccionadas?
CONCLUSIONES: Definir los aciertos, errores y anotaciones pertinentes para una buena
prctica, finalizando con una conclusin que aporte acerca de la importancia de sta tcnica
en la prctica clnica.
LITERATURA CITADA:
1. Callen J. 2003. Biologa celular: de las molculas a los organismos. Mxico, D.F. Segunda
edicin. Editorial Continental. Pgs. 122-125.
2. Cooper, G. 2002. La clula. Segunda edicin. Editorial Marbn. Pgs. 17-24, 81.
3. Coutio, R. y Fernandez, S. 1997. Biologa celular. Manual de laboratorio experimental.
Textos universitarios. Primera edicin. Pgs. 21-22.
4. Curtis, H. 2004. Biologa. Mxico D.F. Sexta edicin. Editorial Panamericana. Pgs. 100-112,
82.
ANEXOS
71
A-1 EVALUACIN.
RUBRO
PRESENTACIN
10%
MARCO TERICO
20%
RESULTADOS E
INTERPRETACIN
35%
CUESTIONARIO
10%
CONCLUSIN
15%
9-10
-La bitcora est escrita
a mano, en limpio y
organizada.
- Hay secuencia lgica
de la presentacin de
cada rubro a evaluar.
7-8
-La bitcora est bien
organizada, la limpieza
y cuidado estn
ausentes en algunas de
sus partes.
No hay secuencia
lgica de la
presentacin de cada
rubro a evaluar.
4-6
- La bitcora no est
bien organizada, la
limpieza y cuidado
estan ausentes en la
mayora de sus partes.
No hay secuencia
lgica de la
presentacin de cada
rubro a evaluar.
0-3
-La bitcora est
desorganizada o sucia.
El marco terico
contiene informacin
necesaria y concreta
sobre el tema. Hay
antecedentes del
mismo y se lleva a cabo
una justificacin para
abordar el tema a tratar.
Redactada con
formalidad.
El marco terico
contiene informacin
necesaria y concreta
sobre el tema. Hay
antecedentes del
mismo.
Redactada con
formalidad.
El marco terico
contiene informacin
necesaria y concreta
sobre el tema.
Redactada con poca
formalidad.
El marco terico
contiene informacin
necesaria sobre el
tema.
Redactada de manera
totalmente informal.
La bitcora describe
clara, correcta y
concretamente los
resultados
Se sigue una secuencia
lgica.
Se establece una
relacin entre lo
observado (descripcin)
y los resultados.
La bitcora describe
concretamente los
resultados.
Se establece una
relacin entre lo
observado y los
resultados. Algunas
descripciones no
corresponden con los
resultados.
La bitcora describe
concretamente los
resultados.
Se sigue una secuencia
lgica.
La bitcora describe
errneamente los
resultados.
Alguna pregunta no se
resolvi o est resuelta
incorrectamente.
La mayora de las
preguntas estn sin
resolver o la respuesta
no es congruente con lo
que se le pide.
No se resolvi el
cuestionario.
Todas las preguntas
estn resueltas
incorrectamente.
- Define de manera
clara el cuerpo de
conocimientos obtenido.
-Emerge de manera
indiscutible de los
resultados obtenidos.
- Define el cuerpo de
conocimientos obtenido.
-Emerge de los
resultados obtenidos.
- No define el
conocimiento generado
-Es incongruente con
los resultados.
La mayora de las
descripciones no
corresponden con los
resultados.
72
REFERENCIAS
CITADAS
5%
ORTOGRAFA,
GRAMTICA Y
SINTAXIS
5%
La bitcora contiene
mnimo 5 referencias
bibliogrficas: 3 libros, 1
artculo de investigacin
y 1 electrnica fuente
confiable.
La bitcora contiene
mnimo 4 referencias
bibliogrficas:
2
libros, 1 artculo de
investigacin y 1
electrnica de fuente
confiable.
La bitcora contiene
mnimo 2 referencias
bibliogrfica: 1 libro y 1
artculo de investigacin
La bitcora contiene
mnimo 1 referencia
bibliogrfica: 1 artculo
de investigacin.
La bitcora solo
contiene citas de
paginas web.
No comete errores.
-Errores (1-5) en todo el
reporte.
Errores de frecuencia
moderada: 1-3 por
pgina.
-Errores frecuentes en
todos los rubros:
Ortografa, gramtica y
sintaxis.
73
Conocen la
competencia
de la prctica
y todos los
pasos del
procedimient
o de la
prctica a
realizar
(9-10
Conocen la
competencia
y algunos
pasos del
procedimient
o de la
prctica a
realizar.
(7-8
ptos.)
Conocen
solamente
los pasos del
procedimient
o de la
prctica a
realizar pero
no conoce la
competencia
(5-6
Conocen la
competenci
a pero no
los pasos
del
procedimie
nto de la
prctica a
realizar
(3-4
No
conocen la
competen
cia ni los
pasos del
procedimie
nto de la
prctica a
realizar.
(0-2
MANEJO DE
MATERIALES,
EQUIPO E
INSTALACIONE
S (5 ptos.)
Conocen los
nombres y
funcionami
ento de
todo el
material y
el equipo
de
laboratorio.
(5
ptos.)
Conocen el
funcionamie
nto y nombre
de algunos
materiales y
algn
equipo
de
laborato
rio. (3-4
ptos.)
Conocen los
nombres pero
no el
funcionamien
to del
material y
equipo de
laboratorio.
(2
ptos.)
COLABORACIO
N EN EQUIPO
(10 ptos.)
Promueven
notablement
e todo el
tiempo el
trabajo
colaborativo
o en equipo
Partici
pa
activamente
en la
realizacin
de toda la
prctica. (910 ptos.)
Promueven
algunas
veces el
trabajo
colaborativo
o en equipo
Participa
activamente
en algunas
etapas del
desarrollo de
la prctica
(5-6
ptos.)
COMPORTAMIE
NTO
Y
ORGANIZACION
DEL AREA DE
TRABAJO (15
ptos.)
Su
comportamie
nto va de
acuerdo al
reglamento
del
laboratorio
todo el
tiempo a
partir de que
ingresa al
mismo.
(13-15
ptos.)
Concluyero
n la
prctica.
(10
ptos.)
Promueven la
mayora del
tiempo
durante el
desarrollo de
la prctica el
trabajo
colaborativo
o en equipo
Partici
pa
activamente
en la mayora
de los
momentos de
la prctica.
Su
comportamie
nto va de
acuerdo al
reglamento
del
laboratorio
la mayora
del tiempo
desde su
ingreso al
mismo. (1012 ptos.)
Conocen
algunos
nombres y
poco
sobre el
funcionami
ent o del
material y
equipo de
laboratorio
.
(1
Promueve
n muy
poco el
trabajo
colaborati
vo o en
equipo
Participa
poco en
las etapas
del
desarrollo
de la
prctica.
(3-4 ptos.)
N/A
Concluyero
n
parcialmen
te la
prctica
No
conocen el
material ni
su
funcionami
ent o as
tampoco el
equipo de
laboratorio
.
(0
ptos.)
No
promueven
el trabajo
colaborativ
o o en
equipo
No
participa
en
ninguna
etapa del
desarrollo
de la
prctica.
(0-2
ptos.)
Su
comportam
ien to no
va de
acuerdo al
reglament
o
del
laboratorio
en ningn
momento
desde su
ingreso al
mismo.
No
concluyero
n la
prctica
(0
PRCTICA
CONCLUIDA (10
ptos.)
Su
comportami
ento va de
acuerdo al
reglamento
del
laboratorio
algunas
veces desde
su ingreso al
mismo.
(7-9
ptos.)
Su
comportam
ien to va
de acuerdo
al
reglament
o
del
laboratorio
pocas
veces
desde su
ingreso al
mismo.
N/A
74
75
UNIVERSIDAD
~~~~~~~~~
GRUPO:
~~~~~~~~
No. PRACTICA:
~~~~-
No. EQUIPO:
~~~~~~~~
INTEGRANTESDEL EQUIPO:
ASISTENCIA:
1~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
2~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~3 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
4
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
5 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
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80
Estado fsico
Descripcin
Cultivos y cepas
Lquido / slido
Patolgicos
Slido / lquido
No anatmicos
Slido
Punzocortantes
Slido
Estado
fsico
Envasado
Color
Sangre
Lquidos
Recipientes hermticos
Rojo
Cultivos y cepas de
agentes infecciosos
Slidos
Bolsas de polietileno
Rojo
Patolgicos
Slidos
Bolsas de polietileno
Amarillo
Lquidos
Recipientes hermticos
Amarillo
Slidos
Bolsas de polietileno
Rojo
Lquidos
Recipientes hermticos
Rojo
Slidos
Recipientes rgidos
polipropileno
Rojo
Residuos no anatmicos
Objetos punzocortantes
78
79
80
A.
B.
REACTIVO
CANTIDADES
Tris base
109g
cido brico
55g
EDTA
4.65g
E.
81
Nota: Sucrosa (40%), Ficoll (15%), o glicerol (30%) pueden ser intercambiados en la
formula.
F.
Buffer TE (1L):
G.
Agregar 60.57 g de Tris base a 0.5L de agua, ajustar pH a 7.5 utilizando HCl
H. 0.5M EDTA (100 ml):
X),
Patrn de bandeo
Idiograma
Un idiograma es la representacin esquemtica del tamao, forma y patrn de bandas
85
Contraindicaciones relativas:
1. Zonas de flexin.
2. Venas muy pequeas
88
90