cibt.bio.cornell.edu/workshops.../Biolum.

pdf

Bioluminescent Bacteria There are bacteria living in the oceans that actually
produce light! These microbes are easily found in seawater, marine sediments, in
the guts of marine animals, and on the surface of decomposing fish. There are
fish and squid that have evolved the ability to harness the power of these lightproducing microbes. These animals have specialized organs that provide
bioluminescent bacteria with both a safe place to live and a source of food. In
return the animals can use the light that is produced by the microbes either as a
means of camouflage, as an aid in hunting, or even as a way of attracting mates.
While interesting from the point of view of understanding the complex
interactions between animals and microbes the study of luminescent bacteria
has also provided unexpected insights on strategies for treating cystic fibrosis
and preventing antibiotic resistant bacterial infections. Over the three days of
the course we will isolate luminescent bacteria from seawater and we will make
some basic observations about the nature of bacterial luminescence. This
exercise will introduce you to some basic techniques that are required for
growing microorganisms. In addition, we hope to be able to send you home with
your own culture of luminescent bacteria and the ability to grow them on your
own. Bioluminescent Bacteria: The picture at left shows how bioluminescent
bacterial colonies appear on a petri plate under normal light. The image on the
right is what you will see when you look at the same plate of bacteria in a dark
room Luminescent Bacteria Who are they? -Genera Vibrio and Photomicrobium
What do they look like? -typically curved rods 1 to 3 microns long and motile by
flagella Where are they found? -Seawater (1 to 100 cells per ml) -fish digestive
tracts -on the outside of decaying fish -Symbiotic relationships: Angler Fish
Flashlight Fish Bobtail Squid How do they make light? -by a chemical reaction
that consumes oxygen FMN +RCOOH + H2O + Light)(FMNH2 + O2 + RCHO
-the reaction is catalyzed by an enzyme called luciferase When do they make
light?
(FMNH2 + O2 + RCHO reaksi -the dikatalisis oleh enzim yang disebut luciferase Kapan
mereka membuat cahaya?Bakteri bioluminescent Ada bakteri yang hidup di lautan yang
benar-benar menghasilkan cahaya! Mikroba ini mudah ditemukan dalam air laut,
sedimen laut, di keberanian hewan laut, dan pada permukaan membusuk ikan. Ada ikan
dan cumi-cumi yang telah berevolusi kemampuan untuk memanfaatkan kekuatan ini
mikroba menghasilkan cahaya. Hewan ini memiliki spesialisasi organ yang menyediakan
bakteri bioluminescent dengan kedua tempat yang aman untuk tinggal dan sumber
makanan. Sebagai imbalannya hewan dapat menggunakan cahaya yang dihasilkan oleh
mikroba baik sebagai sarana kamuflase, sebagai bantuan dalam berburu, atau bahkan
sebagai cara untuk menarik pasangan. Sementara menarik dari sudut pandang
memahami interaksi kompleks antara hewan dan mikroba studi bakteri luminescent juga
telah memberikan wawasan yang tak terduga pada strategi untuk mengobati cystic
fibrosis dan mencegah infeksi bakteri resisten antibiotik. Selama tiga hari tentu saja kita
akan mengisolasi bakteri luminescent dari air laut dan kami akan membuat beberapa
pengamatan dasar tentang sifat pendaran bakteri. Latihan ini akan memperkenalkan
Anda kepada beberapa teknik dasar yang diperlukan untuk mikroorganisme berkembang.
Selain itu, kami berharap untuk dapat mengirim pulang dengan budaya sendiri bakteri
luminescent dan kemampuan untuk tumbuh mereka sendiri. Bakteri bioluminescent:
Gambar di sebelah kiri menunjukkan bagaimana bioluminescent koloni bakteri muncul di
piring petri di bawah cahaya normal. Gambar di sebelah kanan adalah apa yang akan
Anda lihat ketika Anda melihat piring yang sama dari bakteri dalam ruangan gelap

bercahaya Bakteri Siapa mereka? -Genera Vibrio dan Photomicrobium Apa yang mereka
terlihat seperti? -typically batang melengkung 1 sampai 3 mikron panjang dan motil
dengan flagela mana mereka ditemukan? -Seawater (1 sampai 100 sel per ml) saluran
pencernaan -fish -on luar membusuk hubungan -Symbiotic ikan: Angler Fish Senter Ikan
ekor Squid Bagaimana mereka membuat cahaya? -Dengan reaksi kimia yang
mengkonsumsi FMN oksigen + RCOOH + H2O + Ringan)

-Light is only produced when the organisms are present at high cell densities
Quorum Sensing: the ability of bacteria to regulate gene expression in response
to cell density Gene Gene Product Function LuxI autoinducer always expressed,
this is the signal LuxR receptor always expressed, the receptor detects the signal
(autoinducer) and in response turns on expression of luciferase genes LuxAB
luciferase makes light, only expressed when the receptor is active Why is
Quorum Sensing Important? -involved in Biofilm formation: Psedomonas
aeruginosa and cyctic fibrosis Antibiotic resistant infections Additional Useful
Information Websites to Find Info on Luminescent Bacteria:
whyfiles.org/022critters/light.html lifesci.ucsb.edu/~biolum/index.shtml
www.bioart.co.uk/lux www.biology.pl/bakterie_sw/index_en.html Sources for
ingredients: Companies such Carolina Biological (www3.Carolina.com) of Fisher
(www3.fishersci.com) can provide you with all of the ingredients that are
mentioned below as well as inoculating loops. Making an inoculating loop
(inoculating loops can be purchased for about $2.00 each or made as below)
materials: pencil, about 8 cm of thin wire, tape, needle nose pliers 1) Tape the
end of the wire to the pencil so that about 3 cm of the wire stick out beyond the
pencil. 2) Use the needle nose pliers to curl the end of the wire into a small loop
(the smaller the loop the better, the optimum size is about 1-2mm diameter).
Making Seawater Complete (SWC) media Materials: natural or artificial seawater
(you can get instant ocean salt mix from any pet store that sells marine fish), tap
water, agar, yeast extract, peptone, glycerol, 20 sterile petri plates, container
suitable to boil 1 liter of liquid, heat source to boil water SWC agar recipe: 1L
water 24g sea salt 5 g peptone 3 g yeast extract 3 ml glycerol 15g agar (if
making solid media) If you have an autoclave: Mix all of the above ingredients
together and autoclave for 20-40 minutes. After media has cooled to the point
where you can just stand to touch the container (about 50 60 degrees C) and
pour into sterile petri plates. Be aware that the agar will solidify once the
temperature falls below 40 degrees C. If you dont have an autoclave: 1) Mix the
media ingredients in a container sufficient for boiling 1 liter of media. 2) Cover
and boil media for at least 30 minutes. Be careful not to boil over. 3) Allow media
to cool to the point where you can just stand to touch the container (about 50
60 degrees C) and pour into sterile petri plates. Be aware that the agar will
solidify once the temperature falls below 40 degrees C.
-Light Hanya dihasilkan ketika organisme yang hadir di sel yang tinggi kepadatan Kuorum
Sensing: kemampuan bakteri untuk mengatur ekspresi gen dalam menanggapi
kepadatan sel Gene Gene Produk Fungsi Luxi autoinducer selalu menyatakan, ini adalah
reseptor sinyal LuxR selalu menyatakan, reseptor mendeteksi sinyal (autoinducer) dan
respon menyala ekspresi gen luciferase LuxAB luciferase membuat cahaya, hanya
diungkapkan ketika reseptor aktif Mengapa Kuorum Sensing Penting? -involved dalam
pembentukan biofilm: infeksi resisten antibiotik fibrosis Psedomonas aeruginosa dan
cyctic Informasi yang berguna tambahan Situs Web untuk Cari Info di bercahaya Bakteri:

whyfiles.org/022critters/light.html lifesci.ucsb.edu/~biolum/index.shtml www.bioart.

co.uk/lux www.biology.pl/bakterie_sw/index_en.html Sumber untuk bahan: Perusahaan
seperti Carolina Biological (www3.Carolina.com) dari Fisher (www3.fishersci.com) dapat
menyediakan Anda dengan semua bahan yang disebutkan di bawah serta inokulasi loop.
Membuat loop inokulasi (inokulasi loop dapat dibeli untuk sekitar $ 2,00 setiap atau
dibuat seperti di bawah ini) bahan: pensil, sekitar 8 cm dari kawat tipis, tape, jarum
hidung tang 1) Tape akhir kawat untuk pensil sehingga sekitar 3 cm dari kawat tetap
keluar melampaui pensil. 2) Gunakan tang hidung jarum meringkuk akhir kawat menjadi
lingkaran kecil (lebih kecil loop yang lebih baik, ukuran yang optimal adalah sekitar 12mm diameter). Membuat air laut Lengkap (SWC) Bahan Media: air laut alami atau
buatan (Anda bisa mendapatkan campuran garam laut instan dari toko hewan peliharaan
yang menjual ikan laut), air keran, agar, ekstrak ragi, pepton, gliserol, 20 piring petri
steril, wadah yang sesuai mendidih 1 liter cairan, sumber panas untuk mendidihkan air
SWC agar resep: 1L 24g air garam laut 5 g ekstrak pepton 3 g ragi 3 ml gliserol 15g agar
(jika membuat media padat) Jika Anda memiliki autoclave: Campur semua di atas bahan
bersama-sama dan autoclave selama 20-40 menit. Setelah media telah didinginkan ke
titik di mana Anda hanya bisa berdiri untuk menyentuh wadah (sekitar 50 -60 derajat C)
dan tuangkan ke piring petri steril. Sadarilah bahwa agar akan memperkuat setelah suhu
turun di bawah 40 derajat C. Jika Anda tidak memiliki autoclave: 1) Campur bahan media
dalam wadah yang cukup untuk merebus 1 liter media. 2) Penutup dan media mendidih
selama minimal 30 menit. Hati-hati untuk tidak mendidih. 3) Biarkan media untuk
mendinginkan ke titik di mana Anda hanya bisa berdiri untuk menyentuh wadah (sekitar
50 -60 derajat C) dan tuangkan ke piring petri steril. Sadarilah bahwa agar akan
memperkuat setelah suhu turun di bawah 40 derajat C.