Sistemas automatizados para identificacin bacteriana

En los ltimos aos, la automatizacin se ha extendido de manera constante a lo

largo de las reas de qumica y hematologa clnica de los laboratorios de
diagnstico, mientras que a los laboratorios de microbiologa clnica en gran
medida, han sido excluidos de esta tendencia. Aunque la identificacin microbiana
automatizada y los sistemas de pruebas de susceptibilidad antimicrobiana
automatizadas son ampliamente utilizadas en los laboratorios de microbiologa, el
procesamiento de muestras de microbiologa y el diagnstico, en particular, siguen
siendo tareas principalmente manuales. Si bien reconocemos que algunos de los
laboratorios ms grandes de microbiologa utilizan instrumentacin urine-plating, la
mayora de los laboratorios de microbiologa tienen poca o ninguna automatizacin
en sus reas de procesamiento de la muestra, con la excepcin de algunos
laboratorios en Europa occidental, Australia y las naciones del Medio Oriente. An
pocos laboratorios han implementado alguna versin de automatizacin de
laboratorio totales (TLA).
Los cambios asociados con la seleccin e implementacin de soluciones de
automatizacin de la microbiologa implicarn una gestin importante y retos
financieros sobre el liderazgo de laboratorio. De los principales impulsores de la
automatizacin, la estandarizacin de los mtodos de identificacin de matriz
asistida por lser de desorcin-ionizacin por tiempo de vuelo (MALDI-TOF),
espectrometra de masas (MS) y el transporte de muestras lquidas han permitido
a los laboratorios de microbiologa simplificar los sistemas de recogida y de
identificacin, creando un flujo de trabajo que puede ser optimizado con la
automatizacin.
Varios factores han contribuido a la escasez actual de la automatizacin en los
laboratorios de microbiologa clnica. Estos incluyen las ideas que la microbiologa
es demasiado complejo para automatizar, ninguna mquina puede sustituir a un
ser humano en el laboratorio de microbiologa, la automatizacin es demasiado
caro para los laboratorios de microbiologa y laboratorios de microbiologa son
demasiado pequeos para automatizar.
Han surgido varias fuerzas impulsoras que estn cambiando las actitudes acerca
de la automatizacin. Estos se refieren a los cambios globales en la industria de
laboratorio, la creciente escasez de personal capacitado, la disminucin de
reembolso, una creciente demanda de una mejor calidad, y dos muy importantes
innovaciones tecnolgicas: la introduccin de dispositivos de transporte hisopo de
base lquida y el surgimiento de la tecnologa MALDI-TOF.
Los retos que enfrentan en la actualidad los laboratorios de microbiologa es la
realizacin de ms pruebas (mayor en volumen y complejidad), para hacer frente a
la creciente escasez de tecnlogos de microbiologa capacitado y para hacer todo

esto en un clima econmico donde el reembolso no es probable mantener con el

aumento de los costos.

Evaluacin entre las diferentes marcas de sistemas automatizados para test

de susceptibilidad

Debe ser una tarea importante del laboratorio de microbiologa la realizacin de

pruebas de sensibilidad a antimicrobianos de aislamientos bacterianos. Estas
pruebas tiene la finalidad de detectar la posible resistencia de agentes patgenos
hacia determinados medicamentos y as asegurar la susceptibilidad a frmacos de
eleccin para infecciones particulares. Los mtodos de prueba ms utilizados
incluyen microdilucin en caldo o mtodos de instrumentos automatizados rpidos
que utilizan materiales y dispositivos comercializados en el mercado. Cada mtodo
tiene sus puntos fuertes y dbiles. Algunos proporcionan resultados cuantitativos
(por ejemplo, la concentracin mnima inhibitoria), y todos proporcionan
evaluaciones cualitativas utilizando las categoras susceptible, intermedio o
resistente.
Sistema de instrumentacin automatizada. El uso de instrumentacin puede
estandarizar la lectura de los puntos finales, y adems dan resultados en un
perodo ms corto que las lecturas manuales ya que los sistemas sensibles de
deteccin ptica permiten detectar cambios sutiles en el crecimiento bacteriano.
Hay 4 instrumentos automatizados actualmente aprobado por la FDA para su uso
en los Estados Unidos. Tres de ellos puede generar resultados rpidos (3,5-16 h),
mientras que el cuarto es un sistema durante la noche. El MicroScan WalkAway
(Siemens Healthcare Diagnostics) es un dispositivo, incubador/lector autnomo,
grande que puede incubar y analizar 40-96 bandejas de microdilucin. El
WalkAway utiliza bandejas de tamao estndar que se hidratan y se inoculan de
forma manual y luego se coloca en una de las ranuras de incubadoras en el
instrumento. El instrumento incuba las bandejas para el perodo considerado, y los
examina peridicamente, ya sea con un fotmetro o fluormetro. Los paneles de
prueba de susceptibilidad de gram-negativas que contienen sustratos
fluorognicos se pueden leer en 3,5-7 h.
El BD Phoenix Automated Microbiology System (BD Diagnostics) tiene un lector de
gran incubadora con una capacidad para procesar 99 pruebas que contienen 84
pozos dedicados a diluciones dobles de antibiticos y se inoculan manualmente.
El Phoenix monitorea cada panel cada 20 minutos utilizando tanto turbidomtrico y
colorimtrico (indicador de oxidacin-reduccin) de deteccin de crecimiento. Los
paneles de prueba para estreptococos gram-negativos, gram-positivos, S.
pneumoniae, -hemoltico, y el grupo viridans estn disponibles. Resultados de
CIM se generan en 6-16 h.

El sistema Vitek 2 (bioMrieux) est altamente automatizado y utiliza tarjetas muy

compactas de plstico de reactivos (tamao de una tarjeta de crdito) que
contienen microlitros de antibiticos y los medios de prueba en un formato de 64
pocillos. El Vitek 2 emplea monitoreo turbidimtrico repetitiva durante un perodo
de incubacin abreviada. El instrumento puede ser configurado para acomodar 30240 pruebas simultneas. Las tarjetas de susceptibilidad permiten probar el rpido
crecimiento de bacterias aerobias gram-negativas, grampositivos comunes, y S.
pneumoniae en un perodo de 4.10 h.
El Sensititre ARIS 2X (Trek Diagnostic Systems) es un sistema automatizado,
trabaja toda la noche, incuba y lee con una capacidad de 64 paneles. Los paneles
de ensayo son placas de microdilucin de 96 pocillos estndar que pueden ser
inoculadas con una Sensititre Autoinculator. El crecimiento se determina mediante
la medicin de la fluorescencia despus de 18-24 horas de incubacin. Los
paneles de ensayo estn disponibles para las bacterias gram-positivas y gramnegativas, S. pneumoniae, especies de Haemophilus, y no fermentadores bacilos
gram-negativos.
La Phoenix, Sensititre ARIS 2X, Vitek 1 y 2, y los instrumentos WalkAway han
mejorado los programas informticos utilizados para interpretar los resultados de
sensibilidad que incluyen "sistemas expertos" para el anlisis de resultados de las
pruebas de patrones atpicos y fenotipos de resistencia poco comunes. Estudios
han demostrado que los resultados de las pruebas de susceptibilidad rpidas
pueden conducir a cambios ms oportunos para la terapia antimicrobiana, con lo
que conlleva a un ahorro econmico debido al menor nmero de pruebas de
laboratorio adicionales que se realizan. Una de los primeras deficiencias de los
mtodos de pruebas de sensibilidad rpidas es la capacidad disminuida para
detectar algunos tipos de resistencia a los antimicrobianos incluyendo inducibles
-lactamasas y resistencia a la vancomicina. Sin embargo, los instrumentos
recientemente aprobados por la FDA han hecho mejoras significativas en gran
parte a travs de modificaciones de programas informticos de los instrumentos
como la edicin de los resultados de sensibilidad utilizando el software experto
para evitar resultados poco probables de ser reportado. En algunos casos estas
modificaciones dan como resultado una incubacin prolongada (es decir mayor a
10 h) de los paneles de prueba para asegurar resultados precisos, haciendo as
que sean menos "rpida".

Sistemas automatizados para siembras de medios de cultivo

La actual generacin de procesadores de muestras tiene mucha ms

funcionalidad que los instrumentos como el InocuLAB (usados antiguamente). Los
cuatro procesadores de muestras disponibles en la actualidad son el procesador
Innova (BD Diagnostics, Sparks, MD), el dispositivo InoqulA automatizacin
total/manual de la interaccin (FA/MI), dispositivo de procesamiento de espcimen
(BD Kiestra BV, Drachten, Pases Bajos), el Previ Isola placa streaker
automatizado (bioMrieux, Inc., Hazelwood, MO), y el procesador de muestras
walk-away (WASP; Copan Diagnostics, Murrieta, CA). Cada uno de los 4
instrumentos es capaz de automatizar el procesamiento de una variedad de
especmenes de base lquida.
Innova. Cuenta con 5 cajones de muestras, con cada uno con un mximo de 40
contenedores, con una capacidad mxima de 200 contenedores. Las muestras se
pueden agregar a medida que llegan al laboratorio (cdigo de barras). Innova
utiliza un destapador universal que contenedores de diferentes tamaos no
necesitan de ningn ajuste manual. Un cajn puede contener slo un tubo de un
solo tamao en un momento dado. Hay 6 pilas de entrada con una capacidad de
45 placas cada uno (270 placas en total). Diferentes agares se pueden cargar en
cada pila, o todas las pilas pueden mantener el mismo tipo de agar. Innova incluye
una biblioteca completa de los patrones tradicionales de siembra; placas rayadas
son expulsados en un carrusel de salida (5 pilas) y se pueden organizar en pilas
de salida por parte de grupos de manera que no se requiere la clasificacin
despus de rayar.
InoqulA FA/MI. Este procesador puede ser utilizado para la inoculacin
automatizada de muestras lquidas y siembra manual de otros tipos de muestras
(tales como muestras tomadas de heridas) as como para la preparacin de los
portaobjetos. El proceso de siembra se realiza usando una perla magntica, y se
puede obtener un rendimiento de hasta 400 placas/h. Los medios inoculados se
pueden clasificar en un mximo de 4 casetes diferentes para diferentes
atmsferas de incubacin. La seccin de la interaccin manual del instrumento
permite la inoculacin manual de las muestras no lquidas, como puntas de catter
y torundas de heridas. Una vez inoculadas, son golpeadas con perlas magnticas,
como ocurre con las muestras de base lquida. Es necesaria una pipeta
desechable para cada muestra de base lquida.
Previ Isola. Tiene 5 bastidores de diferentes tamaos, un tamao para cada uno
de los 5 tubos de muestras de diferentes dimetros. Todas las muestras deben
estar destapado antes de ser colocado en el equipo. Hay 5 casetes de entrada con
una capacidad de 30 placas en cada pila (150 placas en total). Diferentes placas
se pueden cargar en cada pila, o todas las pilas pueden mantener el mismo tipo
de agar. Placas sembradas son expulsadas en casetes de salida (3 pilas, 30

placas cada uno) y se pueden organizar por grupos de manera que no se requiere
la clasificacin despus de rayar. Es necesaria una pipeta desechable para cada
muestra, y se requiere un aplicador desechable para cada placa. El aplicador
produce un patrn nico de peine radial, y no hay otras opciones de patrn. La
capacidad mxima es de 180 placas/h.
WASP. El WASP (walk-away specimen processor) utiliza la carga de muestras, y
descarga transportadores con vlvulas de diferentes tamaos para tubos de
diferente dimetro. Utiliza un destapador universal que los contenedores de
diferentes tamaos no requieren ningn ajuste manual. Hay 9 silos medianos, con
una capacidad total de 342 a 370 placas (incluyendo placas bi). Cada silo o
mltiples silos pueden contener un solo tipo de medio. El WASP utiliza dos brazos
robot de montaje compatible (SCARA) para mover las muestras y placas. Incluye
una biblioteca llena de patrones de rayas, y las placas sembradas pueden ser
organizadas por grupos de manera que no se requiere la clasificacin despus de
rayar. Las placas inoculadas se pueden marcar en el lado izquierdo de la placa.
No se requieren insumos descartables para la muestra que platean con el WASP.
Un mdulo de Gram SlidePrep opcional est disponible para la preparacin de
diapositivas.
Los factores a considerar en la seleccin de un instrumento de procesamiento de
muestras de microbiologa son: precisin, capacidad, poyo tcnico del fabricante,
flexibilidad (tipos de muestras, loops, protocolos de inoculacin, sistema de
informacin de laboratorio [LIS]), capacidad, flexibilidad, modularidad y costos
(costos iniciales, los costos de los suministros desechables requeridos, y los
costos de mano de obra de operacin).

Referencias bibliogrficas
Paul P. Bourbeaua and Nathan A. Ledeboerb. Automation in Clinical Microbiology.
J. Clin. Microbiol. June 2013 vol. 51 no. 6 1658-1665
L. Barth Reller, Section Editor and Melvin Weinstein, Section Editor James H.
Jorgensen,and Mary Jane Ferraro. Antimicrobial Susceptibility Testing: A Review of
General Principles and Contemporary Practices. Clin Infect Dis. (2009) 49 (11):
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