Grado en Qumica

D.6.01

CPR
(. .)
).(
(
)

TEMA 6
Validacin interna de mtodos

Mtodo, ajusta tus

medidas
Bibliografa: T5_M, T6_M

6.1. Concepto de validacin

Requisitos (ej.
Cliente)

D.6.02

Uso
previsto

Equipo bajo
especificacin
Personal
competente

VALIDACION

Caractersticas
(Ajuste)
* Definicin, * Otros elementos, * Otros trminos

Documentacin (PNT,
Registro)

(Tab. 5.1_M)

D.6.03

Requisitos (ej.
Cliente)

Uso
previsto

Equipo bajo
especificacin
Personal
competente

VALIDACION

Caractersticas
(Ajuste)
* Definicin, * Otros elementos, * Otros trminos

Documentacin (PNT,
Registro)

(Tab. 5.1_M)

D.6.04

Mtodos

El mtodo completo
* Preparacin de la muestra
* Separar la toma de muestra

ISO 17025
Software

VALIDACION
Todo el intervalo de
matrices *

Todo el intervalo de
concentraciones *
ej. Precisin, exactitud =
f (conc.)

*(alcance de acreditacin)

D.6.05

Tareas en validacin de mtodos:

(Tab. 5.3_M)

Especificacin de requisitos

Cliente, Legislacin > propios (internos)

Determinacin de las caractersticas

del mtodo

- Comparacin (patrones, MR, mtodos,

interlaboratorio)
- Factores (robustez)
- Incertidumbre resultados a !?
-Criterios de validacin
( LEC/ENAC: aceptacin)

Comprobacin de la satisfaccin de
requisitos
Declaracin de validez del mtodo
Registro de resultados
a Incertidumbre

Registro de validacin

(resultados) = f (resultados de validacin)

D.6.06

Binomio requisito-caractersticas del mtodo

(Cuadro 5.2_M)
REQUISITOS
(Ensayo qumico)
Ensayo (anlisis)
cualitativo o cuantitativo
Analito
Analito total/libre/extrable
Cantidad de analito
Grado de exactitud y precisin
Interferencias
Resultados comparables:
- con otros LEC
- con especificaciones
externas

CARACTERSTICAS
(Mtodo)
Confirmacin de identidad,
selectividad/especificidad
Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Recuperacin
Intervalo de trabajo y lineal
Exactitud (veracidad)
Precisin (repetibilidad,
precisin intermedia,
reproducibilidad)
Robustez

D.6.07

Otros REQUISITOS
Distribucin del analito (localizado o
disperso)
Naturaleza (qumica, biolgica, fsica) de la
matriz
Muestreo o sub-muestreo (dentro/fuera)
del LEC
Tamao y/o disponibilidad de muestra
Restricciones de personal, tiempo, costes,
equipamiento, reactivos y medios

CARACTERSTICAS
(Mtodo)
Pueden condicionar
la tcnica
Ej: si est localizado
en la superficie habr que
emplear tcnicas de anlisis
superficial
De carcter operativo-econmico
(pueden ser no asumibles por el
LEC)

6.2. Validacin interna y externa

+ Mtodo de uso/inters globalizado

Ej: Doping (Olimpiadas)
+ Reconocimiento
por otros LECs
+ Reproducibilidad

EXTERNA

Estudios colaborativos
> 8 Lab.

(Tab. 5.4_M)

D.6.08

INTERNA
(in-house)

- Error de LEC compensado un

error de mtodo ?

(Programa de verificacin
pareada de mtodos, AOAC)
2-3 LECs

6.3. Proceso de validacin interna de mtodos

INICIO:
Fijar requisitos
(Alcance del mtodo)
Mtodo normalizado
no disponible o
inadecuado
Buscar/adaptar
mtodos
existentes
------------------Desarrollar
nuevo mtodo
Evaluar
caractersticas
(PNT Validacin)

D.6.09

(Cuadro 6.1_M)
Desarrollar
mtodo

si

no
Ajuste a requisitos
(Criterios de
validacin)
Asumir
tiempo de
personal
si
no

si

Ajuste
viable
no

Relajar
requisitos
no

(Mtodo
Subcontratar
Validado)
Registro de validacin
(Declaracin de validacin del mtodo)

D.6.10

Documentos operativos para la validacin:

- PNT-Validacin o PEV (Planificacin de experimentos, criterios)

(Anexo 6.1_M)
- Registro (datos, resultados, interpretaciones,
declaracin de validacin)

(Anexo 6.2_M)

Pag. 356-357 Manual

(Hojas 2 y 3 del Registro de validacin en
blanco) se emplearn en el examen

Necesario leer autnomamente el T3_M, Anexos 3_M (ej. Anexo 3.1.a_M) y Ejerc.3_M (ver Escenario 6.1)
Reproducir hojas 2 y 3 del Registro de validacin en word. Realizar/Adaptar los Ejer.6_M (Obligatorio, Tut.)

6.4. Caractersticas, requisitos y criterios de validacin

Confirmacin de Identidad.
Selectividad/especificidad.
Intervalos de trabajo y lineal
Lmite de deteccin.
Lmite de cuantificacin
Exactitud
Precisin
Robustez
Recuperacin

Estadsticos (T3_M)
de aceptacin (LEC/ENAC)
Ej. estimacin de un error (%)
y comparacin con un lmite
(prefijado)

D.6.11

CONFIRMACIN DE IDENTIDAD. SELECTIVIDAD/ESPECIFICIDAD

D.6.12

(Tab. 6.2_M)
Confirmacin de identidad (Ensayo qumico) :
Establecer que la seal es debida al analito
y no a otra especie qumica.
Efectividad de la etapa de separacin
INTERFERENCIAS
(Otra especie/Conc.
=> Error sistemtico )
Selectividad => Mtodo genera
datos-analito (exclusiva) /
identificacin y/o cuantificacin
Impacto: Alcance (matrices)
Exactitud

Selectividad/especificidad del
mtodo
Especificidad = 100% selectividad

(Anexo 6.3_M) Caso 1

Comparacin de mtodos

Met1 Met2 Met3 . . . .

M1
M2
.
.
MR1
MR2
.
.

XNoxNv

Si Nv=2; test-t (exp. pareado)

Si Nv>2; ANOVA test-repetidos

D.6.13

(Anexo 6.3_M) Caso 2

D.6.14

Fortificar con interferencias

(Efecto int., nc)

Fort Fort. Int1
M1
M2
.
.

(0)
(0)

(nc1)
(nc1)

Fort. Int2 . .
( nc2)
(nc2)

Conc.

E(%)
(prctico, aceptacin
E-Mximo prefijado)

XNox2

Habitual en los LEC

Nv=2; test-t (exp. pareado)

(Anexo 6.3_M) Caso 3

D.6.15

Ejemplos de picos HPLC puros e impuros. La seal cromatogrfica no indica impureza en los picos.
La evaluacin espectral (HPLC/DAD) identifica impurezas en el pico izquierdo.

(Ejer. 6.1_M), Dat8 (Anexo Dat_M)

Muestra
1
2
3
4
5

D.6.16

Resuelto va Registro de validacin

(Anexo 6.2_M; hojas 2 y 3) usar de modelo para
el resto; ver escenario 6.2)

Fortificado: Interferencia I
10
0.071031
0.073223
0.069299
0.086122
0.071845
0.084155
0.071442
0.069624
0.064314
0.066751

x1
Analito

Interferencia II
(mg.l-1)
25
0.0656
0.0796
0.083
0.0766
0.0787

x2
Analito +
interferencia

Caso 2 (Anexo 6.3_M); consistente

x3

D.6.17

Evaluacin visual
(cualitativa)

Box-and-Whisker Plot

-17

-13

-9

-5

-1

3
(X 0.001)

Col_1-Col_2

Box-and-Whisker Plot

dif = 0

Confusin:
(Ef. Interferencia o
Muestra errnea ?)
-15

-11

-7

-3

Col_1-Col_3

9
(X 0.001)

D.6.18

INTERVALO DE TRABAJO Y LINEAL

Intervalo de trabajo
Intervalo de conc. de analito, en la disolucin que se mide, donde el
mtodo puede aplicarse (con exactitud y precisin aceptable).

No en la muestra
original (Alcance)

(Lmites)

Puede incluir un
intervalo lineal

(Tab. 6.3_M)

Inferior: LD o LQ
(Superior depende del
instrumento/seal)
Intervalo lineal (regresin
lineal seal-conc. o curva de calibracin)
Linealidad
Sensibilidad

Impacto: Alcance (conc., capacidad de dilucin del ensayo)

Calibracin de mtodos

D.6.19

(Cuadro 6.3_M)

Impacto OM
OM ~
aceptable

(a) OM= 0.5; RSD=10%

150

100

50
50

100

150

(b) OM= 0.15; RSD=1%

(c) OM= 0.15; RSD=3%

130

130

120

120

110

110

100

100

90

90

80

80

70

70

80

100

120

80

100

120

(d1) OM= 0.15; RSD=5%

(d2) OM= 0.15; RSD=5%

(d3) OM= 0.15; RSD=5%

130

130

130

120

120

120

110

110

110

100

100

100

90

90

90

80

80

70

80

100

120

70

80
70

80

100

120

Aparente no
linealidad

80

100

120

Identificacin del intervalo lineal (1 etapa)

Grfico de linealidad (Sensibilidad vs. log Conc.) de un calibrado en
cromatografa. OM(x) = 4

Int. Lin.

log(x)

y/x

0.699
1.000
1.176
1.301
1.477
1.602
1.778
2.000
2.301
2.699
3.000
3.301
3.699
4.000
4.301
4.699

2.000
1.108
1.062
1.057
1.015
1.017
1.024
1.026
0.993
1.000
1.002
1.001
1.000
0.900
0.850
0.840

(Anexo 6.4_M)

1.200
1.150
1.100
1.050

y/x

x (ng.ml-1 ) y (UA)
0
8.00
5
10.00
10
11.08
15
15.93
20
21.15
30
30.44
40
40.66
60
61.42
100
102.56
200
198.56
500
499.90
1000
1002.12
2000
2001.58
5000
5000.73
10000
9000.41
20000
17000.00
50000
42000.00

D.6.20

1.000
0.950
0.900
0.850
0.800
0

Zona [1.05(y/x), 0.95(y/x)]

2 log(x) 3

(y/x)cte ~ 1

D.6.21

(Ejer. 6.2_M), Dat9 (Anexo Dat_M)

i x (ng/ml)
y (UA)
1
0
3.8
5
6.9
2
3
10
11.6
4
15
15.4
5
20
17.6
6
30
31.1
7
40
36.1
8
60
63.4
9
100
104.5
10
200
197.3
11
500
543.8
12
1000
1013.1
13
2000
2050.2
14
5000
5071.3
15
10000
8754.1
16
20000
13606.2
17
50000
26477.1
Media
Mediana
Media
sin y/x

log(x)
0.70
1.00
1.18
1.30
1.48
1.60
1.78
2.00
2.30
2.70
3.00
3.30
3.70
4.00
4.30
4.70

y/x
1.383
1.165
1.025
0.880
1.036
0.903
1.056
1.045
0.987
1.088
1.013
1.025
1.014
0.875
0.680
0.530
0.982
1.020
1.009

OM(x1)[i=2-17] = 4 ordenes de magnitud

(y/x)/Media *100
141
119
104
90
106
92
108
106
101
111
103
104
103
89
69
54

> 120%

< 80%
(Anexo 6.4
Nota c)

D.6.22

x 10

zoom

100

2
1

x alto

x bajo

0
0

4
x

x 10

50
x

4000

100

1.5

2000

y/x

Residual

50

0
-2000

10
i

20

0.5

4
log(x)

[0.95-1.05]Mediana(y/x)]

LMITE DE DETECCIN

D.6.23

(Tab. 6.4_M)

Lmite de deteccin
Medidas a un nivel de
concentracin bajo

mnimo valor detectable de analito

LD , no cuantificable

Ligada al concepto de blanco

ej. criterio blanco + 3s
otros criterios
Cuantitativo: LD ( yD )
Cualitativo: nivel umbral
(100% positivos)

Indicar el criterio
empleado para LD

D.6.24

Tipos de blanco :
- Blanco de reactivos (disolvente): disolucin con reactivos en las cantidades
empleadas en la curva de calibrado o dilucin de la muestra
LD (o LQ) muy optimistas
sirve para comparacin de LD de varios mtodos
- Blanco analtico: reactivos en las cantidades empleadas en las muestras durante todo
el PEE (sufre todo el PEE)
ms adecuado
- Blanco matriz (de muestra): misma composicin que la muestra excepto el analito
ideal (en ocasiones no disponible) ej: sangre sin droga
- puede aproximarse de una muestra con una muy baja conc. de analito
Muestra negativa: si Conc. < LQ
Muestra positiva: si Conc. > LQ

D.6.25

(Anexo 6.5_M)
LD cuantitativo

(Seal)

ybl

- Casos 1 y 2 : Blanco

Media(ybl)

s(ybl)

bl bl
nbl =10

kD
yD

(Seal
crtica)

- Casos 3 : Seal/ruido
- Casos 4 : b0, b1 (curva de calibrado)

kD

LD

LMITE DE CUANTIFICACIN

D.6.26

(Tab. 6.5_M)
Lmite de cuantificacin
(lmite de determinacin)
la concentracin de analito ms baja que puede determinarse /
repetibilidad y exactitud (fiabilidad) aceptable

- Medidas a conc. bajas

- Se establece a nivel cuantitativo, LQ
- Puede condicionar el intervalo de trabajo (lmite inferior)
- Suele indicar RSDmx. del mtodo

LQ
- Caso 1 : Blanco (ybl)
- Caso 2 : RSD(y) vs. x (mtodo EURACHEM)

- Caso 3 : b1 (curva de calibrado)

D.6.27

D.6.28

Comprobacin prctica LD, LQ

Lmite de deteccin: visualmente
podemos diferenciar el pico
cromatogrfico de la
seal del fondo.

Lmite de cuantificacin: visualmente

podemos diferenciar el pico
cromatogrfico y cuantificarlo con una
precisin y exactitud aceptable.

D.6.29

(Ejer. 6.3_M), Dat9 (Anexo Dat_M)

i
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17

x
0
5
10
15
20
30
40
60
100
200
500
1000
2000
5000
10000
20000
50000

y2
y1
3.8
4.2
6.9
7.0
11.6
9.4
15.4
15.3
17.6
21.7
31.1
29.8
36.1
38.1
63.4
62.5
104.5
102.7
197.3
197.1
543.8
467.3
1013.1 1011.4
2050.2 2214.2
5071.3 4707.4
8754.1
13606.2
26477.1

y3
4.1
7.0
11.6
14.9
21.4
28.3
41.7
60.9
103.8
222.7
464.9
1037.3
1935.4
4575.8

y4
3.7
6.4
10.7
14.0
19.9
32.4

y5
3.9
7.9
11.5
12.6
20.4
29.7

y6
3.3
7.7
11.2
16.9
19.6
29.0

y7
3.9
6.4
10.3
15.0
20.6
31.3

y8
3.4
7.7
10.8
16.6
20.3
30.2

y9
3.6
7.4
10.6
15.7
23.2
28.2

y10
3.8
6.1
11.4
14.5
21.9
31.7

(Seal)

ybl

D.6.30

EXACTITUD
(Tab. 6.6_M)
ISO (*No tradicional)
(Error sistemtico y aleatorio)

Exactitud
Cercana del resultado al valor
(*2componentes)
verdadero
(valor aceptado)
Error de mtodo (veracidad)
+ Error de LEC

Precisin

Poco armonizado an

Se estiman conjuntamente en validacin interna

(pueden compensarse)

D.6.31

Relacin E - conc. alcance

Ej: 3 muestras con valores verdaderos (aceptados): 0 (10, 20, 30 ppm)

35

Tipo de error sistemtico

30

(ppm)

Proporcional
11
22
33

Constante
11
21
31

25

20

15

10
10

Error f (conc.) (unidades de

conc.,
ej. E = +1 ppm)
Selectividad insuficiente (ef.
interferencia)
Blanco (o correccin) inadecuado

15

20
0

Error = f (conc.)
(unidades relativas, ej. E= +10%)
Error de calibracin
(ef. matriz)
Asuncin incorrecta de linealidad

25

30

35

D.6.32

Valores de referencia
(estimar E, criterio de
aceptacin)

(Tab. 6.7_M)

Nivel de trazablilidad
al SI
Valores
aceptados de
ref.

Mtodo primario MRP

0
Muestras ensayadas en
estudios colaborativos

Mtodo de referencia

MRC
0

MR
Muestras (blancos)
fortificados
(con patrones) Habitual en los LEC

Mtodo
alternativo

(Anexo 6.7a_M)

Caso 1 (Rango(conc.) estrecho; ej. OM < 0.5)

Met1

Blanco
reactivos
y MR
(0)

D.6.33

r1
r2
.
.
.
.

xNrx1

nc = 1 (recomendable 3)
(clsico, estadstico)

(obsoleto;
f (precisin))

test-t (Caso 1 0)
E(%)
(prctico, aceptacin
E-Mximo prefijado)

10

Habitual en los LEC

1 s1

Duda:

0 vs. 2 s2
(BCR)

(referencia sin error?)

(Anexo 6.7a_M)

Caso 2 (Rango(conc.) estrecho; ej. OM < 0.5)

Met1

Blanco
reactivos
y MR /
Muestra

Met2
nc = 1 (recomendable 3)

r1
r2
.
.
.
.

XNrx2

10

1 s1

2 s2

test-t (Caso 1 2)
E(%)

D.6.34

(Anexo 6.7a _M)

Caso 3 (Rango(conc.) estrecho; ej. OM < 0.5)

Met1

Fortif.
Blanco /
Muestra (0)

nc = 1 (recomendable 3)

r1
r2
.
.
.
.

xNrx1

test-t (Caso 1 0)
E(%)

>6

1 s1

D.6.35

(Anexo 6.7b_M)

Caso 1 (Rango(conc.) amplio; ej. OM > 0.5)

Met1 Met2
y
x
Mnc1

D.6.36

1 s1

Mnc2

2 s2

.
.

y sy

(como en caso 2; OM<0.5) (a cada nc)

E(%)

XNox2

Mnc3

nc 3 (alcance)

x sx
d

test-t (exp. pareado)

Regresin (b0, b1)

[b0, b1] [0, 1]

(Anexo 6.7b_M)

Caso 2 (Rango(conc.) amplio; ej. OM > 0.5)

Conc.: fortificada
(0)
x
nc1
Blanco +
analito
patrn

D.6.37

nc2
nc3
.
.

determinada (aplicacin del mtodo)

(1)
y
nc 3 (alcance)

X(NoxNr)x2

(a cada nc)
E(%)
Habitual en los LEC

Regresin (b0, b1)

Ecte, Eprop.

[b0, b1] [0, 1]

(Anexo 6.7b_M)

Caso 3 (Rango(conc.) amplio; ej. OM > 0.5)

Calib.

Ad. estandard
x

analito
patrn y
adicin
analito +
muestra

D.6.38

xAd

yAd

nc1
nc2
nc3
.
.

XNox2

Regresin (b1)

XNox2

Regresin (b1Ad)
b1 b1Ad
Eprop.

nc 3

(Ejer. 6.4_M), Dat3 (Anexo Dat_M)

Eq. 1

Eq. 2

Nr = 12 (pseudo-rplicas)
Nf = 1 (equipo; i-col.)

D.6.39

D.6.40

PRECISIN
(Tab. 6.8_M)
ISO

Precisin
Resultados independientes
Proximidad (dispersin) de datos o resultados
(mismas condiciones, PNT)
Depende de las condiciones: (Repetibilidad, precisin
intermedia y reproducibilidad)
Error aleatorio (influye en la exactitud)
Relacionada con la incertidumbre

D.6.41

3 niveles de
precisin

(Tab. 6.8_M)
ISO

Precisin
Resultados independientes
Proximidad (dispersin) de datos o resultados (mismas
condiciones, PNT)
Depende de las condiciones:
Repetibilidad
[=]

Operador
Equipo
Tiempo

( sr )

Reproducibilidad
Precisin Intermedia
indicar Nf (= 1, 2 3; = M, ISO)
Reproducibilidad intra-LEC

( si )

( si-ensayo , se-ensayo )

[]

LECs
(sR )

Reproducibilidad inter-LEC

(sL )

(Valid. ext.)

D.6.42

Cuantitativo

Precisin:
s , s2 , CV o RSD(%) (IUPAC)
medida del error aleatorio (dispersin)
Cualitativo

% falso positivos
% falso negativos

respecto de un
valor umbral

Establecer relacin: s-conc. (o RSD-conc.)

Repetibilidad (sr , estimador de r )
Lmite de repetibilidad : r = 1.96 2 r = 2.8 r
Permite al analista decidir si la diferencia entre 2 medidas es
significativa
Reproducibilidad (R o sR )
Lmite de reproducibilidad : R = 1.96 2 R = 2.8 R
NOTA: r (o R) pueden emplearse como clusula de precisin del mtodo

D.6.43

(Anexo 6.8_M)

Caso 1 (1 matriz alcance)

Met1

r1
Patrones / MR / r2
Blanco de
.
muestra
.
fortificado
.
(varios nc)
.

xNrx1

nc = 1 (recomendable ms nc alcance)

sr = s1

10

1 s1
Independientes

RSDr , r

(Anexo 6.8_M)

D.6.44

Caso 2 (distintas matrices)

Ej. Repetibilidad: LEC analiza Nr = 2 rplicas de No = 7 matrices

x11
x12

XNrxNo
matrices

Tipo de queso
Procesado I
Procesado II
Monterey
Cheddar
americano
suiz o
moz z arella

s2r = s2c = (glj . s2j) / (gl)j = 0.0159

sr = 0.126

(repetibilidad)

Met1
sj
0.01
0.01
0.12
0.13
0.13
0.25
0.01

n j
2
2
2
2
2
2
2

Opciones para estimar s2r :

Usar MCi-col (ANOVA) los datos xij
Calcular s2c a partir de (gl)j = n j 1
y s2j
(Anexo 3.4_M)
(no podemos calcular s2c empleando Rj al no conocer los datos xij)

(Anexo 6.8_M)

D.6.45

Caso 3 (repetibilidad y precisin intermedia)

Ej. Precisin intermedia: (Nf = 1; operador/equipo/tiempo). LEC realiza Nr=2 rplicas diarias durante
Ns=7 das (ensayos, runs).

e-das

XNrxNs
i-da

i \ da(j )
rplica 1
rplica 2

1
31.2
31.7

2
30.9
30.9

3
30.7
30.9

4
31
32

5
31
32

6
31
32

TABLA ANOVA (1 factor = da)

Fuente de variacin
SS
gl
MC (varianza)
Entre-columnas (entre-das)
0.9843
6
0.164
Intra-columnas(residual=rplicas)
0.29
7
0.0414
Total
1.2743
13
s2i-da= s2r = MCintra = 0.0414 (repetibilidad; equivale a s2c )
s2e-das = (MCentre MCintra)/n = (0.164 - 0.0414)/2 = 0.0613
s2 i = s2r + s2e-das = 0.103 (reproducibilidad intra-lab.)

sr = 0.2 (Repetibilidad)
si = 0.32 (Precisin intermedia)

7
31
31
F
3.96

D.6.46

(Ejer. 6.5_M), Dat11 (Anexo Dat_M)

Muestras
Agua potable

Agua mar

Agua residual

Rplica
i
Dia 1 Dia 2 Dia 3 Dia 4 Dia 5 Dia 6 Dia 7 Dia 8 Dia 9 Dia 10 Media
1
186
154
196
170
135
196
179
169
160
180
172.50
2
179
196
180
179
174
170
169
160
154
135
169.60
3
169
4
160
5
174
6
196
1
174
2
196
3
154
4
196
5
170
6
166
1
154
2
196
3
170
4
139
5
196
6
179

sr (distintas matrices; caso 2 Anexo 6.8)

s
18.19
15.92

RSD%
10.545
9.3867

D.6.47

(Ejer. 6.6_M), Dat11 (Anexo Dat_M)

XNrxNs = X2x10
Muestras
Agua potable

Agua mar

Agua residual

Rplica
i
Dia 1 Dia 2 Dia 3 Dia 4 Dia 5 Dia 6 Dia 7 Dia 8 Dia 9 Dia 10 Media
1
186
154
196
170
135
196
179
169
160
180
172.50
2
179
196
180
179
174
170
169
160
154
135
169.60
3
169
4
160
5
174
6
196
1
174
2
196
3
154
4
196
5
170
6
166
1
154
2
196
3
170
4
139
5
196
6
179

s
18.19
15.92

sr y si (Nf = 1, factor da (e-col); caso 3 Anexo 6.8)

RSD%
10.545
9.3867

D.6.48

ROBUSTEZ
Robustez

(Tab. 6.9_M)

- Insensibilidad a pequeas variaciones (deliberadas) en el mtodo

(ambientales, operativas)
- Estudio (diseo exp.) de los factores ( a varios nf, alto y bajo ) respecto
del valor nominal (rutina)
Inters
- Fiabilidad esperable del mtodo en rutina
- Factores crticos para control de calidad
- Futuras mejoras del mtodo

D.6.49

(Anexo 6.9_M)
Factor-1 Factor-2 Factor-3
MR / muestra
analizada

exp1
exp2
.
.
.
.

(Nf)

Met1

(nf)
XNexNf

yNex1

Ne
(Nr = 1)

Diseo experimentos:
- Factorial completo Ne=(nf)Nf
- Factorial fraccionado Ne=(nf)Nf-1
(<Ne; > confusin de efectos)
- Otros

D.6.50

(Ejer. 6.7_M), Dat12 (Anexo Dat_M)

T.COL.
20C

pHF.M
5

n Exp.
1
2
3
4

Factor 1
22
22
18
18

Factor 2
5.1
4.9
5.1
4.9

Factor 3
1.1
0.9
0.9
1.1

Resultado

Cdigos

Factor 1

Factor 2

Factor 3

1
1
-1
-1

1
-1
1
-1

1
-1
-1
1

y
0.17
0.12
0.16
0.11

=
=
=

0.01
0.05
0.00

Valor nominal
(rutina)

Diseo: 23-1

Efectos
Factor 1
Factor 2
Factor 3

((y 1+y 2)-(y 3+y 4))/2

((y 1+y 3)-(y 2+y 4))/2
((y 1+y 4)-(y 2+y 3))/2

CaudalF.M.
1 ml.min-1
0.17
0.12
0.16
0.11

D.6.51

RECUPERACIN
(Tab. 6.10_M)

Recuperacin
Capacidad del mtodo para determinar / extraer la totalidad de la forma
particular del analito
Rec = f ( Conc. analito )

AOAC
Valores esperables de Rec
Ej. para conc. 10% -> Rec 98-102 %

Inters
- Deficiencias en etapas del mtodo (ej. extraccin)
NOTA: Rec = Exactitud

D.6.52

(Anexo 6.10_M)

Caso 1 (fortificar)
Met1

Blaco muestra
o Muestra
Fortificar (0)

r1
r2
.
.
.
.

nc = 1 (recomendable ms nc) alcance

xNrx1
(-) Representatividad
analito adicionado-nativo

6
1 s1
Rec = 100 (1 / 0)

D.6.53

(Anexo 6.10_M)

Caso 2 (MR)
Met1

MR
(0)

r1
r2
.
.
.
.

xNrx1
(-) Representatividad MRmuestra (ENAC)
1 s1

Rec = 100 (1 / 0)

6.5. Estrategias de validacin

D.6.54

Grado de validacin (sugerencia; guas No armonizado)

(Tab. 6.11_M)

Tipo de validacin

Evaluacin LEC

Referencias

Completa

Todas las caractersticas (T.6_M)

MRC
Muestra analizada
Fortificacin

Ampliacin a otras
matrices

Mtodo validado (1 matriz):

- Estudio preliminar precisin
y exactitud
(criterios de aceptacin)
- Confirmar LQ
Mtodo validado (otro LEC):
- Precisin (sr, si), LD, LQ

Fortificacin (2 nc) blanco de muestra /

muestra (nueva y validada)

(ENAC. ampliacin
de alcance)
Transferencia de
mtodos

Muestras analizadas por el otro LEC

NOTA: a criterio de ENAC; contempla la validacin parcial en algunos ensayos concretos y solo
para LEC experimentados en acreditaciones previas

Seleccin de caractersticas a validar (sugerencia-guas

No armonizado-ENAC?...caractersticas crticas)

D.6.55

(Tab. 6.12_M)

Tipo de mtodo / objetivo del ensayo Caractersticas a validar ( depende auditor)

Ensayo cualitativo

Confirmacin identidad

Comparacin con un lmite (bajo?)

Confirmacin identidad
LD
Confirmacin identidad
Exactitud (Rec)
Precisin (sr, si)
(Linealidad)
dem
LQ (LD)

Cuantificacin de analito
(conc. > n. minorit.)

Cuantificacin de analito
(conc. n. traza)
+ Robustez

6.6. Casos prcticos: Registros de validacin

(a desarrollar por alumnos en Tutoras)
- Reproducir hojas 2 y 3 del Registro de validacin en word. Realizar/Entregar los
Ejercicios 6_M empleando como modelo el Eje6.1_M (resuelto)
TareaNP grupal (3-4 alumnos):
Entregable/evaluable
Exposicin power-point

D.6.56

Escenario 6.1.
- Indicar a cual de los casos (A, B) de la Tabla 3.5a_M corresponde cada uno de
los Ejercicios 3_M empleando el Anexo 3.1.a_M (y otros Anexos 3_M). NOTA
anexos necesarios para caracterizar cada estudio en la hoja de registro (y
examen)

* Relacionado con la TareaNP-3:

D.6.57

Escenario 6.2.
- Buscar en internet documentos disponibles que recojan criterios de
validacin/aceptacin de varias entidades de prestigio (ej. Anexos 1.2_M) para
una de las caractersticas de validacin. Hacer una tabla comparativa, incluyendo
las que se presentan en el Manual_M

* Pueden participar varios grupos (cada uno con una caracterstica)

D.6.57