Introduccin

Practica 3: Tcnicas inmunolgicas

Las tcnicas inmunolgicas son aquellas que se basan en la especificidad
antgeno-anticuerpo, este tipo de tcnicas han evolucionado de manera importante
en las ltimas dcadas, ya que se han desarrollado pruebas con mayor
especificidad y sensibilidad. Entre las tcnicas ms utilizadas se encuentran: la
inmunofluorescencia indirecta (IFI), el ensayo inmunoenzimtico (ELISA), el
ensayo mltiple y la electroinmunotransferencia (EIT). Cada una de ellas presenta
diferencias pero conservan el fundamento general que es el reconocimiento de la
unin antgeno-anticuerpo, por lo que presentamos las caractersticas ms
importantes de dichas pruebas, la reaccin de Ag-Ac pose dos caractersticas
intrnsecas, la afinidad y la avidez (Diego F. Hernndez Ramrez, 2010).
Afinidad: " La fuerza combinada de las interacciones no covalentes entre un sitio
de unin de antgeno nico es la afinidad del anticuerpo por ese epitopo"; Avidez:
Se denomina a la fuerza de unin entre un antgeno y un anticuerpo polivalente.
REACCIONES DE PRECIPITACIN.
Este tipo de reaccin Permite detectar la presencia y cantidad de antgenos y
anticuerpos especficos, ya que detecta principalmente un Ac que es la IgG
(Inmunoglobulina G).
-Inmunoelectroforesis: es una tcnica cualitativa que permite la identificacin de
diferentes compuestos proteicos presentes en muestras biolgicas a travs de
arcos de precipitacin, esta tcnica se realiza preferentemente en geles de
agarosa y en ella se diferencian dos etapas:
1. La muestra se somete a una separacin electrofortica.
2. Una vez realizada la separacin, las protenas interaccionan con los
Ac especficos aplicadas en el agar en un canal paralelo al eje de migracin,
posteriormente se empiezan a observar arcos de precipitacin cuya forma y
posicin dependen de las caractersticas inmunoqumicas y de la concentracin de
cada protena.

Esta
curva
de
inmunoprecipitacin,
tambin
conocida como curva dosisrespuesta, constituye la base de
la mayora de los procedimientos
inmunolgicos
para
la
cuantificacin de protenas.
(Internacional)
REACCIONES
DE
AGLUTINACIN. Son tiles para
la deteccin de antgenos y
anticuerpos. Su fundamento es
inducir
una
agrupacin
microscpicamente visible de partculas, causada por interacciones antgeno
anticuerpo que forman puentes entre ellas.
ENZIMOINMUNOANLISIS: ELISA. Se basa en el uso de antgenos o anticuerpos
marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan
actividad tanto inmunolgica como enzimtica. Al estar uno de los componentes
(antgeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte
(inmunoadsorbente) la reaccin antgeno-anticuerpo quedar inmovilizada y, por
tanto, ser fcilmente revelada mediante la adicin de un substrato especifico que
al actuar la enzima producir un color observable a simple vista o cuantificable
mediante el uso de un espectrofotmetro o un colormetro
Reacciones de inmofluorescencia (IF), empleada para identificar anticuerpos o
antgenos especficos. En este caso utiliza Ac conjugados con fluorocromos las
cuales son molculas que al ser excitadas con la energa de una determinada
longitud de onda son capaces de emitir energa de una longitud de onda mayor,
dentro de esta tcnica se tienen dos tipos:
-IF directa, permite la deteccin de Ag
-IF indirecta, permite la deteccin de Ac
La Citofluorometra de flujo es una tcnica que permite el anlisis rpido de la
morfologa de las clulas en un medio liquido.se basa en la reflexin/refraccin de
un delgado rayo laser que incide sobre cada clula segn va asando. La
citofluorometria analiza, adems, la presencia/ausencia de protenas celulares
para las que existan una anticuerpo, o parmetros bioqumicos (calcio) para los
que exista un fluoroforo adecuado. (c.lopezlarrea, 1995)

- Identificacin de marcadores celulares con anticuerpos.

- Fenotipificacin por antgenos de superficie.
- Deteccin intracelular de iones o molculas.
- Estudios de activacin de clulas: monitoreo de concentraciones intracelulares
de Ca2+ y otros iones, activacin de factores de transcripcin, fosforilacin de
protenas, etc.
Western Blot
Tambin llamado Inmunoblot Tcnica utilizada para identificar una protena en
una muestra que contiene varias protenas
Las protenas de la muestra se separan mediante electroforesis en gel en funcin
de su
Peso molecular
A continuacin se utiliza un anticuerpo especfico para detectar la protena de
inters
El resultado aporta informacin sobre el peso molecular de la protena y su
cantidad
Relativa en la muestra
(Veiga, 2013)
PRUEVAS INMUNOLOGICAS RAPIDAS
Es una de las tcnicas de inmunodiagnstico ms modernas cuyas principales
ventajas son la simplicidad y rapidez de la prueba. Cada vez son ms las
aplicaciones de esta tcnica, tanto en el mbito de los test, debido a que no es
necesario reactivos ni instrumentacin adicional, como en el campo clnico. El
ejemplo ms conocido son los test de embarazo de las farmacias, psa, test de
troponina I, y recientemente test sobre el VIH.
RESULTADOS


ANALISIS DE RESULTADO
El sistema empleado en este test es un inmunoensayo en fase slida para la
deteccin cualitativa de un nivel anormal del antgeno prosttico total (t-PSA) en
suero humano.
Su utilidad en diagnstico radica en el hecho de ser uno de los pocos marcadores
tumorales cuya deteccin por encima de determinada concentracin presenta
utilidad clnica en el diagnstico del cncer de prstata, el segundo cncer
masculino en importancia y el ms significativo en edades avanzadas. El test se
usa nicamente para obtener un resultado preliminar. En cualquier caso el
resultado debe ser interpretado por un profesional
El principio de la tcnica que se realizo es que el suero reacciona con las
partculas de ltex coloidal que estn conjugadas con anticuerpos monoclonales
especficos contra PSA que migran por un proceso cromatogrfico hacia la zona
de reaccin. En esta zona, hay anticuerpos contra PSA que reaccionarn con el
complejo partculas de ltex coloidal-anticuerpos-PSA. Esta reaccin origina una
lnea roja/rosa,
INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Negativo:Slo aparecera una lnea transversal AZUL en la zona central del
dispositivo de reaccin (letra C(control)). Siempre debe aparecer esta lnea.
Positivo: Adems de la lnea AZUL de control aparece otra lnea transversal
ROSA/ROJA en la zona central del dispositivo de reaccin (letra T(test))
marcada. La intensidad de esta coloracin va a ser variable segn la
concentracin presente de antgeno.
No vlido: Si no aparece una lnea C en la zona del control tras 5 minutos de la
adicin de la muestra. Toda lnea que pueda aparecer pasados 5 minutos no
tendr valor diagnstico.

CUESTIONARIO
1.- Investigue que otras pruebas rpidas por inmunocromatografa se pueden
utilizar con fines diagnsticos.
Dengue: Prueba rpida por inmunocromatografa
Determinacin cualitativa y simultnea de
anticuerpos IgG e IgM
Muestra de suero, plasma o sangre total
Resultados en 20 minutos
Incluye buffer
VIH: Las pruebas rpidas analizan la sangre de una vena o de una puncin del
dedo, o liquido oral para buscar la presencia de anticuerpos que combaten el VIH.
As como es valido para todas las pruebas de deteccin, un resultado reactivo de
una prueba rpida del VIH debe ser confirmada por una prueba confirmatoria de
seguimiento antes de que se haga un diagnostico definitivo de infeccin
Hepatitis B (HBsAg): Prueba rpida por inmunocromatografa
Determinacin cualitativa del antgeno de superficie
de Hepatitis B (HBsAg)
Muestra de suero o plasma
Resultados en 10-20 minutos
2.- Mencione tres ventajas de las pruebas de aglutinacin frente a las de
precipitacin.
Aglutinacin: es instantnea, se lleva a cabo a temperatura ambiente y el Ag se
encuentra particulado.
Precipitacin: el Ag se encuentra soluble, incubacin de 48 horas y a 37c.
3.- Qu muestra biolgica es la requerida para realizar cada una de las tcnicas
descritas en esta prctica?
Todas son pruebas serolgicas, as que se utiliza plasma o suero.
4.- Mencione la utilidad diagnstica de las pruebas rpidas con fundamento
inmunolgico.
Detectan la infeccin ms rpido utilizando los anticuerpos en el casete donde se
va a unir el antgeno.
5.- Mencione dos auto-Ag determinados
enfermedades auto inmunitaria.
Epidermlisis ampollosa
Enfermedad mixta del tejido conectivo.

por

inmunofluorescencia

en

CONCLUSIONES
En esta prctica realizamos la reaccin antgeno anticuerpo, como ya
anteriormente se cit un antgeno es todo agente extrao que entra en un
organismo, una vez en contacto con el sistema inmune desencadena una la

respuesta especfica del sistema inmunitario, es decir, es capaz de producir

anticuerpos especficos para ese agente extrao con el fin de eliminarlo. Por lo
que tambin se entendi que los antgenos suele ser molculas grandes, se hallan
bsicamente en la superficie d los microorganismos (capside (virus), capsula,
pared bacteriana etc.), el tamao del antgenos es importante porque va a influir
en la capacidad de desencadenar el sistema inmunitario, entre ms grande es el
tamao del antgeno; mayor es la capacidad de la respuesta inmunitario.
El mecanismo por el cual reconoce los antgenos con anticuerpos es; para que un
antgeno que entra a un ser vivo, lo primero que se efecta es el reconocimiento
por parte de los Linfocitos B, despus forma una protenas especificas con el fin
de provocar la destruccin de ese antgeno. (Los anticuerpos son unas protenas
globulares llamados inmunoglobulina (igG, igM, igA, igD e igE)
Cabe mencionar que la especificidad de este complejo es importante; debido en la
regin variable, (la regin variable son los centros de unin de antgeno con
anticuerpo) por lo que cada anticuerpo solo puede actuar sobre los antgenos que
pueden establecer enlaces con los aminocidos de esa zona.
Una vez unido el antgeno, es cuando se va a formar la reaccin, dicho reaccin
puede ser de varias maneras, por reaccin de aglutinacin, que ocurre cuando las
molculas de antgeno se hallan en la superficie de clulas extraas en el
organismo. Por ejemplo; pensemos que a cada clula se fija varios anticuerpos,
cada uno estableces a su vez enlaces con varias clulas, el resultado va a ser una
red complejo para que los fagocitos los reconozca fcilmente y posteriormente los
destruya. Un claro ejemplo sera una transfusin sangunea, cuando una persona
recibe un tipo de sangre diferente, los glbulos rojos va a ser aglutinados por los
anticuerpos del receptor. Otra prueba que se revis fue la de neutralizacin cuyo
objetivo es que los anticuerpos cuando se une al antgeno bloquea la capacidad
de entrada a la clula del organismo; la reaccin precipitacin, en esta reaccin
tenemos que pensar que los antgenos estn disueltos en sangre (ya sea toxina o
bacteria) y cuando se une con anticuerpo forma un complejo precipitado y de esta
manera le es fagocitado. La opsonizacin consiste en que la superficie de las
bacterias es cubierta por anticuerpos, la parte constante de cada anticuerpo se va
a fijar a los receptores presentes en esa membrana, por lo que los fagocitos
captan la parte variable del anticuerpo facilitando su destruccin.
Una de las funciones principal es la activacin de la cascada del complemento
Una de las pruebas realizadas en vivo fue la de antgeno prosttico, en la
actualidad se sabe que es el mejor marcador biolgico que tenemos para detectar
cncer de prstata, aunque tiene una escasa sensibilidad y especificidad, ya que
los niveles del PSA pueden verse afectados por muchos factores.
La elevacin del PSA en plasma es proporcional a la masa tumoral presente y, de
esta forma, el PSA en sangre es una gran prueba para detectar la presencia de un
cncer de prstata. Cuanto ms avanzado sea el proceso tumoral ser ms
frecuente encontrar valores por encima de la normalidad y stos suelen ser ms
elevados.

Bibliografa
c.lopezlarrea INMUNOLOGIA [Libro]. - MADRID : cloputence, 1995. - Vol. i.
Diego F. Hernndez Ramrez Javier Cabiedes Tcnicas inmunolgicas que
apoyan el diagnstico de las enfermedades autoinmunes [Publicacin peridica]. mexico DF : DOI: 10.1016, 2010. - 3 : Vol. 6.
Internacional IAC IAC Internacional [En lnea]. http://iacinternacional.com.ar/introduccion/.
Veiga Ariana Western Blot [Informe]. - MEXICO : ABECAM, 2013.

Integrantes:
Hernndez Rodrguez Laura Fernanda
Jurez Hernndez Luis Enrique
Muoz Hernndez Brian Misael
Prez Carrillo Lorena
Xuehua Liu
Equipo: 4
4CM7