UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO JOO DEL-REI

CURSO DE FARMCIA
DISCIPLINA: FITOQUMICA

Anlise Fitoqumica
Preliminar

Professora: Luciana Alves R. dos Santos Lima

Introduo

Anlise Fitoqumica Preliminar

Avaliar a presena de algumas classes de metablitos

secundrios em uma planta

Introduo

Para algumas substncias, em certos vegetais, pode-se realizar

reaes de caracterizao diretamente sobre os tecidos do material
vegetal.

A caracterizao de um determinado grupo de substncias presentes

em um vegetal s pode ser feita aps sua extrao com um solvente
adequado.

A caracterizao dos principais grupos de substncias nos vegetais

tem sido conseguida pela realizao de reaes qumicas que
resultem no desenvolvimento ou mudana de colorao e/ou
precipitao caractersticos.

Introduo

Para algumas reaes, o extrato pode ser empregado

diretamente, enquanto para outras, o solvente deve ser
previamente retirado.

As reaes podem ser realizadas em tubos de ensaio ou por

deteco cromatogrfica em placas com reagentes
especficos.

Introduo
As reaes feitas diretamente com o extrato bruto pode
mascarar o resultado.

O fracionamento do extrato e o teste com as fraes obtidas

possibilita reaes mais ntidas.

Alguns metablitos podem no ser detectados no extrato, mas

sim nas fraes.

Introduo
Um dos primeiros roteiros de anlise sistemtica de misturas
complexas, foi proposto em 1850 pelo qumico belga J. S. Stas
e modificado pelo farmacutico alemo F. J. Otto.

Partio de substncias
entre
duas
fases
imiscveis, uma aquosa e
outra orgnica

Formao de sais com

diferenas de solubilidade em
relao s bases ou aos
cidos que lhes deram origem

Introduo

O mtodo proposto por

Stas e Otto adequado
para substncias como
alcaloides, por exemplo

Muitas
substncias
so
sensveis a cidos e bases, o
que impede o uso deste
mtodo (cumarinas)

Atualmente, com o avano dos mtodos de extrao e

isolamento, na maioria das vezes, desnecessrio submeter
extratos vegetais a tratamentos qumicos preliminares

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
5

4
3

1. Cumarinas:

7
8

O 2 O
1

Cumarinas

O
4
3

6
7
8

O 2

7
6

Cromonas

Xantonas

Deteco em cromatografia em camada delgada (CCD)

Aparecem manchas de cores como azul, amarela e roxa, sob

ao da luz UV (365 nm), que podem ser realadas aps
exposio ao vapor de amnio, ou revelao com KOH a 5% em
MeOH

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
5

4
3

1. Cumarinas:

7
8

O 2 O
1

Cumarinas

O
4
3

6
7
8

O 2
1

Cromonas

7
6
5

Xantonas

Figura 1: Perfis cromatogrficos, obtidos por CCD, para as amostras vegetais (A, B, C e Dp) e tinturas (D,
E, F e Tp). Pc: cumarina padro. Eluente: Tolueno-DCM-Acetona (45:25:30). Revelador: KOH a 5% em
MeOH / UV365nm.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
5

4
3

1. Cumarinas:

7
8

O
4
3

6
7

O 2 O

O 2

Cumarinas

7
6

Cromonas

Xantonas

HOO

OH
OH

H+
O

amarela

Em solues alcalinas, desenvolvem colorao amarela, devido

ao rompimento do anel lactnico, que revertida pela adio de
soluo cida.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
2. Polifenis:
So substncias redutoras e, portanto, oxidam-se com facilidade,
resultando em substncias coradas devido ao elevado grau de
conjugao.

Substncias oxidantes podem ser empregadas para a

caracterizao de polifenis, tais como o cloreto frrico (FeCl3),
que d a colorao azul ou verde-azulada.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
5'
6'
8

2. Polifenis:

3'
1'

2'

6
5

a) Flavonoides:

9 O

4'

10

Ncleo fundamental
dos flavonoides

Ensaios cromticos:
Reao
de
cianidina,
Shinoda
ou
hidrogenao: consiste em adicionar um
pequeno pedao de magnsio a soluo
alcolica cida da substncia.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
5'
6'
8

2. Polifenis:

3'
1'

2'

6
5

a) Flavonoides:

9 O

4'

10

Ncleo fundamental
dos flavonoides

Ensaios cromticos:
acetona

- Reao citro-brica
ou Reativo de Wilson:
anidrido
actico

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
5'
6'

2. Polifenis:

8
7

9 O

Ensaios cromticos:
- Reao com H2SO4 concentrado:
os compostos flavnicos formam
sais de oxnio com cido sulfrico
concentrado.

3'
1'

2'

a) Flavonoides:

4'

10

Ncleo fundamental
dos flavonoides
flavonas
flavonis

flavanonas

chalconas
auronas

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
5'
6'
8

2. Polifenis:

3'
1'

2'

6
5

a) Flavonoides:

9 O

4'

10

Ncleo fundamental
dos flavonoides

Ensaios cromticos:
- Reao de Marini-Bettolo:
o pentacloreto de antimnio
em tetracloreto de carbono
forma precipitados.

chalconas

flavonas

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
5'
6'
8

2. Polifenis:

3'
1'

2'

6
5

a) Flavonoides:

9 O

4'

10

Ncleo fundamental
dos flavonoides

Ensaios cromatogrficos em CCD:

O adsorvente pode ser slica gel, poliamida ou celulose.

A presena de flavonoides no extrato vegetal bruto pode ser

caracterizada pelo aparecimento de fluorescncias sob a
incidncia de luz UV (254 e 365 nm)

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
5'
6'
8

2. Polifenis:

9 O

3'
1'

4'

2'

6
5

10

Ncleo fundamental
dos flavonoides

a) Flavonoides:
Ensaios cromatogrficos em CCD:
NP / PEG: intensifica
as fluorescncias dos
flavonoides
quando
observadas no UV a
254 nm.

Figura 2: Fluorescncias de
flavonoides no UV aps aplicao
do revelador NP/PEG.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
5'
6'
8

2. Polifenis:

3'
1'

2'

6
5

a) Flavonoides:

9 O

4'

10

Ncleo fundamental
dos flavonoides

Ensaios cromatogrficos em CCD:

Reagente de Folin-Ciocalteau seguido da exposio aos vapores de
amnia serve para a deteco de flavonoides, aparecendo manchas
azuladas ou acinzentadas.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
2. Polifenis:
b) Taninos:
OG
R2

OG
OG

OG

R1

OG

A
O
HO

R3

6'

O 2

HO

R2

B
R4

R1

2'

C
OH

A
6

OH

G=
HO
OH

Taninos hidrolisveis

O 2

HO

Taninos condensados

R3

6'

R4
2'

C
OH

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
2. Polifenis:
b) Taninos:
Vrios mtodos conhecidos e tradicionais so usados para o
reconhecimento de taninos.

Teste com soluo

de
gelatina a 1%, contendo 10%
de NaCl: fornece precipitado
ou mesmo turvao.

Precipitao
com
alcaloides,
podendo ser usado solues de
cinchonina, cafena ou estricnina
a 1-2%.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
2. Polifenis:
b) Taninos:
Ensaios cromticos:

Reao com cloreto

frrico (FeCl3):

taninos
hidrolisveis
ou glico
taninos
condensados
ou catquico

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
2. Polifenis:
b) Taninos:
Ensaios cromticos:
Reativo de Stiasny: uma
soluo de taninos
mantida sob refluxo com HCl
concentrado e formol por 30
minutos.

Tanino condensado
ou
catquico:
precipita

Tanino hidrolisvel
ou glico: filtrado

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
2. Polifenis:

O
8

3
5

c) Antraquinonas:

9,10-antraquinona

Ensaios cromticos:
Reao de Borntragr: em solues alcalinas
os compostos antraquinnicos adquirem
intensa colorao violeta a prpura, inclusive
com bases fracas como NH4OH.
Pode-se tambm borrifar uma soluo aquosa alcalina sobre a
superfcie do vegetal, para caracterizar a presena de derivados
hidroxiantracnicos.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:

As reaes gerais para alcaloides baseiam-se na formao de

complexos insolveis (precipitados).

Como os resultados falso-positivos so bastante comuns para

essas reaes, previamente o material a ser analisado deve ser
submetido a extraes cido-base.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:

Os alcaloides podem ser detectados por diversos mtodos:

Observao da extino
de luz UV em 254 nm, em
placas de slica gel com
indicador de fluorescncia.

Deteco de fluorescncia em 365

nm pode ser muito til para diversos
alcaloides, como por exemplo, os
alcaloides do esporo-de-centeio.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:

As reaes gerais
empregam
Reagente de
Dragendorff :
precipitados laranjaavermelhados

Reagente de Mayer:
precipitados brancos

Iodo-platinato de
potssio: manchas
violeta a azul
acinzentadas

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:

Figura 3: Reaes com o reagente de Dragendorff em placa e em tubo de ensaio.

O aparecimento de manchas em tons laranja em CCD e a presena de
precipitados laranja-avermelhados indicam a presena de alcaloides.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:
- Alcaloides tropnicos:
Reao desenvolvida por Vitali e Gerard

0,0001 mg de atropina, hiosciamina e

escopolamina tratada com HNO3
concentrado e ao resduo, adicionase soluo de KOH em EtOH.

Desenvolve-se colorao
prpura, passando a
vermelho
escuro
e,
finalmente incolor.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:
- Alcaloides tropnicos:
OH
O
H

ONO2

H
N
HNO3 (95%)

H
N

O
H
O2N

KOH/EtOH

OH

Reao de Vitali, mecanismo segundo

Auterhoff (1981).

O2N

prpura

H
N

K+

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:
- Alcaloides indlicos:

Reagente de Ehrlich, que consiste na soluo de cloreto de

p-dimetilaminobenzaldedo a 5% em etanol.

Desenvolve-se colorao laranja a marrom.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:

Figura 4: Perfis cromatogrficos, obtidos por CCD, para alcaloides. Eluente: AcOEt-Ciclohexano-MeOH
(70:15:15). Reveladores: UV 254nm,, Soluo de iodo-KI (revelador A), Reagente de Ehrlich (revelador B).
Pontos: 1. cafena, 2. lidocana, 3. cocana, 4. fenacetina, 5. benzocana, 6. amostra.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
3. Alcaloides:

Figura 5: Perfis cromatogrficos, obtidos por CCD, para alcaloides. Eluente: AcOEt-Ciclohexano-MeOH
(70:15:15). Reveladores: UV 254nm,, Soluo de iodo-KI (revelador A), Reagente de Ehrlich (revelador B),
Iodo-platinato acidificado (revelador C). Pontos: 1. cafena, 2. lidocana, 3. cocana, 4. fenacetina, 5.
benzocana, 6. amostra.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
4.Triterpenos e esteroides:
Reao de Liebermann-Burchard: anidrido actico e cido
sulfrico concentrado.

Colorao verde ou azul

para esteroides.

Colorao
vermelha,
rosa,
prpura ou violeta para terpenos.

Para a deteco de esteroides insaturados, tambm pode ser

empregada a reao de Salkowsky (cido sulfrico concentrado).

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
4.Triterpenos e esteroides:
a) Saponinas:
H
N
O H

HO
H

COOR

RO

Saponina esteroidal

Saponina triterpnica

Grupo espirosolano

Tipo b-amirina

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
4.Triterpenos e esteroides:
a) Saponinas:

Para detectar a presena de saponinas,

emprega-se o teste de formao de
espuma, estvel na presena de cidos
minerais diludos.

Agitao

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
4.Triterpenos e esteroides:
O

b) Glicosdeos
cardiotnicos:

17
11

13

CH3

CH3

O
O

B
H

D
15

CH3

HO

Anel
lactnico

OH

Ncleo esteroidal

OH

HO
OH

Resduos de acar

Estrutura glicosdeos
cardiotnicos
(Digoxina)

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
4.Triterpenos e esteroides:

b) Glicosdeos cardiotnicos:
A deteco da presena de glicosdeos cardiotnicos:
Ncleo esteroidal
(Liebermann-Burchard)

Lactona insaturada
em C-17

Acares

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
4.Triterpenos e esteroides:
b) Glicosdeos cardiotnicos:
Reagente de Kedde (soluo etanlica do
cido
3,5-dinitrobenzoico
e
soluo
etanlica de KOH a 10%):
Aparecimento
de
manchas rosadas
na placa de CCD.

Deteco da lactona
insaturada.

Figura 6: Lactona a, b-insaturada

aps revelao com reagente de
Kedde.

Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos
4.Triterpenos e esteroides:
b) Glicosdeos cardiotnicos:
Reagente de Keller-Killiani (cido actico
glacial, cloreto frrico e cido sulfrico
concentrado):
Forma-se um anel vermelho pardo e a
soluo actica colorao azul-esverdeada

Deteco de acares.

Referncias
SIMES, C. M. O. et al. Farmacognosia: da planta ao
medicamento. Rio Grande do Sul: UFRGS, 2004.
ABREU MATOS, F. J. Introduo fitoqumica experimental.
Fortaleza: Edies UFC.
WAGNER, H. & BLADT, S. Plant Drug Analysis. Berlin:
Springer, 1996.