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Directora
MSc. ZULMA LORENA DURAN HERNANDEZ
JUNIO 2015
Justificacin de la prctica
Competencias a desarrollar
Duracin de la prctica
Mecanismo mediante el cual se
evaluar la prctica:
El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa) es una prueba esttica
de toxicidad aguda (120 horas de exposicin) en el que se pueden evaluar los efectos
fitotxicos de compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinacin de
las semillas y en el desarrollo de las plntulas durante los primeros das de crecimiento. A
continuacin se describe el procedimiento.
2.1 METODOLOGIA
A. Actividades a desarrollar
estos1 formatos), importante tambin tomar fotos del sitio de muestreo y no ir solos a tomar la
muestra.
1 muestras deben ser tomadas a una profundidad de 0-15 cm. Una vez tomada la muestra
B- Las
debe homogenizarse, destruir terrones y remover material orgnico como: hojas, races y
animales. Una vez realizado esto, incorporar la muestra de aproximadamente 250 g en las
bolsas ziploc, asegurndose que quede bien sellada.
Las bolsas ziploc deben estar adecuadamente rotuladas con el nombre de quien toma la
muestra, tipo de sistema agrcola o cobertura vegetal que hubiera tenido, hora y fecha de
muestreo.
Una vez tomada la muestra deber dirigirse a un laboratorio de aguas o suelos de su ciudad
donde sea posible hacer una extraccin lquida de la muestra, ya que solo de esta manera podr
ser usada en la prctica.
Nota: Recuerde que si este procedimiento no es posible de realizarlo, deber hacer el bioensayo
entonces con una muestra de agua.
1
Las soluciones
de control positivo estn diseadas para obtener resultados similares de los que
se obtendran con agua contaminada. Esta solucin le permitir observar cmo reaccionan las
semillas al agua contaminada.
Se preparar una solucin salina de 5g/L, se requerir 1 litro de agua limpia, puede ser agua
destilada o de bolsa que no contenga cloro ni gas, si se cuenta con una balanza o una gramera
se podrn pesar directamente los 5 gramos y adicionarlos al litro de agua. Se debe mezclar bien
y luego marcar el recipiente que diga "Control (+) 5g/L".
Si no se cuenta con gramera o balanza entonces de tendr que calcular dicha cantidad a ojo con
una cucharita de cocina, llenndola solo la mitad y se prepara la solucin.
Colocar 4mL de cada solucin en la caja de petri correspondiente, saturar el papel filtro
dispersando homogneamente la solucin sobre ste evitando que se formen bolsas de aire.
Con la ayuda de una pinza, colocar cuidadosamente 20 semillas (cinco hileras de cuatro
semillas, o cuatro hileras de cinco semillas), dejando espacio suficiente entre las semillas para
permitir la elongacin de las races. Seleccione semillas de tamao, forma y color similar.
Ilustracin 3. Caja de Petri con semillas de lechuga
Tapar las cpsulas, dado que algunas variedades de semillas de lechuga requieren oscuridad
para que se produzca la germinacin (semillas fotoblsticas negativas), las cajas de Petri deben
cubrirse de la luz inmediatamente despus de colocar las semillas en su interior; para esto debe
envolverse cada caja de Petri con papel aluminio.
Repetir el procedimiento pero utilizando el agua embotellada (control negativo) y la solucin de
NaCl como control positivo.
Marcar con cinta de enmascarar cada caja de Petri envuelta con papel aluminio. El control
negativo se marcar como C (-), el control positivo con una C(+), la muestra como M y con un
subndice la repeticin correspondiente (1, 2, 3).
Asegrese de no voltear (no dar vuelta) las placas boca abajo, etiquetando "Parte de arriba" en
cada placa envuelta para que no se confunda.
Colocar las placas de Petri envueltas en papel aluminio dentro de una bolsa plstica (ziploc) para
prevenir que se escape la humedad.
Colocar las placas en un lugar seguro, a temperatura ambiente por cinco das, a resguardo de la
luz solar directa.
Cada1 punto final se evala comparando el efecto generado en los organismos expuestos a la
muestra con respecto a la respuesta en los organismos del control negativo, sujetos a las
mismas condiciones de ensayo, excepto por la ausencia de la muestra contaminada.
1
Ilustracin
5. Partes de la semilla
La siguiente ilustracin muestra los estadios por los que atraviesa la semilla durante el ensayo
de germinacin y elongacin:
1
Ilustracin
6. Estadios de la semilla durante el ensayo
Variables
Control (-)
Numero de
semillas
germinadas
Promedio de
los controles
negativos
Porcentaje
de
germinacin*
Control (-)
Cajas de Petri
Control (+)
Muestra
Muestra R1
Muestra R2
Caja de Petri
Control (-)
Caja de Petri
Control (-)
Caja de Petri
Control (+)
Caja de Petri
Muestra
Caja de Petri
Muestra R1
Caja de Petri
Muestra R2
Promedio EH
Desviacin
estndar
Coeficiente de
variacin*
1
El promedio
EH del control negativo se sacara a partir de los promedios de las dos repeticiones,
siempre y cuando ambas cumplan con el CV menor o igual al 30%.
Caja de Petri
Control (-)
Caja de Petri
Control (-)
Caja de Petri
Control (+)
Caja de Petri
Muestra
Caja de Petri
Muestra R1
Caja de Petri
Muestra R2
Promedio ER
Desviacin
estndar
Coeficiente de
variacin*
El ndice de germinacin tendr valores entre 0 y 100, entre ms cerca a cero este, querr
decir una mayor inhibicin en crecimiento y germinacin, mientras que si es superior a cien,
entonces no hubo inhibicin sino por el contrario un mayor desarrollo con respecto al testigo.
Por ltimo deber concluirse si la muestra es txica o no, segn el ensayo realizado.
El informe requiere conclusiones que respondan a las siguientes preguntas:
1. Su muestra supera el porcentaje de inhibicin de crecimiento de radcula o hipocotilo
en un 50%?
2. Hay riesgo de toxicidad en la muestra tomada?
Nota: Para la elaboracin del wiki grupal cada estudiante publicara el IG calculado con su
muestra, en el foro prctico y por grupo escogern la muestra con mayor toxicidad, es decir
con el IG ms bajo, y realizarn un prrafo en INGLS que describa el cuerpo de agua
donde se tom la muestra, el tipo de contaminacin que le llega, el clculo de inhibicin de
crecimiento de radcula e hipocotilo y el ndice de germinacin. Les dejo dos link con
artculos de estudios cientficos hechos usando el bioensayo de lechuga para que se fijen en
los trminos tcnicos que se usan:
Determination of phytotoxicity of soluble elements in soils, based on a bioassay with lettuce
(Lactuca sativa L.). Publicacin en lnea:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0048969707000484
Evaluation of the phytotoxicity of polycontaminated industrial effluents using the lettuce plant
(Lactuca sativa) as a bioindicator. Publicacin en lnea:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0147651311002120
El prrafo que se aporte en el wiki, no debe tener tablas ni datos sueltos con vietas, todo va
de manera descriptiva en un prrafo, tampoco se acepta ms de un aporte por grupo, debe
mencionarse al inicio o al final del prrafo el nmero del grupo que hace el aporte. El prrafo
debe tener mnimo 100 palabras, mximo 150.
B. Elementos necesarios para la prctica
-
1 sobre de semillas de lechuga (Lactuca sativa L.) (Que no sean tan antiguas, ver
fecha de lote).
6 cajas de Petri (de vidrio o plstico, de 100 mm de dimetro).
3 Goteros o jeringas de 5mL que permitan medir 4mL.
1-
BIBLIOGRAFIA
-
IDRC-CDRI.
Aquatox
2000.
(2000).
bnc.idrc.ca/dspace/bitstream/10625/31600/1/118283.pdf
Disponible
en
http://idl-
C. Productos a entregar
Informe de mximo 10 hojas, letra Arial 11, espacio 1.15, con fotografas del experimento
(mximo 6).
Las partes del informe sern:
- Portada
- Introduccin
- Un mapa conceptual sobre los tipos de bioensayos usados en toxicologa
ambiental para muestras de agua y suelo.
- Diagrama de flujo del laboratorio elaborado
- Descripcin de la muestra llevada al bioensayo.
- Resultados
- Anlisis de resultados
- Conclusiones
- Bibliografa
Los estudiantes deben subir individualmente el informe en el entorno de Evaluacin y
seguimiento. Previo a subir el documento debern participar en el foro practica
toxicologa ambiental donde intercambiaran sus ideas e inquietudes sobre los resultados
obtenidos en la prctica y as podrn colaborarse mutuamente en el desarrollo del
informe, aunque este es de carcter individual y cada uno deber subirlo solo en el
entorno de evaluacin y seguimiento, no en el foro.
Resultados del
bioensayo
Mapa conceptual
Bibliografa
Valoracin
Valoracin
Valoracin
baja
Media
Alta
Evaluacin director de curso o tutor virtual
El estudiante
El estudiante
participo pero no
El estudiante hace
nunca particip
aporto discusin a los
aportes
del trabajo dentro
resultados o dems
significativos para
del foro asignado
asuntos de
el desarrollo del
preparacin y
bioensayo, discute
(Puntos = 0)
desarrollo del
los resultados de
bioensayo. (Puntos =
sus compaeros.
10)
(Puntos = 20)
El grupo no
Su aporte en el wiki
El grupo hace un
participa en el
es poco tcnico, no
aporte significativo,
wiki o lo hace en
presenta los datos
bien redactado en
espaol.
completos que se
ingls y con la
(Puntos = 0)
piden y la traduccin
informacin
est mal hecha.
completa solicitada.
(Puntos = 15)
(Puntos =30)
El estudiante no
El estudiante
Los resultados del
realizo el
presenta informe con
bioensayo y los
bioensayo o se
resultados, pero hay
clculos son
evidencia copyerrores en los
correctos, adems
page de otro
clculos y/o un
presenta un buen
trabajo
anlisis deficiente de
anlisis de sus
(Puntos = 0)
stos.
resultados. (Puntos
(Puntos = 30)
= 60)
No se presenta
este punto dentro
del informe o se
evidencia un
copy-page textual
de otros trabajos
o de internet
(Puntos = 0)
No presenta
bibliografa
(Puntos = 0)
El mapa conceptual
no muestra la
informacin acorde a
los materiales del
curso
(Puntos = 15)
El mapa conceptual
est completo y
usa los
documentos del
curso
(Puntos = 30)
El informe presenta
la bibliografa bien
escrita acorde a
normas APA.
(Puntos = 5)
Mximo
Puntaje
20
30
60
30
145