Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
MARCOS
Universidad del Per, Decana de Amrica
FACULTAD DE QUMICA E INGENIERA QUMICA
CURSO:
PROFESOR:
TURNO:
VIERNES 5-7 PM
ALUMNO:
CDIGO:
12070067
FECHA DE ENTREGA:
16/09/2015
NDICE
Pg.
INTRODUCCIN
CARACTERSTICAS GENERALES
TOXINAS
MODO DE ACCIN
11
11
11
12
14
15
BIBLIOGRAFA
INTRODUCCIN
Bacillus thuringiensis (Bt) fue descubierta a principios del siglo XX en Japn por el profesor
Shigetane Ishiwata a partir de larvas muertas del gusano de la seda (Ishiwata 1902), pero fue
descrita por Berliner en 1911 cuando lo aisl a partir de larvas de Anagasta kuehniella (Zeller)
(Lepidoptera: Pyralidae) en la provincia alemana de Thuringia.
Bacillus thuringiensis es una bacteria del suelo, anaerobia facultativa, mvil y esporognica,
perteneciente al grupo de bacterias Gram positivas conformado por Bacillus cereus y Bacillus
anthracis (Lecadet, 1970). Bacillus thuringiensis se caracteriza porque luego de la fase de
crecimiento exponencial, las clulas producen tanto una espora subapical como uno o varios
cuerpos parasporales: inclusiones compuestas de una o ms protenas cristalinas (ICPs) que
tienen actividad insecticida especfica, incluso a nivel de especie. Las toxinas de Bt
comenzaron a utilizarse comercialmente en Francia en 1938, y para 1958 su uso se haba
extendido a los Estados Unidos. A partir de los aos 80 Bt se convierte en un plaguicida de
inters mundial. Los productos comercializados de B. thuringiensis consisten principalmente en
preparados de esporas y cristales, activados o no, que se rocan sobre los cultivos como si se
tratara de un insecticida convencional. A finales de la dcada de los 70 se identifica en la ribera
de un ro en Israel una subespecie txica para varias especies de dpteros. La nueva subespecie,
que se denomin Bt israelensis (Bti), comenz a usarse con xito para el control de poblaciones
de especies de moscas y mosquitos vectores, presentando unos valores de LC50 de alrededor de
12 ng/mL, dando origen a productos comerciales de Bti utilizados estrictamente para el control
de dpteros.
Hasta ahora las investigaciones han demostrado que los productos de Bt no suponen un riesgo
para artrpodos no diana, aves, peces ni mamferos, observndose, en todos los casos, valores
de toxicidad de muy baja a inexistente y siempre con dosis mayores a las de uso . De hecho, los
nicos efectos dainos observados son indirectos por disminucin de la disponibilidad de
alimento para los depredadores de los organismos diana de Bt. Aunado a esto, tambin se ha
determinado que los productos de Bt tampoco tienen efectos negativos sobre el medio
ambiente. En el caso especfico de Bti, un estudio llevado a cabo en un ro de Pensilvania
(EEUU) durante 8 aos demostr que la aplicacin de Bti no tiene efecto en la composicin y
densidad de las poblaciones de peces y macroinvertebrados no diana, ni siquiera en ciertas
especies de quironmidos que previamente se haban reportado como sensibles a Bt.
BACILLUS THURINGIENSIS
1. CARACTERSTICAS GENERALES :
Bacillus thuringiensis es un bacilo gram positivo, de flagelacin pertrica, que mide de 3 a 5
m de largo por 1 a 1,2 m de ancho y que posee la caracterstica de desarrollar esporas de
resistencia elipsoidales que no provocan el hinchamiento del perfil bacilar (Figura 1) . Es un
microorganismo anaerobio facultativo, quimioorgantrofo y con actividad de catalasa. Los
distintos aislamientos de B. thuringiensis presentan en general caractersticas bioqumicas
comunes. Poseen la capacidad de fermentar glucosa, fructosa, trealosa, maltosa y ribosa, y de
hidrolizar gelatina, almidn, glucgeno, esculina y N-acetil-glucosamina. Sin embargo, la
caracterstica principal de B. thuringiensis es que durante el proceso de esporulacin produce
una inclusin parasporal formada por uno o ms cuerpos cristalinos de naturaleza proteica que
son txicos para distintos invertebrados, especialmente larvas de insectos (Figura 1). Estas
protenas se llaman Cry (del ingls, Crystal) y constituyen la base del insecticida biolgico ms
difundido a nivel mundial.
95% (Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac, etc.). La ltima fila incluye un nmero arbigo al final de la
nomenclatura indicando ms de 95% de identidad (Cry1Aa1, Cry1Aa2, etc.). El grupo
mayoritario de toxinas Cry se les conoce como la familia de tres-dominios, ya que estn
constituidas por tres dominios estructurales (figura 3).
2. Figura 2-Filograma de las protenas Cry que comparten la estructura cuaternaria similar
de tres dominios.
4. MODO DE ACCIN
Las protenas cristalinas se consideran de un gran inters terico y prctico por la comunidad
cientfica, por lo que es necesario conocer el efecto txico de las mismas, con el fin de poder
realizar un correcto control de plagas y prevenir la aparicin de insectos resistentes. El modo de
accin de estas protenas insecticidas ha sido principalmente caracterizado en lepidpteros. La
principal accin de estas toxinas es lisar clulas epiteliales del intestino medio del insecto diana
a partir de la formacin de poros en la membrana apical de las microvellosidades de estas
clulas. Por tanto, las protenas Cry deben pasar de estar en forma de protoxina en el cristal de
inclusin (que se disuelve por el pH alcalino del intestino medio), a toxina activada para unirse
a receptores especficos de la misma y posteriormente insertarse en la membrana. Esto sucede
una vez que la protoxina ha sido procesada por proteasas del intestino medio. De este modo se
forman canales inicos en las microvellosidades, la posterior formacin del poro y finalmente
se produce un desequilibrio osmtico y lisis celular. Durante la activacin proteoltica, las
protoxinas de alto peso molecular, entre 130- 140 kDa son ampliamente procesadas en su
extremo carboxi-terminal, obtenindose una protena activa final de un peso molecular de entre
60-70 kDa. En cuanto a las protenas de bajo peso molecular, de unos 70 kDa, el tamao de la
protena cristalina activada es de un tamao muy similar al de la protoxina.
4.1.
Una vez que las toxinas estn en su forma activada, stas atraviesan la membrana peritrfica,
que es una membrana que protege el epitelio pero permite el paso de molculas de un tamao
menor o igual a 60 kDa hacia la membrana de las clulas epiteliales. El estudio de la unin de
estas toxinas con las clulas del epitelio se ha realizado a partir del uso de tcnicas
histoqumicas, que utilizan anticuerpos frente a ellas o bien se las marca con biotina. A
continuacin, en preparaciones del intestino medio de larvas de insectos, incubadas in vitro con
una protena Cry, muestran la unin especfica de stas al borde en cepillo de las clulas
epiteliales. Tcnicas bioqumicas de ensayos de unin ligando-receptor, han permitido una
mayor caracterizacin de la unin a la membrana celular. Cada una de las protenas cristalinas
se une a sitios de unin especficos en molculas de membrana y, por este motivo, a estas
molculas se las denomin receptores.
Por ejemplo, para las toxinas Cry1A, se han encontrado diferentes receptores en distintas
especies de lepidpteros, como son: protenas de tipo cadherina (CADR), aminopeptidasa- N
(APN), fosfatasa alcalina (ALP) y un glicoconjugado de 270 kDa. En esta especie se han
encontrado dos de los cuatro tipos de receptores nombrados anteriormente: CADR y APN. Las
caderinas son receptores transmembrana, con un dominio citoplsmico y un ectodominio
extracelular con varias repeticiones de cadherina. El ectodominio tiene sitios de unin a calcio,
secuencias de interaccin a integrina y secuencias de unin a caderina. Por otro lado, se
comprob el grado de afinidad de la toxina Cry1A a ambos receptores y los resultados
obtenidos fueron que, para la unin a caderina, la constante de disociacin estaba en el rango de
1 nM, mientras que para el receptor APN era de 100 nM (Jenkins y Dean 2000).
4.2.
En este paso de toxicidad, el modelo aceptado ha sido el de lisis coloideosmtica propuesto por
Knowles y Ellar en 1987. Este modelo propone que las protenas Cry producen pequeos poros
en la membrana apical de las clulas columnares del intestino. Al formarse los poros en la
membrana, se ve alterado el gradiente Na+ y K + hacia el exterior, permitiendo su libre
movimiento. Adems, las clulas, al ser de naturaleza hipertnica respecto a la luz intestinal,
los poros formados permiten la entrada de agua al interior con el fin de producir un equilibrio
osmtico con el exterior. Esto provoca un hinchamiento de la clula que desencadena la lisis
celular (Worfersberger 1992). En el caso de la toxina Cry1Ab, la unin de sta con su receptor
en M. sexta, provoca un corte en el extremo N-terminal de la protena, concretamente la hlice 1 del dominio I, lo que facilita la formacin de la estructura oligomrica llamada preporo, importante para la insercin en membrana y para la toxicidad (Gmez et al. 2002b;
Rausell et al. 2004a). Se han realizado numerosos trabajos para confirmar que la estructura
oligomrica es importante en la formacin del poro, como el uso de anticuerpos tipo scFv73,
que imitan al receptor cadherina, o tratamientos con jugo de intestino medio de M. sexta
(Gmez et al. 2002b, 2003). Adems, las estructuras oligomricas de Cry1Ab y Cry1Ac
aumentan de 100 a 200 veces su afinidad de unin al receptor secundario APN, mostrando una
constante de disociacin de entre 0,75 - 1nM (Gmez et al. 2003; Pardo- Lpez et al. 2006). Se
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS | TOXICOLOGA Bacillus
12
thuringiensis
INSERCIN EN MEMBRANA.
El modelo de insercin en membrana no est del todo claro. Li et al. en 1991 propuso que las hlices 4 y 5 penetran en la membrana lipdica de las clulas epiteliales, mientras que el resto
de las -hlices permanecen en la superficie. A este modelo se le denomin Modelo
Paraguas. Por otro lado, Hodgman y Ellar en 1990, formulan otro modelo, el Modelo
Navaja, donde las -hlices 5 y 6 sobresalen del dominio I y son las que penetran la
membrana. Finalmente, Dean et al. en 1996, propuso que el dominio I se insertaba
completamente. Se ha observado que el dominio I de estas protenas Cry, es similar a otro de
otras protenas formadoras de poro, colicina A, toxina diftrica, o exotoxina de Pseudomonas,
de hecho, los dos primeros modelos se basan en estas toxinas formadoras de poro. Todas estas
toxinas bacterianas tienen en comn el tipo de poro que forman, poro tipo , que forma 3 capas
de -hlices; las -hlices formadoras de un poro capilar hidrofbico de forma helicoidal
estaran protegidas en el centro y el poro se alineara atravesando la membrana.
5.1.
variedad de especies. En el caso especfico del epitelio intestinal de lepidpteros, sus funciones
se enfocan a la digestin de protenas derivadas de la dieta del insecto, papel que comparte con
algunas endopeptidasas y carboxypeptidasas. La aminopeptidasa N (APN) fue de los primeros
que se asociaron con las toxinas Cry (Knight et al., 1994). En lepidpteros, este receptor se
encuentra anclado a la membrana a travs de un grupo glicosilfosfatidil-inositol (GPI), a
diferencia de cmo se encuentra en vertebrados, donde parte de su estructura en su extremo
terminal N es hidrfbica y funciona como pie de anclaje a la membrana celular (Piggot y Ellar
2007). La glicosilacin es importante en la interaccin de APN-Cry. Esto fue observado en la
interaccin de Cry1Ac con el receptor APN de M. sexta, donde el dominio III reconoca zonas
especficas de unin de carbohidratos en aminopeptidasas N (Burton et al., 1999; revisado por
Piggot y Ellar 2007)
que la planta, una vez transformada con el gen de la toxina, exprese suficiente cantidad de sta
como para aniquilar a las plagas susceptibles que las consumen. Desde 1987 aparecieron los
primeros reportes sobre plantas de tabaco y tomate que presentaban suficiente expresin de la
toxina de Bt como para conferir niveles altos de resistencia. En la actualidad, universidades,
centros de investigacin y compaas privadas llevan a cabo proyectos sobre el desarrollo de
plantas transgnicas con capacidad insecticida, una gran variedad de importancia econmica.
La adopcin de plantas transgnicas en la agricultura est ocurriendo a velocidad vertiginosa.
Slo en Estados Unidos, el 50% de la superficie sembrada con soya consiste de plantas
transgnicas resistentes a herbicidas. En Mxico, por ejemplo, el 60% del algodn que se
cultiva es Bt. En la actualidad existen ocho cultivos importantes con cultivares transgnicos
registrados: soya, maz, algodn, canola, papa, tomate, tabaco y remolacha, y muchas otras
plantas estn prximas a registrarse.
7. OTROS FACTORES DE VIRULENCIA PRODUCIDOS POR B. THURINGIENSIS
Adems de las protenas Cry, B. thuringiensis posee otros factores de virulencia que le
permitiran sobrevivir y multiplicarse dentro del husped, evadir su sistema inmune y producir
septicemia. Algunos de estos factores de virulencia, como fosfolipasas, enterotoxinas, exotoxinas, y quitinasas, no tienen especificidad por el orden de insectos que afectan y se
encuentran ampliamente distribuidos dentro de los distintos serovares de B. thuringiensis y
otros miembros del grupo B. cereus. Por otro lado, algunos B. thuringiensis poseen otros
factores de virulencia que s tienen especificidad por el orden de insectos que afectan. Tal es el
caso de las protenas Cyt que se encuentran formando parte principalmente de los cristales de
cepas mosquitocidas de B. thuringiensis (ej. svar. israelensis, kyushuensis, darmstadiensis,
medellin, etc.), aunque tambin se pueden llegar a encontrar rara vez en alguna cepa txica para
lepidpteros (ej. svar. morrisoni HD-12). Estas protenas son hemolticas y citolticas in vitro y
son especialmente txicas para larvas de dpteros in vivo. Otro caso de factores de virulencia
que tienen especificidad por el orden de insectos que afecta lo constituye el grupo de protenas
llamado Vip (vegetative insecticidal proteins). Las Vip son protenas insecticidas no
relacionadas con las Cry que no forman inclusiones cristalinas y que se secretan al medio
durante el crecimiento vegetativo de la bacteriA. Incluyen la toxina binaria Vip1 y Vip2 con
especificidad para colepteros y la toxina Vip3 con especificidad para lepidpteros. Existen en
la actualidad 40 genes vip3 distintos clasificados en 2 clases (A y B), que codifican para
protenas de aproximadamente 88 kDa. Si bien las Vip3 compartiran algunas etapas en el modo
de accin con las Cry, utilizaran distintos receptores. Otras protenas llamadas Sip (secreted
insecticidal proteins) fueron recientemente descritas, pero muy poco se conoce de ellas. Slo se
conoce un miembro de este grupo: la protena Sip1A, que tambin es producida y secretada por
B. thuringiensis durante su etapa de crecimiento vegetativo y que posee propiedades
insecticidas para colepteros.
8. PLANTAS TRANSGNICAS Bt
La ingeniera gentica desarroll muchas especies de plantas que expresan genes cry de B.
thuringiensis y las convirti as en plantas insecticidas. Comnmente se hace referencia a este
tipo de plantas como plantas o cultivos Bt (por ejemplo, maz Bt, algodn Bt, etc.). El primer
informe de una planta transgnica con un gen cry de B. thuringiensis data de 1987. Se
desarrollaron plantas de tabaco (Nicotiana tabacum) que producan cantidades suficientes de
protena Cry para controlar larvas de primer estadio de Manduca sexta. Desde entonces, al
menos diez tipos de genes cry distintos se introdujeron en 26 especies vegetales: cry1Aa,
cry1Ab, cry1Ac, cry1Ba, cry1Ca, cry1H, cry2Aa, cry3A, cry6A y cry9C. El empleo de este
tipo de plantas posee la ventaja de reducir la necesidad de aplicar insecticidas y de proveer una
proteccin duradera a lo largo de la temporada de cultivo. Otra caracterstica muy importante
que poseen es que los nicos insectos expuestos a la toxina son aquellos que se encuentran
alimentndose de los cultivos y no otros. No obstante, la mayor ventaja de estas plantas Bt es
que brindan a los agricultores una alternativa al uso de pesticidas qumicos tradicionales y
constituyen una herramienta para el control de plagas de importancia econmica que son
difciles de controlar por los primeros. Todas estas ventajas se veran reflejadas finalmente en
beneficios enormes para la produccin de alimentos y en una calidad medioambiental mejor en
todo el mundo.
Por otro lado, las plantas Bt poseen la gran desventaja que radica en la posible generacin de
resistencia en ciertas poblaciones naturales de insectos que se alimentan de ellas. Este
fenmeno determinara la inutilizacin de determinadas protenas Cry para su control, ya sea
mediante su empleo en plantas transgnicas o con los bioinsecticidas que los contengan (47).
9. Referencias biliogrficas.